组织病理切片以及HE染色说课讲解
《吉林大学HE染色》PPT课件
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冲洗和保存
▪经过长时间福尔马林固定和保存的组织要充分水 洗，否则影响核的染色。
▪一般置于70~80%酒精中40C保存。当酒精混浊时， 更换新的酒精。
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固定易出现的问题与主要原因
扭曲变形与过度硬脆 容器过小；标本数量过多；固定时间过长。 取材过于薄小，尤其疏松结缔组织。 表层过度，中间没有固定透 取材过厚过大；固定时间不足；固定液失效。 固定液浓度高、渗透力强，表面快速硬化。 局部固定不佳 组织与组织重叠；组织与容器接触；组织露出液面。
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注 意 事 项 及 影响 固 定 的 因 素
1. 组 织 块 不 宜 过 大 ， 一 般 以 厚 度 5毫 米 ， 长 宽 不 超 过 15x15毫 米 。
2. 固 定 液 的 量 一 般 以 组 织 块 大 小 的 20倍 为 宜
3. 必 须 选 择 渗 透 力 强 ， 又 不 使 组 织 过 度 收 缩 或 膨 胀 的 试 剂做固定剂.
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特殊的组织或者器官 血液、骨髓：涂片 肌肉、神经： 骨、牙齿：脱钙 切片
酸 8
固定的方法
1. 蒸 气 固 定 法 比 较 细 小 而 薄 的 标 本 ， 可 用 饿 酸 或 甲 醛 蒸 气 固定。主要用于血液或细胞涂片以及某些薄膜组织等的固。如
血液 涂 片 ， 则 应 在 血 片 未 干 燥 前 就 与 饿 酸 蒸 气 接 触 2注 射 、 灌 注 固 定 法. 某 些 组 织 块 由 于 体 积 过 大 或 固 定 掖 极难渗入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定。 如 肺 可 将 固 定 液 从 气 管 或 支 气 管 注 入 .全 身 灌 注 固 定 较 大 动 物如
H-E染色
H-E染色H-E染色概述苏木精（Hematoxylin）-伊红（Eosin）染色也称普通染色，简称为H-E染色。
是生物组织学、病理学及细胞学工作必不可少的最常用的染色方法，故又称常规染色 H-E染色应该是红蓝相映，层次浓淡均为分明稳恒定优质各种固定、包埋方法所制作的组织切片和冰冻切片等，均可用采用常规染色 H-E染色原理组织细胞的不同成分对苏木精染料的亲合力不同，经苏木精染色的组织切片，再利用酸乙醇的分化作用，可使细胞核等酸性成分着色清晰，而其它成分脱色再经伊红染细胞质等碱性成分，则各种组织与病变的一般形态结构均可显示出来一张优质的染色切片，可以清晰地观察到各种不同的组织结构以此作为病理诊断的确切依据再根据此染色切片所见，分别进行不同的特殊染色到目前为止人类所积累的病理组织学知识，绝大部分是从观察苏木精-伊红染色标本所得来的第一节染液及溶液的配制一、明矾苏木精染液的配制苏木精染液的配法很多，普通、常规染色多用明矾苏木精，常用的有哈瑞（Harris）、埃利希（Ehrlich）、德拉菲而德（Delafield）及迈耶（Mayer）等明矾苏木精染液用钾明矾或铵明矾中的铝离子作为苏木精的媒染剂利用氧化汞等氧化剂进行人工氧化或通过自然氧化成熟的方法，使苏木精具有较强的染色效果还需用冰醋酸作为促染剂，以增强染色能力（一）哈瑞斯（Harris）苏木精染液1．配方（1）甲液苏木精 1g 无水乙醇 10ml （2）乙液钾明矾（硫酸铝钾） 20g 蒸馏水 200ml （3）其他氧化汞 0.5～1g 冰醋酸0.5～1ml 2．配制法分别配制甲、乙液，将乙液（加温并搅拌），待全部溶解后，再加入甲液，混合后煮沸1～2分钟，然后改用小火加温，慢慢加入氧化汞，同时不停地摇荡或搅拌使其充分氧化，当液体变为深紫蓝色时，即迅速将容器放入入冷水中使之迅速冷却，室温静置数小时至一夜。
第二天过滤，每100毫升滤液内加0.5～1毫升冰醋酸，以增强其染色力染色时间为3～15分钟此液为人工氧化剂，配制方便，配后第二天即可应用，且染色时间较短，为临床病理常用之方法，保存时间不能太长，经2～6个月后染色作用渐弱，故现用现配为好，一次不宜配制过多，应按需要量随用随配钾明矾为媒剂，氧化汞为氧化剂，冰醋酸为促染剂二、伊红染液的配制为砖红色粉末状或酱红色结晶，是最常用的胞浆染料伊红有水溶性和醇溶性，黄光（Y）与蓝光（B）之分病理组织学常规染色一般多用水溶性伊红Y伊红染液的一般浓度为0.25％～1％。
详细论述常规石蜡切片he染色的基本流程
详细论述常规石蜡切片he染色的基本流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果分析
病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果分析病理技术HE染色是病理诊断中最常用的染色方法之一。
HE染色法能够明确细胞和组织的结构、性质、分布及数量，对于肿瘤病理诊断、发病机制研究以及治疗方案的制定起到了重要的作用。
一、HE染色法的原理和步骤HE染色法的原理是采用氨基甲酸、伊红等染料，将细胞色素、含氮物质、蛋白质等生物大分子染色，使细胞或组织的形态、结构、分布等更加清晰，便于观察分析。
HE染色法一般分为以下几步：1.取样部位：取病理标本，如组织、细胞和液体等，根据不同所检测的标本来源，有相应的标本取材方法。
