荧光探针
pcr荧光探针法原理
pcr荧光探针法原理PCR荧光探针法原理。
PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种重要的分子生物学技术，它能够在体外迅速扩增DNA片段。
PCR荧光探针法是PCR技术的一种重要应用，它通过引入荧光探针来实现对PCR产物的实时检测，具有高灵敏度、高特异性和高准确性的优点。
本文将介绍PCR荧光探针法的原理及其应用。
PCR荧光探针法利用一种叫做荧光探针的分子来实现对PCR产物的实时检测。
荧光探针通常由一个荧光素和一个猝灭素组成，当它与靶标DNA序列结合时，荧光素和猝灭素之间的距离会发生改变，导致荧光信号的增强。
PCR荧光探针法主要包括两种类型，TaqMan探针和Molecular Beacon探针。
TaqMan探针是一种双链DNA分子，其中心有一个荧光素和一个猝灭素。
在PCR反应中，Taq DNA聚合酶在合成新DNA链时会遇到TaqMan探针，当Taq DNA聚合酶到达TaqMan探针时，会将其附近的DNA链降解，导致荧光素和猝灭素之间的距离发生改变，从而释放出荧光信号。
通过检测荧光信号的强度，可以实时监测PCR产物的数量。
Molecular Beacon探针是一种形似发夹的双链DNA分子，其中心有一个荧光素和一个猝灭素。
在PCR反应中，Molecular Beacon探针会与靶标DNA序列结合，形成一个环状结构，导致荧光素和猝灭素之间的距离发生改变，从而释放出荧光信号。
通过检测荧光信号的强度，同样可以实时监测PCR产物的数量。
PCR荧光探针法在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用。
在基因表达分析中，可以利用PCR荧光探针法实时监测目标基因的表达水平；在病原微生物检测中，可以利用PCR荧光探针法快速准确地检测病原微生物的存在；在药物研发中，可以利用PCR荧光探针法筛选药物的活性成分。
总之，PCR荧光探针法是一种重要的分子生物学技术，它通过引入荧光探针来实现对PCR产物的实时检测，具有高灵敏度、高特异性和高准确性的优点。
taqman荧光探针的原理
taqman荧光探针的原理TaqMan荧光探针是一种常用于实时荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）的探针。
其原理基于PCR扩增过程中的特定核酸序列的扩增和荧光信号的检测。
TaqMan荧光探针由三个部分组成：1. 引物（primers）：引物是设计用于扩增待测核酸序列的短小DNA 片段，通常有两个引物，一个用于扩增待测序列的起始位点，另一个用于扩增终止位点。
2. 探针（probe）：探针是一个含有荧光染料和一个对荧光染料发出信号具有抑制作用的化学修饰的短小DNA片段。
探针的序列与待测核酸序列的中间部分完全匹配。
3. Taq DNA聚合酶（Taq DNA polymerase）：Taq DNA聚合酶是一种热稳定的DNA聚合酶，能够在PCR反应中扩增DNA序列。
TaqMan荧光探针的工作原理如下：1. 引物与Taq DNA聚合酶一起作用，将待测核酸序列进行扩增。
引物会识别并结合到待测序列的起始位点和终止位点，Taq DNA聚合酶会沿着待测序列进行DNA合成，生成大量的扩增产物。
2. 在PCR反应中，TaqMan探针与待测序列中间部分的完全匹配，探针的5'端和3'端分别连接着两种不同的荧光染料（通常是荧光发射染料和荧光供体染料）。
3. 在PCR反应过程中，当Taq DNA聚合酶在扩增过程中到达探针的位置时，它会剪切探针，将发射染料和供体染料分离，导致荧光信号的释放。
4. 荧光信号可以通过实时荧光PCR仪器进行实时检测和记录。
荧光信号的强度与PCR反应中扩增产物的数量成正比，从而可以定量测量待测核酸的起始量。
TaqMan荧光探针的原理可实现高度特异性和灵敏度的实时定量PCR 分析，广泛应用于基因表达分析、病原体检测、基因突变分析等领域。
