地衣芽孢杆菌在营养肉汤中生长模型的建立

刘岩1，仪淑敏1，励建荣*1，李学鹏1，马永钧2

（1.渤海大学食品科学研究院/化学化工与食品安全学院，辽宁锦州121013；2.浙江兴业集团有限公司，浙江

舟山316101）

摘要：考察了温度、NaCl质量分数及pH值对地衣芽孢杆菌在营养肉汤中生长特性的影响，建

立了15～45℃下地衣芽孢杆菌的生长模型。结果表明：地衣芽孢杆菌的最适的生长温度范围为

30～37℃，NaCl质量分数范围为0～3％，pH值范围为5.0～8.0。在15、20、25℃时其生长曲线用MMF模型拟合较好，在30、37℃用Richards模型拟合较好，其相关系数较高，均大于0.998。相

反，在45℃其生长曲线只能用Logistic方程拟合，且相关系数较低，仅为0.907。

关键词：地衣芽孢杆菌；营养肉汤；生长模型

中图分类号：TS254.1文献标志码：A文章编号：1673—1689（2014）10—1025—06 Growth Model of Bacillus licheniformis in Nutritional Broth

LIU Yan1，YI Shumin1，LI Jianrong*1，LI Xuepeng1，MA Yongjun2

（1.Food Science Research Institute/College of Chemistry，Chemical Engineering and Food Safety，Bohai University，Jinzhou121013，China；2.Zhejiang Industrial Group Co.，LTD，Zhoushan316101，China）

Abstract：In this paper，the effects of different tempreture and concentration of NaCl and pH value

on the growth characteristics of Bacillus licheniformis in the nutritional broth were investigated. Meanwhile，mathematical models for the growth of B.licheniformis were established from15to45

℃.Results indicated that the optimum growth temperature range of B.licheniformis were from30to 37℃，and the NaCl concentration were in the range of0~3%and pH value were in the range of5~

8.At15℃and20℃and25℃，the growth curves of B.Licheniformis could be better fitted out by MMF model.However，they could be better fitted out by Richards model at30and37℃.The correlation coefficients were quite high and all above0.998.On the contrary，the growth curve of B. Licheniformis at45℃could only be fitted out by Logistic model，and the correlation coefficient was

quit low，and was only0.907.

Keywords：Bacillus licheniformis，nutritional broth，growth model

地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）属厚壁菌门（Firmicutes）芽孢杆菌科（Bacillaceae），是一种常

收稿日期：2014-03-16

基金项目：国家自然科学基金项目（31301418，31071514）；国家“十二五”科技支撑计划项目（2012BAD29B06）。

*通信作者：励建荣（1964—），男，浙江慈溪人，工学博士，教授，博士研究生导师，主要从事水产品、果蔬贮藏加工及安全控制研究。

E-mail：lijr6491@https://www.360docs.net/doc/be3520767.html,

见的革兰氏阳性细菌，广泛分布在土壤、空气和腐败有机物中[1]。地衣芽孢杆菌能够产生多种生物活性物质，包括多糖、蛋白质、非肽类物质，同时还能产生多种酶促因子，能增强动物消化酶的活性，促进养殖动物的生长，提高饲料的利用率[2-3]。此外地衣芽孢杆菌还能产生胞外酶类，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等，而鱼糜制品产生的胞外蛋白酶是导致产品腐败变质的主要原因[4-7]。

鱼糜制品中存在多种腐败菌，其中包括芽孢杆菌，如地衣芽孢杆菌，且已有研究显示，海水鱼的鱼糜制品中存在大量的地衣芽孢杆菌[8-10]。作者对分离自金线鱼鱼糜制品（鱼丸）中的地衣芽孢杆菌进行了研究，主要研究了其在营养肉汤中的生物学特性并建立了一定温度下的生长模型[11]，从而为研究鱼糜制品贮藏过程中微生物的变化规律提供一定的理论依据。

1.1材料与设备

地衣芽孢杆菌：分离自金线鱼鱼糜制品（已通过16S rRNA技术鉴定，并提交至GenBank数据库，序列号为：KC447353.1）；营养肉汤、平板计数琼脂、营养琼脂、牛肉膏、胰蛋白胨：北京奥博星生物技术有限责任公司产品。

洁净工作台：苏净集团苏州安泰空气技术有限公司产品；立式压力蒸汽灭菌锅：上海申安医疗器械厂产品；LRH系列生化培养箱：上海—恒科技有限公司产品；电子天平、酸度计：梅特勒—托利多仪器（上海）有限公司产品；SZ-1型快速混匀器：江苏金坛市金城国胜实验仪器厂产品；移液器：eppendorf公司产品。

1.2实验方法

1.2.1试剂的配制营养肉汤、平板计数琼脂、营养琼脂培养基按照其说明书配制。

质量分数0.85%的生理盐水的配制：取8.5g的NaCl溶解到1000mL的蒸馏水中。分装9mL/管，121℃灭菌15min后备用。

1.2.2接种以无菌操作，取30℃下培养24h的地衣芽孢杆菌培养物，在无菌生理盐水中制成一定浓度的菌悬液并进行适当稀释，使其浓度达103～104 cfu/mL，取1mL进行接种。

1.2.3平板菌落计数法测菌数以无菌操作，分别吸取1mL不同稀释梯度的培养液置于培养皿中，每个梯度做2个平行，然后倒入20mL左右46℃的平板计数琼脂培养基，待培养基凝固后，将其于30℃培养箱中倒置培养48h后计数，同时做空白对照。

1.2.4地衣芽孢杆菌生长特性的研究NaCl质量分数对地衣芽孢杆菌生长情况的影响实验：分别配制NaCl质量分数为0、0.5、1、3、5、7、9、12%的营养肉汤，加热溶解后分装9mL/管，每个质量分数分装2管，121℃灭菌15min，冷却后接种。置于37℃培养箱中培养7.5h。取1mL培养液，梯度稀释后倒平板计数琼脂，30℃培养48h后，用平板菌落计数法计数。

pH值对地衣芽孢杆菌生长情况的影响实验：配制100mL/瓶的营养肉汤，用0.15mol/L的盐酸和0.15mol/L的NaOH调pH值分别为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11的营养肉汤，分别取9mL分装于试管中，每个梯度做两个平行，121℃灭菌15min。冷却后，接种、培养及计数，操作同上。

温度对地衣芽孢杆菌生长情况的影响实验：配制9mL/管的营养肉汤若干管，121℃灭菌15min，冷却后接种，然后放置到0、4、10、15、20、25、30、37、45℃培养箱中培养，每个温度做两个平行，培养10 h。取1mL培养液，梯度稀释后用平板菌落计数法计数。

1.2.5地衣芽孢杆菌生长模型的研究方法以无菌操作，取37℃下培养24h的地衣芽孢杆菌培养物，在无菌生理盐水中制成一定浓度菌悬液，并进行适当梯度稀释后取1mL接入已灭菌的9mL营养肉汤中，放入培养箱中培养，培养温度分别为15、20、25、30、37和45℃。每隔一定时间，取1mL菌液，梯度稀释后用平板菌落计数法计数，每个温度做两个平行。

