分子病理在细胞学标本中的应用分享
分子病理学课件
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主要组织学实验室
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冰冻切片实验室
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乳腺癌标本巨检
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病理和血液病理科
• 专项检查实验室
• 免疫细胞化学 • 细胞学 FISH (HER-2, UroVysion) • 图象分析 • 细胞遗传学 (FISH) • 分子病理诊断 • 流式细胞计数
DNA和RNA：PCR、Real－time PCR、 RT-PCR、ISH、DNA测序、 DNA微阵列
蛋白质： 蛋白组学、组织阵列、 免疫组化、流式细胞检查
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B. 分子诊断应用于疾病的全过程
疾病阶段
检查目的
危险度预测
高危家族及一般人群中
疾病相关基因突变的携
带者
早期疾病诊断
症前诊断
疾病分期分级
分子病理学
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1
绪论
第一节 病理学与分子病理学 的概念和性质
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一、病理学的概念和性质 • ①研究疾病的原因(病因学)
• ②探索疾病的发生机制
• ③描述疾病发生发展过程中可见 的形态学变化
• ④揭示各种疾病所引起的功能异 常
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器官病理学 细胞病理学 超微病理学 分子病理学
• 高温修复 • 修复液 • 酸碱度
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细胞蜡块技术在细胞学病理诊断中的应用(一)
细胞蜡块技术在细胞学病理诊断中的应用(一)细胞蜡块技术在细胞学病理诊断中的应用什么是细胞蜡块技术？细胞蜡块技术是将细胞样本进行固定、包埋、切片、染色等处理后，制成固态的切片材料。
与传统的组织蜡块技术相比，细胞蜡块技术可以更好地保留细胞形态和细胞内的细胞器。
细胞蜡块技术的优势细胞蜡块技术具有以下优势：•可以更好地保留细胞内形态和细胞器，有助于细胞学病理学的诊断；•制备过程简单，速度快，适用于大规模制备；•可以重复使用，可用于多个实验；•可以保存较长时间，方便远程诊断。
细胞蜡块技术在细胞学病理诊断中的应用细胞蜡块技术在细胞学病理诊断中有广泛的应用，包括以下方面：疾病诊断细胞蜡块技术可以用于疾病的诊断，如癌症等。
利用免疫组织化学或原位杂交等技术，可以检测细胞中的基因变异、蛋白质表达等指标，从而指导治疗和预后判断。
疾病治疗细胞蜡块技术还可以用于疾病治疗的监测，如检测化疗药物的疗效等。
此外，利用细胞蜡块技术可以制备惟一的基因胚胎干细胞，为基因治疗提供基础。
学术研究细胞蜡块技术可以用于学术研究，如筛选潜在的药物靶点和分子诊断指标等。
此外，还可以为生物医学研究提供样本来源。
总结细胞蜡块技术在细胞学病理诊断中有着广泛的应用，其优势包括可以更好地保留细胞内形态和细胞器、制备过程简单、可以重复使用、可保存较长时间等。
它的应用不仅可以支持疾病的诊断和治疗，还可以促进学术研究的发展，为生物医学研究提供样本来源。
