硝苯地平缓释片含量测定及体外释药机理研究

硝苯地平缓释片含量测定及体外释药机理研究刘壬通;陈惠文;潘雪刁;杨智承【摘要】Objective To establish a method for the content determination of nifedipine in Nifedipine Sustained Release Tablets by HPLC. Methods The chromatographic separation condition of determination was asfollows:Diamonsil C18 column(250 mm × 4. 6 mm,5 μm). The mobile phase consisted of methanol-water(60∶40)with the flow rate of 1. 0 mL/min. The wave length of detection was 237 nm and the column temperature was maintained at 30 ℃. Results The standard curve of nifedipine was linear within range of 4. 83-43. 55 μg/mL( r=0. 999 9). RSD of precision and reproducibility were 0. 91% and 1. 46% ( n=6 ) ,respectively. Average of recovery was 99. 94% with RSD of 0. 74%( n=9). Conclusion The determination method of content by HPLC is simple,quick,sensitive,fine reproducibility,which could be used to control the quality of nifedipine sustained release tablets.%目的：建立测定硝苯地平缓释片中硝苯地平含量的高效液相色谱（HPLC）法。

方法色谱柱为Diamonsil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5μm），流动相为甲醇－水（60∶40），检测波长为237 nm，流速为1mL/min，柱温为30℃。

结果硝苯地平对照品溶液质量浓度在4.83~43.55μg/mL （ r＝0.9999）范围内与峰面积呈良好线性关系，精密度、重复性试验结果的RSD分别为0.91%和1.46%( n＝6)，平均回收率为99.94%，RSD为0.74%( n＝9)。

结论该方法简便、快速、灵敏、重复性好，可用于硝苯地平缓释片的质量控制。

【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2016(025)006【总页数】4页(P54-56,57)【关键词】硝苯地平;缓释片;高效液相色谱法;含量测定;释放度【作者】刘壬通;陈惠文;潘雪刁;杨智承【作者单位】广东省惠东县妇幼保健院，广东惠州 516300;广东省惠东县妇幼保健院，广东惠州 516300;广东药学院，广东广州 510006;广东药学院，广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】R969.1;R972+.4硝苯地平是第1代钙拮抗剂，是目前公认的安全有效的一线降压药物[1]。

但治疗高血压的药物必须作用持久、效果稳定，而硝苯地平的持续作用时间较短，半衰期为4～5 h，一般常用量为每日2～3次[2－3]，且血药浓度波动大，会产生峰谷现象，引起较多不良反应。

为减少用药次数，使用药更安全，可通过改变工艺，采用亲水凝胶骨架材料，根据水分透过骨架微孔进而缓慢释放药物的原理[4]，研制出硝苯地平缓释剂型，使药物平缓释放，达到理想效果。

但2010年版《中国药典（二部）》并未对该缓释剂型含量的检测进行规定。

为更好地控制和评价该剂型的质量，本研究中采用高效液相色谱（HPLC）法测定硝苯地平缓释片中硝苯地平的含量，并考察其体外释放行为，方法准确、灵敏度高、快速简便，现报道如下。

仪器：Agilent1100 Series型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；UV－2450型紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；80－2型离心沉淀机（上海手术器械厂）；AB265－S型分析天平（梅特勒托利多公司）。

试药：硝苯地平对照品（中国药品生物制品检定所，批号为100338－200502）；硝苯地平缓释片（广东环球制药有限公司，批号为 111003－2，120815－2，121010－1，规格为每片5mg）；甲醇（广州化学试剂厂，色谱纯），水为超纯水（美国Milipore公司），其余试剂均为分析纯。

2．1 含量测定2．1．1 色谱条件[5]色谱柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇－水（60∶40）；检测波长：237 nm；流速：1m L／min；柱温：30℃；进样量：20μL。

2．1．2 溶液制备对照品溶液：避光操作。

精密称取硝苯地平对照品适量，置50m L棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度制成每1mL含20μg的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液：避光操作，取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于硝苯地平10mg），置50mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理使硝苯地平溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5m L，置50m L容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

阴性对照品溶液：按硝苯地平缓释片处方取处方中除硝苯地平外的其他辅料，按制备工艺制成阴性供试品，并依法制得。

2．1．3 方法学考察检测波长选择：精密称取硝苯地平对照品适量，加适量甲醇溶解配制成20μg／mL的溶液，在210～400 nm波长范围内扫描，紫外扫描图谱见图1。

结果在237 nm和233 nm波长处均有吸收峰，为提高检测灵敏度，最终选择 237 nm为检测波长。

专属性试验：分别取2.1.2项下硝苯地平对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液适量，按拟订色谱条件进样20μL，记录色谱图，见图2。

