羊免疫布鲁菌病疫苗(S2株)免疫抗体长期监测结果的试验
多种动物布鲁氏菌病检测及防控建议
中国牛业科学2020,46(3) ：89-91China Ca t lScinc%疫病防治多种动物布鲁氏菌病检测及防控建议王淑芳，闫海全（天祝县动物疫病预防控制中心，甘肃天祝733299）摘要：天祝县是甘肃省羊布病防控一类区，采取羊免疫为主，检疫、监测相结合的多举共同防控措施。
布病是多种动物共患传染病，为了解县域其他动物布病感染情况,2019年对马、 鸡、马鹿、猪、羊驼等动物做了血清学检测，结果显示马鹿阳性率较高达23.5% ,马初筛阳性2例。
据调查分析，有防控措施执行不严等许多原因，并对此提出了意见建议。
关键词：多种动物；布鲁氏菌病;检测中图分类号：S823 文献标识码：A文章编号#10017111 （2020）06-0089-03布鲁氏菌病（简称布病），又称波状热，是由布 鲁氏菌属细菌侵入机体引起的人畜共患传染病**早 已经被世界动物卫生组织列为必须通报的传染病之一,我国将其定为人的乙类传染病,动物的二类传染病，该病一直是我国重点防控的人畜共患病,2018年列为国家动物强制免疫病种之一*收稿日期#2020-06-12 修回日期：2020-06-19作者简介:王淑芳（1972&），女，本科，高级兽医师，主要从事实验室监测工作**通讯作者：闫海全（1983—）,男，本科，兽医师，主要从事畜禽防控监督*1天祝县畜间布病流行情况2005年天祝县被甘肃省动物疫控中心定为列为动物布鲁氏菌病定点监测县*监测对象为牛羊,其中以羊为主*每年检测数量4 000份以上，实际 2005年以前每年都有布病监测任务，只是数量少,仅200份*结果是2000年至2010年没检测出阳性,2011年始阳性家畜不断出现，其中2013年羊阳 性率为4-14%，牛0. 83%，成为甘肃省羊布病流行 一类区* 2016年开始，天祝县作为甘肃省布病免疫县之一，对3月龄以上羊进行强制免疫（种羊场和种公羊除外），形成检疫、监测和免疫相结合共同防控牛羊布病,但多年以来，对天祝县其他动物没做过布病感染调查，为了解布病在多种动物的感染情况, 今年对天祝县马、鸡、马鹿、猪、羊驼等动物采集样品，做了血清学检测*2动物来源马:采自打柴沟镇3个村156份血样;猪:采自 12个乡镇30个村146份血样;鸡:来自6乡镇12个村 76 血样;:天 种 场 15 血样; 马鹿:来自甘肃创兴生物工程有限责任公司98份血样，合计样品共491份样品*采样时间均是2019年*33.1检测方法布病虎红平板凝集试验与试管凝集试验*平板凝集实验初筛，阳性者再作试管凝集试验确诊*3.2诊断液布病虎红平板凝集抗原批号$1700406014,及阴阳血清，均来源于青岛易邦生物工程有限公司;试 管凝集抗原批号010041904，及阴阳对照血清,均来 源于青岛立见诊断发展中心*4结果与分析多种动物 虎板凝集和 管凝集性率结 1*1） 表中显示天祝县马和马鹿均有布病感染，其余均为0*说明马鹿和马对天祝县流行布病菌种易, 马 性 马, 、 、 不 * 马血样平板凝集有2例阳性，确诊时均为阴性（其中1例样品有沉淀），样品来自1个乡镇3个村，采样不广 泛,下一步应全县广泛采样重新检测,准确了解马布病感染情况,再制定可行的防控措施*2） 马鹿场为野生动物人工驯化养殖场，自繁自90中国牛业科学第46卷养,一直以来自行防控动物疫病，没列为全县布病监知布病感染率，可见养殖者对布病知识的缺乏和不测范畴,2019年出省调运活鹿作实验室检测时才得重视。
布病疫苗不同免疫方法对比评价
