骨源性碱性磷酸酶的测定及注意事项
碱性磷酸酶含量实验报告
一、实验目的1. 掌握碱性磷酸酶（ALP）的测定原理和方法；2. 学习使用分光光度计测定酶活性；3. 了解ALP在不同组织中的含量差异。
二、实验原理碱性磷酸酶（ALP）是一种广泛存在于生物体内的酶，主要催化磷酸单酯的水解反应。
ALP在人体中具有重要的生理功能，如参与骨骼生长发育、肝脏疾病诊断等。
本实验采用连续监测法测定ALP活性，通过测定酶催化底物水解生成产物浓度的变化，计算出酶活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）猪肝匀浆液；（2）鸡肝匀浆液；（3）兔肝匀浆液；（4）磷酸苯二钠；（5）0.1mol/L NaOH；（6）0.1mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）；（7）4-氨基安替比林；（8）铁氰化钾；（9）蒸馏水。
2. 实验仪器：（1）分光光度计；（2）恒温水浴箱；（3）移液器；（4）试管；（5）试管架。
四、实验步骤1. 配制试剂：根据实验要求，配制不同浓度的底物溶液、缓冲液、试剂等。
2. 样品处理：将猪肝、鸡肝、兔肝分别制成匀浆，测定其ALP活性。
3. 酶活性测定：（1）取试管一支，加入0.1mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）1.5mL；（2）加入底物溶液0.5mL；（3）加入酶液0.5mL；（4）立即放入恒温水浴箱中，在特定波长下测定吸光度；（5）记录吸光度变化，计算酶活性。
4. 数据处理：以酶活性为纵坐标，底物浓度为横坐标，绘制曲线，求出酶的最大反应速度（Vmax）和米氏常数（Km）。
五、实验结果与分析1. 不同组织ALP活性比较通过实验，测得猪肝、鸡肝、兔肝匀浆液的ALP活性分别为：猪肝：100 U/mL；鸡肝：150 U/mL；兔肝：200 U/mL。
由此可见，兔肝中的ALP活性最高，猪肝中的ALP活性最低。
2. ALP活性与底物浓度关系通过实验，绘制了ALP活性与底物浓度的曲线，求出Vmax和Km值。
结果表明，ALP活性随底物浓度增加而增加，但在一定范围内，ALP活性与底物浓度呈线性关系。
骨碱性磷酸酶
骨碱性磷酸酶骨碱性磷酸酶介绍：血清中的骨碱性磷酸酶的浓度被认为反映了成骨细胞的代谢活性，而骨代谢的精确评价对于明确骨代谢病的严重程度和治疗反应有着重要意义。
因此在变形性骨炎、骨软化、原发性甲状旁腺功能亢进、肾性骨营养不良、骨质疏松和骨转移瘤中，血清骨碱性磷酸酶水平的检测有着用武之地。
骨碱性磷酸酶的测定就被应用于变形性骨炎诊断和病情的检测。
骨碱性磷酸酶正常值：女性，1-12岁小于500U/L;大于15岁，40-150U/L;男性，1-12岁小于500U/L;12-15岁，小于750U/L;大于15岁，40-150U/L。
骨碱性磷酸酶临床意义：异常结果：1.生理性增高：儿童在生理性的骨骼发育期，碱性磷酸酶活力可比正常人高1～2倍。
处于生长期的青少年，以及孕妇和进食脂肪含量高的食物后均可以升高。
2.病理性升高：(1)骨骼疾病如佝偻病、软骨病、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等;预防儿童缺乏维他命D佝偻病及监测佝偻病的治疗进程。
(2)肝胆疾病如肝外胆道阻塞、肝癌、肝硬化、毛细胆管性肝炎等;(3)其他疾病如甲状旁腺机能亢进。
3.病理性降低：见于重症慢性肾炎、儿童甲状腺机能不全、贫血等。
需要检查的人群:儿童一般要求检查，有相关疾病和症状的也可做检查。
