生物样品预处理技术
样品预处理的目的及方法
样品预处理的目的及方法样品预处理是科学研究和实验分析中的一项重要步骤，它的目的是为了减少或消除样品中的干扰物质，提高测试的精确度和准确度。
同时，样品预处理还能改善样品的适应性，使其符合分析仪器和方法的要求。
本文将介绍样品预处理的目的及常用的方法。
一、目的样品预处理的主要目的是消除或减少样品中的干扰物质。
在进行科学研究和实验分析时，样品中常常存在着各种干扰物质，如杂质、有机物、无机盐等。
这些干扰物质可能会影响测试结果的准确性，甚至导致误判。
因此，通过样品预处理，可以有效地去除或减少这些干扰物质，提高测试结果的可靠性。
二、方法样品预处理的方法根据不同的实验目的和样品性质有所差异。
下面介绍几种常见的样品预处理方法：1. 溶解处理：对于固体样品，首先需要将其溶解成溶液，以便进行后续的分析。
溶解处理的方法包括酸溶解、碱溶解、酶解等。
其中，酸溶解常用于矿石、土壤等样品的处理，碱溶解常用于有机物的分析，酶解则常用于生物样品的处理。
2. 过滤处理：对于含有悬浮物或杂质较多的样品，需要通过过滤来去除这些杂质。
过滤处理可以使用滤纸、滤膜等材料进行，同时还可以选择不同的孔径大小来适应不同的实验要求。
3. 萃取处理：对于某些需要分离的组分，可以使用萃取方法进行处理。
常见的萃取方法包括液液萃取、固相萃取、气相萃取等。
通过选择合适的萃取剂和操作条件，可以将目标组分从样品中分离出来，从而减少干扰。
4. 浓缩处理：有时候样品中的目标组分含量较低，需要进行浓缩处理以提高检测灵敏度。
常用的浓缩方法包括蒸发浓缩、气相浓缩、固相浓缩等。
通过这些方法，可以将样品中的目标组分浓缩到较小的体积中，从而方便后续的分析。
5. 分离处理：对于复杂的样品，需要通过分离方法将不同组分分离开来。
常见的分离方法包括离心分离、电泳分离、层析分离等。
通过这些方法，可以将样品中的各种组分有效地分离开来，从而减少干扰，提高分析结果的准确性。
除了上述的方法外，样品预处理还可以根据实验需要进行其他的处理，如pH调节、加热处理、稀释处理等。
样品预处理实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在了解样品预处理在实验研究中的重要性，掌握样品预处理的基本步骤和方法，提高实验结果的准确性和可靠性。
通过对样品进行适当的预处理，去除杂质、调整浓度、分离目标物质等，为后续的实验分析提供高质量的数据。
二、实验原理样品预处理是实验研究的重要环节，它直接影响到实验结果的准确性和可靠性。
样品预处理的主要目的包括：1. 去除样品中的杂质，提高实验结果的准确性；2. 调整样品浓度，使后续实验分析更加方便；3. 分离目标物质，提高实验的灵敏度；4. 优化实验条件，提高实验效率。
样品预处理的方法主要包括：1. 过滤：去除样品中的悬浮颗粒；2. 萃取：分离目标物质；3. 浓缩：提高样品浓度；4. 离心：分离不同密度物质；5. 火焰原子吸收光谱法（FAAS）：测定样品中的金属元素；6. 高效液相色谱法（HPLC）：分离和检测有机物。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：水样、土壤样品、生物样品等；2. 实验仪器：离心机、超声波清洗器、分光光度计、高效液相色谱仪等。
四、实验步骤1. 样品采集：根据实验目的和样品特性，采集适量的水样、土壤样品或生物样品；2. 样品预处理：a. 过滤：将样品通过滤纸或滤膜，去除悬浮颗粒；b. 萃取：根据样品特性，选择合适的萃取剂，将目标物质从样品中提取出来；c. 浓缩：通过蒸发或低温浓缩等方法，提高样品浓度；d. 离心：将样品离心，分离不同密度物质；e. FAAS：测定样品中的金属元素；f. HPLC：分离和检测有机物；3. 样品分析：将预处理后的样品进行后续分析，如检测目标物质的含量、分析样品的组成等。
五、实验结果与分析1. 样品过滤：通过过滤，去除样品中的悬浮颗粒，提高了实验结果的准确性；2. 样品萃取：萃取剂的选择和萃取方法对目标物质的提取效果有较大影响，通过优化萃取条件，提高了目标物质的提取率；3. 样品浓缩：浓缩后的样品浓度提高，便于后续分析；4. 样品离心：通过离心，分离不同密度物质，为后续分析提供了便利；5. FAAS：测定样品中的金属元素，为环境监测和健康评估提供了依据；6. HPLC：分离和检测有机物，为有机污染物分析提供了技术支持。
细菌分离流程
细菌分离流程细菌分离是微生物学研究中的一项重要技术，它可以将复杂的微生物群落中的细菌分离出来，从而研究和分析单个细菌的特性和功能。
下面将详细介绍细菌分离的流程和步骤。