试 验 研 究农业开发与装备 2019年第8期摘要：布病是一种由布鲁氏菌引起的人畜共患病，给人类健康、畜牧养殖业及动物源性食品安全带来了巨大的威胁。
因此，必须加强布病防控工作，而优良的免疫方法是布鲁氏菌病防控的先决条件。
通过滴眼免疫、灌服免疫、自由饮水免疫等方法对实验羊只进行疫苗免疫，采集实验动物血清，通过虎红平板、试管凝集等方法对比免疫前、免疫后不同时期抗体水平。
结果表明，采用灌服方法免疫效果较好，适合推广使用。
关键词：布病；S2布病疫苗；试管凝集实验；免疫抗体0 引言布鲁氏菌是一种革兰氏阴性，兼性胞内寄生菌，易感宿主广泛，能引起人和多种动物患布鲁氏菌病，简称布病。
根据致病性以及宿主嗜性将其分为9个种（牛种、羊种、绵羊附睾种、猪种、犬种、沙林鼠种、田鼠种、鲸类种、鳍类种）21个生物型[1]。
其中感染人的有牛、羊、猪、犬及海洋种。
羊种布鲁氏菌的致病性最强，临床上以牛、羊、猪的布鲁氏菌病的影响最大[2]。
人感染布鲁氏菌病其临床表现为持续波状热状态，并伴发多汗、关节肿痛或肝脾肿大等，患者部分或完全丧失劳动力，妇女易流产，男性则因睾丸炎、睾丸肿大而导致失去生育能力，患者常伴发关节炎、心内膜炎等，反复发作，临床治疗只能治疗其表面临床症状，难以根治。
动物布鲁氏菌病，常见宿主为牛、羊、猪等，临床症状是生殖器官、胎膜、多种组织器官的发炎、坏死，公畜易患睾丸炎、附睾炎，导致公畜的不育，母畜易导致流产和不孕，弱胎、死胎等。
该病给人类健康、畜牧养殖业及动物源性食品安全带来了巨大的威胁，布病的防制工作面临巨大的挑战，因此，必须加强布鲁氏菌病监测和防控工作，而优良的免疫方法是布鲁氏菌病防制的先决条件[3]。
采用滴眼免疫、灌服免疫、自由饮水免疫等方法对实验羊只进行疫苗免疫，采集实验动物血清，通过虎红平板、试管凝集等方法对比免疫前、免疫后不同时期抗体水平，通过数据分析，得出最佳免疫方法，旨在确定更加方便、效率更高的免疫方法，具有推广价值。
布鲁氏菌疫苗株S2全基因组测序及牛羊布鲁氏菌比较基因组学研究
布鲁氏菌疫苗株S2全基因组测序及牛羊布鲁氏菌比较基因组学研究红梅;冯陈晨;岳建伟;呼和巴特尔;王文龙【摘要】目的为了了解布鲁氏菌S2疫苗株全基因组结构及分子生物学功能.方法对布鲁氏菌疫苗株S2进行全基因组测序,并与GenBank公布的6株牛羊布鲁氏菌进行比较基因组学研究.结果与结论通过全基因组测序发现S2基因组大小为3 331 982 bp,预测基因有3 243个,GC含量为57.23％.S2预测基因中大多数基因功能主要与糖代谢、氨基酸代谢、氨基酸转运和膜转运有关.通过比较基因组学研究发现S2有20个特有基因.另外S2与GenBank公布的S2序列进行比对发现有19个差异基因.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2014(030)011【总页数】4页(P1133-1136)【关键词】布鲁氏菌;布鲁氏菌疫S2疫苗株;全基因组测序;比较基因组学研究【作者】红梅;冯陈晨;岳建伟;呼和巴特尔;王文龙【作者单位】内蒙古农业大学兽医学院,农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特010018;内蒙古农业大学兽医学院,农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特010018;内蒙古农业大学兽医学院,农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特010018;内蒙古农业大学兽医学院,农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特010018;内蒙古农业大学兽医学院,农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特010018【正文语种】中文【中图分类】R378布鲁氏菌病(Brucellosis，简称布病)是由布鲁氏杆菌(Brucella，简称布氏菌)引起的一种人兽共患病。
