大鼠肾脏组织病理染色方法及结果解读
《地龙组分对UUO大鼠p38MAPK、NF-κB影响的研究》
《地龙组分对UUO大鼠p38MAPK、NF-κB影响的研究》一、引言地龙，一种传统中药材，被广泛应用于治疗多种疾病。
近年来，其组分在医学领域的研究逐渐增多，尤其是在泌尿系统疾病的防治方面。
UUO（单侧输尿管梗阻）大鼠模型是一种常用的研究泌尿系统疾病的动物模型。
本篇论文旨在研究地龙组分对UUO大鼠p38MAPK、NF-κB的影响，以探讨地龙组分在泌尿系统疾病治疗中的潜在作用机制。
二、材料与方法1. 材料本实验采用地龙提取物及UUO大鼠模型。
实验过程中所使用的试剂、仪器等均符合实验要求。
2. 方法（1）建立UUO大鼠模型，并随机分为对照组和实验组，实验组给予地龙组分干预。
（2）采用免疫组化、Western blot等方法检测大鼠肾脏组织中p38MAPK、NF-κB的表达情况。
（3）分析地龙组分对p38MAPK、NF-κB表达的影响及其与UUO大鼠肾脏损伤的关系。
三、实验结果1. p38MAPK、NF-κB在UUO大鼠肾脏组织中的表达情况通过免疫组化、Western blot等方法检测发现，UUO大鼠肾脏组织中p38MAPK、NF-κB的表达明显升高，表明这两者在UUO大鼠肾脏损伤中发挥了重要作用。
2. 地龙组分对p38MAPK、NF-κB表达的影响实验组大鼠给予地龙组分干预后，p38MAPK、NF-κB的表达明显降低，与对照组相比具有显著差异。
这表明地龙组分能够抑制p38MAPK、NF-κB的表达，从而减轻UUO大鼠肾脏损伤。
3. p38MAPK、NF-κB与UUO大鼠肾脏损伤的关系p38MAPK、NF-κB的异常表达与UUO大鼠肾脏损伤密切相关。
抑制这两者的表达有助于减轻肾脏损伤，改善肾功能。
四、讨论本实验研究了地龙组分对UUO大鼠p38MAPK、NF-κB表达的影响，发现地龙组分能够显著降低这两者的表达水平，从而减轻UUO大鼠肾脏损伤。
这一结果提示我们，地龙组分可能通过抑制p38MAPK、NF-κB的活性，进而发挥其在泌尿系统疾病治疗中的潜在作用。
肾的的实验报告
肾的的实验报告肾的实验报告引言：肾脏作为人体重要的排泄器官之一，具有过滤血液、排除废物和调节体液平衡的重要功能。
本次实验旨在通过对肾脏的观察和实验数据的分析，探究肾脏的结构和功能。
实验一：肾脏的解剖观察首先，我们对小鼠进行解剖观察，以了解肾脏的形态和位置。
通过细致的观察，我们发现肾脏位于腰部两侧，呈豆状，有一凹陷处称为肾门。
肾脏表面光滑，颜色深红，质地柔软。
进一步观察切片后，我们发现肾脏由皮质和髓质组成，皮质位于外层，髓质位于内层。
肾脏内部有许多小球状结构，这些结构即是肾单位的基本组成单位。
实验二：尿液的分析接下来，我们进行了尿液分析实验，以了解肾脏的排泄功能。
实验中，我们收集了小鼠的尿液样本，并进行了一系列的化学分析。
通过尿液的颜色、气味、酸碱度、比重等指标的测定，我们可以初步判断尿液的健康状况。
同时，我们还进行了尿蛋白、尿糖、尿酮体等指标的检测，以进一步评估肾脏的排泄功能。
实验结果显示，小鼠的尿液呈现正常的黄色，pH值在正常范围内，未检测到异常的尿蛋白、尿糖和尿酮体。
这表明小鼠的肾脏正常运作，排泄功能良好。
实验三：肾小球滤过率的测定肾小球滤过率是评估肾脏滤过功能的重要指标之一。
为了测定肾小球滤过率，我们使用了一种称为肾小球滤过率指示剂的物质。
实验中，我们将该指示剂注射入小鼠体内，然后收集一定时间内的尿液样本。
通过测定尿液中指示剂的浓度，我们可以计算出肾小球滤过率。
实验结果显示，小鼠的肾小球滤过率在正常范围内，说明肾脏对血液进行有效的过滤和排除废物。
实验四：肾脏的调节功能肾脏不仅具有排泄功能，还具有调节体液平衡的重要作用。
为了研究肾脏的调节功能，我们进行了一系列的实验。
首先，我们通过给小鼠喂食高盐饮食，模拟高盐摄入的情况。
实验结果显示，小鼠的尿液中钠离子浓度明显增加，这表明肾脏在高盐摄入后能够有效排除多余的钠离子。
接着，我们进行了脱水实验，通过限制小鼠的饮水量，模拟脱水情况。
实验结果显示，小鼠的尿液浓缩度明显增加，这说明肾脏能够调节尿液的浓缩度，以保持体液平衡。
益气解毒活络中药复方对糖尿病大鼠肾脏病理组织结构的影响
