鸡滑液囊支原体感染快速血清凝集试验(RSA)
鸡滑液囊支原体感染的诊疗
鸡滑液囊支原体感染的诊疗摘要：本病又称传染性滑膜炎，是由滑液囊支原体（ms）引起的鸡和火鸡的一种急性或慢性传染病。
感染后通常引起鸡的呼吸道病和滑膜炎。
该病以侵害关节滑膜、腱鞘膜为主的传染病。
本病的特征是跗关节肿大、趾关节肿大、翅膀关节肿大。
导致病鸡瘸腿而使死淘率增加，种鸡和蛋鸡感染导致产蛋下降，孵化率降低，并垂直传染给仔鸡，使仔鸡发病，肉仔鸡感染后，生长缓慢、饲料报酬下降，酮体等级降低。
2011-2012年，哈尔滨地区肉仔鸡发生多起本病，经过治疗，虽然病情得到了控制，但长期反复发作的过程中鸡群严重受损，死淘率为5%-10%左右。
若与其他鸡的传染性疾病（如葡萄球菌、大肠杆菌、病毒性关节炎）混合感染，死淘率会增加。
关键词：鸡滑液囊；支原体感染；诊疗1 流行特点本病主要发生于雏鸡，通常发生于4-12周龄的鸡，火鸡常见于10-12周龄发生。
特别是20日龄左右的肉雏鸡多发生本病，病鸡和带菌鸡是主要的传染源。
其持续排菌时间14-40天，本病既可经卵垂直感染，又可经呼吸道水平传播。
在同一鸡舍内，病原体很容易通过空气在鸡群中传播。
但在不同鸡舍间，不易传播。
还可通过衣物、车辆、用具、人员等机械性传播，成为远距离传播的重要途径。
滑液囊支原体病主要发生于寒冷、潮湿季节，垫料潮湿、环境卫生和饲养管理不当可促进本病的发生和传播。
2 临床症状传染性滑膜炎，最早见于6日龄的鸡。
接触感染的潜伏期为11-12天，大多数患鸡在发病初期突出的症状是表现跛行、喜欢卧地、不愿站立、食欲下降、体重减轻、多数病鸡鸡冠苍白、跗关节、趾关节、翅膀关节肿胀、在一侧或双侧有水泡样肿胀，触之有波动感、热感，呈淡紫色。
龙骨滑液囊有花生米粒大小或更大的囊肿，触之有波动感。
发病后期，肿胀部位变硬，关节屈曲不利。
3 病理变化大部分患病鸡剖检可见血液稀薄，跗关节、翅膀关节肿胀部位病变早期，剪开皮肤可发现滑液囊肿胀，靠近末端出有淡紫色水泡样肿胀，水泡内渗出液体白色或黄白色，清亮透明；病程较长的，呈黄色胶胨样或黄白色干酪样物，龙骨上的滑液囊到中后期呈黄白色胶胨样物的囊肿。
禽支原体病
TS2004-10美国安伟捷育种公司北京代表处顾敏清(编译)禽支原体病败血性支原体(MG)和滑液支原体(MS)是一种没有细胞壁的细菌，可以感染鸡和其它家禽, 在某些情况下引发疾病。
有些感染虽不表现临床症状但仍对生产造成影响，譬如：减少总产蛋/产雏数或降低肉鸡生产性能。
败血性支原体(MG)通常更易致病，因而比滑液支原体（MS）对生产造成的影响更大。
然而，不同的种类和分离株之间的特性差异很大，包括毒力与动力学血清学反应。
疾病的表现（和血清学反应）受其它许多因素如管理，环境和免疫力的影响而不同。
支原体导致的临床疾病通常是呼吸道疾病，单纯的感染大体上可见到气囊炎，（见图1）。
有时也会见到关节炎，气管炎，窦肿胀和结膜炎，（见图2）。
肉鸡感染MG和MS会增加屠宰次品率。
父母代种鸡产蛋期感染MG和MS会降低产蛋率，胚胎气囊炎及后期死胚增加（已啄壳的胚胎可看到气囊炎）。
在商品蛋鸡中，无临床症状下感染MG预计每只入舍母鸡可减少产蛋10-20枚。
图1. 经实验：同时感染MS和传染性支气管炎10天后的气囊炎在呼吸道病毒，灰尘，氨气和条件性致病菌（如大肠杆菌及类似细菌）的相互作用下，MG和MS 都能使呼吸道疾病恶化。
