大鼠肾脏冰冻切片的体会
大鼠肾脏冰冻切片的体会
大鼠肾脏冰冻切片的体会【中图分类号】R５８７．２【文献标识码】B【文章编号】１００１－５３０２(２０１５)０９－０８５７－０１０．引言由于肾脏组织质地柔软,含水量高,或在取材过程中肾组织与水分接触, 突遇低温,易形成冰晶,快速冷冻切片的制作难度大,我们通过对大鼠肾脏的冰冻制片,总结经验如下. １材料使用德国产Leica—CM１９５０型冰冻切片机,Leica一次性刀片,冷冻组织包埋剂(O．C．T．),AF固定液,改良Gill苏木素染色液,２％碳酸氢钠返蓝液,逐级梯度酒精,中性树胶. ２方法２．１取材及包埋２．１．１取新鲜大鼠肾脏标本常规取材,标本要新鲜,无需固定,严禁浸入甲醛, 酒精,生理盐水等液,尤其是不可以用酒精固定,酒精固定后组织将无法冷冻.２．１．２将样本托放入冰冻切片机的冻台上预冷,加少许O．C．T．,在OCT 未完全冻结前快速的将组织放于样本托上,在组织周围适量的补充O．C．T,待包埋剂约１/３未冻结时压上冷冻锤,打开加强冷冻,使组织快速冷冻.２．１．３冰冻切片机温度设定在－１６oC—－１８oC为宜.冷冻时间一般为１min~２min.冷冻时间过长,组织易变硬变脆,细胞结构会发生改变,难于切片.２．１．４包埋组织时应将组织周边多留出O．C．T．用于牵引展开切片,O．C．T．中的小气泡应尽量去除,以免切片时挤压旁边组织产生皱褶,影响切片效果. ２．２切片组织切片厚度设定为５um－６um.刀具提前安放好,调整好刀具角度,切片时控制好操作窗,以利保温.肾脏组织细胞比较致密,若时间过长会变脆且易碎,在冰冻切片时可用手指轻压组织回温,再进行切片.２．３固定切片后立即放入AF固定液固定３０s—１min,不可待切片干后再固定,这样会造成细胞核染色质不清晰,呈现毛玻璃样改变,细胞胞浆边界不清等组织细胞的退变现象. ２．４染色封片固定好的冰冻切片在苏木素染液中染色３０s—５０s,经１％盐酸分化,２％碳酸氢钠水溶液返蓝,伊红染色,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片. 制好的切片核浆对比分明,红蓝适度,颜色鲜艳,达到理想染色效果.３讨论与分析:３．１冰晶是由于冷冻缓慢,冷冻时间过长,胞质内与组织间隙未结合的水分析出形成的.肾脏因其组织结构,在组织冷冻过程中,组织内易产生大量的冰晶影响冰冻切片的诊断,为了防止组织内冰晶的产生,最佳的办法一是使用冻锤:新鲜标本包埋后放入冷冻台时,不能将冻锤马上按压在组织上,那样会使组织受挤压变形.应该待O．C．T．凝固６０％~７０％时,再将冻锤轻压在组织上, 这样既能防止冰晶的产生,又能得到较平整的切面;另一种方法为使用液氮冷冻,可将组织放入液氮中２s－３s,待组织冻至８０％时即可取出制片,否则过冻会引起组织发脆,冻头与组织分离[２]. ３．２将包埋剂放入－１０OC或－４OC冰箱内保存,包埋剂要使用OCT,而不能用胶水等替代,因OCT的主要成分为PVP,其能通过渗透的作用将细胞内的水分移出,减少冰晶形成.３．３冰冻的速度与样品的表面积和体积成正比,取材时组织块尽可能薄,０．２cm 为宜,扁平状冷冻速度快,切片的前几张冰晶少,越后冰晶越多,切片不能求快,而要确保切片质量,力争一次完成一张高质量的切片[１]. ３．４可预先做好OCT冻头,将冻头上的OCT 修平,有利于将组织放平,再在冰冻机内在肾组织上滴加OCT,有利于OCT迅速降温,避免组织复温,减少冰晶形成. ３．