细胞蜡块技术的制备过程细胞蜡块技术的制备过程可以分为以下几个步骤：1.细胞采集：通过骨髓、脾脏、淋巴结等部位采集需要检测的细胞样本；2.细胞固定：固定细胞，保持细胞形态以便后续加工；3.细胞包埋：将细胞进行包埋，制备细胞蜡块；4.制成切片：将细胞蜡块进行切片，制备细胞蜡块切片；5.染色和检测：进行需要的染色和检测处理，如荧光显微镜观察、免疫组织化学检测等。
细胞蜡块技术的注意事项在使用细胞蜡块技术时，需要注意以下事项：1.固定细胞时需要选择适合的固定液，不同的细胞类型可能需要使用不同的固定液；2.在染色之前，需要先对样本进行脱蜡处理，否则会影响染色效果；3.细胞蜡块切片时，切片仪和刀片都需要保持干净和锋利，否则会引入干扰物；4.制备过程中需严格遵循操作规范和安全要求，以免独立对操作或环境造成伤害。
分子生物学技术在诊断细胞学中的应用
分子生物学技术在诊断细胞学中的应用
张建中
【期刊名称】《诊断病理学杂志》
【年(卷),期】2001(8)5
【总页数】3页(P303-305)
【关键词】诊断细胞学;分子生物学技术;血液肿瘤;染色体易位
【作者】张建中
【作者单位】解放军306医院病理科
【正文语种】中文
【中图分类】R446.8;R733.04
【相关文献】
1.液基细胞学技术在胸水细胞学诊断中的应用分析 [J], 韩全贵;马婷婷
2.液基细胞学技术在非妇科细胞学诊断中的应用研究 [J], 韩全贵;马婷婷;冯小莉
3.TCT薄层液基细胞学制片技术与传统细胞学制片技术在细胞病理学诊断中的应用[J], 易小兵;刘菊林;邢毛毛;霍永华
4.液基细胞学检测技术在胸腔积液细胞学诊断中的应用价值 [J], 杨槐; 刘禄; 杨娜; 刘智; 夏勤; 李林丰; 崔丽娟; 梁鹏; 夏涌然; 刘汝艺
5.液基细胞学检测技术在胸腔积液细胞学诊断中的应用价值 [J], 叶蓉
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乳腺穿刺病理报告种类
乳腺穿刺病理报告种类引言乳腺穿刺病理报告是对乳腺组织进行细胞学或组织学检查后的结果描述和分析。
乳腺穿刺病理报告能够提供关于乳腺疾病的重要信息，对于乳腺病变的早期诊断和治疗起着至关重要的作用。
本文将介绍乳腺穿刺病理报告的种类和其在临床中的应用。
乳腺穿刺病理报告种类1.细胞学报告：细胞学报告主要通过对乳腺组织中的细胞形态、核型和细胞结构的观察，来判断细胞的异常情况。
细胞学报告常用于乳腺肿块或乳腺导管液体的检查。
根据细胞学特征，可以将细胞学报告分为良性、恶性和可疑恶性三类。
2.组织学报告：组织学报告是通过对乳腺切片进行显微镜下的观察和病理学分析，来确定乳腺组织中的病变类型和严重程度。
组织学报告通常用于乳腺手术标本的检查。
根据病理学特征，组织学报告可以分为良性肿瘤、恶性肿瘤和非肿瘤性病变等类型。
3.免疫组织化学报告：免疫组织化学报告是在组织学报告的基础上，通过使用特定抗体标记来检测乳腺组织中的特定抗原或蛋白质表达情况。
免疫组织化学报告可以帮助确定肿瘤的分子分型，并预测预后和对治疗的反应。
4.分子病理学报告：分子病理学报告通过检测乳腺组织中的遗传物质（如DNA、RNA）和蛋白质等分子水平的异常变化，来评估肿瘤的分子特征和预后。
分子病理学报告在个体化治疗方案的制定中起着重要作用。
乳腺穿刺病理报告的临床应用1.早期诊断：乳腺穿刺病理报告能够提供乳腺病变的准确诊断结果，有助于早期发现乳腺癌等严重疾病。
对于乳腺肿块的细胞学分析和乳腺手术标本的组织学检查，可以帮助医生判断病变的性质，从而进行及时的治疗。
2.治疗指导：乳腺穿刺病理报告中的免疫组织化学和分子病理学结果，可以提供对乳腺疾病的分子分型和预后的评估，为个体化治疗方案的制定提供重要依据。
根据报告结果，医生可以选择合适的手术方式、放疗、内分泌治疗或化疗等。
3.随访和预后评估：乳腺穿刺病理报告的结果可以作为乳腺疾病随访和预后评估的重要依据。
通过定期的乳腺穿刺病理报告检查，可以监测乳腺病变的进展和治疗效果，及时调整治疗方案。
非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南(完整版)