布鲁氏杆菌分为7个种。
据统计，截至2009年，我国有29个省(区﹑市)发生人蓄间布鲁氏杆菌病流行，牛﹑羊﹑猪感染达百万头之多。
2009年人感染布鲁氏杆菌病新增病例为3.7万，达到了历史最高水平[1]。
国外也有类似情况，并造成危害[2-3]。
山区山羊布鲁氏菌病的监测报告
2020年第04期布鲁氏杆菌病(以下称布病)是由布鲁氏菌杆菌引起的人畜共患传染病,临床上以牛、羊、猪种布鲁氏菌最为常见,其中羊种布鲁氏菌的致病力最强,约80%的人感染病例由羊布鲁氏菌引起。
本文通过对2017～2019年88个山羊养殖场的饲养、引种等生产情况进行调查，采取检测-扑杀-监测-净化等综合防控措施，应用虎红平板凝集试验初筛，cELISA 复核确诊，对山区家畜布病监测控制净化具有重大意义。
1龙山县畜牧业概况龙山县是国家级贫困山区县，草场面积15万hm 2，饲养有南江黄羊、波尔山羊、湘东黑山羊、武雪山羊等优良品种。
山羊养殖业已成为山区脱贫致富的支柱产业，2018年山羊养殖户有1712户，饲养山羊14.2万只，出栏6.4万只。
2019年山羊养殖户有1740户，饲养山羊14.5万只，出栏6.65万只。
近些年，我县狠抓牛羊布病防控工作，以春秋两防免疫效果评估和牛羊布病基线调查为契机，采取检测-扑杀-监测-控制（净化）等综合防控措施，使布病得到有效控制，保障了公共卫生安全，促进畜牧业健康发展。
2监测情况2017～2019年，共监测88个山羊养殖场，所采集样品来自非免疫养殖场，应用虎红平板凝集试验初筛，cELISA 复核确诊，检测样品3661份，主动监测发现3起布鲁氏菌病疫情，并按照技术规范处置了疫情，及时反馈给县疾控中心和上级业务部门，疾控部门监测发现阳性场的畜主感染了人间布鲁氏菌病，得到了省州业务部门和县人民政府的肯定。
从表1中可以看出：2017~2019年连续8年监测88户，检测样品3661份，共检出布病阳性场户3户，布病阳性血清15份，总个体阳性率为0.41%。
总场群阳性率为3.41%。
2017年、2018年、2019连续3年个体阳性率在0.5%以下。
从图1可以看出人间布病发病情况与羊布病感染趋势基本一致，凡是羊布病阳性率高的地方，人间发病率较高，感染人员为饲养放牧人员。
人间发病率与动物发病率相对同步，这与全国布病发病趋势相一致。
羊布病血清学诊断方法
羊布病血清学诊断方法羊布病（Brucellosis）是一种由布氏杆菌（Brucella）引起的传染病，以母羊不孕、流产、产死胎或弱胎，公羊发生睾丸炎和附睾炎等临床特征。
羊布病的血清学诊断方法主要有以下几种：1.凝集试验（Agglutination Test）凝集试验是一种常用的血清学诊断方法，可用于检测布氏杆菌的特异性抗体。
该方法是将细菌悬液与待测血清混合，观察其是否发生凝集反应。
如果待测血清中含有布氏杆菌的特异性抗体，会与细菌产生凝集反应，从而间接检测出布氏杆菌感染。
2.补体结合试验（Complement Fixation Test）补体结合试验可以检测布氏杆菌的抗原和抗体，具有较高的特异性和灵敏度。
该方法是将待测血清与特异性抗原结合，再加入补体，观察是否发生补体结合反应。
