抗性淀粉和总淀粉测定方法
大米抗性淀粉糊化特性的研究
202008,No .8收稿日期:2008-06-06作者简介:阮少兰(1955-),女,副教授,研究方向为谷物科学与工程。
大米抗性淀粉糊化特性的研究阮少兰,刘亚伟,阮竞兰(河南工业大学,河南郑州 450052)摘 要:采用差示扫描量热分析技术(DSC)对大米原淀粉及抗性淀粉样品的糊化温度和吸热焓进行了测试和研究。
差示扫描量热分析结果表明,抗性淀粉的开始吸热温度和完成温度均高于原淀粉,且吸热焓增大,说明沸水浴处理使淀粉形成了致密的结晶结构。
关键词:抗性淀粉;DSC ;糊化温度;糊化焓中图分类号:TS231 文献标识码:A 文章编号:1003-6202(2008)08-0020-02A Study on G elati n izing Properties of R ice Resistan t S tarchAB STRACT :D ifferentia l Scann i ng Calor i m eter (DSC)w as used to de ter m i ne and study the ge l a ti niza ti on te m perature and enthalpy of raw rice sta rch and resistant starch .The res u lt show ed that the temperatures o f beg i nning and fi nish i ng the heat abso rpti on w as all high e r t han tha t of nati ve rice starch and the entha l py i ncreased ,and it proved that t he co m pact crysta lli ne struct ure was for m ed by bo ili ng w ater bat h treat m ent .K EY W ORDS :resistant starch ;D SC ;ge lati n i zati on te m perat ure ;g elati n izati on en t ha l py 抗性淀粉这一概念,由英国生理学家Eng l yst 等1982年发现并命名[1],欧洲抗性淀粉研究协会(E U RES TA )1993年将其定义为:不被健康人体小肠所吸收的淀粉及其降解产物的总称[2]。
抗性淀粉
抗性淀粉(resistant starch)又称抗酶解淀粉及难消化淀粉，在小肠中不能被酶解，但在人的肠胃道结肠中可以与挥发性脂肪酸起发酵反应。
抗性淀粉存在于某些天然食品中，如马铃薯、香蕉、大米等都含有抗性淀粉，特别是高直链淀粉的玉米淀粉含抗性淀粉高达60%。
这种淀粉较其他淀粉难降解，在体内消化缓慢，吸收和进入血液都较缓慢。
其性质类似溶解性纤维，具有一定的瘦身效果，近年来开始受到爱美人士的青睐。
目录基本概述主要优点1主要分类RS11RS21RS31RS4基本功效制备方法展开编辑本段基本概述抗性淀粉[1]抗性淀粉(resistant starch)本身仍然是淀粉，其化学结构不同于纤维，但其性质类似溶解性纤维。
很早以前，耦合淀粉就被当作食品添加剂使用，尤其使用在需要高度稳定粘度的食品中，因为这种淀粉有着使用量少并且安全性高的特点。
而且，这种淀粉也可被当作医学成分使用，比如填充物，包扎物，分解质和增稠物质。