1.2.6数据处理利用Origin75做出不同温度、pH 值、NaCl质量分数下地衣芽孢杆菌的生长曲线，用curxpt软件建立不同温度下营养肉汤中地衣芽孢杆菌的生长模型，回归得出数学模型。

2.1地衣芽孢杆菌生长特性的研究结果

2.1.1NaCl质量分数对地衣芽孢杆菌生长的影响由图1得知，地衣芽孢杆菌在NaCl质量分数为0

～

1%之间可以较好地生长，随着NaCl质量分数的升高对地衣芽孢杆菌的生长有一定的促进作用。但是，NaCl质量分数在1%～12%之间，随着浓度的升高地衣芽孢杆菌的生长明显受到抑制。总体看来，NaCl质量分数在0～3%时生长良好，7%～12%之间生长情况变化不大，即菌体不生长或生长缓慢，但没有死亡，最适生长NaCl质量分数为1%。

图1NaCl质量分数对营养肉汤中地衣芽孢杆菌生长的影响Fig.1Influence of NaCl concentration to the growth of Bacillus licheniformis

2.1.2pH值对地衣芽孢杆菌生长的影响由图2得知，地衣芽孢杆菌在pH值为2～3之间基本不生长，pH值在4～5之间生长缓慢，pH值在5～8之间生长良好，pH值在9以上生长受到抑制，甚至死亡。最适生长pH值为8。

图2pH值对营养肉汤中地衣芽孢杆菌生长的影响Fig.2Influence of pH to the growth of Bacillus licheniformis

2.1.3温度对地衣芽孢杆菌生长的影响由图3得知，地衣芽孢杆菌在15℃以下生长非常缓慢，在25～30℃生长良好，最佳生长温度范围为30～37℃之间，45℃左右菌体已经接近死亡。最适生长温度为37℃。

图3温度对营养肉汤中地衣芽孢杆菌生长的影响Fig.3Influence of temprature to the growth of Bacillus licheniformis

2.2地衣芽孢杆菌生长模型研究的结果

目前已有不少关于水产品中优势菌的生长动力学模型的报道，如磷发光杆菌（Photobacterium phosphoreum）假单胞菌（Pseudomonas spp.）和腐败希瓦氏菌（shewanella putrefaciens）等，并已证实可以成功用于预测有氧和真空气调冷链水产鲜品的剩余货架期[12]。许钟等成功地构建了罗非鱼及大黄鱼特定腐败菌假单胞菌的生长动力模型并依此确定了它们在加工过程中的关键控制点[13-14]，王力卫等人也建立了冷冻鱼糜制品中沙门氏菌的一级生长预测模型[11]，但对冷藏鱼糜制品在贮藏中优势腐败菌的生长模型的研究至今鲜见报道。以下是对冷藏鱼糜制品（鱼丸）中优势腐败菌（地衣芽孢杆菌）在不同温度下建立的一级生长模型。

根据上述结果，应用curxpt软件分析可得出地衣芽孢杆菌在不同温度下生长模型的方程，见表1。

表1地衣芽孢杆菌生长模型

Table1Bacillus licheniformis growth model

以上是利用curxpt软件对不同温度下地衣芽孢杆菌生长曲线的拟和。其中包括4种S形曲线模温度/℃模型名称营养肉汤中回归模型

15MMF

ln N t＝（5.8255669×5392.5778＋

24.68328t2.4252193）/(5392.5778＋t2.4252193)

20MMF

ln N t＝（6.0321294×7212.201＋

20.360694t3.2333076）/(7212.201＋t3.2333076)

25MMF

ln N t＝（6.4235706×2606.1319＋

20.747547t3.533269）/(2606.1319＋t3.533269)

30Richards

ln N t＝19.672257/(1＋exp（7.7339318－

0.8695748t）1/6.8103333

37Richards

ln N t＝19.7649/(1＋exp（18.418205－

2.4884766t）1/16.028664

45Logistic ln N t＝1.277208e-e-0.8235071-0.02531781t

型，Gompertz模型、Logistic模型、Richards模型、MMF模型，根据拟合的标准差S和相关系数R，选出的相关性最好的拟合模型。图4~10结果显示，营养肉汤中地衣芽孢杆菌在15、20、25℃生长时，用MMF模型拟合较好；在30和37℃生长时，用Richards模型拟合较好，其相关指数均在0.998以上，标准差均在0.52以下。说明所建立的预测模型

具有较好的适用性。而在45℃时，地衣芽孢杆菌的生长呈现负生长的状态，因此生长曲线不具有S形曲线的特点，只能用Logistic模型拟合出来，但由于其相关性较低，所以为了更直观的表现出其生长趋势，又用Excel作了一条趋势线，其相关系数在0.98以上。王力卫等人在鱼糜制品沙门氏菌生长模型的建立的研究中也发现在适合的温度下细菌可以用S 形曲线拟合的较好，但在较高温度下细菌的生长曲线不具有S形曲线的特点[11]。在所有的拟合曲线中，一般在对数期前期，预测值比实测值要偏低，而到对数期后期，预测值要偏高一些。

图4MMF方程拟合的15℃营养肉汤中地衣芽孢杆菌的生长曲线

Fig.4Growth curve of Bacillus licheniformis fitted by MMF model in nutritional broth at15℃

图5MMF方程拟合的20℃营养肉汤中地衣芽孢杆菌的生长曲线

Fig.5Growth curve of Bacillus licheniformis fitted by MMF model in nutritional broth at20℃图6MMF方程拟合的25℃营养肉汤中地衣芽孢杆菌的生长曲线

Fig.6Growth curve of Bacillus licheniformis fitted by MMF model in nutritional broth at25℃

图7Richards方程拟合的30℃营养肉汤中地衣芽孢杆菌的生长曲线

Fig.7Growth curve of Bacillus licheniformis fitted by Richards model in nutritional broth at30℃

图8Richards方程拟合的37℃营养肉汤中地衣芽孢杆菌的生长曲线

Fig.8Growth curve of Bacillus licheniformis fitted by Richards model in nutritional broth at37℃

图9Logistic方程拟合的45℃营养肉汤中地衣芽孢杆菌的生长曲线

Fig.9Growth curve of Bacillus licheniformis fitted by Logistic model in nutritional broth at45

℃

图1045℃肉汤中地衣芽孢杆菌的生长曲线

Fig.10Growth curve of Bacillus licheniformis in nutriti-onal broth at45℃

地衣芽孢杆菌在营养肉汤中有一个初始的延滞期，然后才进入对数生长期。在不同温度下该菌进入对数生长期的时间不同，在最适温度下地衣芽孢杆菌延滞期较短，进入对数生长期的时间较快。因此，温度的高低影响其生长曲线的形状。

