A群轮状病毒检测操作规程
婴幼儿肠炎A群轮状病毒G型和P型的流行病学研究
ｉ ２０ ｃ． ０８： ４５— ４６．
９１ 、０月是 轮 状 病 毒检 出率 的 高峰 月 份 ，与 全 国其 它地 区 组 的婴幼 儿免 疫 系统 发育 还不 健 全 ， 次此 阶段 来 自 体 其 母 血 清 型 的 中和抗 体 高于母 亲 ， 果母 亲 体 内 中和抗 体滴 度 如
，
其 发 病率 与 性 别 无关 ， 染 高 峰 季节 在 不 同地 区差 别 感
较 大 ， 冬季 是 高发 季节 ， 秋 为儿 童 四大 常 见病 之一 ， 自限 １ ｏ ｎ ．ａｏ ．ｅｍｅｔｄ ｏ ｂ — ｔ ｎ ｅ Ｒ Ａ ｉ ｓｓ 有 Ｊ ｈ ＴＰ ｔ ｎ ｇ ｎｅ ｄｕ ｌ ｓ ａｄ ｄ Ｎ ｖ ｕｅ： ２ Ｊ ｔ Ｓ ｅ ｒ ｒ 性， 发病 周期 为 ７天左 右 ， 文 连 续 三 年 数 据 显 示 ， 中 本 其
ｉ ｅ ｆ ｏａ ｉｕｓ ｔａｎｓ ｒ ｍ ｃ ｌ ｒ ｎ ｉ ａ ｓ ｕ ｂａ ｆｌ ｓ ｏ ｒ ｔｖ ｒ ｓｒ ｉ ｆｏ ｈｉｄ ｅ ｎ ｕｂ ｒ ｎ
浙江 中西医结合杂志 ２ ｔ ０ ２年第 ２ 卷第 ３ ２ 期
Ｚ ｅａ ｇ ＩＣ ｈｊ ｎ Ｔ ＷＭ（ ｏ． ｏ ０ ２ ｉ Ｊ Ｖ １ ２Ｎ ． ２ １ ） ２ ３
２ ３９
性 ３ ｓ９ ℃ ３ ｓ、２ ３ ｓ７ 。 ｍｉ ８个 循 环 ；２（ ０ 、４ ０ ６ ℃ ０ 、２Ｃ ｌ ｎ２ ７￣ ２延
比较 低 ， Ｈ Ｗ 果 该血清 型正在流行 ， 此 ｅｎ 孩子 更易感染 嘲 。 Ａ群 轮 状病 毒 流行 毒 株在 不 同年 份 、地 区存 在 差 异 。 感 染 人 类 的主 要 型 别 为 Ｇ１ Ｇ 、 ３ Ｇ 、 ２ Ｇ 、 ４型 ，研 究 显 示 Ｇ１
猪轮状病毒(RV)
1 病原学猪轮状病毒(RV)属于呼肠弧病毒科轮状病毒属的A、B、C、E 群[4]。
成熟完整的病毒粒子略呈圆形，没有囊膜，具有双层表壳，直径为65～75nm的二十面体对称。
电镜观看，病毒的中央为一个电子致密的六角形棱心，直径37～40nm，即芯髓;周围有一电子透明层，壳粒由此向外呈辐射状排列，组成中间层衣壳;外周为一层滑腻薄膜组成的外层衣壳，厚约20nm，形成一个轮状结构，RV由此而得名[5]。
在感染的粪样和细胞培育物中均存在两种形式的病毒粒子：具有双层表壳的滑腻型(S型)双层颗粒，有感染性，直径为75nm;没有外表壳的粗糙型(R型)单壳颗粒，无感染性，直径为65nm。
有关RV的超微结构，学者们的意见尚不一致，Martin等(1975年)以为RV与环状病毒一样，也有32个大的环形壳粒，且其180个三联亚单位按T=9的、方式组成20个三角面体。
每一个三联亚单位包括3个结构单位，因此一共有540个结构单位。
但据Esparza(1978年)报导，RV表面有162个孔，由320个三联亚单位按T=9方式组成20个三角面体。
因每一个三联亚单位包括三个结构单位，因此一共有960个结构单位。
显现上述不同的观看结果，或许是标本制作方式不同的缘故。
Stannard氏等(1977年)对乳鼠流行性腹泻轮状病毒和猴RVSA11株进行了细致的电子显微镜观看，发觉其内衣壳有180个形态亚单位，排列成晶格状。
12个顶各为一个间隙，由5个壳粒围绕，另外80个间隙各由6个壳粒围绕。