益气解毒活络中药复方对糖尿病大鼠肾脏病理组织结构的影响付晓;李敬林【摘要】目的:探讨益气解毒通络中药复方(YQJDHL)对糖尿病(DM)大鼠肾脏结构的影响.方法:SPF级健康雄性SD大鼠72只,注射链脲佐菌素造成糖尿病及痰浊瘀毒中医证候模型.应用YQJDHL分别在造模成功及成模后2周灌胃给药,观察大鼠肾脏病理组织学变化.结果:YQJDHL能够减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾小球肥大、系膜细胞增生等病理改变,中药预防组疗效优于中药治疗组.结论:YQJDHL能够预防和治疗大鼠早期DN,其机制可能与延缓肾脏病理组织损害有关.【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》【年(卷),期】2015(021)001【总页数】3页(P47-49)【关键词】益气解毒活络中药复方;糖尿病肾病;大鼠【作者】付晓;李敬林【作者单位】辽宁医学院附属第一医院中医针灸科,辽宁锦州 121001;辽宁中医药大学附属医院老年病科,沈阳 110032【正文语种】中文【中图分类】R255.4糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)最重要和最常见的并发症之一，是慢性肾衰最常见的病因及DN患者死亡的主要原因。
中医药防治早期DN有一定的临床疗效，但其病理机制和疗效机理尚未完全阐明［1］。
辽宁省名医李敬林教授长期应用益气解毒活络法及其方药治疗早期DN取得良好的临床疗效。
本研究旨在观察益气解毒活络(YQJDHL)中药复方对实验性糖尿病大鼠早期肾脏结构的影响，探讨可能的机制，为临床防治DN提供依据。
1.1 实验动物选择健康雄性SPF级SD大鼠72只，体质量(200±20)g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司(合格证号0194036)，大鼠一般状态良好，皮毛光泽，进食与活动正常。
1.2 环境及饲料1.2.1 饲养环境辽宁中医药大学实验动物中心SPF级实验室笼养，室内通风及光线良好，温度、湿度适宜。
1.2.2 动物饲料普通饲料配方:40%玉米面，26%白面，10%麸子，10%鱼粉，10%豆饼，2%矿物质，1%粗盐，1%复合维生素，购于沈阳市于洪区前民饲料厂。
肾活检病理染色技巧探讨
伊红染色时间不足
适当延长伊红染色时间
PAS染色的常见问题
常见问题
解决办法
Schiff染液失效或染色 时间不足
配制新鲜染液，适当延长染 色时间，肉眼观察至切片 变 淡粉红色、立即入水。
冷配Schiff染液改良
称取碱性品红６ｇ入蒸馏水４２０ｍｌ，用磁力搅 拌器搅拌２．５－３ｈ至完全溶解，继续加入Ｎ盐 酸８０ｍｌ和偏重亚硫酸钠１０ｇ混合，搅拌２． ５－３ｈ至草黄色，避光室温静置１２ｈ后再加入 ５ｇ活性炭，搅拌后过滤至无色透明，置于４℃避 光保存。
脱片的常见问题
常见问题
解决办法
① 载玻片洗涤不洁、有油脂 ① 新鲜配制泡酸液，保证泡酸
② 捞片时，切片未摊平
时间
③ 烤片时间不足
② 将组织切片周围水份吸干
④ 温度不够，急于染色
③ 适当延长时间，升温
⑤ 染色过程中，水洗速度过快。④ 缓缓漂洗
⑤ 涂PLL（防脱片剂）
HE染色的常见问题
常见问题
解决办法
75%（10min × 2）~ 80% （10min × 2）~ 90%（10min ×2） ~ 95% (30min × 2)~ 100%（60min× 3）
脱水的常见问题
常见问题
解决办法
PASM
PASM
脱水时间过长 脱水梯度过大
根据室内温，适当缩短脱水时间 降低脱水梯度，避免梯度过大
组织透明
PASM染色的常见问题
常见问题
解决办法
银染过度 先目测，后在镜下严格控制染色时间
六氨银染液改良
3%六次甲基四胺水溶液25ml，加入2%四硼酸钠5ml ，加入5%硝酸银水溶液2.5ml，震荡至乳白色悬浊 液变为清亮透明，加入30ml蒸馏水，最后加入4% 硼酸5-7滴，混匀后过滤立即使用，如果不立即使 用放入4度冰箱避光储存（一般不能超过3天）。
黄精多糖对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用_付婷婷
沉积程度。 1． 5． 5 肾脏组织 TGF-β1、ET-1、Col-I 蛋白表达 采用免疫组 化二步法，常规脱蜡至水，高压修复，3% H2 O2 去离子水孵育，滴 加 1: 200 稀 释 一 抗，滴 加 兔 超 敏 二 步 法 免 疫 组 化 检 测 试 剂 ( Polink-2 plus，PV-9001) ，3-二氨基苯联胺( DAB) 显色，苏木素 复染，脱水，透明，封片。阴性对照用磷酸盐缓冲液( phosphate buffered saline，PBS) 代替一抗。高倍镜( × 400) 下，在每组大鼠 肾脏免疫组 织 化 学 染 色 切 片 的 肾 皮 质 区 域 随 机 选 择 视 野，用