2.3讨论

通过研究地衣芽孢杆菌在营养肉汤中的最适生长条件可以为其在鱼糜制品生产过程中的控制措施提出一定的建议。首先NaCl质量分数的控制：地衣芽孢杆菌在NaCl质量分数为0～3%之间时适宜生长，随着NaCl质量分数的升高对其生长有一定的抑制作用。可以在人们口感可以接受的范围内，适当增加鱼糜制品中食盐的添加量，有利于抑制地衣芽孢杆菌的生长。但是在实际生产过程中，食盐质量分数一般都控制在1.5%~3.0%之间，变化不大。对于温度的控制：在鱼糜制品加工过程中，应该尽量降低加工环境的温度，以减缓微生物的生长繁殖。如鱼丸加工时，经过高温蒸煮可以杀灭其中大部分的微生物包括芽孢菌的营养体，但是不能将已形成的芽孢杀死，如果预冷时处理措施不当，很容易繁殖微生物，也有可能导致芽孢萌发。如果加工时间过长且温度较高时，地衣芽孢杆菌的芽孢有可能萌发，所以应该快速使鱼糜制品降温，缩短加工时间，降低加工环境温度。

为确保冷藏鱼糜制品质量在销售过程中的安全与稳定，延长货架期，控制冷藏鱼糜制品中优势腐败菌的生长是关键。近年来，微生物预警技术在国外已有广泛研究，利用数学模型定量描述食品特性（如pH值、水分活度等）和加工流通环境因子（如温度、氛围气体等）对食品中微生物生长、残存、死亡动态的影响，用来预测食品的货架期和微生物学安全性[15]。Bunchana等在建立金黄色葡萄球菌温度、pH值、NaCl质量分数、NO2浓度的单因素模型基础上得到了多因素响应面模型，T.P.Oscar等研究了低初始菌数和高初始菌数对模型的影响[16]，在增加参数同时也增加建模难度及模型的复杂度，在实际应用中较困难[17]。由于温度是影响微生物生长的主导因素[18]，在鱼糜制品贮藏过程中，温度是最容易进行实时监督和给予及时调控的重要参数，通过建立地衣芽孢杆菌在营养肉汤中的一级模型，可为预测鱼糜制品在贮藏过程中微生物的变化规律和建立安全预警机制、风险评估体系提供理论依据。

地衣芽孢杆菌生长的最适NaCl质量分数范围为0～3%；最适pH值范围为5.0～8.0；最适温度范围为30～37℃。在15、20、25℃时其生长曲线用MMF 模型拟合的较好；在30和37℃用Richards模型拟合的较好，其相关系数较高，都在0.998以上。相反，在45℃时其生长曲线只能用Logistic方程拟合，且相关系数较低，仅为0.907。从所建立的模型也证明了适宜的温度条件下，细菌的生长繁殖速度越快。所以为了避免细菌的大量繁殖，鱼糜制品应该在低温下贮藏，以延长其货架期并保证销售过程中的品质。作者选用的是商品化的培养基（LB液体培养基），其化学组成与实际鱼糜制品有一定差距。此外，作者是在恒定温度条件下进行的，如果冷藏鱼糜制品在实际生产流通过程中出现温度控制不当的情况，则现有模型就不能准确预测微生物的生长变化。因此，在以后的实验中将进一步研究根据鱼糜制品营养成分制作的培养基及温度波动条件下地衣芽孢杆菌的生长动力学模型，以便更准确地预测细菌的生长繁殖情况

。

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微生物计数培养基适用性验证报告.doc

非无菌产品微生物限度检查用培养基适用性验证

目录 1.验证目的 (1) 2.参照标准 (1) 3.验证项目 (1) 4.验证工作小组及职责 (1) 5.试验材料 (2) 6.试验过程 (3) 7.验证周期 (4) 8.附件 (4)

1、验证目的：需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数用培养基应进行培养基的适应性检查，本次验证的目的是为了确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数的测定。 2、参照标准：《中国药典》2015年版四部 3、验证项目：胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适用性验证 4.验证小组及职责 4.1 验证小组 4.2 验证职责 5.试验材料 5.1验证所用培养基：

5.2验证用菌株培养 5.2. 仪器设备： 5.2.1. XXXXX立式压力蒸汽灭菌器 5.2.2.XXXX水平流净化工作台 5.2.3.XXXXXX干燥箱 5.2.4.XXXXX型霉菌培养箱 (20～25℃) 5.2.5. XXXXX电热恒温培养箱(30～35℃) 5.3. 稀释剂： 0.9%无菌氯化钠溶液 6.试验过程 6.1菌液制备取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培

养物，加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8℃，可在24小时内使用。 6.2、适用性检查培养基适用性检查取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的菌悬液与黑曲霉的孢子悬液（均不大于100cfu），分别注入无菌平皿中，立即倾注适用性检查的胰酪大豆胨琼脂培养基，用于检查胰酪大豆胨琼脂培养基的需氧菌总数计数适用性。其中，接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养皿于30-35℃培养，时间不超过3天。接种白色念珠菌与黑曲霉的孢子的培养皿于30-35℃培养，时间不超过5天。取白色念珠菌的菌悬液与黑曲霉的孢子悬液（均不大于100cfu），分别注入无菌平皿中，立即倾注适用性检查的沙氏葡萄糖琼脂培养基，用于检查沙氏葡萄糖琼脂培养基的霉菌和酵母菌总数计数适用性。培养温度为20-25℃，培养时间不超过5天。上述每一试验菌株平行制备两个平皿，同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述实验。阴性对照为确认试验条件符合要求，同时进行培养基阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。

地衣芽孢杆菌文献综述

地衣芽孢杆菌的研究进展应用生物科学一班，卜亚平，01142102 摘要：地衣芽孢杆菌在作用机理，饲料中应用，医药研究，环境污染防治研究，病虫害防治研究方面做一综述。关键词：地衣芽孢杆菌，作用机理，饲料，医药，环境污染，病虫害防治。地衣芽孢杆菌为中生芽孢的革兰氏阳性需氧菌，是芽孢杆菌中目前较具有应用潜力的菌种之一，具有调节动物微生态平衡，促进肠道有益菌生长，降低病原菌的数量，增加动物机体的抗病力，提高机体的免疫功能。在自然界分布非常广泛, 生理特性丰富多样 , 是土壤和植物微生态优势种群之一。它可产生多种抗生素, 包括脂肽类、肽类、磷脂类、多烯类、氨基酸类、核酸类物质, 对多种动、植物及人类病原菌起到很好的抑制作用。而且芽孢杆菌还具有很强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性[ 1] 。因此, 芽孢杆菌被广泛应用于医药、农药、食品、饲料加工、环境污染治理等各个行业。本文就地衣芽孢杆菌在作用机理，饲料中应用，医药研究，环境污染防治研究，病虫害防治研究方面做一综述。地衣芽孢杆菌( Bacillus licheniformis) 是芽孢杆菌中较具应用潜力的菌种之一。近年来, 国内外对于地衣芽孢杆菌各方面应用的报道日益增多。在医药、饲料加工、农药等行业 , 取得了较好的研究成果。根据文献显示, 关于地衣芽孢杆菌的专利有: 用地衣芽孢杆菌生产生物农药的方法; 地衣芽孢杆菌新菌株及其微生态制剂; 地衣芽孢杆菌 T1 菌株的术, 改变地衣芽孢杆菌 NCIB8061 a- 淀粉酶的耐温性和耐酸性酶的性质等。 1地衣芽孢杆菌的生物学特性地衣芽孢杆菌是兼性厌氧菌，属于益生菌。细胞形态排列呈杆状，单生，细胞内无聚PHB颗粒芽孢形态，产生近中生的椭圆形芽孢，孢囊稍膨大；在肉质培养基上菌落为扁平，边缘不整齐，白色，表面皱褶，24小时后菌落直径3mm，适生长温度大约为 50℃但也能在更高的温度下存活。酶分泌的最适温度为37℃。可能以孢子形式存在，从而抵抗恶劣的环境；在良好环境下，则可以生长态存