2.取材处理：将病理标本置于10%中性缓冲甲醛液中固定，并逐渐递增浓度，最后转移到绝对乙醇中保存，同时进行脱水、清嵌、包埋等处理。
3.切片染色：将经过薄切后处理的标本放入巫丹红中染色并洗涤去色，再放入甲苯中脱水复染，最后油化，放在显微镜中观察。
1.肺癌诊断：肺癌的组织形态往往比较复杂， HE染色法在手术切除后的组织切片和病理活检中都有重要的应用。
该染色法对于肺癌细胞的细胞核、染色质、线粒体、胞浆等结构的观察有极大的帮助，明确肺癌的组织学特征、类型和分级。
2.脑神经元瘤诊断：HE染色法在脑神经元瘤的诊断中也有重要应用。
在脑神经元瘤的标本中，HE染色法能够突显出瘤细胞的核团，清晰显示出瘤细胞的形态、数量、排布等信息，为临床提供重要的诊断数据，指导临床治疗。
3.肝转移瘤诊断：肝转移瘤通常具有多样性，如HE染色法可以帮助病理医生明确病灶中的转移瘤细胞的分布、数量、病理形态等，为临床治疗的制定提供重要依据。
三、HE染色法应注意的问题1.标本的选择和取材应规范，避免样本污染或丢失的情况。
2.HE染色的条件应准确控制，包括染色剂的浓度、染色时间、清洗时间等，避免染色结果的偏差。
3.HE染色结果应随时保存，为结果的分析提供依据。
四、结论HE染色法是病理诊断中一种常规且重要的技术手段，对于肿瘤诊断、发病机制的研究和治疗方案的制定等有着非常重要的作用。
组织切片HE染色与免疫组化
1 组织切片1、剪取组织,10 %甲醛固定。
2、已经固定好的组织依次在70 %、80 %、90 %、95 %、95 %、100 %的乙醇溶液中浸泡15-20 min，3、再浸入乙醇和二甲苯（1:1）的混合溶液中15-20 min，然后浸入二甲苯直到透明，将透明的组织浸入石蜡和二甲苯（1:1）的混合溶液中浸泡1 h，用石蜡进行固定。
4、包埋、切片2组织切片HE染色染色结果：细胞核呈蓝色，细胞的细胞质呈粉红色。
步骤：1、组织切片用二甲苯脱蜡15 min，再次用二甲苯进行脱蜡15 min，2、浸入二甲苯和酒精混合溶液（1:1）3 min，依次浸入100%、95 %、90%、80%、70%、50%乙醇各2 min。
3、苏木素染色5 min, 自来水冲洗3 min, 1 %盐酸2 s，自来水冲洗2 min, 依次浸入50 %、70 %、80 %乙醇2 min,伊红浸泡5 s。
4、 95 %、100 %、100 %乙醇各2 min，最后连续2次二甲苯各15 min，封片。
3 组织切片免疫组化检测1、组织切片置于58 ℃烘箱内烤片20 min, 然后取出待冷却后，进行脱蜡。
2、连续2次二甲苯脱蜡各15 min，依次浸入100 %、95 %、80 %乙醇、蒸馏水各2 min。
3、高压抗原修：将3 L柠檬酸盐缓冲液注入不锈钢压力锅中加热至沸腾。
切片置于切片架上，放入锅内，使切片位于液面以下，盖高压锅压阀。
当压力锅开始慢慢喷气时（加热5-6 min）计时1-2 min，然后将压力锅端离热源，冷水冲至室温后，蒸馏水冲洗，PBS洗，片子室温冷却20 min，再次PBS洗。
4、免疫组化具体方法参照SP试剂盒（福州迈新）：1、室温，正常非免疫动物血清封闭30 min；2、一抗4 ℃ 12 h；3、用PBS清洗两次，每次2 min；4、室温，内源性过氧化物酶阻断1 h；用PBS清洗三次，每次2 min；5、室温，生物素标记的二抗30 min；用PBS清洗三次，每次2 min；6、室温，链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶30 min，7、DAB显色5 min，蒸馏水冲洗；8、Gill’s苏木素复染3 min；9、自来水流水冲洗5 min；依次95 %、100 %的乙醇脱水3 min；10、最后用二甲苯透明，封片，镜检，拍照。
HE染色(石蜡切片)
透明的目的是将与石蜡结合的媒介剂（二甲 苯）浸入组织，并将不能与石蜡结合的脱水剂 （酒精）置换出来，为了更好的浸蜡和包埋，并 使组织透明。常用的透明剂是二甲苯，二甲苯透 明能力强，但易使组织收缩、变脆，故组织块在 二甲苯中不宜久留，小块组织以30min为宜，较 大的组织块可适当延长，但不能超过2h。
和细胞内的核糖体染成蓝紫色；伊红是一种酸性 染料，将嗜酸性的细胞质染成红色或淡红色。在 HE染色中，细胞核的染色至关重要。
（1）脱蜡：染色前，必须将石蜡切片中的石蜡去 除，否则水溶性染料不能与组织结合，这一步称 为脱蜡。脱蜡程序与脱水包埋恰好相反，先将切 片置于二甲苯中使石蜡溶解（5~10分钟），再由 高到低的酒精水化：无水酒精→95%→85%→70% （各级2~5分钟），然后经蒸馏水转入染缸。
（4）脱水与透明：染色后，再进行脱水与透 明，用浓度递增的酒精脱水： 70%→85%→95%→无水酒精（各级2~3分 钟，在95%以下浓度的酒精中伊红易脱色， 应适当缩短时间），之后用二甲苯透明 （10min2次）。
（5）封片：二甲苯透明后，将多余二甲苯擦 拭去，滴加树胶封片。封片要及时，掌握 好树胶的量。尽量做到树胶滴而不流，盖 片满而不溢，无气泡。
为了减少组织块过度收缩，往往在无水酒精 之后，先经过酒精二甲苯的混合液，然后再浸入 二甲苯中。无水酒精：二甲苯=1：1，15min一次； 二甲苯，15min两次。（具体时间自己摸索）
浸蜡是指透明过的组织块在融化的石蜡中浸
渍的过程，其目的是使组织内有一定的支撑物， 组织与石蜡成为不可分离的整体，使之具备一定 的硬度和韧度，便于切出满意的切片。（常用石 蜡的熔点为60~62摄氏度，如果做免疫组化，为了 保存组织内的抗原，可用48~50摄氏度的低熔点石 蜡）。
