SCSP-402SD大鼠骨髓间充质干细胞说明书
间充质干细胞
间充质干细胞及来源间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cell，MSC）是干细胞的一种，因能分化为间质组织而得名，具有亚全能分化潜能，在特定的体内外环境下，能够诱导分化成为多种组织细胞。
间充质干细胞具有干细胞的共性，即自我更新、多向分化和归巢的能力。
间充质干细胞具有向多种类型细胞分化的能力，可以分化为神经、心脏、肝脏、骨、软骨、肌腱、脂肪、上皮等多种细胞。
这种多向分化的能力给人类多种疾病的治疗提供了重要的原材料。
间充质干细胞来源：间充质干细胞广泛分布于胎儿和成体的骨髓、骨膜、松骨质、脂肪、滑膜、骨骼肌、胎肝、乳牙、脐带、脐带血中，其中脐带来源的间充质干细胞质量高、纯净、数量多。
间充质干细胞生物学特性间充质干细胞具有以下特性：1）具有强大的增殖能力和多向分化潜能，在适宜的体内或体外环境下不仅可分化为造血细胞，还具有分化为肌细胞、肝细胞、成骨细胞、软骨细胞、基质细胞等多种细胞的能力。
2）具有免疫调节功能，通过细胞间的相互作用及产生细胞因子抑制T细胞的增殖及其免疫反应，从而发挥免疫重建的功能。
3）具有来源方便，易于分离、培养、扩增和纯化，多次传代扩增后仍具有干细胞特性，不存在免疫排斥的特性。
正是由于间充质干细胞所具备的这些免疫学特性，使其在自身免疫性疾病以及各种替代治疗等方面具有广阔的临床应用前景。
通过自体移植可以重建组织器官的结构和功能，并且可避免免疫排斥反应。
间充质干细胞的临床应用1.间充质干细胞在细胞替代治疗中的前景以组织工程学为手段可望解决的问题几乎涉及人类面临的大多数医学难属，如烧伤、放射损伤等患者的植皮；肌肉、骨及软骨缺损的修补；髋、膝等关节的替换；血管疾病或损伤后的血管替代；糖尿病患者的胰岛植入；心脏病患者的瓣膜替代、房室间隔缺损的修补；癌症患者手术切除后组织或器官的替代；放射损伤及大剂量放疗、化疗后的造血与免疫重建；肝、肾等重要脏器因损伤或功能衰竭的置换；部分遗传缺陷性疾病的治疗等。
间充质干细胞流式标记国际标准
间充质干细胞流式标记国际标准大家好，今天我们来聊聊一个有点儿高大上的话题——间充质干细胞（MSC）流式标记的国际标准。
别担心，我会把这个话题讲得轻松点，让大家听得懂，笑得出来。
毕竟，说到这些医学术语，咱们也得学会用“接地气”的方式来解读，不然一堆专业术语不就是让人头大吗？好啦，话不多说，我们直接开始吧！1. 什么是间充质干细胞？首先，间充质干细胞是什么鬼？简单来说，这是一种超级牛的细胞，能够在咱们身体里变成各种不同的细胞，比如骨细胞、脂肪细胞这些。
就像是细胞界的“全能选手”，它们能干很多事儿，真是了不起。
不过，要想知道这些细胞的状态，得有点儿手段，比如流式细胞术这种神器。
1.1 流式细胞术：细胞的“快递员”流式细胞术，就是用来研究细胞的一种方法。
想象一下，这就像是给细胞穿上了特殊的衣服，然后用一种特别的“扫描仪”来检查它们。
这种技术可以告诉我们每个细胞长啥样、有什么特点，就像是给细胞做体检一样。
通过这玩意儿，我们能更好地了解间充质干细胞的状态。
1.2 为啥要国际标准？既然咱们已经知道流式细胞术的“神奇”，那为啥还要有国际标准呢？想象一下，如果没有标准，大家的细胞检测结果就像是各自家里的“私房菜”，没有一致的口味，根本没法比较对比。
这就像是你做的糖醋里脊和别人做的糖醋里脊可能完全不同，大家都不知道哪个更好。
国际标准的出现就是为了统一口径，确保大家的“糖醋里脊”都是一样的，好让大家可以比一比，挑一挑。
2. 国际标准的核心要点好了，知道了国际标准的必要性，接下来我们得看看这些标准的“干货”。
这些标准就像是一本使用手册，教你怎么用流式细胞术去“审查”间充质干细胞。