结果，在供试品溶液相同色谱峰处，阴性对照品溶液无吸收峰，表明硝苯地平对测定结果无干扰，方法专属性强。

标准曲线制备：避光操作。

精密称取硝苯地平对照品7mg，置25mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取0.4，0.9，1.8，2.7，3.6mL 置25m L棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成每1mL含硝苯地平4.83，10.89，21.77，32.66，43.55μg的系列溶液。

精密量取上述系列溶液各20μL注入高效液相色谱仪，按拟订色谱条件分别进样测定，记录色谱图。

以硝苯地平质量浓度（C，μg／mL）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标进行线性回归，得回归方程 A＝57.522C+22.987，r＝0.999 9(n＝5）。

结果表明，硝苯地平对照品溶液质量浓度在4．83～43．55μg／m L范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液20μL，重复进样6次，测定峰面积。

结果的 RSD为0．91%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，1，2，6，12，24 h时进样20μL，测定峰面积。

结果的 RSD为1．02%(n＝6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取同一批样品，按2．1．2项下方法平行制备供试品溶液6份，分别进样20μL。

结果的 RSD为1．46%（n＝6），表明方法重复性良好。

回收率试验：称取已知硝苯地平含量的供试品适量（约相当于硝苯地平7mg）9份，精密称定，置25m L棕色容量瓶中，分别加入硝苯地平对照品的量为80%，100%，120%各3份，加甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，精密吸取2mL置25mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。

按拟订色谱条件，进样20μL测定，计算回收率。

结果见表1。

2．1．4 样品含量测定分别取3批硝苯地平缓释片，按2．1．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算样品含量。

结果批号为111003－2，120815－2，121010－1的样品中硝苯地平平均含量分别为101．91%，100．26%，100．06%（n＝3）。

2．2 体外释药机理研究取本品，照2010年版《中国药典（二部）》附录ⅩD第二法的释放度测定法，采用第二法装置，以水（含1%的十二烷基硫酸钠）为释放介质，体积为900mL，转速为100 r／min，依法操作，分别于4，8，12，16，24 h时各取溶液5mL，并及时补充相同温度、相同体积的水，用0．45μm的滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，按拟订色谱条件进样检测，计算不同时间的累积释放率。

结果见图3。

为更直观地描述硝苯地平缓释片的体外释药机理，根据上述释放度测定结果，分别用不同释放模型（零级方程、一级方程、Higuchi方程、Ritger－Peppas方程、Weibull方程）进行线性拟合。

结果见表2。

可见，硝苯地平缓释片的体外释药符合Weibull释放模型，呈两相释药，前期快速释药，后期缓慢释药。

硝苯地平遇光不稳定，易分解成硝基苯吡啶衍生物和亚硝基吡啶衍生物，为避免影响测定结果，在整个操作过程中需注意避光。

本方法采用甲醇－水（60∶40）为流动相，有效地使硝苯地平与上述2种分解产物得到分离，保证了结果的准确性。

另外，本试验中曾试用不同的柱温进行测定，主峰保留时间和与分解产物的分离度基本无变化，但柱压变动较大，最后发现柱温为30℃时最佳。

试验结果显示，用HPLC法检测硝苯地平缓释片中硝苯地平的含量，方法回收率高、精密度好、简便、稳定可靠，可有效控制本品的质量，为该剂型确立质量标准提供了可靠依据。

本研究的另一目的在于探索硝苯地平缓释片的体外释药规律，为其体内释药行为提供一定的理论依据。

由表2可见，Weibull分布拟合的相关系数最大，说明该方程能很好地描述硝苯地平缓释片的体外释药特征。

另外，Ritger－Peppas方程拟合的相关系数也较大，Ritger－Peppas方程变换前的形式为 Q＝ktn，其中 n为释放参数，是该方程中表征释放机制的特征参数。

当n＜0.45时，药物释放机制为Fick′s扩散；当 n＞0.89时为骨架溶蚀；当0.45＜n＜0.89时，则为扩散和溶蚀的协同作用。

比较上述拟合结果可知，溶出参数 n＝1.199 5，表明主药以骨架溶蚀方式释药。

【相关文献】[1]陈光亮，王滨燕，戴小华，等．控释硝苯地平对不同证型高血压病的降压疗效的研究[J]．时珍国医国药，2012，23（2）：421－423．[2]段官平，李霞，杨成之．硝苯地平对人体平滑肌的作用研究进展[J]．中国现代医生，2010，48（1）：12－13．[3]凌俐，王东．缓释与控释硝苯地平对高血压患者的降压作用比较[J]．中国药房，2012，23（12）：1 116－1 117．[4]唐东霞，陈洪轩，和平．硝苯地平缓释片的研究[J]．中国现代药物应用，2007，1（4）：21－22．[5]王志强，吴继禹，夏锦泉．RP－HPLC法测定硝苯地平缓释片中硝苯地平的含量及分解产物[J]．安徽医药，2007，11（2）：132－133．。