如果待测血清中含有布氏杆菌的抗体，会与抗原结合并激活补体，从而间接检测出布氏杆菌感染。
3.免疫荧光技术（Immunofluorescence Technique）免疫荧光技术是一种用于检测布氏杆菌抗原和抗体的方法。
该方法是将特异性抗体与荧光染料标记，再与待测样本中的抗原反应，观察是否有荧光信号产生。
如果有荧光信号产生，说明待测样本中含有布氏杆菌抗原。
4.酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）酶联免疫吸附试验是一种灵敏度高、特异性强、重复性好的血清学诊断方法。
该方法是将特异性抗原固定在固相载体上，再与待测血清中的抗体反应，加入酶标二抗后显色反应，用酶标仪测定光密度值，从而检测出布氏杆菌抗体。
5.胶体金免疫层析法（Gold Immunoassay）胶体金免疫层析法是一种快速、简便、准确的血清学诊断方法。
该方法是将特异性抗原固定在硝酸纤维素膜上，再加入胶体金标记的抗体，形成金标复合物，利用胶体金颜色变化产生的颜色信号来判断待测样本中是否存在布氏杆菌抗原或抗体。
以上是羊布病的血清学诊断方法，各种方法具有不同的优缺点和适用范围。
关于兽医实验室实用布鲁氏菌病检测方法
X u m u s h o u y i针对兽医实验室实用布鲁氏菌病检测方法进行分析，常规方式包含细菌分离培养、PCR技术及凝集试验等。
但是受到实验设施、检验成本等因素的影响，检验的结果不够理想。
随着现代兽医学的方法，酶联免疫吸附试验、荧光偏振分析技术及环介导等温扩增技术等开始在布鲁氏病菌检测中得到应用，可提升临床检测的准确度，为针对性治疗活动奠定基础。
布鲁氏菌病，也可以称之为布氏杆菌病、布鲁氏杆菌病等，是布鲁氏菌属细菌诱发的细菌感染性疾病，细菌可传播。
患病的母畜多具有流产、胎盘不下的症状特征，公畜则具有睾丸炎、附睾炎等临床症状，对畜牧业的持续发展会产生不利影响，甚至会危及公共卫生安全。
我国自2004年开始，将布鲁氏菌病纳入到重大动物疫病监测工作中，每年两次检验重点地区的牛羊病菌状态。
及时检出布鲁氏菌病，可预防细菌的传播。
一、布鲁氏菌病的常规检测方法1、细菌分离培养布鲁氏菌可通过细菌培养的方式，了解病菌情况，实验室检测率较高。
但是由于布鲁氏菌病属于二类动物病原微生物，为高致病性动物病原微生物，需要在国家生物安全三级（ABSL-3）或者四级（ABSL-4）实验室认可证书的实验室开展试验检测工作，通常难以在市级兽医实验室开展，临床检验受到限制。
2、PCR技术PCR技术主要是依据布鲁氏菌基因组内的特异保守序列进行分析，获取患病牲畜的血液、乳汁或者是分泌物等，根据扩增的情况进行临床判断。
PCR技术的应用方式简单，临床检测灵敏度、特异性均相对较强，且可以同时检测较多样本。
但是缺点在于仪器设备价格较高，检测成本较高。
3、凝集试验凝集试验为当前实验室检测布鲁氏菌病的主要方式，主要是应用虎红平板凝集试验（RBPT）、试管凝集试验（SAT）等进行检测。
细菌抗原和对应血清融合后，在电解质的影像系，抗原和抗体凝结。
凝集试验的操作方式简单，价格相对较低。
但是缺点在于难以分辨野毒感染抗体和弱毒疫苗感染抗体，可以将其作为筛检感染畜群的方式。
兰州市羊布病血清学监测结果与分析
知》 （ 国办发 ｛ ２ ０ １ ２ ］３ １号 ） 和 甘 肃
省 兽 医局 《 关 于 下 发 甘 肃 省 主 要 人 畜
学检测共 ７ ８ ８ ６份 ， 虎 红平 板 凝 集 试 验 （ Ｒ Ｂ Ｐ Ｔ ） 阳 性 ８ 份 ， 斌 管 凝 集 试 验 （ Ｓ Ａ Ｔ ） 阳 性 ８份 ，Ｒ Ｂ Ｐ Ｆ 、Ｓ Ａ Ｔ 阳性 率