1． 5． 3 24h 尿蛋白测定 将已经收集好的尿液常温解冻，根 据试剂盒说明书操作步骤采用 Bradford 法检测尿蛋白量。 1． 5． 4 光镜下肾脏组织病理形态学观察( MASSON 染色) 肾脏组织放入 10% 甲醛溶液中固定，脱水、包埋后制成切片，常
明确，因此探讨糖尿病肾病的发病机制以及有效的防治方法一 规脱蜡至水，进行 MASSON 染色，光镜观察肾脏组织胶原纤维
Ningxia Medical University ，Yinchuan 750004)
Objectives: In this study we investigated the protective effects of Lycium barbarum polysaccharide ( LBP) on hippocampal neurons injured by oxygen-glucose deprivation / reperfusion ( OGD / ＲP) in vitro and elucidated the related mechanisms． Methods: In primary cultures of hippocampal neurons in neonatal rats for the study，sugar-free culture medium combined with physical hypoxia build oxygen-glucose deprivation injury model． Measured survival of nerve cells by using microplate reader． The neuron apoptosis were evaluated by Hoechst 33342 staining and AnnexinV-FITC / PI． The nerve cell NAD lever was measured by chemical colorimetry． The DNA Ladder were separated using gel electrophoresis． Quantitative real-time PCＲ assay were used to evaluate protein and mＲNA expression of PAＲP-1 and AIF． Ｒesults: Compared with control group，OGD / ＲP group can significantly reduce NAD level． Compared with the OGD / ＲP group，treatment with LBP ( 10，20，40 mg / L) significantly NAD level，significantly attenuated neuronal damage，with evidence of decreased cell apoptosis． DNA laddering was found in hippocampal neurons subjected to OGD / ＲP，but not in control group． What＇s more，it was significantly decreased after LBP treatments． Treatment with LBP ( 40 mg / L) could significantly down regulate the expression of PAＲP-1 and AIF in protein level，induce an increase of Endo G in protein level，significantly down regulate the expression of PAＲP-1，AIF and of Endo G in mＲNA level． Key words Lycium barbarum polysaccharide ( LBP，枸杞多糖) ; cerebral ischemic injury; hippocampal neurons; AIF; PAＲP-1
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色步骤如下：（一）固定与修块取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。
6小时左右后用双面刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。