预测模型与案例

预测模型最近几年，在全国大学生数学建模竞赛常常出现预测模型或是与预测有关的题目，例如疾病的传播，雨量的预报等。什么是预测模型？如何预测？有那些方法？对此下面作些介绍。预测作为一种探索未来的活动早在古代已经出现，但作为一门科学的预测学，是在科学技术高度发达的当今才产生的。“预测”是来自古希腊的术语。我国也有两句古语：“凡事预则立，不预则废” ，“人无远虑，必有近忧” 。卜卦、算命都是一种预测。中国古代著名著作“易经”就是一种专门研究预测的书，现在研究易经的人也不少。古代的预测主要靠预言家，即先知们的直观判断，或是借助于某些先兆，缺乏科学根据。预测技术的发展源于社会的需求和实践。20 世纪初期风行一时的巴布生图表就是早期的市场预测资料，哈佛大学的每月指数图表为商品市场、证券市场和货币市场预测提供了依据。然而这些预测都未能揭示1929－1930 年经济危期的突然暴发，使工商界深感失望。尔后，经济学家们从挫折中吸取了教训，采用趋势和循环技术对商业进行分析和预测，科学预测也因此开始萌生。20 世纪30 年代凯思斯提出政府干预和市场机制相结合的经济模型，1937 年诺依曼又提出了扩展经济模型，对近代经济模型产生重要的影响，科学的经济和商业预测也就步入发展阶段。技术预测开始于二次世界大战后的20 世纪40 年代，直到20 世纪50 年代未才广泛应用于工农业和军事部门。由于社会、科学技术和经济的大量需求，预测技求才成为一门真正的科学，预测未来是当代科学的重要任务 20 世纪以来，预测技术所以得以长足进步，一方面，与社会需求有很大关

系，另一方面通过社会实践和长期历史验证，表明事物的发展是可以预测的。而且借助可靠的数据和科学的方法，以及预测技术人员的努力，预测结果的可靠性和准确性可以达到很高的程度，这也是预测技术迅速发展的另一个重要原因。科学技术、经济和社会预测的应验率也是很高的。维聂尔曾预言20 世纪是电子时代，法国思想家迈希尔18 世纪末到19 世纪初对巴黎未来几百年的发展进行了预测。从1950 年的实际情况分析，他的预测中有36％得到证实，28％接近实现，只有36％是错误的。法国哲学家和数学家冠道塞在法国大革命时期曾采用外推法进行了一系列社会预测，其中75％得到证实。沙杰尔莱特1901 年在《二十世纪的发明》一书中的一些预测，其中64％得到证实。凯木弗尔特在1910 年和1915年公布的25项预测中，到1941年只有3 项未被证实，3 项是错误的。我国明朝开国功臣刘基就预测将来是天上铁鸟飞，地上铁马跑，那时还没有火车、飞机。预测的目的在于认识自然和社会发展规律，以及在不同历史条件下各种规律的相互作用，揭示事物发展的方向和趋势，分析事物发展的途径和条件，使人们尽早地预知未来的状况和将要发生的事情，并能动地控制其发展，使其为人类和社会进步服务。因而预测是决策的重要的前期工作。决策是指导未来的，未来既是决策的依据，又是决策的对象，研究未来和预测未来是实现决策科学化的重要前提。预测和决策是过程的两个方面，预测为决策提供依据，而预测的目的是为决策服务，所以不能把预测模型和决策模型截然分开，有时也把预测模型称为决策模型。

三维预测模型的建立

三维预测模型的建立三维预测相对于传统的矿产预测最大的进步是二维平面预测扩展到了三维空间，使研究区形态更生动形象。在创建三维预测模型之前，必须先建立三维矿床模型( 即数字矿床) ，再根据成矿有利信息分析将有利预测变量提取出来，最终形成三维预测模型。 2. 1 数字矿床的建立数字矿床为矿床的信息模型，即一个以地理坐标为依据的、数字化的、三维显示的虚拟矿床，其核心思想是用数字化的手段整体地解决矿床及其与空间位置相关的信息的表达与知识管理。数字矿床的建立是三维定位和定量研究的重要基础。本次研究应用目前主流地质三维建模分析软件micromine，对个旧松树脚研究区地层、岩体、已知矿体、化探异常等进行三维实体建模，从而实现数字矿床的建立。数字矿床有地质体模型和工程模型。地质体模型包括地表、岩体、地层、构造、已知矿体实体模型。将收集到的等高线文件插值加密并导入micromine软件中，生成研究区地表模型，并与范围实体模型相叠加生成地表实体模型; 将收集到的岩体等深线图以同样方法生成岩体实体模型。地层实体模型与构造实体模型都是通过对勘探线剖面图进行处理，即以中段平面图为基准面，将剖面线以实际坐标投到中段平面上，再根据相应地层界线或断裂界线进行线框连接成体，得到地层实体模型及构造实体模型。同样，矿体模型是根据各剖面图上矿体面进行线框连接，本次研究区内都为层间氧化矿，因此采用平推渐灭方法生成矿体实体模型。工程模型包括钻孔模型与巷道模型。钻孔数据是钻探工程所取得的地下地质体样品的数据，是进行勘探线剖面解译各种地质现象推理和资源储量估算的重要依据。本次研究将收集到的钻孔资料按照孔口坐标表、测斜数据表、岩性分析表、样品分析表的格式进行整理后，导入micromine软件中形成钻孔数据库。通过Surpac 中数据库功能将钻孔显示出来，形成钻孔模型。

芽孢杆菌常用培养基配方

芽孢杆菌常用培养基配方（按理说，该实验的所有培养基都在这了，后红字更为清楚些。。。摘自百度）一、肉汤琼脂培养基：蛋白胨10g ，牛肉膏15g ，NACL15g ，蒸馏水1000ml ，琼脂18g 。调节PH7.2,0.1MPA20min 灭菌。如果用液体做培养基，则去掉琼脂即可。100 mL/组，其中20 mL 液体培养基/250 mL△中（内装玻璃珠10颗）；50 mL固体斜面培养基分装在试管中：5mL/支，10支。 2、或是（J-琼脂培养基：胰蛋白胨5g,酵母膏15g,磷酸氢二钾3g,葡萄糖2g, 琼脂20g, 蒸馏水1000ml。调节PH7.3 —7.5Mpa 30min灭菌。）二、过氧化氢酶测定 1、试剂：3-10%过氧化氢 2、接种与培养：一般将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30度下培养1-2天。 3、试验方法：取一干净载玻片，在上面加一滴3-10%的双氧水，挑取1环1-2天的的菌苔，在双氧水溶液中涂抹，如有气泡出现（O2），作为过氧化氢酶阳性，无泡为阴性。也可以将过氧化氢液直接加入斜面上，观察气泡的产生。