希望以上解释对您有所帮助。
如有任何进一步的问题，请随时提问。
sosg荧光探针使用说明书
sosg荧光探针使用说明书
sosg荧光探针是一种高度灵敏的生物分子探针，可用于定量分析和定位生物分子。
该荧光探针受体结构特异性强，对样品的检测灵敏度高，因此广泛应用于生物药物分析、环境监测、医药研发等领域。
一、适用范围
sosg荧光探针广泛适用于生物分子的检测和研究，包括但不限于以下领域：
1、生物药物分析
2、环境监测
3、医药研发
二、使用方法
1、实验准备：
准备所需样品和实验仪器，确保实验室环境清洁，避免环境对实验结果的影响。
2、探针使用：
将sosg荧光探针加入样品中，按照标准操作程序进行操作，运用实验仪器进行检测。
对于样品的检测，建议采用正交实验设计，以获得最优检测效果。
3、实验分析：
根据实验结果进行数据分析和处理，获得所需要的结论。
三、使用注意事项
1、操作中注意个人安全，避免荧光污染。
2、荧光探针存储温度为-20℃，避免阳光直射。
3、严格按照使用说明使用荧光探针，以获得最佳检测效果。
4、如有其他疑问或者操作上需要帮助，请联系专业人员。
总之，sosg荧光探针是一种高度灵敏的生物分子探针，适用范围广泛，使用方法简便，且对样品的检测灵敏度高。
在实验操作中需要注意个人安全，正确存储荧光探针，严格按照使用说明进行操作，以获得最佳检测效果。
纳米荧光探针的制备与应用方法详解
纳米荧光探针的制备与应用方法详解纳米荧光探针是一种利用纳米材料与荧光技术相结合的新型材料，具有高灵敏度、高选择性和高稳定性的特点，广泛应用于生物医学研究、环境监测、食品安全等领域。
本文将详细介绍纳米荧光探针的制备方法和应用方法。
一、纳米荧光探针的制备方法1. 化学合成法：化学合成法是制备纳米荧光探针最常用的方法之一。
它通常通过在纳米粒子的表面修饰上特定的荧光标记分子，例如荧光染料、量子点等，使纳米粒子获得特定的发光性能。
合成过程包括原料选择、反应条件优化、表面修饰和纳米材料的后处理等步骤。
2. 生物合成法：生物合成法是利用生物体（微生物、真菌等）的代谢活性合成纳米荧光探针。
通过选择合适的生物体和培养条件，调控生物体的生长过程，使其合成出具有荧光性能的纳米材料。
生物合成法具有绿色环保、低成本和易于控制等优点，因此在纳米荧光探针制备中得到了广泛应用。
3. 载体修饰法：载体修饰法是将已经合成的纳米材料与荧光标记分子进行配对，并在纳米材料表面进行修饰，以实现纳米荧光探针的制备。
这种方法能够充分利用已有的纳米材料，在保持纳米材料原有性能的同时，实现对荧光标记分子的控制，具有较高的灵活性和可操作性。
二、纳米荧光探针的应用方法1. 生物传感器：纳米荧光探针可以作为生物传感器用于检测和分析生物样品中的目标分子。
通过将纳米荧光探针与目标分子结合，利用探针的荧光性能变化来实现对目标分子的定量分析。
生物传感器广泛应用于医学诊断、环境监测和食品安全等领域，并展示出高灵敏度和高选择性的优势。
2. 细胞成像：纳米荧光探针具有较小的体积和较好的生物相容性，可以进入细胞内部并与目标分子结合，用于细胞成像。
通过控制纳米荧光探针的发光性能，可以实现对细胞生物学过程的实时监测和研究。
细胞成像技术在癌症治疗、药物研发和基因治疗等方面具有重要的应用价值。
3. 环境监测：纳米荧光探针可以用于环境监测领域，用于检测水体、土壤和大气等环境中的污染物。
近红外荧光探针原理
近红外荧光探针原理
近红外荧光探针是一种较为常见的类型，其作用原理是在特定波长激发下产生荧光信号，从而实现对目标分子的可视化。
近红外荧光探针常见的设计机理包括光致电子转移（PET）、激发态分子内质子转移（ESIPT）、荧光共振能量转移（FRET）、通过键能量转移（Tbet）、内部电荷转移（ICT）、扭曲分子内电荷转移（TICT）和聚集诱导发射（AIE）。
以PET为例，当探针在合适的波长上被激发时，占据最高分子轨道（HOMO）中的电子被转移到最低分子轨道（LUMO）。