组织病理学制片技术详解演示文稿
二、固定(Fixation)
固定就是用物理或化学方法，阻止组织细胞离体或 培养细胞脱离生存环境后发生形态学变化。
(一)固定的目的
1. 迅速阻断组织细胞离体后的自溶性变化，防止腐 败，尽量保持组织细胞生活状态下的形态结构。
2. 使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变成 不溶性物质，并保持原有的空间位置。
3. 防止组织变形 柔软或较薄的组织先平铺在吸水纸上，
再投入固定剂中；含气或脂肪多的组织易浮于液面，可在 组织表面覆盖棉花以达到充分固定。
4. 固定液的穿透性 一般固定液在24h内不能穿透厚度 大于2~3mm的实体组织或5mm的多孔疏松组织，故取材 组织块的厚度原则上不应超过3~4mm。 5. 固定时间 固定的时间与固定液的种类、组织类型、 块大小、温度等有关。一般1.5cm×1.5cm×0.2 ~0.3cm大 小的组织块, 固定时间为12~24h。 6. 固定温度 大多数可在室温(25℃)固定，在低温(如 4℃)固定时，固定时间要相应延长。
组织病理学制片技术详解演示 文稿
第一页，共60页。
（优选）组织病理学制片技术
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目的和要求
Aims and Requirements
了解生物组织的特点及取材的注意事项； 熟悉切片的原理、一般要求及注意事项； 掌握石蜡切片制作技术；
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病理学常用的观察手段
The common survey means in pathology
3. 固定剂有硬化作用,增加组织的硬度,便于制片。 4. 组织中的各种物质经固定后产生对染料的亲和力，利
于染色和观察。
第十一页，共60页。
（二）常用的固定方法
1. 浸泡固定法 2. 灌注固定法 3. 细胞涂片的固定方法 4. 微波固定法 5. 蒸气固定法
HE染色ppt
HE染色步骤
1%伊红Y染液，5min。 蒸馏水速洗。 70%、80%、90%乙醇速洗。 95%乙醇，30s – 1min，LM下镜检细胞核与细胞质颜
色对比情况，注意标本面朝上放置切片。 100%乙醇，3 min ×2次。 二甲苯透明，5min ×2次。 树胶封固切片。 观察染色结果。
粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染
色，这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它
蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的
颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，
这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱 度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的 物质可变为嗜碱性；pH值降低时，原来被碱 性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染 色液的pH值可以影响染色的反应。
伊红颗粒等被成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细 胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。
由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及
染色性质不一样。经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等
呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适
宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。
再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈
我的切片，用手机照的。
染色分类
易于被碱性或酸性染料着色的性质称为 嗜碱性( basophilia ) 嗜酸性( acidophilia )； 中性（neutrophilia)：对碱性染料和酸性染料
亲和力都比较弱。
组织内的蛋白质构成蛋白质的氨基酸的种类很
多，它们有不同的等电点。在普通染色法中， 染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物 质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的
HE染色是什么？
HE染色是什么？
HE染色即苏木精－伊红染色法( hematoxylin-eosin staining )，是石蜡切片技术里常用的染色法之一。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
一张做工精良的HE切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。
H E染色是目前国内外病理诊断上广泛采用的常规染色方法。