分 区域 、分 阶段 Ｊ ｆ 展 控 制 和净 化 行 动 ，
从本 次监 测结果 看 ，兰州 『 存 存
布 鲁 氏 菌 病 阳 性 羊 ，但 比 例 不 人 ．属 于羊 布病 稳 定控 制 区标 ７ 伴 （ ≤０ ． １ ％）
池围
逐 步 控 制 、 消 灭 和 净 化 布 病 等 人 畜 共
１ ． １ ． １ 被 检 ｍ清 以ｉ ． ｔ ． 州 市 辖 内 ９个 县 ８ ２个 乡
镇 （ 街 道 ）的 行 政 村 为 采 单 元 ， 按 全 ｒ ｌ 』 存栏 ７ ５万 余 只 羊 的 １ ％采 集 了 ７ ８ ８ ６份 血 清 待 检 ，其 中 绵羊 ｍ 清 ７ １ ９ ０
１ ． １ ． ２ 诊 断 液
布 鲁 氏 菌 病 板 凝 集 阳 性 Ｉ Ｉ Ｉ Ｌ 清 、 阴 性 血 清 、抗 原 和 布 鲁 氏 菌 病 试 管 凝
建 成 小 康 社 会 ， 正 在 肝 展 以 单 位 联 系
贫 困 村 、干 部 联 系 贫 困 户 为 主 要 内 容 的 “ 联村联 户 、为民 富民”行 动 ，
区要 加 大 布 鲁 氏 菌病 的 监测 力度 。 由 于 兰 州 地 ＃ 的 存 栏 数 量 大 ． 遍 布 范 围 Ｉ ｌ ‘ ，规 模 化 程 度 低 ，流 通 交 易 频 繁 ，给 羊 布 鲁 氏 菌 病 的 防控 下作
实验四 布鲁氏菌病检疫 - 兽医学院
实验四 布鲁氏菌病检疫课程名称：动物传染病学实验学时：4学时一、 实验目的初步掌握布鲁氏菌病试管凝集试验的免疫生物学检疫方法。
二、 实验原理应用血清学方法检出血清中有抗体存在，则说明被检动物为布氏杆菌病患畜。
动物感染布氏杆菌以后首先出现的是凝集抗体，再过一段时间才出现补体结合抗体，最后产生变态反应性。
补体结合反应是一种高度特异性的，其阳性反应与感染的符合率，比血清凝集试验与感染的符合率高。
我国的家畜布氏杆菌病检疫应用的免疫生物学方法主要是凝集试验。
试管凝集反应：本试验按《家畜布氏杆菌病试管凝集反应技术操作规程及判定标准》进行。
三、 实验内容（一）实验准备1、抗原：由兽医生物药品厂生产供应。
使用时用O．5％石炭酸生理盐水作1：20稀释，长霉或出现凝集块的抗原不能应用。
2、 被检血清：必须新鲜，无明显蛋白凝固，无溶血现象和腐败气味。
阳性血清和阴性血清：由兽医生物药品厂生产供应。
3、稀释液：0．5％石炭酸生理盐水，用化学纯石炭酸与氯化钠配制，经高压灭菌后备用。
4、 用具：1ml滴管、10ml滴管、试管架、洗耳球、10ml玻璃试管、移液器。
（二）实验步骤1、布病试管凝集反应牛血清稀释和加抗原的方法试管号（牛编号） 1 2 3 4 5血清最后稀释度 1:25 1:50 1:100 1:2001:4000.5%石灰酸生理盐水（ml） 2.4 0 0.5 0.5 0.5被检血清（ml） 0.1 0.5 0.5 0.5 0.5 弃去0.5诊断抗原1:20 0 0.5 0.5 0.5 0.5 悬空加样判 定比浊管配制方法试管号 抗原稀释(ml) 1:40 0.5%石灰酸生理盐水(ml)清亮度% 判断（标记）1 0 1.0 100 ++++2 0.25 0.75 75 +++3 0.5 0.5 50 ++4 0.75 0.25 25 +5 1.0 0 0 －2、全部试管充分振荡后，置37℃温箱中22~24小时后，用比浊管对照并记录结果。