骨碱性磷酸酶注意事项：不合宜人群：无特殊要求。
检查前禁忌：血清骨碱性磷酸酶(BAP)定量检测需要空腹抽血检查，宜在早晨。
检查时要求：注意血清不被污染和及时送检。
骨碱性磷酸酶检查过程：在骨代谢疾病的监测中，生化标志物是一个有用的指标。
尿中羟(基)脯氨酸(Hydroxyproline)水平和血清总碱性磷酸酶水平，已经用于监测变形性骨炎的治疗效果。
骨质疏松，相对于变形性骨炎，是一种更轻微的骨重建的过程，因此需要更敏感和特异的标志物。
为此，OCTEIA Ostase®为实验室提供了血清骨碱性磷酸酶(BAP)定量的检测方法，该检测方法现已显示，在用于骨代谢疾病的诊治方面证明是有效的。
碱性磷酸酶测定SOP_ALP临床意义_检验科生化项目SOP
2标本采集与处理
2.1采血方法
空腹采不抗凝静脉血2~3ml。
2.2标本保存
室温可稳定8h，2~8℃可稳定4~5d，-20℃可稳定2个月。
2.3注意事项
推荐选用血清。标本避免溶血，也可使用肝素抗凝血浆，避免使用EDTA、草酸盐和枸橼酸钠抗凝血浆，因它们可抑制ALP活性。标本应避免脂血、溶血、黄疸。
碱性磷酸酶测定
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1检测原理
碱性磷酸酶在磷酸根转移缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）存在的情况下催化硝基磷酸苯酯(p-NPP)转移磷酸根到硝基苯酚（p-NP）。通过使用镁和锌离子加强反应。因为p-NP形成引起的在405nm光吸收的改变与ALP活性成正比。
p-NPP+AMPALPp-NP + AMP + PO4
7性能参数
本法线性范围为0~1000U/L,对于超过测定线性范围的结果，用酶稀释液对标本进行稀释，输入稀释因子后再重新检测。
8生物参考区间
50~136U/L。
9临床意义
ALP活力测定常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临床辅助诊断的指标。
活性增高可见于（1）肝胆疾病：阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸型肝炎、肝癌等。（2）骨骼疾病：由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内所含高浓度的碱性磷酸酶活力增高。如纤维性骨炎、成骨不全症、佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈合期等。
[2]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006：406~410。
编写：审核：批准：
3试剂和设备
3.1试剂
采用西门子医学诊断产品（上海）有限公司提供的试剂盒。
3.1.1试剂组成
孕妇血中骨源性碱性磷酸的测定及其意义
孕妇血中骨源性碱性磷酸的测定及其意义北京市妇产医院上官毕文据统计，我国孕妇每天钙摄人量仅为推荐量的40％，亚临床症状发生率为60％，孕产妇钙营养不良者，所生新生儿佝偻病的发生率较正常孕妇高5倍，因此孕期补钙应成为围产期保健的重要一环。
而且前孕期补钙较为盲目，这是因为以往的检测指标不能及时、准确的反映机体钙营养状态。
现在我们应用骨源性碱性磷酸酶(BAP)这一反映骨代谢状况的最好生化指标，采取简便的检测方法对80例孕妇进行BAP的检测，对阳性病人同时测定血钙(Ca)、血磷(P)、碱磷酶总活性(ALP)，以评价孕妇钙营养状态，进而指导孕妇科学补钙，现报告如下。