1. 样品收集细菌分离的第一步是收集样品。
样品可以是环境样品（如土壤、水样、空气等）或生物样品（如血液、尿液、组织等）。
在收集样品时，需要采取无菌操作，以避免外源性细菌的污染。
同时，还需要注意样品的保存条件，避免细菌失活或繁殖。
2. 样品预处理样品收集后，需要进行预处理以去除杂质和非细菌微生物。
预处理的方法包括过滤、离心、稀释等。
过滤可以去除大颗粒的杂质，离心可以沉淀细菌，稀释可以减少样品中的微生物数量，使细菌单个分离更容易。
3. 细菌分离培养基的选择选择适合细菌生长的培养基是细菌分离的关键。
常用的培养基有富集培养基、选择性培养基和差异培养基。
富集培养基可以促进细菌生长，选择性培养基可以抑制非目标菌群的生长，差异培养基可以根据细菌的生理特性进行筛选。
4. 细菌分离细菌分离是将复杂的细菌群落中的单个细菌分离出来，使其单独生长。
常用的细菌分离方法有涂布法、液体稀释法和滴定法。
4.1 涂布法涂布法是将样品均匀涂布在固体培养基表面，使单个细菌形成单个菌落。
具体操作步骤如下：1.取一定量的样品，用无菌工具（如无菌棉签、无菌针头）均匀涂布在固体培养基表面。
2.使用无菌铲子或铅笔头轻轻拖曳样品，使其均匀涂布。
3.使用无菌铲子或铅笔头在培养基上进行菌落分离，每次分离都使用新的工具。
4.标记每个菌落，以便后续的鉴定和分析。
4.2 液体稀释法液体稀释法是将样品逐渐稀释并接种在液体培养基中，使单个细菌形成单个菌落。
具体操作步骤如下：1.取一定量的样品，加入无菌稀释液（如生理盐水）中，进行均匀悬浮。
2.取一定体积的悬浮液，加入无菌稀释液中，再次进行均匀悬浮。
3.重复上述步骤，逐渐稀释样品。
4.取一定体积的稀释液，接种在液体培养基中。
5.在培养过程中观察是否有单个细菌形成菌落。
生物样本的质控和标准化
生物样本的质控和标准化生物样本是研究生物学、医学以及生命科学中不可或缺的实验材料。
但是，生物样本的质量对于实验结果的准确性和可靠性也有着至关重要的影响。
对于某些特殊的研究项目，更是需要对生物样本进行质控和标准化处理，以确保研究结果的可比性和可靠性。
一、生物样本的质控1.1 生物样本的质量标准在生物医学研究领域中，很多子领域都有特定的样本规范和标准操作流程（SOP）来确保最高的质量和有效性。
样品条件，如冷冻时间、制备条件和保存时间等，会影响 RNA、DNA、蛋白质等分子的质量。
所以，我们必须采取适当的方法来评估样本质量。
闪光芯片电泳、吸光度测量和荧光分析一般用于评估 DNA 和RNA 样本质量，而蛋白质分析常常使用凝胶电泳。
对于细胞样本质量的评估，则需要注意细胞密度、细胞存储液体和处理时间等重要因素。
为确保生物样本质量合格，我们需确保样本处理过程的标准化和规范化，从收集、储存、制备和处理样本的每一个环节都需要格外慎重，其中收集和处理样本的过程最为重要。
1.2 生物样本质量评价指标为了衡量样本的质量并确保实验结果的可比性，必须制定适当的性能标准或质量指标。
行业内的指标主要是质量控制（QC）指标，通常包括以下几个方面：- 样品完整性：样品是否已完整地被处理，它的物理和化学性质是否被改变，是否受到其他生物样品的污染。
- 样品质量：样品包含的RNA、DNA、蛋白质等分子质量是否符合特定研究目的的标准。
- 样品数量：合理的样品数量是否能够满足设计好的数据分析方法的需要，以保证研究结果的稳定性和可靠性。
- 样品稳定性：在样品制备，处理和分析过程中的样品稳定性，包括样品中RNA、DNA、蛋白质等分子是否降解，处理方法有没有使样品受到过多的热、冷等影响。
1.3 生物样本的质量管理生物样本的质量管理是生物医学研究中的一个重要环节。
通过管理样品库存储、样品标记和样品数据管理等方面的实施，实验室可以确保样品不受污染以及适时储存和快速取出等方面的要求，更好地实现生物样品数据的信息化和管理化。
灭酶法预处理样品中常用的温度
灭酶法预处理样品中常用的温度
灭酶法是一种常用的样品预处理方法，在各种生物分析实验中广泛应用。
它的主要目的是通过处理，将样品中存在的酶活性完全消除，从
而保证后续实验的准确性和可靠性。
而在灭酶法中，处理过程中的温
度是一个非常重要的因素，下面我们就详细介绍一下灭酶法中常用的
温度范围。
在灭酶法中常用的温度范围是0-10℃。
由于酶是一种蛋白质，在特定的温度和环境下，会发生形态变化和活性变化，从而导致后续实验结
果的不准确。
而在低温下，蛋白质的形态和活性都会受到很好的保护。
因此，在灭酶处理样品时，通常采用0-10℃的低温范围，来防止酶的活性影响实验结果。
在不同的实验中，灭酶法的处理时间和温度都有所不同。