由于受体基团的HOMO能级位于被激发荧光团的两个能级之间，荧光团中LUMO中的电子无法返回到原来的HOMO，导致荧光猝灭现象。
当受体基团与分析物形成络合物时，识别基团的HOMO能级低于荧光团的HOMO能级，从而抑制PET过程，荧光团的电子返回到HOMO水平，荧光被恢复。
常见的小分子荧光探针种类
常见的小分子荧光探针种类1.引言1.1 概述小分子荧光探针是一类被广泛应用于生物领域的化学工具，通过其具有的荧光性质，可以用于生物成像、药物传递、疾病诊断等方面。
小分子荧光探针具有分子结构简单、稳定性好、探测灵敏度高等特点，在生物学研究中起着重要的作用。
小分子荧光探针的种类繁多，根据其不同的结构和功能特点，可以分为许多不同的类别。
常见的小分子荧光探针包括有机荧光探针、金属配合物荧光探针、聚合物荧光探针等。
有机荧光探针是指由有机化合物构成的荧光探针，其分子结构多样，可以通过调整结构来实现特定的探测目标。
常见的有机荧光探针包括荧光染料、荧光蛋白等。
荧光染料具有较强的荧光强度和良好的化学稳定性，可以用于细胞成像、生物传感等领域。
荧光蛋白是一类来源于特定生物体的蛋白质，其具有自身天然的荧光性质，可以通过基因工程技术进行改造和调整，广泛应用于生物研究中。
金属配合物荧光探针是指由金属离子与配体形成的荧光探针，其具有较强的荧光性能和较长的寿命。
金属配合物荧光探针具有选择性较高的特点，可以用于特定金属离子的探测和诊断。
常见的金属配合物荧光探针包括铜离子、锌离子、铁离子等的配合物。
聚合物荧光探针是指由高分子聚合物构成的荧光探针，其具有较好的溶解性和稳定性。
聚合物荧光探针可以通过调整聚合物的结构和链长来实现特定的探测需求。
常见的聚合物荧光探针包括聚合物分子探针、聚合物纳米探针等。
总之，常见的小分子荧光探针种类繁多，具有不同的结构和功能特点，可以根据具体的研究需求选择适合的荧光探针进行应用。
这些小分子荧光探针为生物学研究提供了有力的工具，有助于深入理解生命的基本过程和疾病的发生机制。
未来，随着技术的不断发展和突破，相信小分子荧光探针在生物领域的应用会得到更广泛的推广和应用。
1.2文章结构1.2 文章结构本文主要围绕"常见的小分子荧光探针种类"展开讨论。
文章分为引言、正文和结论三个部分。
在引言部分，将进行概述、文章结构和目的的介绍。
荧光探针原理
荧光探针原理
荧光探针原理是一种常用的生物标记技术，用于研究生物样品中特定分子的分布和动态变化。
荧光探针通常由两个组成部分构成：一个是荧光染料，它能够吸收外界的激发光并发射出荧光信号；另一个是靶向分子，它能够与目标分子特异性结合。
荧光探针的工作基于荧光现象和能量转移原理。
当荧光染料被激发光激发后，其电子跃迁到高能级，随后又以放射光的形式返回到基态。
这个过程中放射的光具有特定的波长和颜色，称为荧光。
当荧光探针中的靶向分子与目标分子结合后，它们之间的距离和相对位置可能会发生变化。
如果这个变化导致荧光染料与另一个分子之间的距离适合，就会引发能量转移现象。
即原本由荧光染料发出的荧光信号将被转移给另一个分子，导致荧光染料的荧光强度减弱或熄灭。
通过测量荧光强度的变化，可以推断出目标分子的存在和活动状态。
荧光探针还可以通过调整荧光染料的性质，如吸收和发射波长，来实现多种目标的同时检测。
综上所述，荧光探针原理基于荧光现象和能量转移原理，利用荧光染料和靶向分子的相互作用实现对目标分子的检测和分析。
化学生物学荧光探针发光机理课件
H2O2的检测
中国科学: 化学 2012 年 第42卷 第12期 化学生物学 H2O2荧光探针发展及生物应用
H2O2的检测
Chem. Commun., 2003, 2728. 化学生物学 H2O2荧光探针发展及生物应用
H2O2的检测
Tetrahedron Letters 49 (2008) 3045–3048 Tetrahedron Letters 51 (2010) 1152–1154
细胞器靶向性的过氧化氢探针
