大泷六线鱼链球菌病的病原及其防治
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ｔ ｏ ｕ ｉ ａ（ Ｃ Ｃ ６７ 购 自韩国标准细菌库。 ｏ ｃ ￣ ｎ ｅ Ｋ Ｔ ３５ ） ｃｃ ｉ
１２ 方法 ．
１２ １ 病 原 菌的分 离 现场 将 大泷 六线 鱼脑 脊 液 ．． 涂布 于干净 的载 玻 片上 ，干 燥后 进 行 革 兰 氏染 色 ， 显微镜 下 ５ ９７年在 日本 的 虹 鳟 养 殖 场 被 首 次 发 现 ， 目前 已导 致 罗 非 鱼 、 Ｊ 牙 鲆、大 菱 鲆 等 ２ ７种 海 水 、淡 水 鱼 类 感 染 发 病＂ 引。造成 鱼 类 感 染 致 病 的链 球 菌 主 要 种 类 有
海 豚 链 球 菌 Ｓｒ ｔ ｏｃｓ ｎａ¨ ｔｐｏ ｃｕ ｉ ¨、 无 乳 链 球 菌 ｅ ｃ ｉ ｅ
１３ 首次被 分离 以来 ，对 其研究 历史 已长达 １０ ８７年 ７
治疗效果 ，可为今后大泷六线鱼链球菌病 的准确诊
断和有 效 治疗提 供有 价值 的参考资 料 。
１ 材料 与方 法
１ １ 材料 ．
患病大 泷六 线鱼 取 自辽宁省某 养殖场 ，经充 氧 运 回实验 室 ，用 于解剖 和细 菌分离 ； 标准菌 株 Ｓ ｅ． ｔｐ ｒ
物学手段相 结合 的方法 ，对病原菌进行 了综合鉴
收 稿 日期 ： ０９— ９－ ８ ２０ ０ ０
将单菌落接种于含体积分数为 １％甘油 的营养 肉 ０ 汤培养基中，于 一 Ｏ℃下保存备用 。 ８
１２ ２ 茵落形态观察 取纯化后的单菌落接种于 ．． ＢＩ Ｈ Ａ培养基 中，２ ７℃下培养 ２ 后 ，取单菌落 ， ４ｈ 经涂片、固定和革兰氏染色后 ，显微镜下观察并记
Ｇ按质量分数为 ０ １ ． ％的量拌饲投喂病鱼 ，取得 了良好 的治疗效果 。
关键 词 ： 大泷六线鱼 ；链球菌 ；生理生化试验 ；１Ｓ Ｒ Ａ ６ Ｎ ；治疗方法 ｒ
中 图分类 号 ：￥４．２ ９ １４
文 献标 志码 ：Ａ
大泷 六 线 鱼 Ｈ ｘｇａ ｏ ｔ ｉ俗 称 黄 鱼 。 由 ｅａｒｍｍ ｓｏ ｋｉ ａ
基金项 目： 国家 “ ０ ”专项 （０ 一 一 Ｈ ） 大连市科技攻关项 目 （ ０４ １ Ｃ ３ ，２０ Ｂ Ｉ Ｃ ０ ） ９８ ９８ 叭 Ｚ ３ ； ２０ Ｂ Ｎ ０ ０ ０ ６ １Ｎ １９
作者简介 ： 冯春 明 （９ ６一） １８ ，女 ，硕士研究生 。Ｅ—ｍａ ：ｆｒ ９０ １ ＠ｓｎ． ｏ ｉ ｅ ７０ ０ ３ ｉ ｃｒ ｌ ｎ ａ ｎ 通信作者 ： 李华 （９ ８ ） １５ 一 ，女 ，教授。Ｅ— ａ ：ｌ ｕ＠ｄ ｕ ｅｕ ｃ ｍ ｉ ｉ ａ ｌ ．ｄ ． ｎ ｌ ｈ ｆ
（Ｓ ）３ ＴＡ 种培养基以平板划线法分离细菌，于 ２ ７ ℃下 培养 ２ ４ ，挑 取 优 势 菌落 纯化 培养 ３次 。 ４～ ８ｈ