这样就导致慢性呼吸道病（CRD）的发生，死淘率有所提高，这通常称之为大肠杆菌性败血症。
良好的空气质量和足够的最小通风量具有保护作用。
（见图3）。
图2. 肉用父母代种鸡野外感染MS并发病毒性关节炎的情形。
MS的有些毒株更易引发腿病问题。
MG在许多国家是官方控制与监测的疾病，但MS 则常常由企业自主控制。
育种公司会控制MS，但这种控制会减少下一代次的产蛋性能。
在商品蛋鸡常常很难控制MS的感染，因为产蛋期间鸡群通常被置于多个年龄的鸡场中，也是其它鸡群转群后留下的感染源。
因为邻近的商品蛋鸡有可能就是一个巨大的感染源，所以肉用父母代种鸡群在控制MS的方式方法方面是一个重大问题。
自从发现MG在鸡群呼吸道病中的重要性后，家禽业想方设法来生产无MG感染的鸡群。
剖析滑液囊支原体
剖析滑液囊支原体鸡群感染滑液囊突出表现症状，传播途径以及感染后果。
提前做好滑液囊预防工作，一旦鸡群感染化进行及时有效药物进行控制病情，以免拖延造成严重后果损失惨重。
早期预防和治疗效果明显，感染时间长鸡影响卵巢和输卵管发育，导致生殖系统发育不完全，鸡寡产歇窝勤，只能淘鸡。
阳光禽业技术部，有着20多年养鸡经验，免费提供鸡只从一日龄到产蛋期给你提供专业养殖方案方法，提高蛋鸡生产性能，提高效益最大化，让您无后顾之忧。
滑液囊发病规律：1. 传染源（如鸡痘，新城疫，法氏囊）2. 霉菌表现在免疫抑制，消化系统，肝脏损伤，繁殖障碍。
3. 温差波动、密度、通风。
30-60日高发期 30日鸡群处于脱温与否状态，增长速度快，又处于换羽高峰期。
60日龄转群应激，温差波动大。
滑液囊传播途径：1、呼吸型（MG)呼吸道，慢呼吸支原体。
2、滑液囊型（MS)关节腔，龙骨，爪垫，鸡冠。
感染后鸡喜卧，缩头炸毛，慢瘦，不吃料，是慢性消瘦病，不会造成死亡。
如果不及时治疗或治疗不彻底将会影响卵巢和输卵管发育，导致生殖系统发育不完全，鸡寡产、歇窝勤。
所以定期净化支原体，降低MG和MS发病，预防混合感染引起的均匀度差，淘汰率高，提高产蛋数量。
阳光公司集团定制“支囊净”方案：有靶向定位因子，使药物在体内迅速蓄积，巨噬细胞和中性颗粒细胞内，是发病部位组织药物浓度高于其它部位达到最佳消杀效果。
而一般药物对关节腔穿透力不够，因关节腔和龙骨上没有血管分布，只是药物浓度在血液里达到一定峰值才能起到治病作用。
注意的是滑液囊为免疫抑制病，必引起新城疫抗体低下，因此病鸡出现缩头炸毛，精神萎靡，所以治疗时把新城疫问题一起解决。
鸡滑液囊支原体PCR检测方法的建立
鸡滑液囊支原体PCR检测方法的建立作者：陈文平李冬立康翠翠张妹程春格陈小娇由鹏王全武蔡晓庆来源：《家禽科学》2024年第06期摘要：目前鸡滑液囊支原体（MS）在养鸡生产中时有发生，是一种顽固性、条件性疾病。
在多种致病因素的作用易发，给养鸡生产造成了经济损失；为了快速诊断MS，特别是致病性鸡滑液囊支原体，本研究针对MS的VlhA基因设计特异性引物，通过优化反应条件，进行灵敏性试验、特异性试验和重复性试验，建立快速高效检测MS的PCR方法。
试验结果表明：该检测技术具有较好的灵敏性、特异性强且CV＜3%，具有很好的符合性。