（二）脱水与透明1．75%乙醇50分钟2．85%乙醇50分钟3．95%乙醇（I）30分钟4．95%乙醇（II）30分钟5．100%乙醇（I）30分钟6．100%乙醇（II）30分钟7 1/2二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟8．二甲苯（I）20分钟9．二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定）若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。
在每一步骤之后，要充分滤干组织块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。
全过程约需要5h。
（三）浸蜡、包埋与修蜡块1．浸蜡：将60℃恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将组织块转入石蜡里，放置于60℃恒温箱120分钟。
2．包埋：将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好，使切面朝下。
不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。
为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上，包埋时蜡盒底部要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。
3．修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘之间的距离不得小于2mm。
（四）切片在载玻片上擦少量甘油蛋白。
可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹匀，呈半干状为佳。
切片厚约4-8μm，将切片在55℃左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。
用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37℃烘箱中过夜。
每个组织块捞片2张。
过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。
（五）脱蜡、染色与脱水倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓度的影响。
(医学课件)肾脏病理
CT检查
MRI检查
血管造影
通过X线扫描肾脏，观察肾脏的内部结构和毗邻关系，判断是否有肾脏病变。
通过磁场和射频脉冲，观察肾脏的内部结构和血流情况，判断是否有肾脏病变。
通过注射造影剂，观察肾脏血管的分布和通畅情况，判断是否有肾脏血管病变。
肾活检
通过穿刺或手术取出一部分肾脏组织，观察肾脏组织的形态学变化，确诊肾脏疾病。
患者男性，60岁，长期高血压病史，近来出现蛋白尿、水肿、肾功能异常。
诊断：高血压肾损害。
分析：高血压肾损害是由于长期高血压导致肾功能受损。主要表现有蛋白尿、水肿、肾功能异常。治疗需积极控制血压，减少蛋白尿，保护肾功能。
THANKS
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肾功能检查
检测血液中的钾、钠、钙等电解质浓度，评估肾脏调节水、电解质平衡的功能。
血电解质检查
通过计算血液中肌酐的清除率，评估肾脏的滤过功能。
血肌酐清除率检查
检测血液中的免疫球蛋白、补体等指标，辅助诊断肾脏疾病。
血免疫学检查
影像学检查
通过超声波扫描肾脏，观察肾脏的形态、结构、大小等指标，判断是否有肾脏病变。
肾脏病理的特点
肾脏病理作为一门学科，经历了漫长的发展过程。早在17世纪，欧洲学者就开始对肾脏疾病进行病理学研究。随着医学技术的不断进步，肾脏病理学逐渐发展成为一门独立的学科。目前，肾脏病理已经成为临床医学的重要基础学科之一。
肾脏病理的研究历史
随着医学技术的不断进步，肾脏病理学也得到了迅速发展。近年来，随着免疫学、分子生物学等学科的不断发展，对肾脏疾病的病因和发病机制的研究也取得了重大进展。此外，随着电子显微镜、组织化学、免疫组织化学等技术手段的不断更新和应用，肾脏病理的诊断水平也不断提高。未来，随着人工智能、大数据等技术的不断发展，肾脏病理学将迎来更加广阔的发展空间。
糖尿病大鼠蛋白尿与肾脏病理及nephrin表达的相关性研究