三、需氧性测定 1、培养基：酪素水解物20g,葡萄糖 10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COONa2g,琼脂15g,蒸馏水1L。调节PH7.2，分装试管，0.06Mpa，30min灭菌，培养基不摆斜面。 2、接种与观察：用一小环的肉汤菌液，穿刺接种到上述培养基中（穿刺管底），一般与30 度培养3-7天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿穿刺线生长则为厌氧菌。四、酪素水解（用于检测不同种类的芽孢杆菌是否具有分解酪素的特点） 1、培养基（1）脱脂牛奶制备取新鲜牛奶，煮沸后去掉上层油脂，再经离心脱脂（3000r/min,10min）,除去上层油脂，即为脱脂牛奶。（2）牛奶平板的制备取50ml的脱脂牛奶放入一只三角瓶中，另外称1.5g琼脂置于含有50ml蒸馏水的另外3只三角瓶中，然后将两液分开灭菌，0.06Mpa-20min，带冷至45-50摄氏度时，速将两液混匀倒平板，即为牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥。 2、接种与观察

地衣芽孢杆菌介绍

名称：地衣芽孢杆菌英文名：PWD一1 (Baclicus lincheniformis PWD一1）俗称：整肠生（地衣芽孢杆菌胶囊）种属：芽孢杆菌科细菌革兰氏染色性；为革兰氏阳性杆菌细胞大小：0．8μm×（1．5～3．5）μm 细胞形态及特点：细胞形态和排列呈杆状、单生。细胞内无聚-β-羟基丁酸盐（P HB）颗粒芽孢形态：产生近中生的椭圆状芽孢，孢囊稍膨大培养特性：在肉汁培养基上的菌落为扁平、边缘不整齐、白色、表面粗糙皱褶，24h后菌落直径为3mm 生化形状：本菌有动力地衣芽孢杆菌的作用机制是以菌治菌，活菌进入肠道后，对葡萄球菌、酵母样菌等致病菌有拮抗作用，而对双歧杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌、消化性链球菌有促进生长作用，从而可调整菌群失调达到治疗目的。可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌。此外通过夺氧生物效应使肠道缺氧，有利于大量厌氧菌生长，造成肠道低氧环境，对肠道内的双歧杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌、消化链球菌等有益健康的厌氧菌的生长繁殖有促进作用；对葡萄球菌、白色念球菌、酵母样菌等致病菌则有拮抗作用。通过这种双重作用可以调整肠道菌群失调，维持机体肠道微生态平衡，从而对肠道疾病达到治疗和预防的目的。【性状】地衣芽孢杆菌高纯粉≥250亿／克水分≤10％【主要用途】 1、促进肠道内正常生理性厌氧菌的生长，调整肠道菌群失调，恢复肠道功能； 2、对肠道细菌感染具有特效，对轻型或重型急性肠炎，轻型及普通型的急性菌痢等，均有明显疗效； 3、能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖。【适用对象】适用于细菌原因引起的肠道菌群失调症以及肠道需要保健的养殖动物。【用法用量】添加在饲料中的量为：50～100克／吨（全价料），注意混合均匀。

结直肠癌术前N分期的随机森林预测模型的建立与验证

结直肠癌术前N分期的随机森林预测模型的建立与验证目的:研究基于CT结肠成像(CTC)或注水法结肠CT检查并结合临床及病理资料建立的随机森林(RF)模型在预测结直肠癌术前N分期方面的价值。方法:回顾性收集并分析从2016年1月到2017年12月在吉林大学第一医院接受手术,经病理证实为结直肠癌的患者,在病理科得到每位患者的N分期,筛选出术前接受过 CT结肠平扫+增强检查的239例患者(其中N0、N1、N2期患者数目分别为119例、99例、21例),使用计算机随机分配软件以大致2:1的比例将患者分为训练集(167)测试集(72)。分别检测病灶平扫、动脉期、静脉期的CT值,并计算动脉期、静脉期的对比强化率。病变均为单发病灶,入组患者在术前均接受CT结肠成像(CTC)或注水法结肠CT检查。在PACS系统中收集影像学资料,在医生工作站上收集临床及病理资料(年龄、性别、糖类抗原19-9、癌胚抗原、糖类抗原72-4、肿瘤最大直径、肿瘤的位置、强化率、术后病理N分期)。使用SPSS软件分别对连续变量(性别和肿瘤位置) 进行t假设检验,对离散变量(年龄、癌胚抗原、糖类抗原19-9、糖类抗原72-4、肿瘤最大径、强化率)进行卡方检验,筛选出相关度最高的特征,进而用降维后得到的特征进行机器学习建模,通过ROC曲线和敏感度特异度等参数评价模型。结果:结直肠癌N分期与CA199、A、V、A-P、V-P、A-P/P、V-P/P这七个特征有相关性(P值均<0.05,与年龄、最大直径、CEA、CA72-4均无相关性。随机森林模型预测的N分期与术后病理N分期具有高度一致性,训练集Kappa系数为0.78452(95%置信区间为0.69073-0.87830),测试集Kappa系数为0.58333(95%置信区间为0.39579-0.77088)。

时间序列模型的构建和预测

时间序列模型的构建和预测 Box Jenkins Methodology) 步骤1：识别。观察相关图和偏相关图步骤2：估计。估计模型中所包含的自回归系数和移动平均系数，可以用OLS 来估计步骤3：诊断检验。选一个最适合数据的模型，检查从这模型中估计到的残差是否白噪声，如果不是的话，我们必须从头来过步骤 4 ：预测。在很多情况下，这种方法得到的预测结果要比其它计量模型得到的要准确识别检查时间序列是否平稳 - 如果自相关函数衰退的很慢，则序列可能是非平稳 - 如果时间序列为一非平稳过程，应该运用差分的形式使它变为平稳过程 - 在检验了一个时间序列的平稳性之后，我们应该用相

关图和偏相关图检验ARMA模型中的阶数p和q 模型 ARIMA（1,1,1） .■: x t = ■ 1. x t-1 + u t + ru t-1 自相关函数特征缓慢地线性衰减 1.0 偏自相关函数特征 AR（ 1） x t = -1 X t-1 + u t 右；1 > 0，平滑地指数衰减若-11 > 0，k=1时有正峰值然后截尾 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 -0.2 -0.4 -0.6 -0.8 2 - 4 6 - 8 10 12 ?14 MA （ 1） X t = U t + 71 U t- 1 AR（ 2） x t = ；1 x t-1 + 2 X t-2 + u t 若;i < 0，正负交替地指数衰减 0.8 若71 > 0，k=1时有正峰值然后截尾若71 < 0，k=1时有负峰值然后截尾指数或正弦衰减若-11 < 0，k=1时有负峰值然后截尾 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 -0.2 -0.4 -0.6 -0.8 若?冷> 0，交替式指数衰减 0.8 若3<0，负的平滑式指数衰减 k=1,2时有两个峰值然后截尾