具体来说，标准里有几个核心要点，不妨来瞧瞧。
2.1 标记的一致性首先，标准要求所有的间充质干细胞都得有统一的“标记”。
这就像是给每个细胞贴上统一的标签，确保大家在同一个“游戏规则”下工作。
这样一来，不同实验室之间的结果才不会像八点档电视剧一样，各种情节都不一样。
间充质干细胞流式标记国际标准
间充质干细胞流式标记国际标准1. 什么是间充质干细胞？好啦，咱们今天聊点儿科学话题，但咱们不搞得像一场艰涩的讲座。
先从间充质干细胞说起。
这些小家伙们在咱们的身体里可是很有地位的，像是一支万能的维修队，随时待命修复各种组织。
间充质干细胞，简称MSC，就像是身体里的小工匠，干什么都能行——从修补骨头到抚平肌肉小伤，都能一手包办。
这些干细胞在研究上也很有“身价”，因为它们的万能性让科学家们看到了很多可能性。
就像一个百宝箱，里面的东西你可能永远也用不完。
是不是觉得很神奇？其实，它们就像身体里的超级英雄，平时安静地待在角落里，但一旦需要，它们马上就能派上用场。
2. 流式细胞术的魔法2.1 流式细胞术是什么？要想搞清楚流式细胞术，你得知道它就像一个超级智能的筛选器，可以把成千上万的细胞按类型和状态给分类得明明白白。
这个过程听起来像是科学家在玩魔术一样，把一大堆细胞丢进机器里，然后拿出来就变成了有用的信息。
具体怎么操作呢？其实就像一个细胞的大排档，机器把细胞一个个“抓”出来，然后用激光照射，测量每个细胞的“体质”——比如它是胖是瘦，或者是年轻还是老迈。
这样一来，科学家们就能对这些细胞有个清晰的了解了。
流式细胞术真是个能让细胞“脱胎换骨”的神奇工具。
2.2 为什么要用流式细胞术来标记间充质干细胞？那么，流式细胞术和间充质干细胞有什么关系呢？这就像是用显微镜来观察宝石的瑕疵一样，流式细胞术能帮我们精准地分辨这些小干细胞的种类和数量。
间充质干细胞虽然万能，但它们的各种功能和状态是非常复杂的。
用流式细胞术标记这些细胞，就像是给每个细胞贴上了独特的身份证，科学家们就能知道这些细胞的“背景”如何。
说到这儿，你可能会想，这标记工作是不是很复杂？的确，流式细胞术的确需要一些国际标准来确保结果的准确性。
这就像是修车需要一套完整的工具和标准流程，才能把车修得又快又好。
科学家们也得依靠这些国际标准，才能保证他们的细胞数据是可靠的，不然就像是做菜没盐，效果肯定不如人意。
间充质干细胞成脂成骨分化实验方法学开发思路和流程
间充质干细胞成脂成骨分化实验方法学开发思路和流程干细胞是一种具有自我更新能力和多潜能分化的细胞，可以分化成为各种类型的细胞，包括脂肪细胞和骨细胞。
间充质干细胞（MSCs）是一种重要的干细胞类型，它们存在于各种组织中，如骨髓、脂肪组织和胎盘组织等。
间充质干细胞成脂成骨分化的实验方法学开发，是生物医学研究中一个重要的课题。
本文将从方法学开发的思路和流程入手，对间充质干细胞成脂成骨分化实验方法学进行探讨。
一、研究背景间充质干细胞成脂成骨分化是指间充质干细胞在一定的诱导条件下分化为脂肪细胞或骨细胞的过程，这一过程在细胞生物学和再生医学领域具有重要意义。
成脂成骨分化的研究有助于深入了解骨质疏松症、骨折愈合和脂肪代谢等疾病的发病机制，同时也为干细胞治疗提供了理论基础。
因此，开发一套可靠的实验方法学对于间充质干细胞成脂成骨分化研究至关重要。
1.确定分化诱导条件间充质干细胞在体外培养时，可通过添加不同的生长因子、细胞因子或药物来诱导其分化为脂肪细胞或骨细胞。
因此，确定最佳的分化诱导条件是方法学开发的第一步。
此过程需要考虑到诱导因子的种类、浓度、培养时间等因素，以及不同来源的间充质干细胞在分化过程中的差异性。
2.确定评价指标分化过程中，需要通过一系列的生物化学和分子生物学方法来评价间充质干细胞的脂肪细胞或骨细胞特征。