５肾脏冰冻制片时易产生不规则裂痕,与切片时温度和切片速度有关,操作时应注意操作窗不要开太大,免工作箱的温度升高;OCT的用量太少易产本皱褶,滴加OCT时要上下俩端多,俩侧少,同时要注意OCT不要有小气泡. ３．６冰冻切片机应安放在冷室内,避免压缩机反复工作,仪器要定期维护,除霜,清洁消毒.总之,冰冻切片技术是病理科最重要的常规工作之一,也是较难掌握的病理实验技术.要做好一张冰冻切片需要病理技术人员具有严格的责任心、严谨的工作态度、丰富的工作实践经验[３]在日常的工作中还需不断摸索经验提高切片质量,冰冻切片不仅要求病理技师在短时间内制出高质量的切片,还需要病理技师具有娴熟的技术,对冰冻切片机功能的熟练掌握合理应用.参考文献[１]陈乐真,徐庆中,陈国璋手术中病理诊断图鉴１版北京:科学技术文献出版社,２００５:２(还需卷数期数页码等现在还没查询查询后补上)[２]范慧,陈立华,刘宇冷冻切片的制作体会及常见问题分析．诊断病理学杂志,２００８,１３８(还需卷数期数页码等现在还没查询查询后补上)[３]吴艳霞．冰冻切片的制作方法分析．吉林医学,２００９,３０(６):４９３．。
冰冻切片详细说明解读
冰冻切片详细说明切片技术最早期是从冰冻切片开始，后来逐步有了发展和更新，冰冻切片弥补了石蜡切片和火棉胶切片之不足，石蜡切片和火棉胶切片需时太久，且在制片中要使用许多化学试剂，石蜡切片还需要加温过程，因而某些重要的不稳定的组织成分如脂类、酶以及抗体等，可能被溶解和破坏。
冰冻切片过程较简单，无须经过上述步骤，组织中的水分起着包埋剂的作用，组织经固定或不固定即可进行冰冻切片，切片厚度一般可在6-8微米，组织没有收缩，易保持生活时原有状态，是保存脂肪组织，许多神经组织特殊染色方法和组织化学方法，特别是酶的活性十分理想的切片方法，对于外科临床诊断和现代免疫荧光诊断，冰冻切片也很重要。
其缺点是组织过大不易冰冻，连续切片困难。
5微米以下切片不易成功。
但是随着现在冰冻包埋液的不断改进，已经能切出少于3微米的切片一、直接冰冻切片法冰冻切片多用于新鲜组织、甲醛固定组织和冰箱冷藏组织等。
组织块不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后再进行切片。
1．恒冷箱切片就是将组织在恒冷箱的切片机切片。
目前恒冷箱切片机的品种较多。
此种切片适用于科研和教学上的连续切片。
要求预先开动电源（预冷准备），配多种固定组织台，以便更换组织。
2．甲醇制冷器制冷箱为附有带导管的制冷台和制冷刀的甲醇循环装制，其冷却速度比较快，属于开放式，作一般常规冰冻切片用。
3．二氧化碳冰冻法将组织用蒸馏水洗后，放在冰冻切片机的冷冻台上，加蒸馏水少许。
打开冷冻台的二氧化碳开关，二氧化碳气体喷出，待组织出现冷霜时，将二氧化碳关闭，即可切片。
若组织冷冻过硬则切片易碎；组织冷冻硬度不足，则切片呈粥糜状，需用间歇方法继续冷却。
硬度一般在刚开始解冻时最合适，应迅速切片。
4．半导体致冷冰冻切片法将组织置半导体致冷台上，滴加少许蒸馏水，调好切片机的厚度。
先接通热器的循环流水，然后接通电源，电源的正负极切勿接反，用整流电源控制温度。
二、明胶冰冻切片法明胶包埋法一般多用于冰冻切片易破碎的组织，特别是某些有树枝状突起的组织，当其切片后投入水中时，常常引起分散，甚至发生丢失，某些间隙较多的组织，有时会因发生散乱而失去相互间的联系，可形成移位现象。
肾移植穿刺标本冰冻切片制作方法及体会