外衣壳由蜂窝样的晶格组成，且与内衣壳的晶格排列相符。
1.1 分子生物学特性通过X-射线晶体结构研究发觉，完整的病毒粒子具有复杂的结构。
最外层核衣壳由结构蛋白VP7和VP4组成，中间层衣壳由VP6组成，最内层衣壳由VP2和少量的VP一、VP3组成。
VP7是组成外衣壳最丰硕的外壳蛋白，是分子量为37KD的糖蛋白。
VP4是88KD的红血球凝集素纤突蛋白，沿VP7形成的滑腻表面向外突出。
腹泻患儿粪便中A群轮状病毒的检测分析
菌 １ ， ５％。这 与 患者 免疫 力低 下 、 株 占 ０ 激素 、 免疫 抑制 剂及不合 ｌ． ％， １ １ 其次为 消化 内科 ５ ６ １ ． ％。 ５ ２３ 院感 染 部位分 布 ：医院感 染 部 位 以皮 肤 软 组 织最 多见 ， 理 使用抗 菌素 药物 导致 机体 菌群失 调有 关 。 －医 占 １ ． ％， １ １ 其次是 泌尿道感 染 占 ５ ６ １ ． ％。 ５ 本 次 调 查 显 示我 院抗 菌 药 物 的使 用 率 为 ３ ． ％，在各 科 ９１ ７ ２４医 院感 染病 原 菌监 测 ： ． ２例 医院 感染 病 例 叶 ， 送 了病 原 学 用 药 中 ， １ ２例 以治 疗 用 药 为 主 占 ３ ．９ ， 防用 药 占 ５ １ ％。调 查 ２９％ 预 ． ５
患 者 合 理 使 用 抗 菌 药 物 的宣 传 ，制 定 抗 菌 药 物 合 理 应 用 的原 则 。 可能 按 药 敏 试 验 结 果 选 用 敏 感 的 抗 菌药 物 ， 主 张 经验 尽 不 性 使 用抗 菌 药物 。 通过 此次 现患率 调查 ， 强 了全 院临床 医护 人员对 医院感染 增
（４ ７ 、 １ ％（ ５２ ） 年龄 ６ ２ １／ ）５ ． １／９ 。 ２ ７ 月一 岁患 儿 阳性 率 百分 比７ ％。 论 ：～ 岁 急性腹 泻 患） ２ ． ９ 结 ０５ Ｌ ２ ％是 由Ａ ５ 群轮 状病 毒 引起 ， 是儿 童急性腹 泻 的主要 病 源之一 ， 病 主要 集 中在 每年 的 １２ 发 ～ 月和 １－ ２ １ １月的秋 冬季 节 ， 做好 患儿Ａ 群轮 状 病毒 的常规 检 查显得 尤 为重要 。 关键 词 ： 急性 腹 泻患儿 ； 粪便 ； 状 病毒 轮 中 图分类 号 ： ７ ５ Ｒ ２． ７ 文献 标识 码 ： Ｂ 文章编号 ：０ ６ ０ ７ （ ０ ０ ２ — ０ ８ ０ １ ０ — ９ ９ ２ １ ）２ ０ ６ — １
腹泻患儿粪便中A群轮状病毒的检测分析
腹泻患儿粪便中A群轮状病毒的检测分析
张文莉;杜彦懿;赵东晓
【期刊名称】《内蒙古中医药》
【年(卷),期】2010(029)022
【摘要】目的:探讨儿童腹泻的致病因素及发病规律.方法:对前来我院就诊的患儿粪便使用A群轮状病毒诊断试剂盒(胶体金法)进行检测.结果:151例0～5岁急性腹泻患儿粪便中检出A群轮状病毒阳性34例,总检出率为22.5%.且1～2月和11～12月检出率分别为51.9%(14/27)、51.7%(15/29).年龄6月-2岁患儿阳性率百分比79%.结论:0～5岁急性腹泻患儿22.5%是由A群轮状病毒引起,是儿童急性腹泻的主要痛源之一,发病主要集中在每年的1～2月和11～12月的秋冬季节,做好患儿A群轮状病毒的常规检查显得尤为重要.