版药典培养基适用性验证

版药典培养基适用性验证公司内部编号：（GOOD-TMMT-MMUT-UUPTY-UUYY-DTTI-

培养基验证文件药有限公司制药有限公司验证立项申请表

验证方案的审批验证方案目录 1、概述 2、验证目的 3、验证范围 4、验证项目小组成员及职责 5、验证合格标准 6、试验材料 7、菌液制备 8、适用性检查 9、验证记录 10、验证结论及综合评价计数培养基适用性检查的验证方案 1. 验证目的：

需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基是否适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数测定。 2. 参照标准：《中国药典》2015年版四部1105非无菌产品微生物限度检查法。 3. 验证项目：胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基的适用性检查。 4.验证小组人员及职责： 5. 合格标准：被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。 6. 试验材料： 6.1. 被验证产品：胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基。 6.2. 仪器设备： 6.2.1. YXQ-LS-100G型立式压力蒸汽灭菌器

6.2.2. GHT-00双人净化工作台 6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安全柜 6.2.4. MJ-250I型霉菌培养箱 (20～25℃) 6.2.5. LRH-250生化培养箱 (30～35℃) 6.2.6. 电热恒温干燥箱 6.2.7微波炉 6.3. 验证用培养基 6.4. 验证用菌株：(第代) 7. 菌液制备按6.4规定程序培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3～5ml含 0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml的黑曲霉孢子悬液。 8. 适用性检查：

脑心浸液肉汤培养基配制使用

脑心浸液肉汤（BHI ）培养基 Brain Heart Infusion Medium 配方：（g/L ）蛋白胨脱水小牛脑浸粉脱水牛心浸粉氯化钠葡萄糖磷酸氢二钠 pH 值7.4 ± 0.2 10.0 12.5 5.0 5.0 2.0 2.5 25℃ 原理：蛋白胨、脱水小牛脑浸粉、脱水牛心浸粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖可为多种细菌提供能源；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钠为缓冲剂。用法：称取本品 38.5g ，加热搅拌溶解于1000ml 蒸馏水中，121℃高压灭菌15 分钟，备用。质控菌株接种后于35±0.5℃培养24h ，结果如下：产品名称用途

哥伦比亚 CNA 琼脂基 Columbia CNA Agar Base 用于革兰氏阳性球菌的分离培养,也可用于制备哥伦比亚 CNA 血琼脂(需另加无菌脱纤维羊血) 改良 Giolitti-Cantoni 肉汤基础 Modified Giolitti-Cantoni Broth Base 用于金黄色葡萄球菌的增菌培养(ISO 标准) 卵黄甘露醇高盐琼脂基础 Egg-Yolk Mannitol Salt Agar Base 用于金黄色葡萄球菌的选择性分离培养(需另加 50% 卵黄液) 甲苯胺蓝 -DNA 酶琼脂 Toluidine Blue-O-DNase Agar 用于脱氧核糖核酸酶试验(SN 标准) 葡萄球菌选择性琼脂 Steptococcus Selective Agar 用于凝固酶阳性葡萄球菌的选择性分离培养葡萄球菌增菌肉汤 Steptococcus Enrichment Broth 用于金黄色葡萄球菌的增菌培养亚碲酸钠肉汤基础 Sodium Tellurite Broth Base 用于金黄色葡萄球菌的增菌培养普通肉汤培养基 General Broth Medium 用于金黄色葡萄球菌的培养(SN 标准) 7.5% 氯化钠肉汤 7.5% Sodium Chloride Broth 用于金黄色葡萄球菌的增菌培养(GB 标准) DNA 酶琼脂 DNase Agar 用于金黄色葡萄球菌 DNA 酶试验冻干血浆 Freeze-Dried Plasma 用于血浆凝固酶试验 Baird-Parker 琼脂基础 Baird-Parker Agar Base 用于金黄色葡萄球菌的选择性分离培养(ISO、FDA BAM、 GB、SN 标准) 10% 氯化钠胰酪胨大豆肉汤(TSB) 10% Sodium Chloride Tryptic Soy Broth 用于金黄色葡萄球菌的选择性增菌培养(GB 标准) 胰蛋白胨大豆肉汤(TSB) Tryptic Soy Broth 用于金黄色葡萄球菌MPN法测定的增菌培养,NaCl浓度可根据需要而调整(FDA BAM、SN 标准);用于β溶血性链球菌的增菌培养(GB 标准); 也用于一般细菌的培养肠毒素产毒培养基(不含琼脂)Enterotoxin-Producing Medium(Agar-Free) 用于葡萄球菌肠毒素检验(GB 标准) 肉浸液肉汤 Meat Infusion Broth 用于金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和蜡样芽胞杆菌的培养(GB 标准)

地衣芽孢杆菌的作用机理及应用

地衣芽孢杆菌的作用机理及应用一、形态特征地衣芽孢杆菌(Bacillus Subtilis) 是芽孢杆菌属的一种，细胞大小0.8卩1.5?3.5)卩m，细胞形态和排列呈杆状、单生，细胞内无聚-伊羟基丁酸盐颗粒，革兰氏阳性杆菌。菌落为扁平、边缘不整齐、白色。为兼性厌氧菌。二、作用机理 1 、生物夺氧枯草芽孢杆菌为需氧菌，在生长过程中需要大量的氧气，进入动物肠道内，消耗大量的游离氧，降低肠道内氧浓度和氧化还原电势，改善了乳酸杆菌、双歧杆菌等厌氧菌的生长环境，保持肠道微生态系统的稳衡，提高动物机体抗病能力，减少胃肠道疾病发生几率。 2、拮抗致病微生物，改善体内外生态环境动物饲喂芽孢杆菌后，能显著降低肠道大肠杆菌、产气荚膜梭菌、沙门氏菌的数量，使机体内的有益菌增加而潜在的致病菌减少，因而排泄物、分泌物中的有益菌数量增多，致病性微生物减少，从而净化体内外环境，减少疾病的发生 3、增强动物体的免疫功能枯草芽孢杆菌能促进动物肠道相关淋巴组织处于高度的“免疫准备状态”，同时使免疫器官发育加快，免疫系统成熟快

而早，T、 B 淋巴细胞数量增多，动物体液和细胞免疫水平提高。 4、产生营养物质枯草芽孢杆菌在动物肠道内生长繁殖，能产生多种营养物质如维生素、氨基酸、有机酸、促生长因子等，参与动物机体新陈代谢。 5、产生多种消化酶枯草芽孢杆菌能提高动物生产性能是其产生多种消化酶的一个重要体现。研究表明，枯草芽孢杆菌能产生多种消化酶，帮助动物对营养物质的消化吸收。芽孢杆菌具有较强的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同时还具有降解饲料中复杂碳水化合物的酶，如果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶等，这些酶能够破坏植物饲料细胞的细胞壁，促使细胞的营养物质释放出来,并能消除饲料中的抗营养物质。三、产品功效 1、环境污水处理、废物处理、景观水处理强效去除DOD 、COD 及TSS ，消除硫化氢、氨氮等臭味及气泡，降解有机质。 2 、生态畜牧业 A、畜牧、家禽、特种动物及宠物养殖消除动物废料臭味，分解动物舍内的残渣，降解粪浆，消除臭味*本品能有效降解高分子物质为低分子物质，促进营养成分的吸收，提高饲料的利用率，同时还能抑制病害微生物的生长，提高动物的免疫力，增强动物的抗病能力，减少疾病的发生，提高成活率。 B 、水产养殖净化水质，有效降解水中有机质，改善水色，