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羊免疫布鲁菌病疫苗(S2株)免疫抗体长期监测结果的试验苏胜杰;马立峰;戴晓光;申捷;萨茹拉;郭少平;赵心力【摘要】为探究羊经布鲁菌病疫苗(S2株)免疫后的血清抗体长期动态消长规律,本试验于2012年9月-2015年9月选取阿拉善盟阿拉善左旗96只山羊、100只绵羊作为试验动物,经布鲁菌疫苗(S2株)100亿CFU、200亿CFU不同免疫剂量灌服,分别于免疫前和免疫后不同时间段采血分离血清,应用虎红平板凝集试验和试管凝集试验进行抗体监测.结果表明,绵羊组在一免后20 d时,血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,150 d抗体阳性率降至0％,免疫后180 d ～360 d,绵羊组抗体阳性率一直处于较低水平(0％～4％),二免和三免后不同时间段免疫抗体消长规律与首次免疫基本一致;山羊组抗体阳性率在免疫后20 d时,血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,免疫后90 d～360 d,免疫抗体时高时低,起伏较大,无明显规律,二免和三免后不同时间段免疫抗体消长规律与首次免疫基本一致,结果同时表明,100亿CFU和200亿CFU两个免疫剂量组的抗体阳性率无明显差异.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2019(055)003【总页数】4页(P29-32)【关键词】绵羊;山羊;布鲁菌;抗体;监测【作者】苏胜杰;马立峰;戴晓光;申捷;萨茹拉;郭少平;赵心力【作者单位】内蒙古自治区动物疫病预防控制中心,内蒙古呼和浩特010010;内蒙古自治区动物疫病预防控制中心,内蒙古呼和浩特010010;内蒙古自治区动物疫病预防控制中心,内蒙古呼和浩特010010;内蒙古自治区动物疫病预防控制中心,内蒙古呼和浩特010010;内蒙古自治区动物疫病预防控制中心,内蒙古呼和浩特010010;内蒙古阿拉善盟动物疫病预防控制中心,内蒙古阿拉善750306;内蒙古自治区动物疫病预防控制中心,内蒙古呼和浩特010010【正文语种】中文【中图分类】S853.31布鲁菌病,是由布鲁菌引起人、家畜和多种野生动物共患的一种慢性细菌性传染病,简称布病。
本病呈全球流行具有重要的公共卫生意义,给世界经济造成巨大损失[1]。
布鲁菌是该病病原,该病主要经过消化道、皮肤黏膜和呼吸道等途径侵入机体而发生感染和发病,该病主要对动物生殖系统造成严重损害,也会对神经系统和骨骼系统造成损害。
布鲁菌主要寄生于网状淋巴组织,造成免疫系统病理进程。
对于布病流行严重地区,疫苗接种是控制该病的重要手段,目前,国内主要用布鲁菌活疫苗S2、A19、M5对易感动物进行免疫[2]。
其中使用最为广泛的是S2疫苗。
但这些疫苗免疫均存在一个共同弊端,均不能通过血清学方法区分自然感染和疫苗免疫抗体,从而影响对该病的诊断和防控。
为探究布病S2疫苗免疫绵羊和山羊抗体长期消长规律,我中心对S2疫苗免疫羊监测一年的基础上,又进行了两年的免疫抗体监测结果研究,为布病疫苗临床应用、布病实验室检测和科学防控提供参考。
1 材料与方法1.1 试验疫苗布鲁菌病活疫苗(S2株),购自中牧实业股份有限公司。
1.2 检测试剂布鲁菌虎红平板凝集抗原、布鲁菌试管凝集抗原及布鲁菌阴、阳性血清,均购自中国兽医药品监察所。
1.3 实验动物选取非免疫区阿拉善盟阿拉善左旗经布鲁菌虎红平板凝集试验、布鲁菌试管凝集试验检测均为阴性试验羊,分组情况见表1。