肾移植穿刺标本冰冻切片制作方法及体会余鑫鑫;陈阳;阎红琳;袁静萍【摘要】目的介绍一种肾移植穿刺标本冰冻切片的制作方法并分享制片过程中的体会.方法选取2017年武汉大学人民医院手术室提供的肾移植供体穿刺标本10例,分别记录每例冰冻切片的制作方法,切片质量,制片时间.收到标本后,首先在样本托上均匀涂抹一层普通胶水,于冷冻锤下压平成型30s,取出样本托,将标本铺展成一条直线于样品托上之后,在放置好的标本上均匀涂抹一层普通胶水覆盖标本,并用冷冻锤轻轻压平1min,取出进行切片.切片经改良AFA固定液固定,苏木素-伊红(hematoxylin-esin staining,HE)染色制片后,显微镜下观察.结果切片完整平坦,无褶皱、卷缩、刀痕;染色核质分明,红蓝适度,对比度好;制片时间在13min左右.结论肾移植穿刺标本经两步法包埋再切片,联合改良AFA固定液固定及HE染色,大大缩短了制片时间,提高了制片质量,易于观察,且重复性好,可以推广.【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2018(027)004【总页数】4页(P364-367)【关键词】肾移植穿刺标本;冰冻切片;改良AFA固定液【作者】余鑫鑫;陈阳;阎红琳;袁静萍【作者单位】武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉大学人民医院麻醉科,武汉430060;武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉大学人民医院病理科,武汉430060【正文语种】中文【中图分类】R446.8冰冻切片是病理科的急诊工作，要求病理医师在很短的时间内做出正确的诊断，为手术医生下一步的手术方案提供指导。
在肾移植手术中，影响肾移植效果的因素有很多，如排斥反应、各种并发症导致的损伤等[1]，这就要求临床医生对供肾功能状态进行评估，除临床评分及肉眼评估外，病理活检是评估移植肾功能，预测器官分配或远期存活的金标准[2]。
临床将供肾穿刺标本取出送病理科进行快速病理活检，而冰冻切片质量的好坏直接决定诊断的快速、客观、准确、合理，因此，一张快速优质的供肾穿刺标本冰冻切片显得尤为关键。
不同组织的冰冻切片体会
不同组织的冰冻切片体会来源：第三军医大学大坪医院病理科作者：毛成毅，杜娟，肖华亮，李增鹏冰冻切片原理：组织被冷冻时，组织中的水变成冰，而在这种状态中，组织变坚硬的。
冰冻块的硬度可通过改变组织温度来改变。
降温会使组织块更加坚硬，提高温度使组织变软。
大多数非脂肪不固定组织的切片最好在-20到-25℃制作。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片的制作过程中，常有许多因素影响其质量，并进一步影响结果的观察和分析，甚至会影响诊断，造成无法挽救的后果，对此我们经过比较及总结得出如下经验。
冰冻温度及组织冰冻的时间对冰冻切片质量的影响是至关重要的。
冰冻温度对细胞的影响：温度太低，细胞容易收缩，温度太高，细胞容易膨胀，结构不清，模糊，影响冰冻诊断。
充分利用冷冻台、冰锤及速冻头的功能。
将放有新鲜组织的冻托放在冻台上然后压上压板，等组织冻住后，轻敲压板，冻有组织的冻托就会下来，然后进行切片。
在实际工作中，一般冰冻机温度设定如下：冻台温度：-18℃；工作温度：-18℃；冻头温度：-20℃。
（一）乳腺组织的冰冻切片乳腺组织（纤维腺瘤，间质胶原化）含纤维组织较多，冰冻切片染色时容易脱片。
1、使用免疫组化防脱载玻片进行贴片，冰冻切片脱片率明显下降。
2、乳腺含脂肪组织比较丰富，在冰冻切片时不容易成片或展片。
3、乳腺组织在取材时，取材医生应尽量将病变周围的脂肪组织剔除。