关键词：鸡滑液囊支原体；PCR；检测中图分类号：S858.31 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2024）06-0027-05鸡的滑液囊支原体感染（Mycoplasama synoviae infection），又称滑液囊支原体病，是一种急性或慢性传染性疾病，可引起鸡和火鸡的传染性滑液囊炎、慢性呼吸系统疾病及鸡蛋尖端综合征[1]。
临床上主要表现为渗出性滑膜炎、腱鞘滑膜炎或粘液囊炎等，对鸡的生产性能造成了很大的影响。
近几年来，MS在各个地区都陆续出现，各个品种的鸡均有发病，特别是商品蛋鸡、商品肉鸡及一些地方品种鸡等，且各个日龄均可感染；大多数成年鸡呈隐形感染。
MS有垂直传播和水平传播2种传播方式，而呼吸道传播感染是该病的主要传播方式。
临床上主要表现为呼吸啰音、鸡冠苍白、食欲减退、生长缓慢；严重的可出现胸骨囊肿、脚垫及脚关节肿胀、跛行等。
临床剖检发现肝脏有尿酸盐沉积，脾脏、肾脏肿大等[2]。
剖检病鸡，主要病理变化为附关节、跗关节和脚垫肿胀，肿胀部位囤积大量黄色胶冻样粘液。
胸部发生囊肿，随着病程延长，胸骨关节被粘液或干酪样物质覆盖，爪垫内也存在脓性分泌物或干酪样渗出[3]。
病鸡的睫鞘滑膜层出现广泛、散在和局灶性的炎性浸润[4]。
部分鸡肝脾肿大、出现明显的纹路，肾脏肿大[5]。
鸡滑液囊支原体病的临床症状与防治
养殖与饲料2020年第05期鸡滑液囊支原体病的临床症状与防治王世有河南省南阳市卧龙区动物疫病预防控制中心，河南南阳473000摘要鸡滑液囊支原体病是由滑膜支原体感染引起一种急性或慢性呼吸道传染病，主要传染鸡和火鸡，临床症状为渗出性肌膊炎和粘液囊炎。
本病的预防措施为疫苗免疫和加强鸡场生物安全措施，病鸡可使用大环内酯类抗生素进行治疗。
关键词鸡；滑液囊支原体病；临床症状；防治方法收稿日期：2020-02-25王世有，男，1972年生，兽医师。
滑膜囊支原体主要引起鸡和火鸡急性到慢性感染，导致渗出性肌膊炎、粘液囊炎和亚临床性上呼吸道症状。
鸡滑液囊支原体病是近年来比较流行的一种禽病，一旦鸡或火鸡感染了此病就会长期带毒，危害较大，给养鸡业带来严重的经济损失[1]。
1病原学鸡的致病性支原体有数种，其中最重要的有鸡败血支原体、衣阿华支原体、火鸡支原体和滑液囊支原体。
其中，鸡滑液囊支原体在姬姆萨染色片中表现为多形态的球状体，直径0.2μm 。
鸡滑液囊支原体细胞呈圆形或梨形，内含颗粒性核糖体，直径为300~500nm ，无细胞壁，并被3层膜所包裹。
鸡滑液囊支原体能发酵葡萄糖及麦芽糖，产酸，不产气，不发酵乳糖、卫矛醇和杨苷，有些鸡滑液囊支原体分离株可凝集鸡或火鸡的红细胞。
病原菌在中性或酸性条件下不稳定，对高于39℃的温度敏感，但能耐受低温。
鸡滑液囊支原体在室温条件下，羽毛上的鸡滑液囊支原体至多可存活3d ，而在鸡鼻腔内至多可存活12h 。
2流行病学鸡滑液囊支原体病一年四季均可发生，但以春夏季、潮湿季节或饲养管理不当时多见。
常发生于4~12周龄的鸡，成年蛋鸡显示为慢性或隐性，潜伏期11~21d 。
在环境污染或鸡舍卫生条件差的情况下，其发病日龄会越早。
滑液囊支原体可蛋源传播，蛋传播一般在感染后4~6周最高，感染此病后终生排菌。
饲养早期传染率可高达30%~50%，但有些感染鸡群的蛋孵出的小鸡也可能不带菌。
自然和人工都可垂直传播，直接接触可以发生水平传播，鸡可终生感染。
鸡滑液囊支原体病诊治