这些评价指标包括脂肪细胞的油红O染色、脂肪球形成实验，以及骨细胞的矿化实验、ALP染色等。
确定合适的评价指标对于评估分化效果至关重要。
3.确定实验方案在确定了分化诱导条件和评价指标后，需要制定详细的实验方案。
包括细胞的处理方法、诱导条件的优化、实验的时间节点等，以便后续实验的顺利进行。
1.间充质干细胞的提取和培养首先需要从适当的组织中分离和提取间充质干细胞，并进行细胞培养。
这一步需要注意细胞的纯度和活性，以保证后续实验的准确性。
2.分化诱导实验将培养好的间充质干细胞分别进行脂肪和骨分化诱导实验，根据预先确定的诱导条件进行处理。
骨髓间充质干细胞膜片的设备制作方法及其应用与设计方案
本技术公开了骨髓间充质干细胞膜片的制备方法及其在治疗心肌缺血再灌注损伤上的应用。
利用密度梯度离心、细胞贴壁和细胞冻存的方法提取扩增细胞，可以获得足够量的未分化的较为单一的MSCs，增殖能力较强，纯度高，可以作为组织工程的种子细胞，为组织工程血管的构建提供依据。
而且较Reyes方法去除了免疫磁珠选择的步骤，在实际应用中减少了昂贵的费用，操作中减少了污染的机会。
权利要求书1.骨髓间充质干细胞膜片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：用20ml注射器吸取10ml骨髓液，将细胞悬液贴壁缓慢注入到预置有等体积密度为1.077kg/L的人淋巴细胞分离液的试管内，使两者间形成清晰的界面；S2：以2500r/min离心20min，吸取中间的乳白色云雾状单核细胞层，PBS漂洗，1500r/min离心10min，弃上清，加入含15％FBSDMEM-LG培养液10ml，制成单细胞悬液；S3：以3×105/cm2密度接种于50ml培养皿内，置入37℃、5％CO2饱和湿度条件下培养，4d后首次半量换液，将未贴壁的细胞全部弃掉，以后每2～3d全量换液一次；S4：待细胞汇合成单层后，以0.25％胰蛋白酶(含0.02％EDTA)消化，即得到原代MSCs悬液，再以1×104/cm2的密度以1：2传代培养以形成细胞膜片；S5：倒置显微镜观察细胞生长；S6：绘制细胞生长曲线；S7：测定贴壁率并绘制贴壁率曲线。
2.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞膜片的制备方法，其特征在于，在所述的S1中，注射器内含稀释的肝素钠2500U/ml约0.5ml。
3.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞膜片的制备方法，其特征在于，在所述的S1中，骨髓液的吸取方法为选髂后上棘穿刺点，无菌条件下局部麻醉后骨髓穿刺针穿刺成功后拔出针芯，接含有5ml生理盐水和肝素(100U/ml)的10ml注射器穿刺抽取骨髓10ml。
4.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞膜片的制备方法，其特征在于，在所述的S2中，用于离心的离心机为台式高速离心机。
大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的分离、鉴定与培养
大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）的分离与鉴定大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）的分离与鉴定材料试剂(一)主要设备和产地1.手术器械上海手术器械厂2.台式水平离心机Eppendorf，5810R德国3.Nanopure超纯水仪日本SANYO公司4.AA一200型电子天平美国Denver Instrumol/Lent公司5.