1．材料与方法1-1资料来源：选自1999年10一11月在我院产科门诊就诊的正常孕妇80例，年龄21—36岁，孕周15～37w，无重要脏器疾病史，无其他妊娠并发症。
采样的同时询问其妊娠因素，包括钙和VD的营养状况，钙和VD的用药史，户外活动史，工作环境，低钙体征等。
1-2试验方法：l-2-1 BAP：采用斑点亲和渗滤试验，只需病人手指血一滴或血清17L11，参考值≤150U／L,试剂盒由北京中生金域诊断技术有限公司提供。
1-2-2 Ca、P、ALP：采用全自动生化仪测定。
1-3统计学处理：X2检验，多元逐步回归。
2.结果2-1 BAP：诊断标准以>150U／L，为钙营养不良临界值，则80例孕妇中有39例BAP活性增高，其中150—200U／L有13例，200—250U／L有20例，> 250U ／L有6例，总异常率为48.0％。
2-2 Ca、P、ALP：39例BAP增高患者中，5例血Ca降低(12.8％)，12例ALP增高(30.7％)，用配对资料X，检验，BAP附哇检出率显著高于Ca和ALP(P<0．01)。
2-3 妊娠因素与BAP阳性结果的关系：把富含VD和钙食物赋值为(0)：不富含为(1)，经常参加户外活动为(0)，偶尔为(1)，室外工作环境为(0)，室内为(1)，服用VD和钙剂为(0)，无为(J)，无低钙症状为(0)，有为(1)，通过多元逐步回归法，对妊娠因素与BAP阳性结果的关系进行分析，发现BAP阳性结果的出现与是否经常参加户外活动，是否服用VD和钙类药物有极为密切的关系(P<0.01)，与低钙症状的出现亦关系密切(P<0.01)，工作对其影响不明显。
碱性磷酸酶km值测定实验报告
碱性磷酸酶km值测定实验报告碱性磷酸酶 Km 值测定实验报告一、实验目的1、掌握测定碱性磷酸酶（ALP）Km 值的原理和方法。
2、了解底物浓度对酶促反应速度的影响。
3、熟悉分光光度计的使用。
二、实验原理碱性磷酸酶是一种广泛分布于人体各脏器器官中的酶，在骨、肝、肠、胎盘等组织中含量较高。
它能催化磷酸酯的水解反应，产生无机磷酸和醇、酚等物质。
在酶促反应中，反应速度（v）与底物浓度S之间的关系可用米氏方程表示：v ＝ VmaxS ／（Km ＋ S) ，其中 Vmax 为最大反应速度，Km 为米氏常数。
Km 值是酶的一个重要特征常数，它表示酶与底物的亲和力。
Km 值越小，酶与底物的亲和力越大；反之，Km 值越大，酶与底物的亲和力越小。
本实验通过测定不同底物浓度下的酶促反应速度，以反应速度 v 对底物浓度S作图，通过双倒数作图法（LineweaverBurk 作图法），即1/v 对 1/S作图，可求得碱性磷酸酶的 Km 值。
三、实验材料与仪器1、材料碱性磷酸酶提取液磷酸苯二钠溶液（不同浓度）01mol/L 氢氧化钠溶液004mol/L 碳酸钠溶液05mol/L 三氯乙酸溶液2、仪器分光光度计恒温水浴锅移液器试管、刻度吸管等四、实验步骤1、准备试剂配制不同浓度的磷酸苯二钠溶液：0005mol/L、001mol/L、002mol/L、003mol/L、004mol/L。
配制显色剂：将 01mol/L 氢氧化钠溶液和 004mol/L 碳酸钠溶液按4:1 的体积比混合。
2、反应体系设置取 7 支干净的试管，按下表加入试剂：｜试管编号|1|2|3|4|5|6|7|｜｜｜｜｜｜｜｜｜｜磷酸苯二钠溶液（mL）｜000|020|040|060|080|100|＿____|｜蒸馏水（mL）｜100|080|060|040|020|000|＿____|｜37℃预温5min 后，各加入05mL 碱性磷酸酶提取液，立即混匀，37℃水浴准确反应 15min|｜反应结束后，各加入 05mL 05mol/L 三氯乙酸溶液终止反应|3、显色与比色各管加入 45mL 显色剂，充分摇匀。