目前研究发现，这种特殊的消化特点被大量使用于控制药物载体的稀释上面。
在许多领域中这种淀粉消化特点是很重要的，但是淀粉在生物体外的因退化而改变的数据却很少出现在文献中。
众所周知，碳水化合物又称多糖，人们食用碳水化合物后要在体内被胃酸及酶消化分解为单糖——葡萄糖以后才能吸收并进入血液，抗性淀粉由于消化吸收慢，食用后不致使血糖升高过快，也就是可以调节血糖水平，因此成为一种功能性淀粉，特别适宜糖尿病患者食用，食用抗性淀粉后不容易饥饿，有助于糖尿病人维持正常的血糖，减少饥饿感(特别是午夜)。
抗性淀粉也可通过某些加工方法提高其含量，如将原淀粉加热使其糊化并迅速冷却，则此糊液产生老化，或将淀粉制品在冰箱内贮存，都可增加抗性淀粉含量；还可添加脂肪使淀粉变性以增加抗性淀粉含量，因脂肪可使淀粉分子内部的螺旋结构凝固而趋于稳定，可抵抗酶的侵蚀。
编辑本段主要优点1、抗性淀粉可抵抗酶的分解，在体内释放葡萄糖缓慢，具有较低的胰岛素反应，可控制血糖平衡，减少饥饿感，特别适宜糖尿病患者食用；2、抗性淀粉具有可溶性食用纤维的功能，食后可增加排便量，减少便秘，减少结肠癌的危险；3、抗性淀粉可减少血胆固醇和三甘油脂的量，因食用抗性淀粉后排泄物中胆固醇和三甘油脂的量增加，因而具有一定的减肥作用；4、抗性淀粉可以增值，据资料介绍，玉米原淀粉20美分/磅，制成功能性抗性淀粉作为食物配分，价格可提高至2.5美元/磅，价值增加10倍。
抗性淀粉的简介及其制备
1. 抗性淀粉研究1.1 抗性淀粉简介1981年A nders on等首次发现食物中的淀粉经过小肠并未完全被消化。
通过测定作为大肠发酵指示的呼出的氢气，他们发现白面包中大约有20%的淀粉进入大肠[1]。
最初，研究者称淀粉进入大肠的现象为淀粉的不良吸收，但是随着对淀粉在人体内代谢过程的深入研究，发现进入大肠的淀粉能被大肠里的微生物发酵，作为能源利用。
研究者们将这种不被健康人体小肠所吸收的淀粉称之为抗性淀粉(Resist ant Starch)，简称RS。
这种淀粉较其他淀粉在体内消化、吸收和进入血液较缓慢，具有类似膳食纤维的功能特性。
但抗性淀粉本身仍然是淀粉，其化学结构不同于纤维。
作为一种新型功能型添加剂，抗性淀粉对人体健康有重要作用，它能降低血糖和胰岛素的反应，适合肥胖病人和糖尿病人食用。
动物实验表明，抗性淀粉还具有降低血清胆固醇、防治心血管疾病的作用[2]。
此外，抗性淀粉还具有比传统膳食纤维更好的加工特性，特别是在膨胀度、黏度、凝胶能力、持水性等方面[3]。
作为一种新型的膳食纤维，抗性淀粉具有类似于传统膳食纤维的生理功能，在大肠中，经微生物发酵，它的产短链脂肪酸尤其是丁酸的能力远远高于普通膳食纤维[4]。
而且，将抗性淀粉添加到食品中，RS不会影响食物的风味、质地和外观，在许多应用中，甚至可以提高最终产品的风味。
因此在过去几十年中，RS 已作为保健营养成分应用于面包、谷物早餐、面条等普通食品和减肥食品等特殊食品中[5]。
1.2 抗性淀粉的分类抗性淀粉(RS)因其天然来源或加工方法不同，其抗消化性会有很大的差别，目前一般可将其分为4类，即RS1、RS2、RS3、RS4[6]。
RS1，物理包埋淀粉，是指那些因细胞壁的屏障作用或蛋白质的隔离作用而不能被淀粉酶接近的淀粉。
抗性淀粉的制备及其形成影响因素的研究_徐丹鸿