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Ｌ 尿 糖 阳性 ， 定 为糖 尿 病 模 型形 成 。正 常组 给 予 ， 确 等 体积 的枸 橼酸缓 冲 液一次 性腹 腔注 射 。
１ ３ 标本 的采 集 ． 分 别 于０周 、 、 周 、２周 （ ４周 ８ １ 各 周 均指 造模 成功后 的各 周末 ） Ｎ 从 Ｃ组与 Ｄ Ｍ组各 随
Ａ ｓ ａｔ ｊｃ ｖ Ｔ ｂｅ ｅａ ｕ ｎｒ ｘｒｔｎｉ ｄ ｂｔ ａ ｎ ｏｉ ｅｔａ ｔ ｒａｏｓｉｓｗｔ ｒ ａ ｔｓｅ ｂｔ ｃ： ｅｔ ｅ ｒ Ｏｂ ｉ ｏｏｓ ｖ ｌ ｍｉ ｉ ｅｃｅｏ ｉ ｅｃｒ ｓａｄｔ ｎ ｓｇｔ ｉ ｅ ｔｎｈ ｉ ｅ ｌ ｓ ｒ ｂ ｕａ ｉ ｎ ａ ｉ ｔ ｖ ｉ ｅ ｓ ｌｉ ｐ ｈ ｎ ｕ ｉ ｐｔ ｌ ｉ ｌ ｈｎ ｅ ａｄｔ ｘｒ ｓ ｎｏ ｎｐ ｒ ． ｔｏｓ ４ ｓ ｒ ａ ｅ ｉｄｄｉｏｃｎ ｏ ｇｏｐ Ｎ ａ ｏ ｇ ａ ｃａｇｓ ｎ ｅｅｐ ｓ ｏ ｆ ｅｈｉ Ｍｅ ｄ ０Ｗｉａ ｔ ｗ ｒ ｄ ｉ ｔ ｏｔ ｌ ｒ （ Ｃ ｎ＝２ ） ｄ ｂｔ ｈ ｏ ｃ ｈ ｅｉ ｎ ｈ ｔ ｒｓ ｅ ｖ ｅ ｎ ｒ ｕ ０ ， ａｅｃ ｉ ｉ
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肾脏组织病理
主要的染色方式：
HE染色显示各种细胞核呈蓝色，细胞质呈红色，主要用于观察细胞的种类和数量、坏死及管型成分。
观察的病变包括：肾小球的增生、坏死及渗出性病变，肾小管上皮细胞损伤，间质水肿、间质出血、炎细胞浸润、血管炎症等。
PAS染色显示基底膜、系膜基质、糖原及糖蛋白呈紫红色，细胞核呈蓝色，能很好的显示肾小球和肾小管的基底膜，主要用于观察肾组织的基本结构，进而发现病变，判断病变性质、累及部位和轻重程度，同时根据基底膜轮廓还能判断固有细胞种类。
观察的病变包括：肾小球基底膜增厚，毛细血管袢塌陷，包曼囊壁病变，透明滴，硬化，系膜细胞和基质增多，系膜溶解，毛细血管袢内/外增殖；肾小管上皮细胞内蛋白吸收滴，肾小管基底膜增厚，肾小管炎；血管透明变性，动脉内弹力层分层等。
Masson-Trichrome三色染色显示基底膜、系膜基质和型胶原呈绿色（或蓝色，取决于使用亮绿或甲苯胺蓝），免疫复合物、纤维素样坏死、血栓均呈红色，细胞核呈蓝黑色，主要用于观察坏死性病变、免疫复合物沉积。
观察的病变包括：肾小球免疫复合物沉积，血栓，纤维蛋白，血小板；肾小管萎缩，间质纤维化；血管血栓等。
PASM-Masson染色显示基底膜和系膜基质呈棕黑色，细胞质及免疫复合物呈红色，胶原呈绿色/或蓝色（取决于套染中使用亮绿或甲苯胺蓝），该染色对肾小球结构的显示较PAS染色更为精细，主要用于观察基底膜，免疫复合物及特殊沉积物。
观察的病变包括：肾小球基底膜“钉突”和空泡，基底膜双轨，基底膜和包曼囊壁断裂，间质纤维化和动脉内弹力层分层等。
免疫荧光、免疫组化冰冻切片较好，足细胞标志物如（nephrin WT-1, podocin 等，查看足细胞病变、肾小球硬化
病理观察（电镜）
肾小球：
1.肾小球总数、球性、节段硬化的肾小球、缺血性肾小球
2.病变分布：局灶或弥漫，节段或球性
3.增生：系膜增生、毛细血管内增生或渗出性，浸润细胞类型或数量
4.K-W结节
5.毛细血管袢基底膜断裂、增厚、病变（钉突、空泡）
肾小管间质
1.肾小管急性损伤
2.肾小管上皮细胞凝固性坏死
3.肾小管基底膜异常
4.肾小管炎
5.间质炎细胞浸润
6.间质出血水肿
7.间质纤维化、肾小管萎缩
血管
动脉炎、动脉内皮细胞病变、动脉栓塞、管周毛细血管炎细胞浸润；动脉
TMA病变、动脉硬化和小动脉硬化（透明变性和内膜增厚）
HE 染色图解
对于肾脏的观察要看肾小球、肾小管、肾间质及肾小动脉的病变，肾小球的病变又要观察肾小囊、系膜细胞及基质、毛细血管基底膜、足细胞等等等等，而且糖尿病不等于糖尿病肾病，如果是糖尿病肾病最典型的标志性病变是系膜基质无细胞性增生，形成K-W结节
片子质量没有问题。
但是不知道要看什么，看蛋白的沉积是用PAS染色，看基底膜是电镜，看免疫复合物是用免疫荧光，简单的炎症反应看HE。
常见检测指标因子
Nephrin（足细胞裂孔隔膜上的一种跨膜蛋白，于1998年被发现命名）是调节足细胞裂孔隔膜结构和功能的重要蛋白，可影响肾小球滤过膜的通透性及蛋白尿的产生，被作为肾脏疾病早期足细胞损伤的重要的标志物之一。
表达越高，表示损伤越严重
VEGF VEGF 增多提高肾脏损伤作用，抑制其作用可以降低足细胞损伤。
血清检测指标： Sflt-1 Enos 肌酐尿素
尿液检测指标： NGAL kim-1 尿肌酐和尿蛋白肾脏结构：。