Veterinary clinical science | 兽医临床科学124 ·2019.020 引言鸡滑液囊支原体的致病原是滑膜支原体，该种疾病属于典型的急慢性传染性疾病，不同年龄的鸡感染该种致病原后表现的临床症状存在很大差异性。
临床上支原体主要侵害鸡的关节滑液、建造膜和气囊，主要表现为关节、腱鞘和脚掌肿胀，气囊中存在干酪样物。
该种疾病的流行与传播具有一定的典型特点，主要危害3～7周龄的雏鸡，特别是对肉雏鸡造成的危害最为严重。
通常雏鸡表现的临床症状较为严重，致死率也最高，成年鸡感染该种疾病后不会表现出明显的临床症状，成为养殖场的主要传染源。
隐性带菌鸡的存在会导致健康鸡群反复感染该种疾病，影响鸡群的正常生长发育，降低养殖场的经济效益。
此外，该种疾病可以通过种蛋进行垂直传播，也可经呼吸道直接接触进行水平传播，一个鸡舍内出现了该种疾病，致病原会在较短时间内向整个集群传播蔓延。
1 发病经过2017年8月13日，当地一个肉鸡养殖场养殖的肉雏鸡中出现不能正常行走、瘫痪、跗关节和脚垫肿胀的患病鸡。
整个发病过程较为缓慢，初期并没有引起养殖户的重视，只有个别患病鸡出现关节肿大、精神不佳的情况。
随着病程进一步传播蔓延，发病鸡的数量进一步增加，养殖户看到病情严重后，才将患病鸡单独隔离养殖，然后使用鱼肝油加土霉素联合治疗，连续治疗1周后，病情没有得到好转，养殖场的发病率显著升高，并出现了死亡现象，死亡鸡的数量逐日增加。
随即养殖户才将病情上报。
通过对该养殖场进行全面检查，发现鸡舍内的饲养密度较大，整体卫生环境不佳，由于是夏秋季节，气候炎热，潮湿不堪，通风不良，大量粪便堆积，产生了很多有毒有害气体，用手触摸患病鸡的体表，有大量水分存在。
结合养殖场患病鸡典型的关节病变，兽医怀疑是鸡滑液囊支原体病，采集病料进行实验室诊断，明确病原后，制定针对性的控制措施，在较短时间内将病情控制，避免养殖场损失进一步加大。
2 临床症状鸡舍内湿度偏大，通风严重不良，有毒有害气体积累。
鸡滑液囊支原体感染鸡滑囊炎最佳治疗方法
鸡滑液囊支原体感染鸡滑囊炎最佳治疗方法近几年来滑液囊支原体病的发病率较高，发病区域广泛，一旦发病往往得不到及时有效准确的治疗，给养殖户造成较大的损失。
现把该病的流行特点和防治措施分享一下，望引起大家重视。
鸡滑液囊炎是由滑液囊支原体引起的一种鸡和火鸡的传染病，以渗出性关节滑膜炎，腱鞘滑膜炎和滑液囊炎为特征。
流行特点：1本病主要发于4到12周龄之间，蛋鸡产蛋期也有可能感染发病。
在一个区域发生时有一定的品种特异性，只针对该区域某个品种集中发病。
无季节性，一年四季都可发生，发病率高，死亡率低，成年鸡可成慢性经过。
2本病发展缓慢，病程长，一旦鸡群感染彻底根除困难，造成生长迟缓，消瘦，体质差容易造成混感病情，成年鸡产蛋量下降，产破壳单，软壳蛋，带来很大的经济损失。
3本病主要通过垂直传播，也可水平传播，新城疫和传支病毒（包括疫苗毒株）感染是本病最大诱因。
发病的鸡群可以通过分泌物，空气，羽毛，饮水，交配等感染健康鸡群。
4本病易复发，环境密度过大，鸡舍寒冷闷热，潮湿，通风不良，氨气过大，不同批次鸡群混养，免疫应激都可以导致本病重复发生。
症状和病变：流行特点1、典型发病的症状一般都是首先表现急性然后转化为慢性，症状表现为病鸡瘫软，双腿不能站立，卧地，进而消瘦生长迟缓，关节脚趾红肿，肿胀有波动感，胸部囊肿，胸骨弯曲变形，触摸肿胀处有疼痛感。