低温高速离心机ThermoForma公司6.90一2型磁力搅拌器上海沪西分析仪器厂7.电动匀速垂直转轮上海沪西分析仪器厂8.微量移液枪德国Eppendorf公司9.烧杯、容量瓶上海实生公司10.全自动酶标光度仪美国Bio-Rad公司11.6cm/10cm细胞培养皿美国Conring12.2mL冻存管、细胞冷冻储存器美国Conring13.低温高速离心机ThermoForma公司产品14.YJ-875超净工作台苏州工业园区三兴净化科技有限公司15.C02培养箱3111型美国Thermo Forma公司16.CK40-F200型倒置显微镜日本Olympus公司17.10ml注射器美国BD公司(二)试剂和材料1.谷氨酰胺(L-Glutamine)美国Hyclone公司2.75%消毒酒精上海生工3.肝素美国sigma公司4.胰蛋白酶美国Amresco公司5.胎牛血清美国Gibco公司6.α-MEM培养液美国Hyclone公司7.5-6周龄SD大鼠上海斯莱克实验动物有限公司8.Percoll细胞分离液美国GE公司9.DMSO(细胞培养级)美国Sigma公司Rat BMSC的分离与培养分离颈椎脱臼法处死大鼠，75%酒精中浸泡5分钟，超级工作台内依次取下大鼠两条胫骨及两条股骨。
用手术器械将长骨上附着的肌肉组织尽量去除干净，整个过程保持无菌。
用剪刀剪去长骨两端，10ml注射器吸取加入肝素的完全培养液（10%FBSα-MEM），从长骨一端开口处注入，将骨髓腔内的细胞出入到50ml离心管内，直至长骨冲洗的发白，认为骨髓腔内的细胞都被吹入离心管内。
大鼠骨髓间充质干细胞分离鉴定方法及生物学特性
大鼠骨髓间充质干细胞分离鉴定方法及生物学特性曹华;高建华;刘小龙;林思思【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2017(021)009【摘要】背景：如何能简便高效地获得均质性的骨髓间充质干细胞群是软骨组织工程研究的重点。
目的：分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,观察其生物学特性。
方法：抽取30只SD大鼠股骨以及胫骨骨髓,采用全骨髓贴壁培养法体外分离培养骨髓间充质干细胞,流式细胞仪测定细胞表面标记物的表达,细胞计数法观察细胞生长增殖能力,MTT法检测细胞存活率。
结果与结论：（1）刚分离培养的细胞呈圆形、椭圆形,部分细胞呈三角形,接种12-15 d后,细胞开始融合,传代后细胞增殖速度加快,传代2 h后细胞均匀分布在瓶底;（2）随着传代次数的增加,细胞增殖能力出现下降趋势,第1-5代细胞存活率均超过95%,显著高于第6代和第7代（P〈0.05）;（3）骨髓间充质干细胞表面CD34呈阴性表达,CD44呈阳性表达;（4）结果表明,采用全骨髓贴壁法可有效分离大鼠骨髓间充质干细胞,获得的细胞生长稳定,增殖能力强,可选用前5代细胞作为软骨组织工程的种子细胞。
【总页数】5页(P1357-1361)【作者】曹华;高建华;刘小龙;林思思【作者单位】[1]江西医学高等专科学校,江西省上饶市334000;[2]南昌大学医学部,江西省南昌市330006【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.骨髓间充质干细胞分离鉴定及在糖尿病大鼠肾脏保护中的机制研究 [J], 康岩;李志杰;王丽娜;郭玉卿;刘璠;张洁2.大鼠骨髓间充质干细胞的分离鉴定及免疫调节性能初探 [J], 张志强;刘义;李克秋;李光3.大鼠骨髓间充质干细胞分离鉴定方法及生物学特性 [J], 曹华;高建华;刘小龙;林思思4.大鼠骨髓间充质干细胞的分离鉴定及其在胶质瘤治疗中的作用 [J], 刘辉;张鹏幸;范菲艳;刘楠;任东妮;张永生;涂艳阳5.不同分离及培养方法对大鼠骨髓间充质干细胞生长增殖和生物学特性的影响 [J], 贾贵清;张明鸣;杨平;程惊秋;陆燕蓉;伍晓汀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
