吸入及食物过敏原

吸入性及食物性过敏原特异性IgE 抗体检测试剂盒的标准操作规程

1 目的：保证特异性IgE(sIgE)试验的正确操作，保证检验结果的准确可靠。

2 适用范围：临床免疫实验室

3 项目名称：吸入性及食物性过敏原特异性IgE 抗体检测试剂盒

4 项目方法：欧蒙印迹法

5．原理：采用免疫印迹法原理。

5．1 经缓冲液预处理的检测膜条与患者样本进行温育。如果样本阳性，IgE 类特异性抗体与相应的过敏原结合。

5．2 在洗涤之后，加入酶标单克隆的抗人IgE 抗体（酶结合物）进行第二步温育，以形成复合物。

5．3 在孵育之后，冲洗掉未结合的酶-抗-IgE，然后加入底物液，发生颜色反应。

5．4 终止反应之后，风干判读结果。

6．标本种类及收集、运送要求：

6．1 病人准备：要求患者在安静状态下；晨起的精神、体力、情绪等因素的影响较小，是标本采集的最佳时间；抽取肘部静脉血或毛细血管血。

6．2 标本种类：人血清或者EDTA、肝素或柠檬酸抗凝血浆。

6．3 标本稳定性：待测样本于2-8°C 条件下通常可保存14 天。稀释后的样本应在同一个工作日内检测。

6．4 标本稀释：患者样本不需稀释，直接检测。

6．5 标本容器：一般用真空采血管中的血清促凝管（红色头盖）或抗凝管（紫色或绿色头盖）。

6．6 标本最小用量：血清最小用量 1ml。

6．7 标本运送：标本采集于真空采血管后应尽快送实验室分析，物流系统可加快标本传递速度。若标本不能及时转运到实验室，应将真空采血管内的标本置冰瓶或冷藏箱内，运送过程中应避免剧烈震荡。当天无法运送的标本应分离血清后冷藏。

7．试剂：

7．1 来源：欧蒙公司.

7．2 规格： 16*1人份/盒

7. 3 试剂盒组成和代号：

主要组分：16 人份的试剂盒

7．4 储存和稳定性：2-8°C 保存，不要冰冻。未开封前，试剂盒可稳定至所标示的有效期。

已稀释的缓冲液必须在一个工作日内用完。

7．5 试剂的准备和稳定性：

7．5．1 试剂在使用前均应在室温（18-25℃）平衡30分钟左右。

7．5．2包被过敏原的检测膜条：直接使用。为防止膜条发生冷凝，只有当膜条平衡到室温后才可打开包装。取出膜条后应立即密封好原包装并将其保存于2-8°C。

7．5．3酶结合物：直接使用。使用前充分混匀。通用缓冲液：10 倍浓缩。在稀释前应充分混匀。用干净的吸管从瓶中吸取需要量用蒸馏水或去离子水1:10 稀释。由于欧蒙印迹法中使用了特殊的膜条，因而需要用已稀释的通用缓冲液稀释患者样本和清洗检测膜条。如需温育一条检测膜条，可取5ml 浓缩缓冲液用45ml 蒸馏水或去离子水稀释。稀释后的缓冲液应在同一个工作日用完。

7．5．4底物液：直接使用，因对光敏感，使用后应立即盖紧瓶盖。

7．6 注意事项：

7. 6. 1 本检测试剂仅用于体外诊断。

7. 6. 2 试剂盒中部分试剂含有毒性的叠氮钠，应避免接触皮肤。

7．7 废物处理：病人样本，质控血清和温育过的膜条必须作为潜在传染源处理，其余试剂

如果没有特殊官方规定不需要单独处理。

7．8 生物安全级别：按Ⅱ级执行。

8．其它辅助用品： Tip 、判读软件Eurolinescan。

9．使用仪器：EUROBLOTMASTER全自动蛋白印迹仪。

10.操作步骤：

仪器操作按《全自动蛋白印迹仪操作标准化规程》进行，只需分离血清上机、加样，包含温育、洗涤等各项操作均由仪器自动进行。

11．质控品的使用水平和频率：

质控品：每根膜条上均包含质控品，每个病人每次试验均有质控。

12．参考区间：

<0.35 kU A/l

13．报告结果：

13．1 标本检测结果手工输入中文电脑，数据经操作者初次审核，经小组负责人或中级职称以上的授权代理人再次审核后发出。

13．2 报告样式：欧蒙特异性IgE单位（kU A/l）

欧蒙特异性IgE用于测定特异性IgE抗体，测定值以kU/l为单位。≥0.35kU/l的值代表特异性过敏原抗体的相对浓度累进增加。<0.35kU/l的结果表明无或未检测到特异性过敏原抗体的含量。特异性IgE分级如下：

类别浓度[ kU/l] 结果

0 <0.35 kU/l 未检出特异性抗体。

1 0.35 kU/l -0.7 kU/l 特异性抗体滴度很低，通常没有临床症状，但比较敏感。

2 0.7 kU/l-3.5 kU/l 特异性抗体滴度低，具敏感性，如果浓度在该类别的上限，则通常有临床症状。

3 3.5 kU/l-17.5 kU/l 特异性抗体滴度显著，通常出现临床症状。

4 17.

5 kU/l-50 kU/l 特异性抗体滴度高，几乎总是出现临床症状。

5 50 kU/l-100 kU/l 特异性抗体滴度很高。

6 > 100 kU/l 特异性抗体滴度很高。

膜条上包被抗原位置：

14. 临床意义：

14．1过敏反应是一种对异物的超敏反应。这些异物通常无害，但在过敏反应患者中，则产

生强烈的反应。最常见的过敏反应为I 型过敏反应，其特征是形成特异性IgE 抗体。一旦跟过敏原接触很快就会产生诸如发红，水肿以及瘙痒等症状。典型的过敏反应有鼻炎、通常所说的花粉热、结膜炎和哮喘。接触过敏原的次数越多，过敏反应就会越严重。如果发生系统性过敏反应，可能会出现危及生命的严重反应（全身性过敏反应）。吸入性过敏反应可由季节性过敏原(树、草或种子的花粉)引起，也可由常年性过敏原（ 尘螨、霉菌孢子、宠物的唾液和皮屑） 引起。除了空气传播的过敏原（如花粉、灰尘和霉菌）可引起过敏反应外，还有食物也可引起过敏反应。

14. 2 最常见的食物过敏原有花生、大豆、小麦、贝类、鱼、牛奶、蛋类和坚果。食物过敏

位置 缩写 过敏原

1 ts20 树组合 2（柳树/杨树/榆树）

2 w1 普通豚草

3 w6 艾蒿

4 ds1 尘螨组合 1（屋尘螨/粉尘螨）

5 h1 屋尘

6 e1 猫毛

7 e2 狗上皮

8 i6 蟑螂

9 ms1 霉菌组合 1（点青霉 /分枝孢霉 /烟曲霉 /交链孢霉） 10 u80 律草 11 f1 鸡蛋白 12 f2 牛奶 13 f13 花生 14 f14 黄豆 15 f27 牛肉

16 f88 羊肉/羊羔肉

17 fs33 海鱼组合 1（鳕鱼/龙虾/扇贝） 18 fs34 淡水鱼组合 1（鲑鱼/鲈鱼/鲤鱼） 19 f24 虾/对虾 20 f23 蟹

21 CCD CCD 标记物 a

lnd 指示带