无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程

无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程目的：建立无菌检查用培养基适用性检查标准操作规程。范围：适用于无菌检查使用培养基的适用性检查。依据：中国药典》2015年版《药品生产质量管理规范》2010年修订《中国药品检验标准操作规程》2010年版责任：QC化验员对实施本规程负责。内容: 1、概要：无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌检查及灵敏度检查要求。本检查可在供试品的检查前或与供试品的检查同时进行。 2、材料及设备 2.1 生化培养箱 2.2 生物安全柜 2.3 中国浊度标准管（由中国药品生物制品检定所提供） 2.4 灭菌试管、灭菌注射器 2.5 0.9%无菌氯化钠溶液 2.6 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液：取聚山梨酯80 0.05ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠至100ml，混匀，灭菌即可。3、无菌检查培养基的适用性检查 3.1无菌性检查取新鲜配制灭菌的培养基各5瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃，胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃，培养14天，应无菌生长。 3.2灵敏度检查 3.2.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），

并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。金黄色葡萄球菌[Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003] 铜绿假单胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104] 枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501] 生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC(B) 64941] 白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001] 黑曲霉[Aspergillus niger CMCC(F) 98003] 3.2.2菌液制备 3.2.2.1 金黄色葡萄球菌菌悬液制备 3.2.2.1.1 取金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时，取新鲜传代菌种一支待用。取一支灭菌中试管，加入3ml 0.9%无菌氯化钠溶液，把新鲜传代菌种培养物用接种环轻轻刮取，在加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的试管壁上研磨，使之成为均匀悬液。 3.2.2.1.2 取菌悬液1ml于比浊管中，用0.9%无菌氯化钠溶液逐步稀释至与标准管的浊度一致。记录下所加入的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的量，余下的2ml菌液盖上试管塞以备用。 3.2.2.1.3 打开试管塞，取1ml菌液于中试管中，加入比浊时所需的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的量一致的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，此时试管中的细菌浓度与标准比浊管相一致。根据细菌浊度标准菌数表的菌数，将菌悬液用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液系列稀释至不大于100cfu/ml。 3.2.2.1.4 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌悬液制备方法同金黄色葡萄球菌。 3.2.2.2 生孢梭菌菌悬液的制备 3.2.2.2.1取生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上，30～35℃培养18～24小时，取一支灭菌中试管，用灭菌注射器吸取硫乙醇酸盐流体培养基中底部三分之二处的新鲜菌液1ml，加入

微生物培养基种类大全

摘要：1、营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。用途：作普通琼脂平皿。2、血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养 1、营养琼脂（普通琼脂) 成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤) 100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定) 制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。用途：作普通琼脂平皿。 2、血琼脂平板（BA) 制法：取营养琼脂（PH7．6)，加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。 2．尿液，脓液 3．分离细菌标本用。 3、基础培养基（肉膏汤BB) 成份：蛋白胨10克牛肉膏5克氯化钠5克水1000毫升制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。 2 作普通琼脂斜面。 4、血液培养基（大管肉汤培养基) 成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升 2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕) 1g% 1毫升 3 MgSO 4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升 4 枸椽酸钠0．3g 制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。

2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。用途：作血，骨髓培养用。 5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂) 成份：蛋白胨10克乳糖10克氯化钠5克琼脂25（22)克水1000毫升2%伊红溶液20毫升 0．5%美兰溶液20毫升制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟)，冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖) 用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。 1 6、罗文斯坦培养基成份：磷酸二氢钾2．4克硫酸镁0．24克枸椽酸钠0．6克天门冬素3．6克纯甘油（丙三醇) 12毫升水600毫升马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤) 2%孔雀绿水溶液20毫升制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿)。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。 2 鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。 3 将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。 4 间歇灭菌第一次90℃1小时，第二次80℃半小时，第三次80℃半小时（或放85℃烤箱内连续二次)。质控标准： 1 灭菌试验合格。 2 接种结核杆菌要求两星期生长良好。用途：作结核分枝杆菌培养用。

地衣芽孢杆菌活菌胶囊说明书

浙江京新药业股份有限公司浙江京新药业股份有限公司地衣芽孢杆菌活菌胶囊说明书请仔细阅读说明书并按说明使用或在药师指导下购买和使用【药品名称】通用名称：地衣芽孢杆菌活菌胶囊商品名称：京常乐英文名称：Bacillus Licheniformis Capsule, Live 汉语拼音：DiYiYaBaoGanJunHuoJunJiaoNang 【成份】本品主要成份为地衣芽孢杆菌，每粒2.5亿活菌。辅料为乳糖、淀粉。【性状】胶囊内为白色或灰白色粉末。【作用类别】本品为消化类非处方药药品。【适应症】用于细菌或真菌引起的急、慢性肠炎、腹泻。也可用于其他原因引起的胃肠道菌群失调的防治。【规格】每粒025克（2.5亿活菌）【用法用量】口服，成人，一次2粒；儿童，一次1粒；一日3次；首次加倍。对吞咽困难者，服用时可打开胶囊，将药粉加入少量温开水或奶液混合后服用。【不良反应】超剂量服用可见便秘。【禁忌】尚不明确。【注意事项】 1.本品为活菌制剂，切勿将本品置于高温处，溶解时水温不宜高于40℃。 2.服用本品时应避免与抗菌药合用。 3.对本品过敏者禁用，过敏体质者慎用。 4.本品性状发生改变时禁止使用。 5.请将本品放在儿童不能接触的地方。 6.儿童必须在成人监护下使用。 7.如正在使用其他药品，使用本品前请咨询医师或药师。【药物相互作用】 1.抗菌药与本品合用时可降低其疗效，故不应同服，必要时可间隔3小时服用。 2.铋剂、鞣酸、药用炭、酊剂等能抑制、吸附活菌，不能并用。 3.如与其它药物同时使用可能会发生药物相互作用，使用本品前请咨询医师或药师。【药理作用】本品以活菌进入肠道后，对葡萄球菌、酵母样菌等致病菌有拮抗作用，而对双歧杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌、消化链球菌有促进生长作用，从而可调整菌群失调达到治疗目的。本品可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌。此外通过夺氧生物效应使肠道缺氧，有利于大量厌氧菌生长。【贮藏】于室温条件下避光、干燥处保存、运输。【包装】聚氯乙烯固体药用硬片+药用铝箔，6粒/板×1板/盒；6粒/盒×3板/盒；12粒/板×1板/盒；12粒/板×2板/盒；12粒/板×3板/盒。【有效期】自生产之日起，有效期为24个月【执行标准】YBS00902008及《中国药典》2015年版三部【批准文号】国药准字S2******* 【生产厂家】浙江京新药业股份有限公司

实验指导书(ARIMA模型建模与预测)