4、当遇到脂肪组织较多，又无法剔除时，建议使用液氮。
5、充分利用冰冻切片机（速冻台）的功能。
（二）子宫肌瘤的冰冻切片1、温度的控制：冷冻温度是冰冻切片的关键；冷冻室温度设定-17~-22度；控制肌瘤组织冷冻时间，4/5组织冻好就可以；冷冻过头时拿出冷冻室解冻软化一下。
2、包埋剂(OCT)的使用：冻头中心滴好OCT粘好组织块，再在周围加固一圈；虽然有可能加长了冷冻时间，但可以将组织牢牢固定住；修片时不能太厚，要用慢进；防止修片和切片时产生的抖动。
冰冻切片技术经验总结
冰冻切片制作技巧1.从锋利的刀片开始我发现使用新的锋利的刀片时常常做出高质量的片子。
我觉得在医疗场合中某些尽量省钱的做法显得有些因小失大。
一般我对每位患者的标本都使用一组新的刀片，当片子的质量开始下降时，我会立刻更换刀片。
某些组织如质地较硬的胶原和钙化组织会使刀片很快变钝，因此，经常更换刀片显得很有必要，有时候我在切片过程中要连续更换2-3次刀片。
2.坐着还是站着我切片时总是坐在一张凳子上。
要学会把刷子作为一种便捷的辅助工具来操作，从而精细地控制显微厚薄程度的片子。
切片时俯身弯腰，颈部过伸的姿势有些不妥，要尽量处于放松和舒适的姿势以便能最大程度控制你的左手。
3.刷子我是一位刷子的使用者。
我相信要想切好片子首先学会使用刷子。
刷子的作用就在于粘住片子并把片子弄到台子上。
冷冻的片子会自发的卷缩并从刷子上脱离下来，因此，我使用一把有硬毛、夹取面宽的刷子。
我发现来自中国的野猪毛十分坚硬，非常管用。
你可以花3美元从工艺店买一把1/4英寸长的#2号扁平无色的刷子，把毛削成一个角度。
由于是个有角的头端，加上握持刷子成一定的角度，这样刷子与组织接触时就会象扫帚一样的平。
我不能理解为什么有人使用脆弱的骆驼毛刷子，组织片很容易从这些柔软的毛上掉下来。
4.握持刷子左手象拿笔一样握持刷子，将第五指轻压于台面上以稳定握笔的手(或根据手和切片机尺寸的大小置于你感觉合适的地方)，这样可以保证操作者动作的灵活及可控性。
我把刷子削成一个角度，大致与左手握持刷子的角度相同，这样使刷子平着接触组织的1/4。
5.摇柄的旋转以连续均匀的力量转动切片机的摇柄，且要毫不犹豫。
我看到很多冰冻切片者手握着刷子在开始切片时总要停一下，缓慢的抓取组织，然后再开始转动摇柄。
依我的经验看来，这种动作增加了起始切片假象的可能，会使片子的厚度不均匀，也增加了处理脂肪类组织的难度。
我切片时，象前面所说的那样手握刷子，以一种连续的动作抓取组织，这个动作与刀片接触组织同时开始并贯穿于整个过程。
制作冰冻切片的体会
制作冰冻切片的体会无论是在组织胚胎学等医学基础课中，还是在临床检验工作中，冰冻切片都有着举足轻重的作用，冰冻切片被广泛的运用在科研、教学和临床诊断中。
所谓冰冻切片就是组织在低温状态下在很短的时间内变硬并进行切片。
在临床外科手术中常常需要进行快速病理诊断，而冰冻切片就是一个很好的方法。
标签：冰冻切片；制作；体会冰冻切片是一种在低温的条件下使组织快速冷冻到一定的硬度然后进行切片的方法。
其制作过程简单方便快捷，在手术中快速进行病理诊断从而为手术在中快速确定组织性质，对医生的手术方案具有指导意义。
冰冻切片的组织在送检前不需要进行处理，其组织没有发生变化，使得原来的生活形态得以保持，特别是在免疫组织化学染色中，组织中的糖、酶、抗原、脂类等成分由于没有受到干扰而存在，组织中的细胞抗原的免疫性也得到了保存，对于需要检测糖、酶、抗原、脂类的不会受到影响。
