常用化学药品检验方法检验仪器的使用 (ppt 62页)

4．流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↑，组分tR↓，k↓
5．出柱顺序：结构相近组分，极性小的组分先出柱极 性大的组分后出柱
6．适用： n 氰基键合相与硅胶的柱选择性相似（极性稍小），
分离物质也相似
n 氨基键合相与硅胶性质差别大，碱性，分析极性大 物质、酚、羧酸、核苷酸、糖类、氨基酸等
2. 流程图：fig3-2 3.分类
a.双柱型：化学抑制型离子色谱法； b.单柱型：非抑制型，用低电导的洗脱液；
4.分离机制 （阴离子为例）
被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流 动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换， 根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。
色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、 选择性好、分析速度快等。
使用色谱柱时应注意事项： 1 避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。 2 应逐渐改变溶剂的组成，不应直接从有机溶剂改变为全
部是水，反之亦然。 3 一般不能反冲，否则会迅速降低柱效。 4 使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破
n （也可用作反相固定相，氨基柱不能用于分离甾酮、还原 糖）
二.液-固色谱法（或液-固吸附色谱法）
1.特点：流动相为液体，固定相为吸附相。
2.分离机制：
Xm + nSa = Xa + nSm K = [Xa][Sm]n / [Xm][Sa]n
3.结论： 显然，分配系数大的组分，吸附剂对它的吸附 力强，保留值就大。
泵
恒压泵、恒流泵。恒流泵按结构又可分为螺旋注射泵、 柱塞往复泵和隔膜往复泵。目前应用的基本上是柱塞 往复泵。（单元泵、四元泵、高压二元泵）
柱塞往复泵使用时的注意事项： 1 防止固体微粒进入泵体造成磨损。 2 流动相不应含有对泵体造成腐蚀的化学物质。 3 泵空转也会磨损柱塞，防止流动相跑空。 4 压力过高会使密封环变形，产生漏液。 5 防止流动相中析出盐晶，应开启柱塞冲洗功能。
4.结论：a.分配系数D愈大，表示溶质的离子与离子交换 剂的相互作用愈强。
b.亲合力高的，在柱中保留值就愈大。 5.应用：a.分离离子或可离解的化合物。
b.主要用于分析有机酸、氨基酸、核酸、多肽等。
离子对色谱法
1.特点：分离效能高，分析速度快，操作简便.
2wenku.baidu.com分离机制：又称偶离子色谱法，是液－液色谱法的分支。
2．固定相：极性小的烷基键合相
C8柱，C18柱（十八烷基Octadecylsilyl，简称ODS ）
3．流动相：极性大的甲醇-水或乙腈-水
流动相极性 > 固定相极性 （RP） 底剂+ 有机调节剂（极性调节剂）
例：水（缓冲盐溶液） + 甲醇，乙腈，THF
4．流动相极性与k的关系：
流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑
常用化学药品检验方法 检验仪器的使用
化学药品检验室
内容：
高效液相色谱仪器 （高效液相）色谱理论 滴定分析法
高效液相色谱仪
一、结构示意图. 二、部件介绍
一般由输液泵、进样器、 色谱柱、检测器、数据记录 及处理装置等组成。
现在的仪器还一般配置有 在线脱气机、自动进样器、 柱温箱等。制备型HPLC 仪还配备有自动馏分收集装 置。
进样器
主要部件为定量环及六通阀。 使用时应注意： 1 样品溶液进样前必须用0.45µm滤膜过滤，以减少微粒
对进样阀的磨损 2 进样量应不大于定量环体积的50% 3 每次分析结束后应冲洗进样阀，现在大部分进样器能
自动实现此功能。 部分自动进样器还能实现柱前衍生化等操作。
（Agilent）
色谱柱
一、液-液色谱
（一）反相键合相色谱 化学键合相：利用化学反应将固定液的官能团键合在载体
表面 特点： 不易流失
热稳定性好 化学性能好 载样量大 适于梯度洗脱
1分离机制：分配 + 吸附
疏溶剂理论
流动相与溶质排斥力越强，作用时间↑ ， k↑，组分tR↑ 流动相与溶质排斥力越弱，作用时间↓， k↓，组分tR↓
4.作用：a.适用分离相对分子质量中等油性试样。
b.对具有不同官能团的化合物和异构体有较高 的选择性。
缺点：由于非线性等温吸附常引起峰的拖尾现象。
三.离子交换色谱法
1.分离机制；离子与离子之间的电荷吸引力 2.适用范围；凡能在溶剂中电离的物质一般均可用该法进
行分离。
3.交换：KX = [- NR4+X-][Cl-] / [- NR4+Cl-][X-] DX =[- NR4+X-]/[X-]= KX[- NR4+Cl-]/[Cl-]
坏。 5 流动相应先脱气，避免气泡进入柱体。 6 测试基质复杂的样品时，应用保护柱。 7 定期用强溶剂冲洗色谱柱，清除驻留在柱内的杂质。 8 保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇后塞紧。
高效液相色谱的主要类型及其分离原理
类型（按固定相分子聚集状态和分离机制分）： 分配色谱(液-液色谱)；吸附色谱(液-固色谱)；离子 交换色谱；空间排阻色谱；亲和色谱等。
5．出柱顺序：极性大的组分先出柱
极性小的组分后出柱
6．适用：非极性~中等极性组分
（二）正相键合相色谱
1．分离机制：溶质分子与固定相之间定向作用力、
诱导力、或氢键作用力（有分配和吸附两种说法）
2．固定相：极性大的氰基、氨基、二氨基、芳硝基等键合
相
3．流动相：极性小（同LSC）
底剂 + 有机极性调节剂 例：正己烷 + 氯仿-甲醇，氯仿-乙醇
它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离 子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使 其分离效果改善。
3.分离过程： X+水相 + Y－水相 ↔ X+Y－水相
KXY= [ X+Y－ ]有机相 / [ X+ ]水相· [ Y－ ]水相 DX = [ X+Y－ ]有机相 / X+水相 = KXY· [ Y－ ]水相
4. a.可用C18、C8等常用色谱柱；
b.庚烷磺酸钠等离子对试剂价格贵.
5.应用：解决了以往难分离混合物的分离问题.主要用于
分析离子强度大的酸碱物质。（三聚氰胺）
离子对色谱分离过程示意图
四、离子色谱法
1.固定相:离子交换树脂，常用苯 乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨 架，在表面未端芳环上接上羧基、 磺酸基（称阳离子交换树脂）或季 铵基（阴离子交换树脂）。 流动相:电解质溶液 检测器:电导检测器，安培 主配件：抑制柱