SNAP-tag 来自烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移 酶(O6-alkylguanine-DNAalkyltransferase，hAGT)，该酶是一种 DNA修复蛋白，它的底物是一类苄基嘌呤 和嘧啶的衍生物，包括苄基鸟嘌呤
AGT
SNAP-tag
J. AM. CHEM. SOC. 9 VOL. 132, NO. 12, 2010 ACCOUNTS OF CHEMICAL RESEARCH ,793– 804 ,2011,Vol. 44, No. 9
化学生物学 H2O2荧光探针发展及生物应用
分子内电荷转移 ICT（ intramolecular charge transfer）
Tetrahedron ,69 ,2013, 1700 -1704
化学生物学 H2O2荧光探针发展及生物应用
荧光共振能量转移 FRET（ fluorescence resonace energy transfer ）
• （2）能量供体与能量受体相隔的距离必须远大于它们之 间的碰撞直径（有时甚至为70-100Å）；
• （3）能Ino量rg供. C体he与m.能20量13受, 5体2, 7还43必−须75以2 适当的方式排列。
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荧光探针(fluorescent probe)在化学传感、光学材料及生物检测和识别等领域得到了广泛的应用，并成为实现上述功能的一种主要的技术手段。
但以传统的有机荧光染料为主的荧光探针在应用中也存在一些难以克服的缺陷。
最近，无机发光量子点、荧光聚合物纳米微球、复合荧光二氧化硅纳米粒子等荧光纳米探针的相继出现，在一定程度上克服了传统有机荧光试剂的缺陷，为生物分析提供了新的发展领域，成为了近年来研究的热点，在此我想作一简单介绍，希望能起到抛砖引玉的作用，如果大家觉得我有什么地方说错的话，欢迎批评指正！让我也从中受益！1、荧光纳米粒子的分类荧光纳米粒子是指可以发荧光的半导体纳米微晶体（量子点）或将荧光团(Fluorophore)通过包埋、共价键连接以及超分子组装等方式引入有机或无机纳米粒子中，并让纳米粒子承担有机小分子荧光染料的检测、标记等功能。
与传统的荧光染料相比，荧光纳米粒子具有更高的亮度和光稳定性，也能更加容易地实现水分散性和生物相容性。
另外，随着纳米制备技术的进一步提高，对纳米粒子的尺度的精确控制及对粒子功能化手段的日臻完善，这在很大程度上使荧光纳米粒子满足了化学传感器、生物探针等领域的要求。
目前荧光纳米粒子主要有无机发光量子点、荧光高分子纳米微球、复合荧光二氧化硅纳米粒子三大类。
1.1.量子点量子点(quantum dot, QD)又可称为半导体纳米微晶体，是由数百到数千个原子组成的无机纳米粒子，是一种由II-VI 族或者III-V 族元素组成的纳米颗粒。
目前研究较多的主要是CdX(X = S、Se、Te)。
量子点粒径很小，它们的电子和空穴被量子限域，连续能带变成具有分子特性的分立能级结构，因此光学行为与一些大分子很相似，可以发射荧光。
量子点的体积大小严格控制着它的光谱特征。
量子点的晶体颗粒越小，比表面积越大，分布于表面的原子就越多，而表面的光激发的正电子或负电子受钝化表面的束缚作用就越大，其表面束缚能就越高，吸收的光能也越高，即存在量子尺寸效应，从而使其吸收带蓝移，荧光发射峰也相应蓝移。
可见，相对于其他传统的荧光染料而言，量子点由于其量子尺寸效应，粒径不同或组成材料不同即可发射不同颜色的荧光。
由于量子点潜在的应用前景，研究者在量子点的制备方面展开了一系列的研究。
目前，量子点的制备方法根据其所用材料的不同，有以下两种方法：一、在有机体系中采用胶体化学方法以金属有机化合物为前体制备量子点，二、在水溶液中直接合成。
在有机体系采用胶体化学方法制备量子点的研究中，Bawendi等将金属有机化合物注射入热的有机溶剂中，在高温下制备出具有单分散性的CdSe量子点。