但是，冰冻切片的制作过程要比普通的蜡切片难度大、要求高，而且组织冰冻的程度不好把握，在切片的过程中组织较易破碎，很难切成符合要求的薄片，在染色的过程中很容易脱片，所有以上这些因素都会影响到切片的质量，从而影响到了检测结果。
对于如何能有效快速高质量的制作符合要求的冰冻切片一直使我们面对的问题。
1材料和方法1.1 材料：恒冷切片机，切片刀，固定液，胶水，实验用用的新鲜组织如肝、肾、脾、皮肤、食管、胃、淋巴结、心肌、脑、卵巢、小肠等组织。
1.2 方法：采用新鲜的实验用的新鲜组织，取一块大小为1.5cm×1.5cm×3cm 的新鲜实验用组织，去除组织中的脂肪组织，在取组织的时候要注意保持干燥以免引起组织细胞发生变性和变化，把组织放在低温液氮中快速冷冻放置于冰冻台上。
在切片机内快速冰冻2分钟之后待切。
如果组织的体积较大冰冻时间相应延长，如果所取组织体积较小则相应的缩短冰冻时间，切片刀的温度控制在零下25℃-零下30℃之间。
在开始切片之前要对切片刀和防卷板之间的角度进行调整以防切出来的组织薄片卷曲。
冰冻切片的体会-马晓龙2015
提高冰冻切片质量的体会马晓龙北京大学医学部病理学系/北京大学第三医院病理科maxiaolong1998@2015年2月22日冰冻切片是将组织直接冰冻后进行切片，是一种简便快速的方法，常用于配合临床手术，需在短时间内制出切片，为病理的快速诊断提供依据，在病理科属于急诊工作，其重要性和责任性都很大。
能否在短时间内制出质量好的冰冻片子，一直是许多病理技术人员关心的话题。
通过参加北京病理技术质量控制冰冻切片比赛暨北京“徕卡杯”冰冻切片大赛和代表北京参加全国冰冻切片大赛，并结合多年的冰冻切片工作经验，我对如何制做出质量好的冰冻切片有了更深刻的认识——我认为一张完美的冰冻切片必须具备切片的完整性，厚薄均匀，无摺叠和切痕，组织内无冰晶，染色核浆分明，红蓝适度，组织结构清晰。
以下是我的具体体会一：制片的前期准备1、正所谓“公欲善其事，必先利其器”，要想切出好的冰冻切片，必须要有性能优良质量可靠的冰冻切片机。
冰冻机的摆放空间要留有足够的面积，最好能对流通风，保证其散热良好。
2、平时要认真仔细研读机器说明书，熟悉各个按钮的功能，掌握其操作要领，在长期的人机配合过程中充分运用机器特性，提高切片技巧。
3、在日常工作中还要定期对冰冻机进行清理和必要的检查，最好每周2-3次。
清理机器内部既可以减少切片时的交叉污染，又可以同时对切片机的性能进行检验，必要时还要除霜，保证机器的正常运转。
切制有传染性疾病的标本时，事后还必须要对机器进行彻底消毒，防止疾病传染。
二：制片过程及注意事项1、取材：标本要新鲜，不要放在盐水、酒精和甲醛中浸泡，取材好的组织尽量用滤纸将组织表面的污血和水分吸干，以减少冰晶的产生。
理想取材小为1.5-2cm×1.5-2cm×0.2cm,取材要厚薄适宜，最厚不超过0.3cm，最薄不低于0.1cm，如果太厚则组织冰冻时间要延长，且易产生冰晶。
待组织全层冻好后，表层会太硬太脆，影响后续切片，而太薄的标本在修切过程中容易修到组织托头。
快速冰冻切片的几点体会(精)
对照组为健康体检者 100例 , 其中男性 56例 , 女性 44例 , 年龄为 42岁 ~70岁 , 平均 (51. 36±6. 6 岁。
1. 2方法所有病例均于入院第 2日早晨空腹采血 , 测定甘油三酯 (T G 、胆固醇 (CHO 、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL 2C 、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL 2C 、载脂蛋白 A 1(A poA 1 、载脂蛋白 B (A poB 及脂蛋白 [a (L p 2a ]。