非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南（完整版）NSCLC基因变异检测主要包括靶向治疗及免疫治疗相关分子病理检测。
我国NSCLC患者分子变异谱不同于西方人群，主要体现在腺癌，包括常见变异基因表皮生长因子受体（EGFR，45%~55%）、KRAS（8%~10%）、间变性淋巴瘤激酶（ALK，5%~10%），少见变异基因ROS1（2%~3%）、MET（2%~4%）、HER2（2%~4%）、BRAF（1%~2%）、RET（1%~4%），以及罕见变异基因NTRK（<1%）、NRG1/2（<1%）、FGFR2（<1%）等。
除极少数病例存在共突变外，上述基因变异在同一个病例中普遍存在互斥现象。
靶向治疗相关分子病理检测详见表1。
免疫治疗相关分子病理检测（表1）包括PD-L1蛋白表达和TMB。
其他生物标志物，如高度微卫星不稳定（MSI-H）在NSCLC中罕见。
目前免疫治疗主要用于EGFR、ALK和ROS1基因变异阴性的NSCLC患者。
近年来，肺癌分子微小残留病灶（molecular residual disease，MRD）的检测已受到广泛关注，MRD 指的是经过治疗后，传统影像学（包括PEC/CT）或实验室方法不能发现，但通过液体活检发现的癌来源分子异常，代表着肺癌的持续存在和临床进展可能。
检测适用人群1.拟接受靶向治疗的肺浸润性腺癌（或包括含腺癌成分的NSCLC）患者需进行靶分子基因检测。
对于晚期NSCLC患者，靶分子基因检测能够有效筛选靶向药物获益人群。
对于术后肺腺癌患者，一方面，EGFR基因突变阳性患者可从酪氨酸激酶抑制剂（TKI）辅助治疗中获益；另一方面，术后患者存在复发风险，分子分型可直接指导复发后肿瘤治疗方案的选择。
2.经活检组织病理学证实为非腺癌的晚期NSCLC患者可推荐进行靶分子基因检测。
3.所有EGFR、ALK基因变异阴性晚期NSCLC患者，如拟进行PD-1/PD-L1抗体药物免疫治疗，推荐进行PD-L1表达检测。
病理学在临床医学中的应用技术
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病理学在基础研究中的作用主要体现在对疾病的病因、发病机制、病理生理等方面的研究
病理学在基础研究中的应用还包括对疾病的诊断、治疗、预防等方面的研究
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病理学在基础研究中的应用还包括对疾病的流行病学、遗传学、免疫学等方面的研究
病理学在转化医学研究中的未来发展趋势和挑战
病理学在转化医学研究中的具体应用，如疾病机制研究、新药研发等
病理组织学诊断在疾病诊断中的应用：确定疾病的性质、程度、范围和预后
病理组织学诊断方法：显微镜检查、免疫组化、分子病理学等
细胞学诊断的定义：通过观察细胞形态、结构和功能，对疾病进行诊断的技术
细胞学诊断的应用：在肿瘤、感染性疾病、遗传性疾病等疾病的诊断中具有重要作用
细胞学诊断的优点：快速、准确、无创，可对疾病进行早期诊断和治疗
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病理学在靶向治疗中的应用：通过分析肿瘤细胞的基因突变和信号通路，为靶向治疗提供依据
病理学在免疫治疗中的应用：通过分析肿瘤细胞的免疫逃逸机制，为免疫治疗提供依据
病理学对靶向治疗的影响：病理学可以帮助医生确定靶向治疗的最佳时机和剂量，提高治疗效果
病理学对免疫治疗的影响：病理学可以帮助医生确定免疫治疗的最佳时机和剂量，提高治疗效果
病理学可以帮助医生评估手术效果，指导后续治疗方案。
病理学可以指导医生选择合适的手术方式，以最大程度地切除肿瘤并保留正常组织。
病理学可以指导放射治疗的剂量和部位