者首次报道了大泷六线鱼的海豚链球菌病 ， 在分离 纯化 病原 细 菌并经 人工 回接 感染试 验确 定其致 病性 的基 础上 ，采 用传 统 生 理 生化 与 １ＳｒＮ ６ Ｒ Ａ分 子生
大 泷 六 线 鱼链球 菌病 的病 原及 其 防治
冯春 明，景宏丽 ，李 莹，李强 ，李华
（ 大连海洋大学 农业部海洋水产增养殖学重点开放实验室 ，辽宁 大连 １６ ２ ） ０ ３ １
摘要 ： ０８ ９ ２０ 年 月，辽宁省某养殖场养殖的大泷六线鱼 Ｈｘｇａ ｍ ｓ ｔ ｉ暴发链球菌病，患病鱼鳃盖内 ｅ ｒ ｏｏ ｋ ａ ｍ ａ ｉ
定 ，并 通 过药敏 试验指 导生 产用药 ，取得 了较好 的
于该鱼生长期短 ，肉质细嫩 ，经济价值较高 ，深受 国内外市场 的欢迎 ，也是我国北方海水网箱养殖鱼 类 的主要 种 类 之 一 Ｌ 。迄 今 国 内外 对 大 泷 六 线 鱼 １ ｊ 的研究 主要 集 中在 育 苗技术 及其对 营养 的需求 等方 面，而对 其 疾 病 的研 究仅 有 对该 鱼 烂鳃 病 的报 道 ［ 。链 球 菌 是 重 要 的人 畜 共 患 病 原 菌 Ｊ 自 ２ 】 ，
在无 菌状 态下 ，取 病 鱼 的 肝 、脾 、肾 、心 脏 、
副乳房链 球 菌 Ｓｐ ｒｕｅｓ１ ．ａａｂｒ － ｉ 、格
式 乳球 菌 Ｌ ｃ ｃｃｕ ａｖ ａ ，而 在 致 病 机 制 的 ａｔ ｏｃｓ ｒ ｅｅ ｏ ｇ ｉ
研究 中对 其 荚膜 与致病 性及 其在 免疫反 应 中的作用 研究 比较 活跃 。由于在 不 同地 区和不 同鱼类上 分离
脑等 部位 ，用 含 ２ ／ ａ１的营 养 琼 脂 （ Ａ） ０ｇＬＮ Ｃ Ｎ 、 脑心 浸 液 琼 脂 （ Ｈ Ａ） 和 胰 蛋 白 胨 大 豆 琼 脂 ＢＩ
的链球菌在血清型和抗原性上存在差异 ，因此对不 同链球菌生物学特性的研究和积累，对病原学调查 尤其对制备高效疫苗具有重要意义。本研究中，作
侧 发红 ，体表无 明显症状 。对病鱼进行细菌分离 ，从 脑部 分离 出纯度较 高的细菌 ，并经人工感染试验 确定 了该菌的致 病性 。对该细菌进行形态观察 、生理生化特征 比较及 １Ｓｒ Ｎ ６ Ａ分子鉴定 ，测定 了 １Ｓｒ Ｎ Ｒ ６ Ａ基 Ｒ 因序列 ，并构建 系统发育树 。结果表明 ，该致 病菌 （ Ｇ ９ ０ Ｚ ０ ９ ）与海豚链球 菌 Ｓｒ ｔ ｏｃｓｉａ 的相似性 最 ｔｐｏ ｃｕ ｉｅ ｅ ｃ ｎ 高 （９４ ％ ） ９ ．８ 。药敏试验表明 ，该致病 菌对青霉素 Ｇ 、先锋 Ｖ和呋喃妥 因等 多种药物 敏感 ，并且将青霉 素
第２ ５卷第 ３期
２０１０年 ６ 月
大 连
海
洋 大 学
学 报
Ｖｏ． ５ Ｎｏ ３ １２ ． Ｊ ｎ．２０ １Ｏ ｕ
Ｊ ＯＵＲ ＮＡＬ ＯＦ ＤＡＬ Ａ ＯＣ ＡＮ Ｕ ＶＥ ｎＹ Ｉ Ｎ Ｅ ＮＩ ＲＳ
文 章 编 号 ：００－ ９ ７ ２ １ ）３－ ２ ０一 ５ １０ ９ ５ ｛０ ０ ０ ０ ７ Ｄ
