高效液相色谱分离法

总结
• 高效液相色谱法的应用远远广于气相色谱法。它 广泛用于合成化学、石油化学、生命科学、临床 化学、药物研究、环境监测、食品检验及法学检 验等领域。据了解很多国家都在进一步投注于缩 短高效液相色谱的分析时间，提高它的分析效率 上，并逐步向自动化、智能化及质谱联用技术上 发展。那在不久的将来，伴随液相色谱技术的提 高，应用的扩展，对环境的监督力度势必有很大 提高。所以人们生活环境的质量也将会有一个全 新的状态，并将向更健康的生活状态中发展。
高效液相色谱分离法 在环境污染分析中的应用
主讲：黄超毅 1206081101210 陈林东 1206081101204 蔡惠琪 1206081101201
高效液相色谱法
高效液相色谱法又称“高压液相色谱”、 “高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、 “近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一 个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系 统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混 合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱 柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检 测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、 医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重 要的分离分析技术。
高效液相色谱法的应用
• • • • • 在生物化学和生物工程中的应用 在食品分析中的应用 在生命科学中的应用 在医学检验中的应用 在环境分析中的应用
1.在生物化学和生物工程中的应用
• 1.1氨基酸、多肽和蛋白质的分析研究、 • 1.2核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究 • 1.3生物胺的分析研究
3.在生命科学中的应用
• HPLC技术目前已成为生物化学家和医学家在分 子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、 分子生物学等必不可少的工具。其在生化领域的 应用主要集中于两个方面： • 3.1低分子量物质，如氨基酸、有机酸、有机胺、 类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定。 • 3.2高分子量物质，如多肽、核糖核酸、蛋白质和 酶（各种胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等） 的纯化、分离和测定。
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2.在食品分析中的应用
• 2.1食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、 色素、维生素、香料、有机酸（邻苯二甲酸、柠 檬酸、苹果酸等）、有机胺、矿物质等； • 2.2食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂 （合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、 日落黄、亮蓝等）、抗氧化剂等； • 2.3食品污染物分析：霉菌毒素（黄曲霉毒素、黄 杆菌毒素、大肠杆菌毒素等）、微量元素、多环 芳烃等。
• 过去对这些生物大分子的分离主要依赖于 等速电泳、经典离子交换色谱等技术，但 都有一定的局限性，远远不能满足生物化 学研究的需要。因为在生化领域中经常要 求从复杂的混合物基质，如培养基、发酵 液、体液、组织中对感性趣的物质进行有 效而又特异的分离，通常要求检测限达ng 级或pg级，或pmol，fmol，并要求重复性 好、快速、自动检测；制备分离、回收率 高且不失活。在这些方面，HPLC具有明显 的优势。
• 图为有机磷农药的分离谱 图。色谱柱为Lichrosorb RP-18( 微填充毛细管柱），流动 相为80%甲醇水溶液，流 量为40μL/min。色谱柱 后流出液经一石英毛细管 接口加热至300℃，用氮 气喷雾，溶剂挥发后，样 品被氮气带入热离子检测， 对磷的最小检出量为 0.2～0.5pg/s。
农药残留的检测
• 农药可分为杀菌剂、除草剂和杀虫剂。 • 有化学组成可分为有机氯农药、氨基甲酸 酯农药、含氮除草剂、笨氧氨基酸除草剂 等。各种农药使用后残留存在于土壤、水、 植物体中，对不易降解的农药，经食物链 会在人体中聚集，从而造成对人体健康的 危害。
• 有机氯农药在20世纪50~60 年代的广泛使用已造成对人 类居住环境的严重危害，现 已禁用。图为使用正向分配 色谱柱对有机农药的分离色 谱图。色谱柱为Micro Pak 载体涂渍 ，流动相为 异辛烷，流量0.5mL/min， 用UVD（254nm）检测。有 机磷农药施用后，受热会分 解，残留物危害较小，但其 自身有强毒性和恶臭味，施 用过程会对人畜造成伤害。
4.在医学检验中的应用
体液中代谢物测定；药代动力学研究；临 床药物监测： 4.1合成药物：抗生素、抗忧郁药物（冬 眠灵、氯丙咪嗪、安定、利眠宁、苯巴比 妥等）、黄胺类药等。 4.2天然药物生物碱（吲哚碱、颠茄碱、 鸦片碱、强心甙）等。
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5.在环境污染分析中的应用
• 高效液相色谱法适用于对环境中存在的高 沸点有机污染物的分析，如大气、水、土 壤和食品中存在的多环芳烃、多氯联苯、 有机氯农药、氨基甲酸酯农药、含氮除草 剂、笨氧氨基酸除草剂、酚类、胺类、黄 曲霉素、亚硝胺等。
氨基甲酸酯类农药具 有高效、低毒的特点。 图为氨基甲酸之类农 药的反相键合相色谱 分离谱图。
• 色谱柱为 μ-Bondapak 流动相为20%乙腈水溶液，进样后 20~60min使流动相中乙腈含量增至60%， 并保持至80min，检测器为UVD（220nm）， 实现23种分组的分离。此类农药还可以电 化学检测器检测。