蛋鸡产蛋率下降或者无明显高峰期，蛋质差，软壳蛋增多，鸡冠发白。
2、剖检病变发生于肘关节指关节，滑液囊排肠肌腱鞘部分。
关节腔有糊状粘液，脓性分泌物或者黄色干酪物，滑液囊有粘稠黄色分泌物，胸囊内有黄色干酪物。
3、接触感染潜伏期10—15天，长时可达两个月。
垂直传播潜伏期短，可在育雏的20到50天内发病，这段时间发病症状往往不明显，表现为个别鸡站立不稳，关节轻微肿胀，肝脾肿大，粪便拉白色和绿色稀粪。
这个阶段不发现治疗的话对后期鸡群危害较大。
4、还有一种发病呈呼吸道症状，咳嗽，甩鼻，流鼻涕，呼吸道症状常常是环境应激和免疫应激后出现，常呈现一过性或者少数不能正常吃食和饮水的鸡群脱水和消瘦死亡。
肉鸡滑液囊支原体病的诊治报告
养殖与饲料2021年第09期疾病防控肉鸡滑液囊支原体病的诊治报告雷莉辉张浩曹金元北京农业职业学院，北京102442摘要鸡滑液囊支原体病是由于鸡感染滑液囊支原体（MS）而发生的传染性疾病，此病主要是通过人工授精或种蛋进行垂直传播，同时也可以经呼吸道或传播媒介进行水平传播。
感染严重的种鸡群发病率可达100%，群内病死率可达30%。
目前临床上治疗效果较好的药物是泰乐菌素、泰妙菌素、沃尼奥林等，此病可通过采取低剂量金霉素持续饮水、疫苗接种和加强饲养管理等措施来预防。
关键词肉鸡；滑液囊支原体；防治；诊断滑液囊支原体病，又称滑膜炎，是由鸡滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae，MS）引起的一种传染病。
滑液囊支原体病的主要特征为鸡关节、腱鞘和爪垫肿胀，病鸡常见胸部囊肿、气囊有干酪物，其他脏器无明显病变。
近年来，该病对养鸡业的危害越发严重，给养鸡场带来严重的经济损失。
1发病经过2020年4月，北京市房山区某肉鸡养殖户，11周龄肉母鸡存栏800只，肉公鸡存栏200只。
从2020年4月16日起，该养殖户陆续发现鸡群中有100余只鸡出现精神不振、缩脖呆立、久卧不起、关节和爪垫肿胀等症状，虽然将这部分病鸡及时进行了隔离，并用氟苯尼考与强力霉素拌料治疗连续5d后，病情并未得到抑制。
截至2020年5月8日，仍有20余只又先后出现类似症状，且最初发病的肉鸡中有40余只出现瘫卧而无法站立等现象，有12只肉鸡死亡[1]。
2临床诊断2.1临床检查在隔离病鸡群中肉鸡主要表现为精神不振、羽毛松乱、缩脖呆立、站立不稳而喜卧、消瘦、鸡冠苍白，且采食量明显下降；病程略长的鸡发育不良；病情较重的鸡跗关节和跖关节有明显的肿胀，站立和行走时以跗关节着地，跛行呈“八”字状，行走困难甚至久卧不起，胸骨有囊肿，囊肿部位的皮肤呈现紫红色。
2.2剖检变化对病鸡剖检可见典型的病变有：跗关节肿胀，触诊有明显热感，大部分病鸡的跗关节和跖底肿胀部位切开后可见黄色或灰色黏性渗出物，病情严重的呈干酪状；病鸡翅关节肿胀、积液呈索状，切开翅关节，内有脓性分泌物，个别鸡翅关节剖开呈干酪样；病鸡胸肌和腿肌有出血斑和瘀血；肝与脾略有肿大、颜色发暗、质硬，肌胃内有绿色黏液状内容物，胆囊充盈胀满。
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附 录 A
（规范性附录）
鸡滑液囊支原体感染快速血清凝集试验(RSA)
A.1 样品采集、保存与处理