间充质干细胞
第1章间充质干细胞1.1研究背景自Evans等1981年首先建立了小鼠ES细胞系后，在此之后近20年内，人们相继自早期胚胎建立了猪、牛、兔、绵羊、由羊、水貂、仓鼠、灵长类动物(恒河猴、狨)和人类ES细胞系。
最近，干细胞的研究又取得两个重大技术突破，一是人类胚胎干细胞在体外培养成功，实现了人类胚胎干细胞体外的非分化增殖。
同时对胚胎干细胞进行定向分化研究也取得了明显的进展，而且准确的分化诱导应用于干细胞治疗疾病。
目前，胚胎干细胞在体外被诱导分化成的细胞类型越来越多，如Pacacios等利用某些骨髓基质细胞或其条件培养液，使胚胎干细胞在体外分化产生造血干细胞，并可进一步分化形成髓系造血细胞和淋巴细胞。
在干细胞研究中另一重大技术突破是成体间充质干细胞的横向分化的发现。
一般认为，胚胎干细胞具有全能性，能分化为体内所有的组织和器官；而成体间充质干细胞的分化潜能较弱，只能分化成一种或有限的几种组织功能细胞。
1999年，Jackson等用肌肉来源的间充质干细胞在小鼠体内分化成各种血细胞。
现在已有多家实验室证明人的间充质干细胞可分化为肝脏细胞、肌肉细胞、神经细胞等。
这表明一种组织的特异性间充质干细胞可以横向分化成其他组织的细胞，间充质干细胞的横向分化具有明显的普遍性。
成体间充质干细胞横向分化的发现不仅从理论上改写了“组织特异性间充质干细胞只能定向分化”的经典概念，而且为利用成体间充质干细胞治疗疾病提供了可能。
有不少关于间充质干细胞定向诱导和横向分化的研究报道，造血干细胞向肝脏细胞以及其他细胞的横向分化在人类也已得到证实，为临床应用奠定基础。
1.2生物学特性间充质干细胞[mesenchymal stem cells，MSC]是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。
MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。
如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
SD大鼠骨髓间充质干细胞说明书
SCSP number:
SCSP-402
细胞名称: SD大鼠骨髓间充质干细胞
细胞描述: 大鼠骨髓间充质干细胞
大鼠品系: SD大鼠
细胞来源: SCSP取4周龄的SD大鼠骨髓，自行分离制备
SCSP 培养液: MSC完全培养液：SCSP-615
α-MEM medium with GlutaMAX™-I （Gibco 32571） 500 ml
FBS（Biochrom S0115） 56 ml
Pen Strep（Gibco 15140） 5.6 ml
细胞说明: 取自SD大鼠骨髓，通过机械法在无菌环境下分离，使用MSC
完全培养液贴壁培养，传代扩增至第二代冻存。集落形成率>5%，
CD29、CD90表达率>70%, CD34、CD45、CD11b表达率<5%，
具备分化成为脂肪、成骨、软骨的能力。
细胞代数
P2
细胞总数/每支:
106
体积/每支:
500µl
传代方法: 待细胞长满至90%时，用0.05%胰酶消化，按照2x104/cm2传代
或按1:2-1:3比例进行传代。
传代周期：3-5天 传代比例：1:2-1:3 换液频率：3天
气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃
冻存液： 培养液80%，FBS10%，DMSO 10%