骨碱性磷酸酶儿童标准
骨碱性磷酸酶儿童标准
骨碱性磷酸酶（ALKP）是一种肝功能指标，是一种胆汁酸物质，是人体中较重要的消化液，来源于血液中。
骨碱性磷酸酶也有时被称为抗肝炎物质（ALP），其在人体健康方面有着重要的作用。
ALKP在体内的功能主要是进行胆汁的生成和分泌，有助于消化食物，吸收营养。
当肝脏出现问题时，ALKP会大量分泌，从而引起血液中骨碱性磷酸酶增高，用于监测肝组织的稳定性及肝功能的状况。
在实际的医学检测中，ALKP的参考值不同，儿童的参考范围一般在20~200单位/L。
当ALKP增高时，有可能提示着孩子肝脏出现了不正常的情况，可能患有肝炎，或出现肝脏疾病。
另外，ALKP值还会受到性别、体重等其他因素的影响，检测条件越精确，得出的检测结果才能更加准确。
因此，为了确保儿童的健康，建议定期对儿童ALKP水平进行检查。
ALKP具有许多优点，比如迅速完成检测，检测结果准确，适用检测标本广泛，快速给出诊断结果，以及免疫酶标记技术（ELISA）可以检测极低的血清水平，越低就越准确。
总之，骨碱性磷酸酶对儿童健康来说非常重要，定期对儿童进行ALKP检测有助于及时发现，提前采取措施，以防止肝功能问题。
此外，为了保证检测的准确性，应尽量精确和全面地检测相关的参数，尤其是性别和体重，以便有效监测和控制儿童健康状况。
骨型碱性磷酸酶的检测方法和临床应用
检验科开展骨型碱性磷酸酶（BALP）测定骨型碱性磷酸酶(BALP)是成骨细胞分泌的一种糖蛋白，在成骨过程中水解磷酸酯，为羟磷灰石的沉积提供必须的磷酸；同时，水解焦磷酸盐，解除其对骨盐形成的抑制作用，有利于成骨过程。
临床应用:1.用于亚临床佝偻病、骨代谢障碍及高转化骨质疏松的诊断。
2.指导补钙或维生素D治疗：易患低钙人群或疾病主要包括儿童、孕产妇、老年人、佝偻病、骨质疏松、肝肾甲状腺疾病等，当人体缺钙或维生素D时，血钙下降，甲状旁腺激素分泌，促进肾脏合成大量1,25(OH)2维生素D3生成，后者可使静止的成骨细胞转化成活跃的成骨细胞，合成大量的BALP释放入血，BALP活性与活性成骨细胞的数量成正比，是反映成骨细胞活性和数量的专一标志物。
补钙或维生素D治疗后4周后复查BALP，发现BALP活性无变化应更换钙剂和避免长期服用导致的维生素D中毒。
3．BALP活性的检测以及动态观察可为骨代谢异常疾病早诊、疗效监测、病情预后等提供有效依据：骨密度的改变太慢不能作为临床监测骨代谢异常疾病（骨质疏松、骨软化症、佝偻病、Paget病、早期甲亢、慢性肾衰、肾移植病人等）治疗效果的早期反应。
BALP参与成骨过程并且其活性在血清中稳定没有昼夜变化，因此可作为观察骨形成变化率，为临床提供有效治疗的监测手段。
4.生长激素缺乏的儿童，使用生长激素后生长速率加速，BALP活性增加，并且与生长激素治疗所诱导的高SD分数正相关，能有效地监测对生长激素治疗的反应性。
5.慢性肾功能衰竭病人在接受肾移植后，常发生持续性的甲状旁腺机能亢进，BALP活力与甲状旁腺激素呈明显正相关，与骨皮质的密度呈负相关。
标本采集：抽静脉血2ml置红色盖非抗凝管送检，或安排患者来检验科取手指血。
项目信息：血清骨型碱性磷酸酶（BALP）编码250305013-1，参考值<200U/L，收费50元/次。
检验科2008.4.10。
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒标准操作程序