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１２ １ 病 原 菌的分 离 现场 将 大泷 六线 鱼脑 脊 液 ．． 涂布 于干净 的载 玻 片上 ，干 燥后 进 行 革 兰 氏染 色 ， 显微镜 下 ５ ９７年在 日本 的 虹 鳟 养 殖 场 被 首 次 发 现 ， 目前 已导 致 罗 非 鱼 、 Ｊ 牙 鲆、大 菱 鲆 等 ２ ７种 海 水 、淡 水 鱼 类 感 染 发 病＂ 引。造成 鱼 类 感 染 致 病 的链 球 菌 主 要 种 类 有
海 豚 链 球 菌 Ｓｒ ｔ ｏｃｓ ｎａ¨ ｔｐｏ ｃｕ ｉ ¨、 无 乳 链 球 菌 ｅ ｃ ｉ ｅ
１３ 首次被 分离 以来 ，对 其研究 历史 已长达 １０ ８７年 ７
治疗效果 ，可为今后大泷六线鱼链球菌病 的准确诊
断和有 效 治疗提 供有 价值 的参考资 料 。
１ 材料 与方 法
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患病大 泷六 线鱼 取 自辽宁省某 养殖场 ，经充 氧 运 回实验 室 ，用 于解剖 和细 菌分离 ； 标准菌 株 Ｓ ｅ． ｔｐ ｒ
物学手段相 结合 的方法 ，对病原菌进行 了综合鉴
收 稿 日期 ： ０９— ９－ ８ ２０ ０ ０
将单菌落接种于含体积分数为 １％甘油 的营养 肉 ０ 汤培养基中，于 一 Ｏ℃下保存备用 。 ８
１２ ２ 茵落形态观察 取纯化后的单菌落接种于 ．． ＢＩ Ｈ Ａ培养基 中，２ ７℃下培养 ２ 后 ，取单菌落 ， ４ｈ 经涂片、固定和革兰氏染色后 ，显微镜下观察并记
Ｇ按质量分数为 ０ １ ． ％的量拌饲投喂病鱼 ，取得 了良好 的治疗效果 。
关键 词 ： 大泷六线鱼 ；链球菌 ；生理生化试验 ；１Ｓ Ｒ Ａ ６ Ｎ ；治疗方法 ｒ
中 图分类 号 ：￥４．２ ９ １４
文 献标 志码 ：Ａ
大泷 六 线 鱼 Ｈ ｘｇａ ｏ ｔ ｉ俗 称 黄 鱼 。 由 ｅａｒｍｍ ｓｏ ｋｉ ａ
基金项 目： 国家 “ ０ ”专项 （０ 一 一 Ｈ ） 大连市科技攻关项 目 （ ０４ １ Ｃ ３ ，２０ Ｂ Ｉ Ｃ ０ ） ９８ ９８ 叭 Ｚ ３ ； ２０ Ｂ Ｎ ０ ０ ０ ６ １Ｎ １９
作者简介 ： 冯春 明 （９ ６一） １８ ，女 ，硕士研究生 。Ｅ—ｍａ ：ｆｒ ９０ １ ＠ｓｎ． ｏ ｉ ｅ ７０ ０ ３ ｉ ｃｒ ｌ ｎ ａ ｎ 通信作者 ： 李华 （９ ８ ） １５ 一 ，女 ，教授。Ｅ— ａ ：ｌ ｕ＠ｄ ｕ ｅｕ ｃ ｍ ｉ ｉ ａ ｌ ．ｄ ． ｎ ｌ ｈ ｆ
（Ｓ ）３ ＴＡ 种培养基以平板划线法分离细菌，于 ２ ７ ℃下 培养 ２ ４ ，挑 取 优 势 菌落 纯化 培养 ３次 。 ４～ ８ｈ