【总页数】1页(P68-68)
【作者】张文莉;杜彦懿;赵东晓
【作者单位】宁夏第三人民医院检验科,750000;宁夏第三人民医院检验科,750000;宁夏第三人民医院检验科,750000
【正文语种】中文
【中图分类】R725.7
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检测结果分析4.腹泻患儿A群轮状病毒检测分析5.腹泻患儿粪A群轮状病毒检测结果分析
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2.腹泻症候群监测技术方案 091214
内部资料“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项传染病监测技术平台项目腹泻症候群监测技术方案专项实施管理办公室二〇〇九年七月编写组责任人：阚飆编写组核心成员：段招军夏胜利目录I．流行病学设计 (1)一、监测目的 (1)二、监测网络的设置 (1)三、监测病例定义 (2)四、监测内容与方法 (2)五、数据收集、分析和反馈 (3)II．标本的采集、运输及保存 (4)一、标本的采集 (4)二、标本的保存与运送 (4)III．病毒检测内容及流程 (6)一、标本检测流程图 (6)二、标本的处理 (7)三、检测方法 (7)四、注意事项 (7)IV．细菌检测内容及流程 (9)一、标本检测流程图 (9)二、标本的处理 (9)三、检测程序 (9)四、注意事项 (13)V．寄生虫检测内容及流程 (14)一、标本检测流程图 (14)二、标本的处理 (14)三、检测方法 (15)VI．质量控制 (16)一、项目启动之前的质量控制要求 (16)二、病原谱调查质量控制要求 (18)三、病毒检测标本的处理和检测 (20)四、病原谱调查评价指标 (21)VII．信息管理方案 (25)一、原始表格的管理 (25)二、数据库的建立和管理 (25)三、标本检测结果的反馈 (27)VIII．附件 (31)附件一省医院腹泻病例个案登记表 (31)附件二腹泻病毒抗原和核酸检测SOP (33)附件三腹泻病原细菌检测标准程序 (41)附件四腹泻寄生虫检测操作程序 (73)I．流行病学设计一、监测目的（一）建立腹泻症候群病原谱监测网络和监测检测技术，获得我国监测地区的腹泻病原谱构成；（二）通过对腹泻症候群分离病原体的鉴定、分子分型、基因变异等特征分析，探讨主要病原体的变异和流行变迁规律；（三）提高监测实验室腹泻病实验室诊断、监测预警、突发腹泻疫情的处置能力。
二、监测网络的设置（一）监测实验室的设置和任务腹泻症候群监测共包括12个监测网络实验室（见表1）。
早期新生儿A组轮状病毒感染筛查分析
３ １
（ １ ８ ２ ／ ８ ８ ９ ） ， 维 吾尔 族 等其他 民族早 期新 生 儿 Ａ组 轮 状 病 毒抗原 阳性率 为 ２ ４ ． ６ ３ ％（ ２ １ ７ ／ ８ ８ １ ） ， 汉 族与其 他 民族 的感染 率 无统计 学 意义 ２ ． ７ ７ １ ， Ｐ ＝ Ｏ ． ０ ９ ６ ＞。 ２ ． ３ ２ ９例腹 泻新 生 儿粪便 常规 检 测 结果 （ 见表 ２ ）
２ ． ２ ３ ９ ９ 例 Ａ组轮状病毒阳性样本
３ ９ ９ 例 Ａ组轮状病毒阳性样本 中，汉族早期新
生 儿粪 便 Ａ组 轮 状 病 毒 抗 原 阳性 率 为 ２ ０ ． ４ ７ ％
新疆维吾尔 自治区人民医院新生儿科（ 阿依加玛力 ， 李龙 ， 茹克亚 ） 新疆维吾尔 自治区人 民医院 新疆儿科研究所 （ 李奇凤 ， 贾娜尔 ）
计 学意 义 。可 见 ２ ０ ０ ７年早 期 新生 儿 Ａ组轮状 病 毒 感染 、 患病 高 峰在 ９—１ １ 月 。 由于 ２ ０ ０ ６年调查 月份 ２ ． ４ Ａ组轮 状病 毒 流行 季节 分 布 ：