后来，人们使用无机物来钝化颗粒表面，发展了核壳结构的量子点。
peng等人以CdO或Cd(Ac)2为原料，在一定条件下与S、Se、Te的储备液混合，一步合成了性能良好的CdS、CdSe、CdTe量子点。
Nie等以此法合成了CdSeTe量子点，其荧光发射最大的波长为850 nm，量子产率高达60%。
该法不但克服了先前合成方法中需要采用(CH3)2Cd作为原料的缺点，而且所合成的量子点荧光量子产率高、尺寸分布窄、波长覆盖范围广。
此外，Reiss等人在Peng的基础上以CdO为前体在HDA-TOPO混合体系中合成CdSe，然后以硬脂酸锌为锌源，在CdSe的表面包覆一层ZnSe，首次合成了CdSe/ZnSe核壳结构的量子点，荧光量子产率高达85%。
另外，也有研究者采用在水溶液中进行量子点的合成，Weller等人以六偏磷酸钠及巯基乙酸、巯基乙胺等巯基化合物为稳定剂，以Cd(ClO4)2•6H2O为镉源合成了水溶性的CdS、CdSe、CdTe量子点。
该法操作简单、可制备的量子点种类多、所用材料价格低、毒性小，且量子点表面修饰有可直接与生物分子偶连的羧基或氨基等官能团。
然而，采用在水溶液中合成量子点的方法存在着量子产率不高、尺寸分布较宽等缺点。
所以，目前人们仍较多的采用在有机体系中进行量子点的制备。
1.2. 高分子荧光纳米微球高分子荧光纳米微球开始是以聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯类、聚丙烯酰胺类为微粒主体，表面键合或吸附荧光素（Fluorescein，如FITC等）、罗丹明（Rhodamine，如Rhodamine 6G）、菁色素（Cy染料）等荧光物质的荧光纳米微球。
因为单个纳米粒子可以键合多个荧光分子，所以荧光强度有所增强。
但由于荧光分子没有被保护在高分子材料中，仍然受外界氧化或光漂白的影响，荧光的稳定性并没有提高。
近来，Kawaguchi等采用细乳液聚合的方法，开发出一种用聚苯乙烯内包铕与β-二酮类荧光配合物的高分子荧光纳米微球。
这种高分子材料的表面键合有羧基，可以标记具有氨基等活性基团的生物分子。
同样，采用细乳液聚合的方法还可以制备包埋其它染料的荧光高分子纳米微球，但是，由于该类高分子材料比重较小，在溶液中难以离心沉淀，分离非常困难，所以只能制备直径比较大的微粒，粒径一般在100 nm以上。
而这又造成纳米颗粒在水中易聚集，并且它在有机溶剂中高分子又极易溶胀从而导致微粒内的荧光分子发生泄漏。
1.3复合荧光二氧化硅纳米粒子复合荧光二氧化硅纳米粒子是由功能性的内核、可生物修饰的硅壳以及修饰在硅壳表面的生物分子构成，具有明显核壳结构的一类新型的纳米颗粒，其内核材料可以是有机荧光染料、稀土发光材料、量子点等。
由于该类型的纳米颗粒采用油包水(W/O)反相微乳液方法成核，通过硅烷化试剂在微乳液中水解形成三维网状结构的硅壳进行包壳，所以采用不同的硅烷化试剂可以制备出表面带有不同官能团的核壳型生物纳米颗粒。
通过对纳米颗粒的表面进行各种生物大分子的修饰，如：肽片断、抗体、生长因子等，可以实现对特异性细胞的识别、分离和检测。
于是，复合荧光二氧化硅纳米粒子由于其具有良好的分散性、温和的合成条件、可重复合成及细胞毒性小等优点已在生物学领域得到了广泛的应用。
目前，复合荧光二氧化硅纳米粒子在细胞水平上的研究主要集中在特定细胞的染色、识别和分离、细胞内pH 的检测及基因转染等方面。
目前，常用的复合荧光二氧化硅纳米粒子制备方法主要有反相微乳液法和改进的Stober 水解法。
反相微乳液法是近年来制备复合荧光二氧化硅纳米粒子的一种最为经典的方法。
在其制备机理研究方面，研究者们发现微乳颗粒不停地做布朗运动，不同颗粒的互相碰撞使微反应器内增溶的物质迅速交换、传递并发生化学反应如氧化-还原反应、沉淀反应和光引发反应等。
这种再交换需要胶团在相互碰撞时产生一个大的孔洞，使胶团的表面化学剂膜的曲率发生巨大变化，因此可以阻止已在反应器内生成的颗粒发生物质再交换。