从鸡群采集的血清样品，如不能立即进行试验，应 4℃保存，保存期不超过 72 h，不能冻结。鸡
血清在 56℃水浴 30 min 后进行检测。
A.2 试剂
试验用染色抗原、阳性及阴性对照血清。
A.3 操作方法
室温中加一滴(20 uL)血清于白瓷板或玻板上，再加等量染色抗原，用加样枪头将其混合，轻轻摇
动使之充分反应。室温条件下，鸡血清 2 min内，火鸡血清 3 min 内判定结果。
试验设阳性血清及阴性血清对照。
A.4 结果判定
A.4.1 规定时间内，发生完全凝集的，判为阳性。
A.4.2 如仅在液滴边缘部分出现凝集，或超过 2 min(火鸡 3 min)在边缘出现凝集，判为可疑。
A.4.3 超过规定时间无凝集者，判为阴性。
A.4.4 对判为可疑样品进行重试，如结果符合 C.4.1 判为阳性，如符合 C.4.3 判为阴性，如仍符合
C.4.2，应选其他方法进行重试。
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附 录 B
（规范性附录）
鸡滑液囊支原体感染血凝抑制试验（HI）检查
B.1 血凝试验（HA）测定 MS 抗原血凝价
B.1.1 试验在 96 孔“V”型微量反应板上进行。
B.1.2 试验使用的MS标准抗原和标准阳性对照分装后于 －20℃保存。
B.1.3 试验使用的红细胞为新鲜的 0.8％鸡红细胞悬液。
B.1.4 常规倍比稀释法测定 MS 抗原的血凝价。以 100％凝集（红细胞呈颗粒性伞状凝集于孔底）的
MS 抗原最大稀释孔为该 MS 抗原血凝价，即 1 个血凝单位。
B.2 血凝抑制试验（HI）测定 MG 抗体血凝抑制价
B.2.1 试验在 96 孔“V”型微量反应板上进行。
B.2.2 试验使用的 MS 抗原分别含有 4 个血凝单位。
B.2.3 试验使用的红细胞为新鲜的 0.8％鸡红细胞悬液。
B.2.4 去除待检血清中非特异性血凝因子：按照 1 mL 稀释待检血清（1：5）加 6～8 滴洗涤的鸡红
细胞比例，37℃作用 10 min 后，除去红细胞，取上清液进行检测。
B.3 试验程序
B.3.1 于第 1 孔中加入 PBS 50μL，再取 4 个血凝单位 MG 抗原依次加入 3～8 孔，每孔 50μL，
第 2 孔加含有 8个血凝单位的 MS 抗原 50μL。
B.3.2 吸 1：5 稀释的待检血清 50μL 于第 1 孔中，混匀后吸 50μL 于第 2 孔中，依次倍比稀释
至第 8 孔，最后弃去 50μL。
B.3.3 置振荡器上振荡 1 min。
B.3.4 放室温下（18～20℃）作用 20 min。
B.3.5 滴加 50μL 0.5％鸡红细胞悬液于各孔中，振荡混合后，室温下静置 30～40 min，判定结果。
B.4 结果判定
B.4.1 以 100％抑制红细胞凝集的待检血清最大稀释度为该血清 MS 抗体血凝抑制价。
B.4.2 血凝抑制价≥1：80 以上判为 MS 抗体阳性，1：40≤血凝抑制价＜1：80 时为结果可疑，21
天后再采血检测。
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7
附 录 C
（规范性附录）
鸡滑液囊支原体感染酶联免疫吸附试验（ELISA）检查
C.1 材料和试剂
C.1.1 主要仪器