大量的研究发现内源脂类影响 ＲＳ 的形成， 质量较 小的物质（ 如醇类、脂类） 能与自身质量 ６ 倍的直链淀粉 结合形成复合物。Ｓｚｃｚｏｄｒａｋ 通过 ＤＳＣ（ 差示扫描量热法） 发 现 在 １００～１５０ ℃之 间 有 直 链 淀 粉 － 油 脂 复 合 物 的 存 在 。直 链 淀 粉 与 油 脂 结 合 后 就 不 再 参 与 直 链 双 螺 旋 的 形 成， 因而降低 ＲＳ 的含量。杨光等研究了内源脂类对抗性 淀粉形成的影响， 发现多量的脂类不利于抗性淀粉的形 成， 少量的脂类提高了抗性淀粉的得率， 研究数据显示， 经脱脂处理的淀粉 ＲＳ 含量（ ８．６％） 高于原淀粉（ ７．０％） 及 无脂淀粉 （ ８．１％） 。 Ｍａｎｇａｌａ 等研究非碳水化合 物 如 内 源脂类和内源蛋白质对抗性淀粉形成的影响时， 也证实 脱脂能显著提高抗性淀粉的含量， 而脱蛋白质对 ＲＳ 含 量的影响不显著。 ２．４ 处理方式、处理工艺的影响
研 究 人 员 通 过 比 较 常 压 蒸 煮 、高 压 蒸 煮 、焙 烤 、挤 压 和煎炸等处理方式对蜡质玉米淀粉中抗性淀粉形成的 影 响 ， 发 现 常 压 蒸 煮 、高压 蒸 煮 的 方 式 较 其 它 的 方 式 产 生的 ＲＳ 含量高； Ｌｉｊｅｂｅｒｇ 则研究了不同焙烤条件对抗性 淀粉形成的影响， 发现低温长时间（ １２０ ℃， １２ ｈ） 烘烤制
抗性淀粉
抗性淀粉的制备与功能摘要：本文综述抗性淀粉的研究进展，并介绍对抗性淀粉的认识、抗性淀粉的制备及其功能关键字：抗性淀粉；制备；功能一、抗性淀粉的定义及其分类Enlyst[1]和Baghurst[2]等人根据淀粉在小肠内生物可利用性，将淀粉分为三类：一类是快速消化淀粉（Ready digertible starch,RDS）指那些在小肠内迅速消化吸收的淀粉颗粒；另类是缓慢消化淀粉（Slowly digestible starch,SDS）指那些在小肠内消化吸收比较慢的淀粉颗粒；第三类便是抗性淀粉（Resistant starch,RS）指不被小肠消化吸收，但能在大肠内进行发酵的淀粉。
1985年，当从AOAC之酶－重力法进行膳食纤维定量时，发现有淀粉成分会被包埋在不溶性膳食纤维中（IDF）。
Englyst等学者首先将此部分定义为抗性淀粉。
后来Asp等人研究以为，加工食品中所含的抗性淀粉成分，在体外试验中无法被淀粉酶水解且在人体小肠内也无法被水解。
据此，在1993年将抗性淀粉定义为：不能再健康人体小肠中消化吸收的淀粉及其降解物的总称。
[3]但是由于影响淀粉在小肠内消化吸收的因素很多：如淀粉的糊化和凝沉程度、淀粉颗粒的大小和形态、其他膳食的消化能力也有所不同，因此抗性淀粉和可消化淀粉之间并无严格区分，对抗性淀粉的定义还需进一步研究，采用多数人均值测定体内的抗性淀粉含量将会是一种行之有效的方法。
食物中存在的抗性淀粉可分为四种类型：即RSI,RS2,RS3,RS4 。
RS1：物理包埋淀粉，指那些因细胞壁的屏障作用或蛋白质的隔离作用而不能被淀粉酶接近的淀粉。
如部分研磨的谷物和豆类中，一些淀粉被裹在细胞壁里，在水中不能充分膨胀和分散，不能被淀粉酶接近，因此不能被消化。
但是在加工和咀嚼之后，往往变得可以消化。
RS2：抗性淀粉颗粒，指那些天然具有抗消化性的淀粉。
主要存在于生的马铃薯、香蕉和高直链玉米淀粉中。
其抗酶解的原因是具有致密的结构和部分结晶结构，其抗性随着糊化完成而消失。
抗性淀粉
抗性淀粉概述 抗性淀粉的分类 抗性淀粉与健康 在食品工业中的应用
抗性淀粉概述