表1 试验羊分组免疫100亿______________CFU组免疫200亿CFU组_____空白对照组合计阿左旗山羊 48 48 25 121阿左旗绵羊_________50___________________________________________50_25_1251.4 免疫方法灌服免疫,免疫剂量100亿CFU组绵羊、山羊在一免后360 d、720 d分别进行1次加强免疫,口服免疫剂量200亿CFU组绵羊、山羊只免疫1次。
1.5 免疫抗体检测在免疫前、一免、二免、三免后对所有试验羊进行采血分离血清,采用虎红平板凝集试验、试管凝集试验检测免疫抗体水平。
实验操作按照GB/T18646-2002进行。
1.6 选取试验过程中抗体一直阳性或抗体转阳后转阴又转阳持续2个月以上羊只进行剖检,观察病理变化,并进行细菌培养。
2 结果2.1 100 亿CFU免疫剂量组绵羊、山羊检测结果100 亿CFU免疫剂量组绵羊一免后20 d时血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,一免后150 d血清抗体阳性率降至0%,一免后180 d～360 d抗体阳性率处在较低水平(0% ～4%);二免后30 d血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,二免后150 d血清抗体阳性率降至2.8%,二免后180 d～330 d抗体阳性率有高有低,二免后360 d抗体阳性率降至2.5%;三免后60 d血清抗体阳性率又达到最高峰,之后一直呈现下降趋势,三免后360 d抗体阳性率降至2.6%,空白对照组抗体检测均为阴性;100亿CFU免疫剂量组山羊一免后20 d时血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,一免后90 d～三免后360 d抗体阳性率时高时低,规律不明显,空白对照组抗体检测均为阴性,检测结果见图1。
图1 100亿CFU免疫剂量组绵羊、山羊抗体消长曲线2.2 200 亿CFU免疫剂量组绵羊、山羊检测结果200亿CFU免疫剂量组绵羊免疫后20 d时血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,免疫后150 d血清抗体阳性率降至0%,免疫后180 d～1 080 d抗体阳性率有高有低。
空白对照组抗体检测均为阴性;200亿CFU免疫剂量组山羊一免后20 d时血清抗体阳性率达到最高峰,之后呈下降趋势,免疫后90 d～免疫后360 d抗体阳性率时高时低,规律不明显,空白对照组抗体检测均为阴性,检测结果见图2。
图2 200亿CFU免疫剂量组绵羊、山羊抗体消长曲线3 讨论3.1 100 亿CFU免疫剂量组绵羊在一免后20 d时,血清抗体阳性率达到最高峰为82%,之后呈下降趋势,免疫后150 d,抗体阳性率降至0%,此后,直到免疫360 d抗体阳性率维持在0% ～4%之间;二免疫后30 d血清抗体阳性率达到最高峰为47.5%,直到二免后150 d血清抗体阳性率降至3%,二免后180 d～330 d血清抗体阳性率时高时低,阳性率维持在14%～30%之间,二免后360 d抗体阳性率又降至3%;三免后60 d血清抗体阳性率又达到最高峰为87.2%,三免后90 d～360 d 抗体阳性率呈现下降趋势;100亿CFU免疫剂量组山羊在免疫后20 d时,抗体阳性率达到最高峰为100%,免疫后90 d～330 d抗体阳阳性率时高时低,处于10% ～25%之间,免疫后360 d抗体阳性率降至5%,二免后和三免后抗体消长规律基本与一免后抗体消长规律一致;200亿CFU免疫剂量组绵羊在免疫后20 d时,血清抗体阳性率达到最高峰为92%,免疫后150 d,抗体阳性率降至0%,免疫180 d～360 d 抗体阳性率处于0%～8%之间;200亿CFU免疫剂量组山羊在免疫后20 d时,抗体阳性率达到最高峰为100%,免疫后90 d～360 d抗体阳阳性率时高时低,处于18% ～35%之间。