碱性磷酸酶(ALP)测定标准操作程序1.摘要碱性磷酸酶（ALP）存在于成骨细胞、干细胞、白细胞、肾、脾、胎盘、前列腺和小肠内。
测定血清或肝素化血浆中的碱性磷酸酶活力，做临床辅助诊断用。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中碱性磷酸酶（ALP）的活力。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定碱性磷酸酶（ALP）活力的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的碱性磷酸酶（ALP）试剂盒采用的是AMP缓冲液法。
5.原理在AMP的缓冲环境下，磷酸对硝基苯在碱性磷酸酶的作用下，可以水解成磷酸盐和对硝基苯酚。
在一定底物浓度范围内,磷酸对硝基苯的水解产物对硝基苯酚会引起405nm处吸光度的上升，其上升速率与血清中碱性磷酸酶的活力成正比。
−→−+OH−−磷酸盐对硝基苯酚磷酸对硝基苯碱性磷酸酶+26.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R1：AMP缓冲液（PH10.50）、乙酸镁；R2：AMP缓冲液（PH8.85）、磷酸对硝基苯、乙酸镁。
AMP：2-氨基-2-甲基-1-丙醇7.3试剂稳定性：试剂在2-8℃避光保存，有效期1年。
试剂工作液在2-8℃避光保存，可稳定4周，15-25℃可保存稳定4天。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
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骨源性碱性磷酸酶的测定及注意事项
血浆中骨源性碱性磷酸酶(BAP)活性测定，首先是血球和血浆的分离，这一过程是基于全血样品经血浆分离器将血球截留在分离器的血球容纳膜上，而血浆渗滤穿过转运膜到达反应膜的特定区域，血浆分离完成后，将血浆分离器从反应装置上取下。
第二步是BAP与血浆中其它组分，包括其它来源的碱性磷酸酶(ALP)分离达到特异测定BAP的目的。
这一目的实现是根据小儿型BAP(NBAP)和成人BAP(ABAP)分子结构中糖基类型的不同，分别选择相应的亲和素，我们可称之为NBAP-结合蛋白和ABAP-结合蛋白，预先固相在反应膜的特定区域—反应区上。
当血浆经过此区域渗滤时，BAP即被结合，而其它组成滤过或被滴加的洗涤液清洗掉，从而完成特异性亲和反应。
第三步方可进行BAP的活性测定显色反应。
反应膜固定在反应滑板上，待亲和反应完成后，将反应滑板推动，使反应膜到达反应孔正中，将显色液滴加到反应孔内的反应膜上，在37℃反应一定时间，酶促反应显色的深浅与BAP活性成正比，对照说明书上的标准色板目测判读BAP活性。
作为干化学分析技术，结果判断是对照标准板目测做出的半定量分析。
其中，标准色板的色阶印刷在说明书上，不同批次的产品使用同一标准色板，如何使每批次的产品使用同一标准色板，如何使每批产品酶促显色的深浅都能与标准色板一致呢?这是通过每批产品出厂前的校正实现的。
校正是用已知NBAP(活性为200U／L，250U／L，300U／L)和ABAP(活性为150U／L，200U／L，250U／L)的血清(17µl)进行的，在37℃进行反应，使显色强度与标准色板上相应色强相一致，确定所需的反应时间为每批产品说明书上填写的反应时间(多少分钟)。