抗性淀粉的定义为：在小肠中不能被酶解，但在人的肠胃道结肠 中可以与挥发性脂肪酸起发酵反应的一类淀粉结构。淀粉不能被吸收 并且能够进入结肠具有重要的生理功效。
抗性淀粉存在于某些天然食品中，如马铃薯、香蕉、大米等都含 有抗性淀粉，特别是高直链淀粉(high amylosecorn starch)的玉米 淀粉含抗性淀粉高达60%。
抗性淀粉比膳食纤维有更为广泛的保健意义目前成为欧美国家食品与营养研究的重点西方居民食谱中抗性淀粉正增加至10以上但抗性淀粉不易被消化酶所消化消化能力差的人应当少吃或不作为一种新型健康食品添加剂抗性淀粉既不会显著的影响食品流变学性质又可形成具有不同特色的功能食品和风味食品
新型健康食品添加剂 —抗性淀物
糖原（Glycogen）：又称动物淀粉，是多聚D-葡萄糖，几乎全部存 在于动物组织中，结构与支链淀粉相似，分支多，支链比较短，分子量 大。
抗性淀粉（Resistant Starch，RS）：又称抗酶解淀粉及难消化淀 粉，这种淀粉较其他淀粉难降解，在体内消化缓慢，吸收和进入血液都 较缓慢。抗性淀粉本身仍然是淀粉，其化学结构不同于纤维，但其性质 类似溶解性纤维。
抗性淀粉比膳食纤维有更为广泛的保健意义，目前成为欧美国家 食品与营养研究的重点，西方居民食谱中，抗性淀粉正增加至10%以 上，但抗性淀粉不易被消化酶所消化，消化能力差的人应当少吃或不 吃。
抗性淀粉精品文档
抗性淀粉一、淀粉的分类：E第一文库网nglyst等依据人体对淀粉消化释放葡萄糖时间的快慢将淀粉分成三种：〔1〕快速消化淀粉(RDS,rapiddigestiable starch)是指那些能在人体小肠中被快速消化汲取的淀粉，20min内消化完全；〔2〕慢消化淀粉(SRS,slowlydigestiable starch)是指那些能在人体小肠中被完全消化汲取但是速度较慢的淀粉，20～120min 时间段内消化；〔3〕抗性淀粉(RS,resistant starch)是指在人体小肠内无法消化汲取，被排到大肠，类似膳食纤维，能被大肠内的微生物发酵利用。
Englyst指出影响淀粉消化性与生理反应的主要因素有淀粉来源、颗粒结构、结晶性质、链淀粉和支淀粉的比率以及与淀粉结合的其它成分如蛋白质、脂类等。
一般来说，链淀粉含量高的淀粉是作为SDS和RS的主要来源。
抗性淀粉：1 抗性淀粉的分类：依据RS的存在形式特点把RS分为4类：〔1〕RS1物理包埋淀粉：〔physically trapped starch〕指那些因细胞壁的屏障作用或蛋白质的隔离作用而不能被淀粉酶接近的淀粉。
如部分研磨的谷物和豆类中，一些淀粉被包裹在细胞壁里，在水中不能充分膨胀和分散，不能被淀粉酶接近，因此不能被消化，但是在加工和咀嚼之后，往往变得可以消化。
〔2〕RS2生淀粉颗粒〔resistance starch granules〕指那些自然具有抗消化性的淀粉。
主要存在于生的马铃薯、香蕉和高直连玉米淀粉中。
其抗酶解的缘由是具有致密的结构和部分结晶结构，其抗性随着糊化完成而消逝，依据X-射线衍射图像的类型，RS2可以分为三类：A/B/C三类。
A类; 这类淀粉即使未经加热处理也能消化，但在小肠中只能部分消化，主要包括小麦、玉米等禾谷类淀粉。
B类：这类淀粉即使经过加热处理也难以消化，包括未成熟的香蕉、芋类和高直连玉米淀粉C类：衍射的类型介于A类和B类之间，主要是豆类淀粉。
抗性淀粉的研究
按照 热处 理 温度 和 淀粉乳 水分 含量 的不 同， 淀 粉 的热液处 理 可 分 为 湿 热 处理 ， 韧化 处 理 ， 热 处 压