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病理学可以指导化学治疗的药物选择和剂量
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病理学可以评估放射治疗和化学治疗的效果
添加标题
病理学可以预测放Байду номын сангаас治疗和化学治疗的副作用
病理学可以培养医学生的科研能力和创新意识，为医学研究提供基础和指导。
病理学研究中常用的分子生物学的技术及其实际应用
• 概念
• 固体支持物有硝酸纤维素滤膜、尼龙膜、乳
• 酸颗粒、磁珠和微孔板等
• 基本方法： 在此以膜相为例
• (1) DNA 变性：使DNA由双链解链成为单链。
•
是成功的关键
• (2)变性DNA在硝酸纤维素膜上的固定
• (3)预杂交
• (4)杂交
• (5)洗膜
• (6)结果显示
• A.放射性测定 放射自显影法
•
蛋白质， 细胞间期,光镜下呈细颗
•
粒状
• 染色体 （chromatosome） 主要成分同上， 细胞分
• 裂期，由染色质浓集而成，呈杆状,有恒定数目
•
• 同一物质在不同时期的形态变化 •
• (4) 蛋白质
• 一级结构 多肽链氨基酸排列顺序 • 序列改变→ 构型改变 → 功能改变 • 二级结构 局部/某一段肽链空间位置 • 三级结构 (三维结构）整条肽链空间位置 • 四级结构 多条肽链位置
• 概念具有一定同源性的核酸单链
• 一定条件下碱基互补退火形成双链 • 用带有标记的具有特殊碱基序列（已知碱 • 基序列）的一段DNA或RNA单链片段 • 来检测靶核酸（待测核酸）中是否存在与之
• 同源的序列 • 已知的核酸序列——即探针（probe） • 探针标记
• 1.固相杂交 (solid-phase hybridization)
•
小分子快于大分子
•
DNA浓度高快于浓度低
•
离子强度高（盐浓度高）快于离子
强度低
• cDNA mRNA的互补拷贝
• cDNA缺乏该基因的内含子，但含有为产生功 • 能蛋白质所需的全部编码信息
• 寡核苷酸
• 一.病理学研究中常用的分子生物学基本 技术
分子病理学的发展现状
分子病理学的发展现状分子病理学是一门研究生物分子在病理学中应用的学科，它将分子生物学和病理学相结合，通过研究细胞和分子水平的变化来揭示疾病的发生机理，诊断及治疗。
随着科学技术的不断发展，分子病理学在近年来取得了巨大的进展，为临床诊断、预后评估以及个体化治疗提供了新的思路和方法。
一、进展和应用：分子病理学的发展推动了临床病理诊断的现代化。
传统的组织学方法主要依赖组织构造和形态学特征来判断疾病种类，而分子病理学则通过检测基因、蛋白质、RNA等分子水平的变化来辅助诊断和预后评估。
例如，通过检测肿瘤标志物、基因突变、蛋白质表达等，可以更准确地诊断癌症的种类、分期和预后。
分子病理学在个体化治疗方面也取得了重要进展。
分子诊断技术为临床药物靶向治疗提供了重要依据。
通过检测肿瘤特异性基因突变，可以选择更有效的靶向药物，避免对药物的耐药性和副作用。
例如，EGFR基因突变在肺癌患者中的检测，可以指导是否应用EGFR抑制剂来治疗。
此外，分子病理学在预后评估方面也发挥了关键作用。
通过检测肿瘤细胞内的各种分子标记物，可以预测疾病的进展和转移风险，帮助医生选择最佳治疗方案和综合治疗策略。
二、技术及方法：分子病理学的发展得益于生物技术的飞速发展。
目前，包括PCR、免疫组化、原位杂交、质谱分析等在内的一系列分子生物学技术已经在病理学领域得到广泛应用。
此外，高通量测序技术的发展为分子病理学研究提供了更广阔的视野和更深层次的理解。
免疫组化技术是目前最常用的分子病理学方法之一、它通过检测组织中的特定蛋白质表达情况，为疾病的诊断和分期提供了依据。
PCR技术则可以检测疾病相关基因的突变、扩增或缺失，对肿瘤的分子类型和药物敏感性进行评估。