者首次报道了大泷六线鱼的海豚链球菌病 ， 在分离 纯化 病原 细 菌并经 人工 回接 感染试 验确 定其致 病性 的基 础上 ，采 用传 统 生 理 生化 与 １ＳｒＮ ６ Ｒ Ａ分 子生
大 泷 六 线 鱼链球 菌病 的病 原及 其 防治
冯春 明，景宏丽 ，李 莹，李强 ，李华
（ 大连海洋大学 农业部海洋水产增养殖学重点开放实验室 ，辽宁 大连 １６ ２ ） ０ ３ １
摘要 ： ０８ ９ ２０ 年 月，辽宁省某养殖场养殖的大泷六线鱼 Ｈｘｇａ ｍ ｓ ｔ ｉ暴发链球菌病，患病鱼鳃盖内 ｅ ｒ ｏｏ ｋ ａ ｍ ａ ｉ
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于该鱼生长期短 ，肉质细嫩 ，经济价值较高 ，深受 国内外市场 的欢迎 ，也是我国北方海水网箱养殖鱼 类 的主要 种 类 之 一 Ｌ 。迄 今 国 内外 对 大 泷 六 线 鱼 １ ｊ 的研究 主要 集 中在 育 苗技术 及其对 营养 的需求 等方 面，而对 其 疾 病 的研 究仅 有 对该 鱼 烂鳃 病 的报 道 ［ 。链 球 菌 是 重 要 的人 畜 共 患 病 原 菌 Ｊ 自 ２ 】 ，
在无 菌状 态下 ，取 病 鱼 的 肝 、脾 、肾 、心 脏 、
副乳房链 球 菌 Ｓｐ ｒｕｅｓ１ ．ａａｂｒ － ｉ 、格
式 乳球 菌 Ｌ ｃ ｃｃｕ ａｖ ａ ，而 在 致 病 机 制 的 ａｔ ｏｃｓ ｒ ｅｅ ｏ ｇ ｉ
研究 中对 其 荚膜 与致病 性及 其在 免疫反 应 中的作用 研究 比较 活跃 。由于在 不 同地 区和不 同鱼类上 分离
脑等 部位 ，用 含 ２ ／ ａ１的营 养 琼 脂 （ Ａ） ０ｇＬＮ Ｃ Ｎ 、 脑心 浸 液 琼 脂 （ Ｈ Ａ） 和 胰 蛋 白 胨 大 豆 琼 脂 ＢＩ
的链球菌在血清型和抗原性上存在差异 ，因此对不 同链球菌生物学特性的研究和积累，对病原学调查 尤其对制备高效疫苗具有重要意义。本研究中，作
侧 发红 ，体表无 明显症状 。对病鱼进行细菌分离 ，从 脑部 分离 出纯度较 高的细菌 ，并经人工感染试验 确定 了该菌的致 病性 。对该细菌进行形态观察 、生理生化特征 比较及 １Ｓｒ Ｎ ６ Ａ分子鉴定 ，测定 了 １Ｓｒ Ｎ Ｒ ６ Ａ基 Ｒ 因序列 ，并构建 系统发育树 。结果表明 ，该致 病菌 （ Ｇ ９ ０ Ｚ ０ ９ ）与海豚链球 菌 Ｓｒ ｔ ｏｃｓｉａ 的相似性 最 ｔｐｏ ｃｕ ｉｅ ｅ ｃ ｎ 高 （９４ ％ ） ９ ．８ 。药敏试验表明 ，该致病 菌对青霉素 Ｇ 、先锋 Ｖ和呋喃妥 因等 多种药物 敏感 ，并且将青霉 素
第２ ５卷第 ３期
２０１０年 ６ 月
大 连
海
洋 大 学
学 报
Ｖｏ． ５ Ｎｏ ３ １２ ． Ｊ ｎ．２０ １Ｏ ｕ
Ｊ ＯＵＲ ＮＡＬ ＯＦ ＤＡＬ Ａ ＯＣ ＡＮ Ｕ ＶＥ ｎＹ Ｉ Ｎ Ｅ ＮＩ ＲＳ
文 章 编 号 ：００－ ９ ７ ２ １ ）３－ ２ ０一 ５ １０ ９ ５ ｛０ ０ ０ ０ ７ Ｄ