理， 减压处 理和超 高压处 理五类 Ｊ 。
２ ２ 等的变化形成 ， 因
此 也是很重 要 的一类抗 性淀粉 。回生淀粉 是膳食 中 抗 性淀粉 的主要成分 ， 类淀粉 即使经加 热处理 ， 这 也 难 以被淀粉酶类 消化 ， 因此可作为 食品添加 剂使用 。
第２ ６卷
第 ６期
甘 肃科技
Ｇａ ｓ ｃｅ ｃ ｎ ｃ ｎ ｌｇ ｎ ｕ Ｓ ｉｎ ｅ ａ ｄ Ｔｅ ｈ ｏｏ ｙ
２６
Ⅳ０ ６ ．
２１ ００年 ３月
Ｍａ ． ２ １ ｒ ００
抗 性 淀 粉 的研 究
王宏 志 ， 永利 王
（ 山东 寿 光 巨 能 电力 集 团 ， 山东 寿光 ２２ ０ ） ６７ ０
现象。 １８ ９３年 ， 国 生理学 家 Ｈ ｎ ｎｌ ｔ 英 ａｓＥ ｇｙ 等人 首 ｓ
先将这 部分淀 粉定 义为 抗性 淀 粉… 。由此 ， 抗性 淀
粉 的理 化性质及 应用 特性成 为人们研 究 的热点 。
ｌ 抗 性 淀粉 的分类
按照 目前 公 认 的 分 类 方 法 ， 性 淀 粉 可 分 为 抗 Ｒ ｌＲ ２Ｒ Ｒ ４四类 。 Ｓ、Ｓ 、Ｓ Ｓ Ｒ 物理 包埋淀 粉 ， 那些 因细 胞壁 的屏障 作 Ｓ： 指 用或蛋 白质 的 隔 离作 用 而 不 能被 淀 粉 酶 接 近 的 淀
４ ７
近 年来 ， 波加 热 过 程 中膨 化 效应 是 国内外 研 微 究 的热点之 一 。 由于微 波 加 热 速 度极 快 ， 得 食 品 使 物料 中 的水 分在 短 时 间 内迅 速 蒸 发汽 化 ， 在 内部 并 积 累形 成压力 梯度 ， 物料质 构 不能承 受这 个压力 。 若 就会造 成体积 膨胀 ， 产生 膨 化效 应 ， 性 淀粉 （ Ｓ） 抗 Ｒ ，
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抗性淀粉及总淀粉测定方法采用Megazyme抗性淀粉试剂盒法，测定方法见试剂盒说明书（下附）原理（AOAC法 2002.02 ;AACC法32-40）抗性淀粉的测定方法：样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶（AMG）37℃振荡水浴孵育16小时，在这期间，通过两种酶的联合作用，非抗性淀粉被溶解，水解成D-葡萄糖，孵育结束后，加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精（IMS,变性乙醇）终止反应。
离心上述溶液，收集上清勿弃，底部残留絮状团即为样品中的RS，用含水的IMS或乙醇（50%v/v）洗涤絮状团，洗涤后离心，再重复一次洗涤离心，收集离心后获得的上清，与之前收集的上清混合。
小心倒出试管残留的液体，将絮状团置于冰水浴中，加入2M KOH溶解，溶解的同时用磁力搅拌机剧烈搅拌。
用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性，用AMG将淀粉定量水解成葡萄糖。
D-葡萄糖用葡糖氧化酶/过氧化物酶试剂（GOPOD）测定，这也是对样品中RS含量的测定。
非抗性淀粉（可溶性淀粉）的测定可通过集中的上清液并定容至100mL，再用GOPOD测定D-葡萄糖完成。
总淀粉测定方法：即抗性淀粉与非抗性淀粉总和。
抗性淀粉检测试剂盒K-RSTAR（100次分析）应用性和精确性这个方法需要样品中RS含量多于2% w/w。
如RS含量多于2% w/w，常规标准误差为±5%。