质谱分析技术可以检测体液中的代谢产物、蛋白质和核酸等，为疾病的早期诊断和治疗监测提供了新的途径。
三、挑战和展望：尽管分子病理学取得了显著的进展，但仍然面临着一些挑战。
首先，技术的标准化和质量控制仍然是一个重要问题。
病理学研究在临床诊断中的应用
病理学研究在临床诊断中的应用病理学是研究疾病本质、病因、机制和病理变化的学科，它对于临床诊断和治疗起着重要的作用。
通过对组织和细胞的研究，病理学为临床提供了准确的诊断结果和治疗方案的决策依据。
下面本文将介绍病理学研究在临床诊断中的应用，并探讨其重要性和未来发展方向。
一、组织学检查组织学是病理学的核心内容之一，它通过对组织标本的镜下检查，对疾病的诊断和鉴别提供了重要的参考。
临床医生通常会通过活检或手术切除标本获取组织样本，然后经过特殊染色技术和显微镜观察，以获得病理诊断结论。
组织学能够明确疾病的类型、程度和分级，为治疗方案的选择和预后评估提供重要依据。
二、细胞学检查细胞学是病理学的另一个重要分支，它通过对细胞标本的涂片制备和显微镜观察，对疾病的诊断和鉴别提供了有力证据。
细胞学检查常用于早期肿瘤的筛查和鉴别诊断，如宫颈涂片和细针穿刺细胞学检查等。
细胞学能够直接观察到病变细胞的形态和特征，从而为疾病的诊断和治疗提供重要的信息。
三、分子病理学分子病理学是近年来发展迅速的新兴领域，它研究疾病发生和发展的分子基础，以及与之相关的基因突变和蛋白异常。
分子病理学的发展使得临床医生不仅能通过形态学检查，还能通过检测基因、蛋白和其他分子标志物，更准确地诊断疾病、预测预后和指导靶向治疗。
分子病理学的应用已经在许多疾病中取得了显著的进展，比如癌症的分子分型和个体化治疗等。
四、病理数据库随着信息技术的发展，在临床病理学中建立和维护病理数据库已经成为一种趋势。
将病理学数据进行数字化管理和分析，可以提高数据的可利用性和准确性，为临床决策和科研提供更为可靠的依据。
病理数据库的建立还有助于加强不同医疗机构之间的数据共享和合作，促进病理学研究的进一步发展。
总结起来，病理学的研究在临床诊断中起着不可或缺的作用。
组织学、细胞学和分子病理学等检查方法的应用能够帮助医生准确定位病变，诊断疾病的类型和病因，并根据检查结果制定个体化的治疗方案。
分子病理学技术讲稿
合格的超薄切片样品应该达到以下基本要求： （1）切片的厚度应在50nm左右，不能超过 100nm，以获得较高的分辨率和较高的反差； （2）切片应能耐受电子束的强烈照射而不发 生破裂、变形；（3）细胞超微结构保持良好， 没有明显的物质凝聚和丢失。
电子显微镜技术： 细胞内的细胞器、细胞骨架或大分子水平的变化。
三．常用免疫组织化学染色方法
（一）直接法
将荧光素(免疫荧光法)或酶直接标记在第一 抗体上，以检查相应的抗原。直接法具有 特异性强的优点，但敏感性差，耗费抗体 多。
（二）间接法
先用荧光素或酶标记第二抗体，一抗为特异 性抗体， 二抗仅有种族特异性。 特点: ⑴ 预先标好二抗，较方便； ⑵ 比直接法敏感，但仍差。
⑵ Lysozyme少数阳性。
６．滑膜及间皮肿瘤及其标记物：双向分 化，无特异性标记物。
Keratin,EMA;Vimentin,FN,AAT,ACT,Lysoz
yme等均有可能阳性。
７．周围神经肿瘤及其标记物：
⑴ S-100：神经纤维肿瘤，神经鞘肿瘤。
⑵ 髓性碱性蛋白（Myelin basic protein,MBA）； ⑶ 髓鞘相关蛋白（MAG）；
⑷ 层粘连蛋白（Laminin）。
8．淋巴造血组织肿瘤及其标记物：
(１)LCA（Leucocyte Common Antigen，白细胞共同抗原）；
(２)CD19，CD25，CD20－－标记Ｂ淋巴细胞；
(３)CD4，CD8，CD3－－标记Ｔ淋巴细胞；
(４)ＭＡＣ３８７、Ｌｙｓｏｚｙｍｅ－－标记组织细胞； (５)ＣＤ１５、ＣＤ３０（Ki-antigen）－－标记Ｒ－Ｓ细胞； (６)CD11，CD14－－标记单核细胞、粒细胞。