血脂使用日本日立公司生产的 7170A 生化仪 , 试剂购买于和光公司 ; 流变学使用北京世帝公司生产的 R 80自动流变仪。
统计学使用 t 检验。
2结果110例脑梗死患者的 T G 、 A poB 、 LDL 2C 、 L p (a 、血浆黏度、全血还原比黏度及 CHO 显著高于对照组 (P <0. 05 , HDL 2C 、 A poA 1则明显低于对照组(P <0. 01 。
结果见表 1。
表 1脑梗死患者血脂及血黏度结果比较 (xθ±s组别例数 TG CHO ApoA 1ApoB HDL 2C LDL 2C Lp (a 血浆黏度还原比黏度病例组 1101. 67±1. 0834. 13±0. 8231. 22±0. 30. 87±0. 3230. 89±0. 26#2. 99±0. 713256. 9±205. 831. 76±0. 11317. 9±4. 273对照组 1001. 13±0. 333. 79±0. 571. 24±0. 150. 71±0. 251. 00±0. 292. 57±0. 61122. 1±74. 41. 69±0. 04513. 0±1. 4注 :与对照组比较 , #P <0. 01; 3P <0. 05。
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大鼠肾脏冰冻切片的体会
发表时间：2016-03-01T14:17:27.000Z 来源：《中国综合临床》2015年9月供稿作者：张丽娥[导读] 福建省南平市第二医院病理科福建建阳３５４２００冰冻切片不仅要求病理技师在短时间内制出高质量的切片,还需要病理技师具有娴熟的技术,对冰冻切片机功能的熟练掌握合理应用.
张丽娥
福建省南平市第二医院病理科福建建阳３５４２００
【中图分类号】R５８７．２【文献标识码】B 【文章编号】１００１－５３０２(２０１５)０９－０８５７－０１
０．引言由于肾脏组织质地柔软,含水量高,或在取材过程中肾组织与水分接触, 突遇低温,易形成冰晶,快速冷冻切片的制作难度大,我们通过对大鼠肾脏的冰冻制片,总结经验如下. １材料使用德国产Leica—CM１９５０型冰冻切片机,Leica一次性刀片,冷冻组织包埋剂(O．C．T．),AF固定液,改良Gill苏木素染色液,２％碳酸氢钠返蓝液,逐级梯度酒精,中性树胶. ２方法２．１取材及包埋２．１．１取新鲜大鼠肾脏标本常规取材,标本要新鲜,无需固定,严禁浸入甲醛, 酒精,生理盐水等液,尤其是不可以用酒精固定,酒精固定后组织将无法冷冻.２．１．２将样本托放入冰冻切片机的冻台上预冷,加少许O．C．T．,在OCT 未完全冻结前快速的将组织放于样本托上,在组织周围适量的补充O．C．T,待包埋剂约１/３未冻结时压上冷冻锤,打开加强冷冻,使组织快速冷冻.２．１．
３冰冻切片机温度设定在－１６oC—－１８oC为宜.冷冻时间一般为１min~２min.冷冻时间过长,组织易变硬变脆,细胞结构会发生改变,难于切片.２．１．４包埋组织时应将组织周边多留出O．C．T．用于牵引展开切片,O．C．T．中的小气泡应尽量去除,以免切片时挤压旁边组织产生皱褶,影响切片效果. ２．２切片组织切片厚度设定为５um－６um.刀具提前安放好,调整好刀具角度,切片时控制好操作窗,以利保温.肾脏组织细胞比较致密,若时间过长会变脆且易碎,在冰冻切片时可用手指轻压组织回温,再进行切片.