少于2% w/w RS的误差更高。
试剂盒瓶子1：淀粉葡糖苷酶AMG，12 mL，3300U/ mL，条件为pH4.5，40℃下，底物为可溶性淀粉，[单位或为200U/mL，条件为pH4.5，40℃下，底物为对硝基苯基β-麦芽糖苷]。
AMG 溶液应完全没有可检测到的游离D-葡萄糖。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子2：α-胰淀粉酶(胰酶，10g，3Ceralpha U/mg)。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子3：GOPOD 试剂缓冲液。
磷酸钾缓冲液（1M，pH7.4），对羟基苯甲酸（0.22M）和叠氮化钠（0.4%W/V）。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子4：GOPOD试剂酶。
葡糖氧化酶（>12,000U）加上过氧化物酶（>650U）和4-氨基安替比林（80mg）。
冻干粉，-20℃下稳定性>5年。
瓶子5：D-葡萄糖标准溶液（5 mL,1.0mg/mL）溶于苯甲酸0.2%（w/v）。
室温下稳定性>5年。
瓶子6：抗性淀粉对照。
抗性淀粉含量如表所示。
室温下稳定性>5年。
溶液/悬浮液的制备1.使用瓶子1中提供的的产品（AMG；溶液1）。
这个溶液是有粘性的，因此应使用正向移液器移取分装。
4℃下稳定性> 3年。
稀释AMG（300 U/ mL）。
取2 mL瓶子1中的AMG浓缩液用0.1M顺丁烯二酸钠缓冲液（0.1M，pH6.0；试剂1，非提供）稀释至22mL。
以5 mL为单位分装后用聚丙烯管冷冻保存。
反复冻融不会影响稳定性，稳定性-20℃>5年。
用前制备2.用100mL顺丁烯二酸钠缓冲液(100mM，pH6.0；试剂1，非提供)悬浮1g瓶子2中的产品(α-胰淀粉酶)，搅拌5分钟。
加入1.0mL稀释的AMG（300 U/ mL），混匀。
>1500g离心10分钟，慢慢倒出上清液，这就是制备的溶液2。
溶液2制备后应当天使用。
3.用蒸馏水稀释瓶子3中的产品（GOPOD 试剂缓冲液）稀释至1L，这就是制备的溶液3。
制备后马上使用。
备注：（1）如果浓缩缓冲液在-20℃下储存，它将形成结晶盐，因此必须要完全溶解才可以用蒸馏水稀释。
（2）这个缓冲液包含0.4%（w/v）的叠氮化钠。
因此这是个有毒化学物，应进行相应的处理。
4.取瓶3中制备好的溶液320mL溶解瓶子4里全部的产品，定量转移这个溶液至装有剩余溶液3的瓶子中。
用铝箔封盖瓶子以遮光。
这就是葡萄糖测定试剂（GOPOD 试剂），可以在2-5℃保存3个月或者-20℃下保存一年。
如果试剂要以冷冻态储存，应分装后再冻存。
当试剂是新鲜制备的，它的颜色应是浅黄色或浅粉色。
在4℃储存2-3个月时会演变成深粉色。
当以蒸馏水为对照时，这个溶液的吸光度应小于0.05。
5&6.使用瓶子5或6提供的产品。
室温下稳定性>5年。
没有提供的试剂（应购买分析纯级）1.顺丁烯二酸钠（马来酸钠）缓冲液(100mM，pH6.0)加上5mM二水氯化钙和叠氮化钠（0.02%w/v）.用1600mL蒸馏水溶解23.2g顺丁烯二酸，用4M（160g/L）氢氧化钠调节pH至6.0，加入0.74g二水氯化钙和0.4g叠氮化钠，并溶解。
定容至2L。
4℃下可保存一年。