通常情况下，如果需要尽可能彻底地灭酶，那么处理的时间越长，温度越低，效果
就越好。
但是，在实际操作中，温度和时间之间也需要进行平衡和选择。
处理时间过长会导致样品的一些物理和化学性质的改变，从而影
响实验结果，而温度过低则可能会造成样品中某些组分的析出和沉淀，影响后续操作的进行。
总的来说，在灭酶处理样品时，选取适当的温度范围非常重要。
根据
不同的实验需求，我们需要在灭酶时间和处理温度之间进行平衡和选择，以确保样品中的酶活性被完全消除，并保证实验结果的准确性和可靠性。
生物样品的处理方法
生 物 样 品 的 处 理 方 法
（3）分离纯化与富集
①液-液萃取法
水相pH值是萃取成功的关键 水相最佳pH值
碱性药物：高于pKa值12个pH单位
酸性药物：低于pKa值12个pH单位
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物 样 品 的 处 理 方 法
但生物样品宜在碱性或近中性提取 ——生物基质中内源性物质多为酸性， 在碱性下不易萃取
②液-固提取法（固相萃取法）
原理： 将不同填料作为固定相装入微型小柱， 当含有药物的生物样品溶液通过时，由 于受到吸附、分配、离子交换或其它亲 和力作用，药物或杂质被保留在固定相 上，用适当溶剂清洗杂质，再用适当溶 剂洗脱药物。
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物 样 品 的 处 理 方 法
(4)化学衍生化
化学衍生化目的 ①使药物变成具有能被分离的特性 ②提高对样品的检则灵敏度 ③增加药物的稳定性 ④提高对光学异构体的分离能力
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物 样 品 的 处 理 方 法
（5）有机破坏
方法：湿法破坏
干法破坏
氧瓶燃烧法
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
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第五章 药物定量分析与分析方法验证
1. 测定法
取空白生物基质（如血浆）数份，照标准曲线项下方法 操作，用标准曲线计算 在标准曲线范围内制备质控(quality control，QC)样品 ——高(接近上限)、中、低(接近LOQ) 3个浓度
——每一浓度至少5个样本
——与随行的标准曲线同法测定、计算，每个样品分析 测定1次
实际生物样品的量有限(如血浆，一般为0.5～2ml)
样品预处理的原则要求,方法、使用范围
样品预处理的原则要求，方法、使用范围下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证讲解
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萃取小柱一次性使用，防止交叉污染！ 33
固相萃取操作一般有五步：
? 活化——甲醇/乙腈 润湿小柱，活化填料； ? 平衡——水或适当缓冲液冲洗平衡小柱； ? 上样——将样品转移上柱，抽去废液； ? 淋洗——水或缓冲液最大程度洗去干扰物； ? 洗脱——用小体积的溶剂将被测物质洗脱下来并收集。
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? HPLC中化学衍生化法，包括柱前衍生化和柱后衍生化两 种方法。
? 柱前衍生化分析前尽可能将药物进行提取分离后再衍生 化，防止其他含有相同的功能基团的杂质也被衍生化， 影响分离。柱后衍生化是药物经色谱柱分离之后进行的， 所以可形成对检测器具有高灵敏度的衍生物。
? HPLC法常用的衍生化试剂有邻苯二醛、丹磺酰氯、荧胺 等。
式存在，加入强酸，可与蛋白质阳离子形成不溶性盐 而沉淀。常用的强酸有： 10%三氯醋酸等。血清与强 酸的比例为1:0.6混合，高速离心,就可除去蛋白质。 在酸性下分解的药物不宜用本法除蛋白。
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④加入锌盐或铜盐沉淀剂 ? 当pH高于蛋白质的等电点时，金属阳离子与蛋白
质分子中带阴电荷的羧基形成不溶性盐而沉淀。常用 的沉淀剂有：CuS04-Na2W04 ,ZnS04-NaOH等。含药物血 清与沉淀剂的比例为1:2混合，高速离心、分离后得上 清液。