２ ０ ０ ７年 ９一ｌ １月 份 新 生 儿 粪 便 检 测 例 数 为 不 满一年 ， 所 以不具 有 可 比性 （ 见图 １ ， ２ ） 。
老 年人 免疫 力低 下 时也 可感 染 翻 。为 了解住 院早 期
２ ． １ 早期新生儿粪便 Ａ组轮状病毒抗原检 出情况
（ 见表 １ ）
表１ 早期新生儿粪便轮状病毒抗 原检 出情况
新生儿 Ａ组轮状病毒感染情况及其 临床表现特点 ，
２ ０ ０ ７年 ６月 ２ ０ ０ ８年 １ ２月 ， 对 在 我 院 出生 的早 期
１ ６ １ ＞０ ． ０ ５无统计学意义 。
急性腹泻婴幼儿粪便检测A群轮状病毒的分析
急性腹泻婴幼儿粪便检测A群轮状病毒的分析
焦飞燕
【期刊名称】《内蒙古中医药》
【年(卷),期】2013(032)033
【摘要】目的:了解A群轮状病毒引起婴幼儿腹泻的感染情况,为临床诊断提供参考.方法:采集腹泻婴幼儿的新鲜粪标本,采用A群轮状病毒诊断试剂盒,对我院2012年1月至2012年12月儿科门诊603例腹泻婴幼儿的腹泻标本进行A群轮状病毒的检测.结果:603例腹泻婴幼儿中检出160例A群轮状病毒阳性标本,阳性率26.5％急性患儿感染A群轮状病毒较多,A群轮状病毒引起的婴幼儿腹泻以11～1月为高发感染期,感染率分别为533％48.6％37.3％.轮状病毒阳性例数以6个月至2岁婴幼儿最高,占阳性总数的80％.结论:11～1月为感染高峰期,尤其以6个月至2岁婴幼儿为主要感染人群,应重视腹泻病原的检测,以明确诊断防止滥用抗菌药物而导致肠道菌群失调,发生二重感染.
【总页数】1页(P73)
【作者】焦飞燕
【作者单位】陕西省第四人民医院陕西西安 710043
【正文语种】中文
【中图分类】R725.1
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小儿急性腹泻粪便中A群轮状病毒检测与分析
小儿急性腹泻粪便中Ａ群轮状病毒检测与分析【摘要】目的：分析A群轮状病毒（RV）引起小儿急性腹泻的特征。
方法：采用A群轮状病毒诊断试剂，分别在秋、冬、春季节，对212份有腹泻症状的婴幼儿粪便进行A群RV检测。
结果：在212份有腹泻症状的婴幼儿粪便中检出67例RV阳性标本，阳性率31.60%；其中1~2月份检出35例RV阳性粪便，占52.24%（35/67）；0.5~2岁年龄段RV阳性56例，占88.06%（59/67）；检出男性RV阳性49例，阳性率为32.23%（49/152）；女性RV阳性18例，阳性率为30.00%（18/42）。
结论：我院由A群RV引起的婴幼儿急性腹泻主要集中在每年春季的1~2月份，0.5~2岁的婴幼儿为A群RV感染的高峰期。
【关键词】轮状病毒；腹泻A群轮状病毒（rotavirus，RV）是严重引起婴幼儿腹泻的重要病原。
有研究报道，轮状病毒腹泻是婴幼儿死亡的主要原因之一[1，2]。
婴幼儿RV致的腹泻主要以粪—口途径为主，具有季节性，多发于秋冬季节；潜伏期为1～2天，患儿发病初期表现流涕、咳嗽、发热、咽部疼痛等感冒症状，病程一般可持续2~6天，每天腹泻次数在10~20次不等[3]，若治疗不及时或治疗方法不正确，患儿容易出现脱水、肺炎及中毒性心肌炎等而危及生命。
为了解小儿A群RV感染的流行情况，我们于2006年9月~2007年4月，对前来我院就医的有腹泻症状的患儿，进行A群RV抗原检测。
现报道如下：1 材料与方法1．1 标本来源：212份粪便均为2006年9月~2007年4月我院门诊儿科送检标本，患儿均伴有不同程度呕吐、发热、腹泻、脱水等症状，粪便呈黄色水样或蛋花样便。
1．2 试剂来源：A群RV诊断试剂盒由深圳市惠安生物科技有限公司提供。
检测原理：第一抗体吸附在硝酸纤维素膜（NC）上，第二抗体结合于胶体金颗粒表面，当粪便标本中含有RV抗原时，先与NC膜上面第一抗体结合，然后与金标记第二抗体反应，形成抗体—抗原—金标记抗体的夹心式复合物，并呈现出紫红色沉淀线。