含 490 nm 波长酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
C.1.2 主要试剂
C.1.2.1 ELISA 抗原
支原体培养：鸡滑液囊支原体标准株接种支原体液体培养基，36℃摇动培养 2～3 d，已明显混浊
的培养液按 8000 r/min 离心 20 min，沉淀用 PBS 在相同条件下洗 3 次。
上述沉淀用 PBS 悬浮，超声波打碎后上清即为 ELISA 抗原。
C.1.2.2 酶结合物
辣根过氧化物酶标记羊或兔抗鸡 IgG 抗体。
C.1.2.3 阳性血清
MS抗原免疫 SPF 级鸡只 3 次获得的抗血清。
C.1.2.4 阴性血清
无 MS 感染的 SPF 级鸡只血清。
C.1.2.5 试剂溶液的配制
C.1.2.5.1 包被液(0.05 mol/L pH 9.6)
称取碳酸钠 1.59 g 和碳酸氢钠 2.93 g 溶于蒸馏水中并定容至 1000 mL。
C.1.2.5.2 洗涤液
取入 Tween-20 0.5 mL 加入到 1000 mL PBS(0.01 mol/L pH 7.4 )中，充分混匀。
C.1.2.5.3 稀释液
含 10％小牛血清的洗涤液。
C.1.2.5.4 磷酸盐一柠檬酸缓冲液(pH 5.0)
称取柠檬酸 3.26 g 和磷酸氢二钠(Na
2HPO,·12H2
0) 12.9 g 溶于蒸馏水，并定容至 700 mL。
C.1.2.5.5 底物溶液
取邻苯二胺(OPD) 4 mg 和 30％过氧化氢 2 uL 加入 10 mL 磷酸盐一柠檬酸缓冲液中溶解混匀。
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C.1.2.5.6 终止液(2 mol/L 硫酸)
硫酸 58 mL 加入到 442 mL 蒸馏水中混匀。
C.2 酶联免疫吸附试验(ELISA)操作步骤
C.2.1 包被抗原
将最适工作浓度的抗原用包被液稀释。每孔 100μL，置 37℃ 1 h 后再 4℃过夜。用洗涤液洗5
次，每次 3 min，拍干。
C.2.2 加样
待检血清和阴性、阳性血清分别用稀释液做 1:40 稀释，每孔加入 100μL，37℃孵育 1 h ，洗涤
同上。
C.2.3 加酶结合物
用稀释液将酶结合物稀释至适当浓度，每孔加入 100μL，37℃孵育 1 h ，洗涤同上。
C.2.4 加底物溶液
每孔加入新配制的底物溶液 100μL，置 37℃避光显色 10～15 min。
C.2.5 终止反应
每孔加入终止液 50μL。
C.2.6 测 A 值
在酶标仪上，于 490 nm下测量和记录吸光值 A（490）。
C.3 结果判定
C.3.1 在阴性和阳性血清对照成立的条件下，进行结果判定。
C.3.2 同时符合下列 2 个条件者，判为阳性。
a)
待检血清的A值≧0.2；
b)
待检血清的A值/阴性对照血清的A值≧2.10。
C.3.3 均不符合上述 2 个条件者，判为阴性。
C.3.4 仅有 1 条符合者，判为可疑，需重试。
C.3.5 对判为可疑样品进行重试，如结果符合 C.3.2 判为阳性，如符合 C.3.3 判为阴性，如仍符合
C.3.4，应选其他方法进行重试。
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