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一般认为，当药物在体内达到稳定状态时，血浆中药 物浓度与药物在作用点的浓度紧密相关，即血浆中的药物浓 度反映了药物在体内（靶器官）的状况，因而血浆浓度可作 为作用部位药物浓度的可靠指标。
血浆和血清可以稳定的冰冻保存，一般储存在-20℃的 条件，长期保存时可以保存在-80℃的条件下，是生物样品 检测中最常用的样本。
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2．生物样品的介质组成比较复杂。如在血清中既含有高 分子的蛋白质和低分子的糖、脂肪、尿素等有机化合物， 也含有Na＋、K＋、Cl-等无机化合物。这些成分会严重影响 测定的准确性和灵敏度，同时会污染仪器。因此， 为了保 护仪器，提高测定的灵敏度，保证检测结果的准确性和可 靠性，必须对样品进行前处理。
第3章-样品预处理技术
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影响洗脱效率的因素
1. 洗脱液的性质：包括极性、对待测物的溶解度和 化学活性等理化性质，例如极性待测物要选择极性洗脱 液；对待测物的溶解度越大，洗脱效率越高；能与待测 物起化学反应，生成物易溶于洗脱液的，洗脱效率就高。 2. 洗脱时间：随着洗脱时间的增加，洗脱效率提 高，一定的 洗脱时间后，达到高而稳定的洗脱效率。 3. 洗脱方式：加热、振摇或超声等方法可以加快洗 脱和提高 洗脱效率。
m T 100% M
式中：T —— 消解效率，％； m —— 测得的待测物量，mg； M —— 滤料上加入的待测物量，mg。
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影响消解效率的因素
1.消解方法 湿法消解方法常用电热消解法和微波消解法 等，对不同的待测物要选择合适的消解方法， 例如测定易挥发性金属化合物，最好采用微波 消解法，可以防止待测物因挥发而损失。
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一、稀释或浓缩
吸收液样品中待测物浓度高于测定方法的 测定范围时，可用吸收液稀释后测定。如果吸收液 样品中待测物浓度高是由采样过程中吸收液的溶剂 挥发损失而造成的，则应先补充溶剂，恢复吸收液 原本组成后，再用吸收液进行适当稀释。 吸收液样品中待测物的浓度低于测定方法的 测定范围时，可将吸收液样品通过挥发或蒸馏等方 法浓缩后测定。在进行稀释或浓缩时，要注意稀释 或浓缩后样品基体的变化对测定结果的影响。
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解吸液的选择
2、单一还是混合？ 选择解吸液时可以采用单相解吸液或多相解吸 液，由所采集的化学物质在不同溶剂中的溶解特性 决定。 单相解吸液是指用一种溶剂作解吸液，如用二 硫化碳解吸活性炭上吸附的苯、甲苯等。 多相解吸液是指用两种或两种以上溶剂混合作 为解吸液，如果其中两种溶剂相溶可以配成溶液， 即一种溶剂溶于另一种溶剂中，解吸后得到的是单 一样品溶液，测定时得到一个浓度值。
生物样品前处理方法
反相作用
CH2N(R3)Cl -
+
强阴离子交换作用 -
H
O
N
O
CH3
O
对乙酰氨基酚
（酸性药物）
SPE一般性分析操作步骤
活化:依次用强溶剂、弱溶剂（缓冲溶液）进行活化； 上样：用能够溶解样品的弱溶剂携带样品上柱，既要保证样 品分析物的有效溶解，又要确保溶剂强度不至于把被分 析化合物从柱上洗脱下来； 淋洗：用具有一定强度的混合溶剂淋洗去除干扰杂质，确保 杂质被洗脱，而被分析化合物有效的保留在柱上； 洗脱：用较强的溶剂把被分析化合物从柱上替换洗脱下来。
SPE填料的类型
正相填料 溶剂：正己烷 填料：硅胶（ Silica ）氧化铝, Florisil®, 氨基, 二醇基… 反相填料 溶剂：MeOH/水 填料：C18/C8/Oasis HLB 离子交换填料 溶剂：缓冲液/盐流动相 填料：Accell CM/Accell QMA/Oasis MCX/MAX/WAX/WCX
1.
柱预处理
2.
3. 4.
进样
净化 洗脱
泵
SPE技术—填料颗粒基质
硅胶基质—键合各种官能团 如，{C18, C8, NH2, QMA ...} 不规则填料 小柱(Cartridges)： 40 - 80 m Disks：8 -10m 活性碳(AC2) 表面衍生剂涂层 (DNPH) 聚合物基质 (最新技术) — Oasis 球形填料 30/60m
排除限界 分子量
Total permeation
GPC系统
输液泵 进样阀 （自动进样器） GPC净化柱 馏分收集器 检测器