微反应器内的粒子一经形成，表面活性剂分子就附着在粒子表面，使粒子稳定并防止其进一步长大。
由于微反应器的直径只有0～100 nm，不同微反应器内的晶核或粒子间的物质交换受阻，从而可以通过控制微反应器的大小来控制生成粒子的尺寸，最后形成大小可控的核壳纳米颗粒。
改进的Stober 水解方法也常用于制备硅壳荧光纳米颗粒。
Stober 水解方法指利用TEOS 的水解及缩合反应，形成SiO2 的方法。
早在1968 年就有采用Stober方法合成单分散二氧化硅颗粒，VanBlaadere等首次报道了采用Stober 方法合成大小在几百个纳米的有机荧光染料嵌入的硅壳荧光纳米颗粒。
Hooiswen等采用改进的Stober 水解方法制备了大小在20-30 nm 的硅壳荧光纳米颗粒，整个制备过程包括了两部分，一是首先将有机荧光染料共价修饰在硅的前体上，形成一个荧光染料富集的内核，二是将硅溶胶-凝胶单体加入到硅壳包被的荧光染料内核中，通过TEOS 的水解及缩合反应后的包壳。
通过该方法可以制备大小均匀的硅壳荧光纳米颗粒。
另外，他们采用这种方法也分别制备了覆盖了紫外到可见区的荧光染料为内核的复合荧光二氧化硅纳米粒子，包括Alexa350，N-(7-(dimethylamino)-4-methylcoumarin-3-yl)，Alexa 488，异硫氰酸荧光素, 四甲基异硫氰酸罗丹明，Alexa 555，Alexa 568，得克萨斯红，Alexa 680和Alexa 750 为内核材料的复合荧光二氧化硅纳米粒子。
2荧光纳米粒子在生命科学中应用2.1荧光纳米粒子直接用于生物检测荧光纳米粒子作为一种荧光探针已被广泛应用在生物标记及医疗诊断领域。
近年来国外已涌现出多家研制和开发荧光纳米粒子生物荧光标记的公司，如NanoTech-Ocean等，我国在这方面的研究正逐步展开，也出现开发纳米荧光探针相关产品的一些公司，如武汉的珈源公司就提供各种可用于生物的量子点探针。
基于目前国内外的研究现状，要实现荧光半导体纳米粒子在生物检测中的应用关键在于对荧光纳米粒子的表面结构和功能的准确控制，而且纳米粒子表面必需具有亲水性官能团。
为了使TOPO 法合成的油溶性量子点转移到水相，主要采用表面包覆和表面置换两种方法。
例如，在量子点表面包覆SiO2 壳层，Alivisatos 等利用巯基硅氧烷(MPS) 置换量子点表面的TOPO 分子，然后进一步将硅氧烷水解缩聚使微粒表面形成一种稳定的SiO2 壳层。
通过水解有机硅氧烷还可以形成具有胺基、脲丙基和羧基等活性官能团的SiO2 壳层。
自1998 年Alivisatos 和Nie 等提出用半导体纳米粒子作生物荧光标记的最初构想以来，基于荧光量子点的生物偶联得到蓬勃发展。
荧光量子点用于生物偶联主要依靠纳米粒子表面的活性基团如羧基、胺基、醇基和巯基等。
主要是利用纳米粒子表面活性基团与生物分子之间形成共价偶联、静电吸附、疏水作用和硅烷偶联等。
归纳起来，荧光纳米粒子与生物分子偶联主要有两种方法：一种是通过化学反应，即通过表面修饰有羧基或氨基的水溶性纳米晶与生物分子中的氨基或羧基形成酰氨键,实现偶联。
该方法通常用于较复杂的研究体系，如抗源-抗体之间的识别、活体标记及特异性标记等。
另一种是静电吸附方法，带电荷的纳米粒子可以与带相反电荷的生物分子通过静电相互作用吸附偶联，该方法适用于简单体系。
纳米粒子与抗体偶联后，利用抗源-抗体间的特异性识别，可以将不同荧光纳米粒子修饰在底物上，并对底物进行跟踪。
迄今为止，纳米粒子和生物分子的偶联物已经在DNA 杂化、免疫检测、受体诱导的细胞内吞作用和生物组织成像等方面得到应用，而且纳米粒子作为新一类的荧光标记材料已经逐步发展到活体细胞成像。
将纳米粒子直接用于生物检测主要优势是利用纳米粒子的高荧光稳定性，可以在几十分钟到数小时研究细胞的过程中进行实时跟踪检测；可以用多种颜色的纳米粒子同时对细胞内或细胞表面进行多个靶向目标研究；将纳米粒子表面包覆有惰性物质壳层，使纳米粒子对细胞的毒性低于有机染料带来的毒性。