２．３固定切片后立即放入AF固定液固定３０s—１min,不可待切片干后再固定,这样会造成细胞核染色质不清晰,呈现毛玻璃样改变,细胞胞浆边界不清等组织细胞的退变现象. ２．４染色封片固定好的冰冻切片在苏木素染液中染色３０s—５０s,经１％盐酸分化,２％碳酸氢钠水溶液返蓝,伊红染色,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片. 制好的切片核浆对比分明,红蓝适度,颜色鲜艳,达到理想染色效果.
３讨论与分析:３．１冰晶是由于冷冻缓慢,冷冻时间过长,胞质内与组织间隙未结合的水分析出形成的.肾脏因其组织结构,在组织冷冻过程中,组织内易产生大量的冰晶影响冰冻切片的诊断,为了防止组织内冰晶的产生,最佳的办法一是使用冻锤:新鲜标本包埋后放入冷冻台时,不能将冻锤马上按压在组织上,那样会使组织受挤压变形.应该待O．C．T．凝固６０％~７０％时,再将冻锤轻压在组织上, 这样既能防止冰晶的产生,又能得到较平整的切面;另一种方法为使用液氮冷冻,可将组织放入液氮中２s－３s,待组织冻至８０％时即可取出制片,否则过冻会引起组织发脆,冻头与组织分离[２]. ３．２将包埋剂放入－１０OC或－４OC冰箱内保存,包埋剂要使用OCT,而不能用胶水等替代,因OCT 的主要成分为PVP,其能通过渗透的作用将细胞内的水分移出,减少冰晶形成.
３．３冰冻的速度与样品的表面积和体积成正比,取材时组织块尽可能薄,０．２cm 为宜,扁平状冷冻速度快,切片的前几张冰晶少,越后冰晶越多,切片不能求快,而要确保切片质量,力争一次完成一张高质量的切片[１]. ３．４可预先做好OCT冻头,将冻头上的OCT 修平,有利于将组织放平,再在冰冻机内在肾组织上滴加OCT,有利于OCT迅速降温,避免组织复温,减少冰晶形成. ３．５肾脏冰冻制片时易产生不规则裂痕,与切片时温度和切片速度有关,操作时应注意操作窗不要开太大,免工作箱的温度升高;OCT的用量太少易产本皱褶,滴加OCT时要上下俩端多,俩侧少,同时要注意OCT不要有小气泡. ３．６冰冻切片机应安放在冷室内,避免压缩机反复工作,仪器要定期维护,除霜,清洁消毒.
总之,冰冻切片技术是病理科最重要的常规工作之一,也是较难掌握的病理实验技术.要做好一张冰冻切片需要病理技术人员具有严格的责任心、严谨的工作态度、丰富的工作实践经验[３]在日常的工作中还需不断摸索经验提高切片质量,冰冻切片不仅要求病理技师在短时间内制出高质量的切片,还需要病理技师具有娴熟的技术,对冰冻切片机功能的熟练掌握合理应用.
参考文献[１] 陈乐真,徐庆中,陈国璋手术中病理诊断图鉴１版北京:科学技术文献出版社,２００５:２(还需卷数期数页码等现在还没查询查询后补上)[２] 范慧,陈立华,刘宇冷冻切片的制作体会及常见问题分析．诊断病理学杂志,２００８,１３８(还需卷数期数页码等现在还没查询查询后补上)[３] 吴艳霞．冰冻切片的制作方法分析．吉林医学,２００９,３０(６):４９３．。