田素梅研究表明,绵羊经S2疫苗免疫,免疫15 d抗体达到最高值,至9个月仍然可以检测到凝集抗体[3],高红霞研究表明,羊经S2疫苗免疫后,一个月时凝集抗体达到最高峰[4],党富德研究表明,奶山羊经S2疫苗免疫后25 d,抗体阳性率达到最高峰,在以后不同时间段抗体阳性率也出现时高时低现象[5],通过本研究证实,无论是多次免疫或一次免疫绵羊组和山羊组,在免疫后30 d左右,抗体阳性率均达到最高峰,之后在不同时间段均出现抗体阳性率时高时低的现象。
3.2 通过100亿CFU、200亿CFU免疫剂量组试验羊抗体阳性率来看,两组试验羊阳性率并无明显差异,所以对疫苗免疫后的检测进行评价时,无需考虑免疫剂量大小的影响。
3.3 通过试验羊抗体转阳率看,山羊组免疫抗体阳性率较同时期绵羊抗体阳性率普遍偏高,且升降幅度较大,这可能与山羊对疫苗免疫敏感性较高有关,有待于进一步研究。
3.4 通过多次免疫试验羊抗体转阳率看,无论绵羊组和山羊组,在首次免疫、二免和三免后30 d左右抗体阳性率均达到最高峰,但绵羊二免后、山羊二免和三免后试验羊抗体阳性率最高值较首次免疫低,可能与多次免疫造成试验羊对疫苗敏感性降低有关,有待于进一步研究。
3.5 通过100亿CFU、200亿CFU免疫剂量组绵羊抗体转阳率看,在免疫后150 d,抗体阳性率已降至0%,但后期有出现个别试验羊抗体转阳现象,选取4只抗体阴转阳的试验羊进行剖检,并未发现剖检羊脏器出现病理变化,同时进行细菌培养,未见布鲁菌菌落,说明抗体转阳的羊不是布鲁菌自然感染,可能与疫苗免疫有一定关系,也可能由其他因素引起,需进一步研究。
3.6 通过绵羊组抗体转阳率发现,在一免后150 d和二免后150 d虎红平板凝集试验检测抗体转阳率为0%,初步摸索了羊经3次免疫布鲁菌S2株疫苗后血清抗体规律,为鉴别绵羊自然感染和疫苗免疫抗体消长规律提供参考。
3.7 通过一次免疫试验羊抗体阳性率发现,在免疫后390 d和740 d抗体阳性率均出现较小幅度升高,可能与多次免疫羊混群饲养,羊群互相舔舐及吸入环境中疫苗有关,同时一次免疫组试验羊在免疫较长时间后,仍然能够检测到阳性动物。
3.8 通过虎红平板凝集试验和试管凝集试样两种检测方法对所采集样品的检测结果看,虎红平板凝集试验检测样品阳性率较试管凝集试验高,也证实虎红平板凝集试验敏感性较高,而试管凝集试验特异性较高。
在日常布病监测工作中,先进行虎红平板凝集试验筛选,同时对检测阳性样品进行试管凝集试验,有助于更准确判定羊的感染状况。
参考文献：【相关文献】[1]陆承平.兽医微生物学[M].4版.北京：中国农业出版社,2005：265-271.[2]Seleem M N,Boyle S M,Sriranganathan N.Brucellosis areemerging zoonosis[J].Vet Microbiol,2010,140(3/4)：392-398.[3]田素梅,周红菊,温都苏,等.绵羊杭布鲁氏菌特异性IgG,IgA和IgM抗体的观察[J].中国人兽共患病杂志,1993,9(3)：53.[4]高红霞.不同血清学方法检测牛羊布鲁氏菌疫苗免疫抗体消长规律的比较研究[J].畜牧兽医杂志,1990(4)：17-18.[5]党富德,何玉财.奶山羊断奶后连年两次口服布鲁氏菌S2菌苗后免疫抗体消长规律试验观察[D].哈尔滨：东北农业大学,2010：28-29.。