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1．检验目的
轮状病毒是在全世界范围内造成婴幼儿急性肠胃炎的主要因素。
在我国，每年春秋冬季均有一个婴幼儿腹泻的发病高峰，病原学研究证实，这些病例的40%-60%是由轮状病毒引起的。
通过检测粪便标本中A群轮状病毒抗原，适用于临床婴幼儿腹泻患者A群轮状病毒感染的辅助诊断。
2．方法原理
以抗A群轮状病毒多克隆抗体包被硝酸纤维素膜、以胶体金标记的小鼠抗A群轮状病毒VP6单克隆抗体为结合物，利用免疫层析原理来检测粪便标本中的轮状病毒抗原。
（胶体金法）
将试纸条插入用稀释液稀释好的标本中后，胶体金结合物与标本一起移动，当移动至硝酸纤维膜上的抗轮状病毒多抗时，如果标本中含有轮状病毒，则胶体金-轮状病毒结合物会与抗轮状病毒多抗结合，5-10分钟出现红色的检测线。
多余胶体金结合物继续移动，将与包被在膜上的羊抗鼠IgG抗体结合，形成另外一条红色的对照线。
3．标本采集与处理
3.1在症状出现以后尽快收集粪便标本，无特殊要求。
3.2样本应该当天立即检测，如果不立即检测可在2-8℃冰箱保存1-2天。
长时间保存需要于-20℃冷冻，使用前彻底解冻并回复到室温再检测。
4．分析系统
4．1分析试剂：北京万泰生物药业股份有限公司提供的配套的A群轮状病毒诊断试剂盒，规格为10test/盒，2-30℃干燥贮存，有效期18个月；在效期内使用试剂。
5．操作方法
如果在冰箱保存试剂盒，在使用前将试剂盒回复至室温。
5.1旋开滴管，取出采便勺，收取粪便1勺（100mg），放入有样本稀释液（生理盐水0.5ml）的滴管中，旋紧。
5.2振荡混匀，折断滴管上的盖帽。
5.3垂直而缓慢滴加2-3滴混匀后的样本（80ul）至测试卡加样中心。
5.4 5-10分钟内判读结果，不可超过10分钟。
6．结果判定
质量控制：出现对照线试验有效，反之，试验无效，应重新检测。
6.1阳性：出现两条红色线。
6.2阴性：只出现一条对照线。
7. 结果解释
7．1对于检测结果阳性的标本，临床医生须结合临床信息和试验结果综合评价。
7．2由于反应原理的限制，对于阴性结果不排出A群轮状病毒感染可能。
8．注意事项
8.1本试验仅能检测粪便标本中A群轮状病毒抗原，不能检测其他轮状病毒；仅能定性检测，不能定量检测；
8.2仅供体外诊断用；
8.3 开启后要放置在干燥的环境中贮存，尽量在15周内用完；
8.4 不同批号的组分不要混用；
8.5 操作标本时请遵照GLP的要求进行。
8.6不要使用放置时间过长，长菌或反复冻融的样本，以避免这些非特异性的反应。
8.7采样过量，过稠，导致稀释后的样本堵塞检测卡，请取上清液检测。
8.8在规定的时间内，即使检测线的色带非常弱也判为阳性。
8.9试剂盒，在使用前将试剂盒回复至室温。
8.10测试卡在打开包装20分钟内使用，过长会影响结果。
8.110分钟后的结果无临床意义。
8.12样本视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。
9．安全防护
9．1对任何一份标本（包括质控品、标准品及检测试剂等）都应视其为具有传染性，操作人员在工作时应戴乳胶手套、穿工作服。
9．2一旦发生标本容器划破手或身体、液体溅进眼睛等粘膜处，应立即用大量的水冲洗，同时向上级医师或科领导报告，必要时施以丙种球蛋白预防。
10．常见的误差源
10．1试剂原因：试剂过期等。
10．2标本原因：标本处理、收集不符合要求等。
10．3人为原因：结果填写错误等。
11.引用文件
北京万泰生物药业股份有限公司提供的配套的A群轮状病毒诊断试剂盒说明书。
【操作规程修改规定】
本操作规程自制定之日起开始实施,各实验人员必须严格按照本规程操作,若本仪器,实验方法更新或有新仪器,新方法,新技术应用于临床,则对本操作规程进行修改。