实验指导书（ARIMA模型建模与预测）例：我国1952-2011年的进出口总额数据建模及预测 1、模型识别和定阶（1）数据录入打开Eviews软件，选择“File”菜单中的“New--Workfile”选项，在“Workfile structure type”栏选择“Dated –regular frequency”，在“Date specification”栏中分别选择“Annual”(年数据) ，分别在起始年输入1952，终止年输入2011，文件名输入“im_ex”，点击ok，见下图，这样就建立了一个工作文件。在workfile中新建序列im_ex，并录入数据（点击File/Import/Read Text-Lotus-Excel…，找到相应的Excel数据集，打开数据集，出现如下图的窗口，在“Data order”选项中选择“By observation-series in columns”即按照观察值顺序录入，第一个数据是从B15开始的，所以在“Upper-left data cell”中输入B15，本例只有一列数据，在“Names for series or number if named in file”中输入序列的名字im_ex，点击ok，则录入了数据）：

（2）时序图判断平稳性双击序列im_ex，点击view/Graph/line，得到下列对话框：显著非平稳。 IM_EX 240,000 200,000 160,000 120,000 80,000 40,000 556065707580859095000510 （3 因为数据有指数上升趋势，为了减小波动，对其对数化，在Eviews命令框中输入相应

培养基适用性验证

培养基适用性验证方案起草人：方案审核人：方案批准人： XXXXX药业股份有限公司

目录 1. 验证目的 (2) 2. 参照标准 (2) 3. 验证项目 (2) 4. 验证小组人员及职责 (3) 5. 验证可接受的标准 (3) 6. 验证步骤 (3) 7. 菌液制备 (6) 8. 适用性检查 (6) 9. 控制菌检查 (7) 10. 操作方法 (8) 11.结论 (11)

1. 验证目的：需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基及控制菌培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数及测定和控制菌适用性检查。 2. 参照标准：2015版中国药典微生物限度检查法。 3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查和控制菌适用性检查。 4.验证小组人员及职责： 4.1验证小组人员: 4.2验证人员职责及要求 4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。 4.2.2认真观察并做好验证原始记录。 4.2.3对实施验证的结果负责。 4.3验证中各部门的职责 4.3.1验证领导组职责 4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。 4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。 4.3.1.3负责验证方案的批准工作。 4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。 4.3.1.5负责验证报告的批准工作。 4.3.2验证工作小组职责 4.3.2.1负责验证方案的起草工作。 4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。 4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。 4.3.2.5参与验证结果的评价工作。 4.3.3质量部职责 4.3.3.1负责验证方案的审核工作。 4.3.3.2负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。 4.3.3.3负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。 4.3.3.4负责验证资料和报告的审核工作。 4.3.3.5负责验证文件回收、归档管理工作。 5. 合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。 6. 试验材料： 6.1. 被验证产品：溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基、肠道菌增菌液培养基、RV沙门菌增菌液培养基、麦康凯琼脂培养基、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基、麦康凯液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基 6.2. 仪器设备： 6.2.1. LXD型压力蒸汽灭菌器 6.2.4.JMP-250霉菌培养箱(20～25℃) 6.2.5. SHP-250生化培养箱(30～35℃) 6.2.7 101-1电热鼓风干燥箱

实验用培养基适用性检查标准操作规程

起草人Prepared by: 起草日期 Date: _____________________ QC 审核人Reviewed by: 审核日期 Date: _____________________ QC 审核人Reviewed by: 审核日期 Date: QA 批准人Approved by: 批准日期 Date: 质量部QD

目的Purpose 为保障微生物检验的准确性及相关工作特制定本规定。范围Scope 本程序适用于微生物限度测定培养基的适用性检查及相关工作。职责Responsibility 分析员：严格按照本操作规程执行。及时完成各类相关记录。在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。主管：监督本操作规程的执行。对检验员进行必要的培训。指导任何可能的OOS和偏差调查。内容procedure 1检验员应根据培养基配制程序或培养基各自的说明书配制培养基。 2试验用菌种及培养基 2.1菌种: 2.1.1培养基灵敏度测试所用的菌株传代次数不得超过5代，从国家药检所或菌种保藏中心购买。 2.1.2枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[ATCC 6633] 2.1.3大肠埃希菌(Escherichia coli) [ATCC 8739] 2.1.4金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [ATCC 6538] 2.1.5白色念珠菌(Candida albicans) [ATCC 10231] 2.1.6黑曲霉(Aspergillus niger)[ATCC 16404] 2.1.7伤寒沙门菌(Salmonella) [ATCC 14028] 2.1.8铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [ATCC 9027] 2.2培养基 2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌。 2.2.2大豆酪蛋白消化肉汤Soybean-Casein Digest Broth 2.2.3大豆酪蛋白消化琼脂Soybean-Casein Digest Agar 2.2.4沙氏葡萄糖琼脂Sabouraud Dextrose Agar 2.2.5肠道菌增菌肉汤Enterobacteria Enrichment Broth Mossel

枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌产酶研究分析

个人收集整理仅供参考学习枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌产酶分析一、概述 1. 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属地一种.单个细胞0.7～0.8 ×2～3微米，着色均匀. 无荚膜，周生鞭毛，能运动.革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9 ×1.0～1.5 微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大.菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭.需氧菌.可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚.b5E2RGbCAP 有地菌株是α-淀粉酶和中性蛋白酶地重要生产菌；有地菌株具有强烈降解核苷酸地酶系，故常作选育核苷生产菌地亲株或制取5'-核苷酸酶地菌种.在遗传学研究中应用广泛，对此菌地嘌呤核苷酸地合成途径与其调节机制研究较清楚.广泛分布在土壤及腐败地有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名.p1EanqFDPw

2.地衣芽孢杆菌地衣芽孢杆菌，种属芽孢杆菌科细菌为革兰氏阳性杆菌；细胞大小：0．8μm×（1．5～3．5）μm；细胞形态及特点：细胞形态和排列呈杆状、单生.细胞内无聚-β-羟基丁酸盐（PHB ）颗粒，产生近中生地椭圆状芽孢，孢囊稍膨大. 在肉汁培养基上地菌落为扁平、边缘不整齐、白色、表面粗糙皱褶，24h 后菌落直径为3mm.本菌有动力.可调整菌群失调达到治疗目地，可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌.能产生抗活性物质，并具有独特地生物夺氧作用机制，能抑制致病菌地生长繁殖.DXDiTa9E3d 二、产酶地种类 1.枯草芽孢杆菌代谢产酶种类枯草芽孢杆菌产生多种酶和其他代谢产物，主要由以下几个方面：枯草芽孢杆菌菌体在生长过程中产生地枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质对致病菌或内源性感染地条件致病菌有明显地抑制作用；RTCrpUDGiT 枯草芽孢杆菌能迅速消耗消化道内环境中地游离氧，形成肠道低氧环境，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道PH 值，间接抑制其它致病菌地生长；5PCzVD7HxA 枯草芽孢杆菌能刺激动物免疫器官地生长发育，激活淋巴细胞，提高免疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能，提高群体免疫力； jLBHrnAILg 枯草芽孢杆菌菌体能自身合成消化性酶类，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