切片质量的好坏，可直接影响疾病诊断的及时与准确性。
因此，能制作出一张高质量的HE染色切片，是必须掌握的技术之一。
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组织病理切片以及HE染色
（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin
staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可
用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可
较长时间保存，被称为常规染色方法。
（二）实验步骤：
一、制作切片
1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有
固定液的小瓶中保存。
2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋
组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成
蜡块，进行石蜡切片。脱水是指用某些溶媒置换组织内水分
的过程。组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能
溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组
织块。在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织
块变得透亮，因此称之为透明。组织染色后也要进行透明。
最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。
组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。用其
他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程
称为浸透或透入。为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3
小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。一般用于浸蜡的石蜡熔
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点为52-56℃。
组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳
蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。
这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄
片。石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。用于包
埋的石蜡熔点一般为60℃左右。但在有些情况下，如某些酶
染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。
3、切片、制片
石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片
机，以前者为多用。切片厚度一般为3-5μm。切片时先将组
织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织
片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。也可直接将组织切
片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附
于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。
二、HE染色
1. 二甲苯脱蜡2×10 min；
2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min；
3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直
接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；
4. 苏木素染色4 min，自来水洗2 min；
5. 1％盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min；
6. 1％稀氨水返蓝30s（镜下控制），自来水洗2分钟，蒸馏
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水洗1min；
7. 伊红染色90s；
8. 80％乙醇脱水10s，95％酒精10s，无水乙醇5min；
9. 无水乙醇10min；
10.二甲苯2×10 min；
11.中性树胶或加拿大树胶封片。
（三）实验结果：细胞核呈蓝色；细胞浆、肌肉、结缔
组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。钙盐和各种
微生物也可染成蓝色或紫蓝色。
（四）实验分析：HE染色时病理学中常用的一种诊断
方法，通常将病理切片染色后再在显微镜下观察组织的病理
学变化，从而做出病理学诊断。