可见，在影响酶促反应的诸多因素(底物种类和浓度、缓冲液种类和浓度、PH值、反应温度、激活剂等辅助因子)一定的前提下，样品中BAP催化反应产物的多少(显色强度)只决定于反应时间的长短。
从上述校正过程可见，欲使测定结果可靠而且重复性好，需要严格掌握的操作环节，一是反应温度应控制在37℃±0．1℃范围内；二是反应时间严格按照说明书上给定的时间；三是如果不用全血分析，直接用血清作为样品分析时，应定量加人17µl 。
另外，对照说明书上的每步操作，BAP活性测定的质量控制还应包括：
第1步：在反应装置的加样孔中，均匀滴加两滴洗涤液。
待其渗入，目的在于加随后的全血样品滴加后渗滤顺利，血球和血浆分离较快，其渗入一般较快，如渗入缓慢，可用手轻压一下血浆分离器，即可迅速渗入。
如漏加洗涤液，则有可能使样品血浆分离缓慢且不均匀，将影响下一步亲和反应及显色反应，最后人为地使显色斑点均一性差。
第2步：试剂盒要求使用新鲜全血，不能使用抗凝血。
因某些抗凝剂会抑制BAP的活性。
采血时试剂盒是配套的30µl定量采血管，手持有黄线的一端，用另一端吸取血液标本恰好至黑色刻度线，然后用吸球迅速将其均匀加入加样孔中，注意勿产生气泡。
如用血清分析，则需加17／J 1。
加样后，血液一般在30秒内可全部渗入。
如渗透较慢，可用手轻压一下分离器。
第3步：待血液全部渗入后，再逐滴加入两滴洗涤液。
由于此时膜表面已截留了血球。
所以此时洗涤液渗滤较慢，一般约需1—2分钟。
如个别又出现渗入较慢的，也可用手轻压分离器，即可加快渗入速度。
第4步：待洗涤液渗入后，此时样品中血浆已完全转运到亲和膜上，将血浆分离器从反应装置上取下，即可见反应滑板上的圆形反应膜。
注意膜上不能附着有其它膜片，如有可能为分离器上的过渡膜松动脱落而成，此时应用镊子或分离器一角将其挑去。
第5步：为了除去血浆中其它物质的干扰，在反应膜上只保留BAP结合蛋白复合物，在反应膜上再滴加两滴洗涤液(小儿型)或中止液(成人型)，此时液体渗入较快。
第6步；推动反应滑板，使反应膜定位在反应孔的正中，此步骤使亲和反应和酶促显色反应在两个不同的区域进行，以避免亲和反应对显色反应的干扰，提高检测灵敏度和特异性。
第7步；在反应孔正中滴加一滴显色液，置37℃恒温水浴箱中按说明书上标明的反应时间进行保温反应。
滴加显色剂时，应先将显色剂平衡至室温。
注意：反应温度指的是水浴箱内的气温，而非水的温度；且反应装置应放在试管架或别的支架上，切勿将反应装置放在水中进行反应，放时也要注意避免反应膜上溅上水滴。
显色液正常的颜色为淡黄色，在2-8℃避光条件下可稳定一年，如变蓝或变成无色，可能是运输过程中外界因素的影响所致，对检测结果有一定影响，请勿使用并及时与供应商或公司技术服务部门联系。
第8步：显色结束后，将反应滑板推回原位，此时反应膜上剩余的显色液将会被吸收掉，之后滴加一滴中止液，停止酶促显色反应。
因为显色反应时间已经出厂前校正确定，故实际显色时间与说明书上标明的显色时间应尽可能接近。
第9步：试剂盒使用的显色系统是BCIP／INT，显色产物是一种蓝紫色色淀。
正常小儿血浆BAP活性一般≤200U／L,~E常成人血浆BAP活性一般≤150U／L，钙营养不良者血浆中BAP活性升高，随钙缺乏程度不同，反应膜上显色强度不同。
报告时，对照标准色板报告：小儿：≤200U／L，250U／L，300U／L。
如显色偏离标准色板标明的数值，则可据目测实际报告为200-250U／L,250-300U／L或>300U／L；
成人：≤150U／L，200U／L≤200U／L。
如显色偏离标准色板标明的数值，则可据目测，实际报告为150-200U／L，200-250U／L或>250U／L。