2.醋酸钠缓冲液（1.2M，PH3.8）将69.6mL的冰醋酸（1.05g/mL）加至800 mL的蒸馏水中，用4M氢氧化钠调节pH至pH3.8。
用蒸馏水定容至1L，室温下可保存一年。
3.醋酸钠缓冲液（100mM，PH4.5）将5.8mL的冰醋酸加至900 mL的蒸馏水中，用4M氢氧化钠调节pH至4.5。
用蒸馏水定容至1L，4℃保存2个月。
4.氢氧化钾溶液（2M）将112.2gKOH加至900 mL的去离子水中，搅拌溶解。
定容至1L，密封保存。
室温下可保存2年。
5.含水乙醇（或者IMS）（大约50%v/v）将500mL乙醇（95%v/v或者99%v/v）或者工业甲基化酒精（IMS；变性乙醇；95% v/v 乙醇加上5%甲醇）至500mL的水中。
密封保存，室温下稳定保存>2年。
备注：一系列包含RS的对照样品0.6%-78%w/w可从Megazyme公司购买。
设备（推荐）1. 离心式粉碎机，带有齿轮转子和1.0mm筛子，或类似的装置。
小型样品可选择旋风磨碎机替代。
2.绞肉机-手动或电动的，装有4.5mm筛。
3.台式离心机-能够放入16×120mm玻璃试管，速度大约1500g(3000rpm)4.振荡水浴器，可设定为每分钟100次直线运动（振荡速度为每分钟200里程），振荡距离35mm,37℃。
5.水浴锅-能够保持在50+0.1℃。
6.涡旋混匀器。
7.磁力搅拌器。
8.磁力搅拌棒-5×15mm。
9.pH计10.计时器11.分析天平（精确到0.1毫克）12.分光光度计-能够设定510nm（10mm路径长度）13.100μL移液器及一次性枪头14.连续分配器-配有50mL管嘴，能够移取2.0mL，3.0mL和4.0mL。
15.培养管-螺旋帽，16×125mm16.玻璃试管-16×100mm，14mL容量17.塑料盒，可放置试管架，也可作为冰盒使用。
18.温度计-能够读取37+0.1℃和50+0.1℃。
19.容量瓶-100mL，200mL，500mL，1L，2L样品制备用磨碎机研磨大约50g谷物样品或冻干植物或食品，使样品粉末可过1.0mm筛。
转移所有的材料至广口瓶，颠倒振荡混匀。
工业淀粉一般不用研磨。
用绞肉机粉碎鲜样（如罐装的豆子，香蕉，土豆），过4.5mm筛。
用AOAC法925.10（15），测定干样中的含水量，根据AOAC 法925.10，冻干后烘炉干燥测定鲜样中的含水量。
分析方法（a）水解和溶液化非抗性淀粉1.准确称取100mg（±5 mg）样品后直接倒入有螺旋帽的试管里，轻柔的拍打试管以保证样品集中在底部。
注意：对于湿样，样品大概为0.5g(准确称重)，这些材料的含水量通常为60-80%。
2.每个试管中加入4.0 mLα-胰淀粉酶（10 mg/mL）其中含有AMG（3 U/mL）（溶液2）3.盖紧试管盖子，用涡旋振荡器混匀，卧式放入振荡水浴器，与运动方向平行。
如下图所示：4.连续振荡，37℃孵育，精确孵育时间为16小时。
（备注：200里程/min）5.把试管从水浴锅中拿出，用纸巾擦掉多余的水。
拿开盖子，加入4.0mL乙醇（99% v/v）或者IMS（99% v/v），用涡旋器涡旋。
6.1500g离心，10分钟（不加盖）7.小心倒出上清，加入2mL 50%乙醇或50% IMS重悬浮，用涡旋器涡旋，再加入6mL 50%IMS，混合，1500g离心，10分钟8.小心倒出上清，重复上述重悬浮和离心步骤。
9.小心倒出上清，翻转试管，用纸巾吸除多余的液体。
（b）测定抗性淀粉含量1.将试管冰浴，再向每个试管中加入磁力搅拌棒和2 mL2M的KOH，用磁力搅拌机在冰浴/水浴状态下搅拌20min，以重悬浮絮状物和溶解RS。
如下图所示：备注：（1）不要使用涡旋器混匀，那将会导致淀粉乳化。
（2）确保边加入KOH溶液边剧烈搅拌试管里的样品。
这将会避免形成难溶的淀粉块。
2.向每个试管中加入8 mL1.2M的醋酸钠缓冲液（pH3.8），并用磁力搅拌机搅拌。
立即加入0.1mLAMG（溶液1；3300U/mL）,混匀，并放入50℃水浴。
3.孵育30min,期间用涡旋器间歇混匀。
4.对于RS含量>10%的样品，用水洗瓶定量转移试管里的样品至100mL容量瓶，当用洗瓶洗涤试管中的溶液时用外磁铁保持试管中的磁力棒。
用蒸馏水定容至100mL，并混匀。
以单位体积离心溶液，1500g，10min。
5.对于RS含量<10%的样品，直接离心1500g,10min（非稀释）。
对于这些的样品，试管里的最终体积大约为10.3mL（体积可能会变化，如果分析的是湿样，在计算数值时应注意折扣）6.将稀释的（4.）或非稀释的（5.）上清液以0.1mL为单位转移至玻璃试管（16×100mm），一式两份，加入3.0mLGOPOD试剂（溶液4），50℃孵育20分钟。
7.测量每一个溶液的在510nm下相对于空白试剂的吸光度值。
制备空白试剂准备空白试剂：通过混匀0.1mL的100mM的醋酸钠缓冲液（pH4.5）和3.0mL的GOPOD试剂制备D-葡糖糖标准品（一式四份）通过混合0.1mLD-葡萄糖（1mg/mL）和3.0mL的GOPOD 试剂制备D-葡糖糖标准品。
（c）计算非抗性（可溶性的）淀粉1.收集起始孵育[(a)7.]过程中离心获得上清液和两次50%乙醇洗涤[(a)8.和9.]获得的上清液至容量瓶中。
用100mM的醋酸钠缓冲液（pH4.5）定容至100mL。
混匀。
2.以0.1 mL为单位孵育溶液（一式两份）并加入10μL稀释的AMG溶液(300U/mL), 50℃孵育20分钟,加入3.0 mL GOPOD试剂（溶液4），50℃孵育20分钟。
3.计算在510nm下相对于空白试剂的吸光度值。
4.计算非抗性淀粉的含量。
计算计算样品中抗性淀粉含量，非抗性淀粉含量和总淀粉含量（%，在干重的基础上），计算模板如下：抗性淀粉（g/100g样品）（样品包含>10%RS）=⊿E×F×100/0.1×1/1000×100/W×162/180=⊿E×F/W×90抗性淀粉（g/100g样品）（样品包含<10%RS）=⊿E×F×10.3/0.1×1/1000×100/W×162/180=⊿E×F/W×9.27非抗性淀粉含量（g/100g样品）=⊿E×F×100/0.1×1/1000×100/W×162/180=⊿E×F/W×90总淀粉含量=抗性淀粉含量+非抗性淀粉含量⊿E=相对于空白试剂的吸光度值F=从吸光度值到微克的转换（在GOPOD反应中100μgD-葡萄糖的吸光度值是确定的，F=100（D-葡萄糖的μg数）除以这100μgD-葡萄糖的GOPOD吸光度值）100/0.1=体积校正（从100mL取0.1mL）1/1000=从微克到毫克W=分析样本的干重=重量×（100-含水量）/100100/ W=RS在样品重量中百分比因子162/180=从测定获得的游离D-葡萄糖转换到淀粉中存在的脱水-D-葡萄糖的因子10.3/0.1=体积校正（从10.3 mL取0.1mL），对于含有0-10%RS，当孵育溶液时没有被稀释，最终体积为-10.3 mL。