样品制备与双向电泳技术
蛋白质双向电泳简介
IPG 胶的水合及上样
2-DE 样品
水合溶液
IPG 胶条支架
水合溶液：
8M
尿素
2%
NP-40 或 CHAPS
2%
IPG缓冲液 (两亲性电解液)
0.28% DTT
微量 溴酚蓝
IPG 胶条 定位
水合目的：使样品能完全以可溶形式进入IPG胶条内
蛋白载样量
IPG胶条对蛋白载样量的影响因素：
待分析的蛋白点的量应满足随后的质谱分析待研究蛋白的丰度 样品的复杂度
IPG 胶条的平衡
平衡液 6 M 尿素和30% 甘油 减少电内渗
SDS-PAGE均一胶各成分用量
双向电泳（2DE）示意图
等电聚焦，实现蛋白质按等电点进行分离
提取的总蛋 白溶液
大 分子量
SDS-PAGE 分离，使得 蛋白质按分 子量大小排 序
小
通过双向电泳使得不同等电点和分子量的 蛋白质根据其自身特性分布到凝胶的不同
位置从而实现蛋白质的双向分离
步骤
样品制备 胶条水合 等电聚焦 聚焦后胶条平衡 第二相SDS-PAGE 分离蛋白质的检测与匹配分析
通过细胞破碎方法从原材料中提取粗蛋白质, 然后用含变性剂(或离液剂)、去污剂和还原剂 的裂解液溶解蛋白并使其变性。提取的蛋白可 用裂解液稀释。裂解液也可结合IPG胶条上基 质以维持IEF期间的蛋白质的稳定性。变性剂 尿素和硫脲与IEF兼容。用高浓度的变性剂以 打断蛋白质样品中的氢键结构。使用非离子型 或两性去污剂以破坏疏水交互作用。
在蛋白样品裂解时,应以溶解尽可能多的蛋白 质和保持在整个双向电泳过程中蛋白质的溶解 性为主要目标。根据目前的实践经验,蛋白质 变性成为多肽链便于多肽序列能够与其相应基
因序列匹配。二次样品制备的目的是去除干扰 双向电泳的非蛋白物质(如盐、酚类物质、脂 类、多糖和核酸等)和阻止在双向电泳谱中导 致假点的多肽或蛋白修饰。此外,用于样品制 备的药剂必须与等电聚焦兼容。
6第四节 双向电泳(2DGE)-生化分析
二、 双向电泳技术
1．ISO-Dalt系统 向将不同pI的蛋白质通过等电聚焦电泳分离，获
得了按等电点差异分离的蛋白质组分，然后再经 SDS-PAGE，将等电点相同或相近的、相对分子质 量有差异的蛋白质组分分开，最终得到不同相对分 子质量的蛋白质组分。
一般情况细胞内同时具有pI和相对分子质量都相同的 蛋白质，其概率是非常少的。所以，双向电泳得到的蛋白 质组分绝大部分都是单一组分。
2．IPG-Dalt系统 原理：固相pH介质是丙烯酰胺的衍生物，通过化学 方法以共价键的形式结合到聚丙烯酰胺凝胶上。pH 梯度在凝胶聚合时就已经形成，所以，该pH梯度不 受脱水、重新水化和电场等因素的影响，能得到很 稳定的pH梯度，不会产生pH漂移，电泳时不同pI的 蛋白质，根据其pI聚焦在相应的位置。
5 000～8 000多种蛋白质，这是其他任何分析鉴定技 术无法与其相比的。所以，双向电泳在样品的全组分 鉴定中占有重要的地位。
1970年Kaltschimidt 和Wittmann提出了用双向电 泳技术分离有效组分的研究。 双向电泳(two-dimensional electrophoresis，简称 2DE)分离技术是将样品进行一次电泳后，再沿它 的直角方向进行一次电泳。 随着双向电泳第一向的等电聚焦技术的发展，等 电聚焦形成的pH梯度有载体两性电解质pH梯度、 固相pH梯度及二者的“杂交”技术形成的pH梯 度。这些技术被引入双向电泳中以后，大大提高 了双向电泳的分辨率和重复性。
双向电泳
双向电泳的应用及研究进展摘要:双向电泳是蛋白质组学研究中最常用的技术,具有简便、快速、高分辨率和重复性等优点。
本文重点介绍了双向电泳的基本原理及其应用。
同时对当前双向电泳技术面临的挑战和发展前景进行了讨论。
关键词: 双向电泳，应用，前景1.1双向电泳技术概述双向电泳（two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE）是蛋白分离的黄金标准，由此可以分析生物样品的显著差别，产生的结果用于诊断疾病、发现新的药物靶标和分析潜在的环境和药物的毒性。
双向电泳分离技术利用复杂蛋白混合物中单个组分的电泳迁移，第一向通过电荷的不同分离，另一向通过质量的不同分离。
双向电泳协同质谱技术是正在出现的蛋白组学领域的中心技术。
双向电泳是一种分析从细胞、组织或其他生物样本中提取的蛋白质混合物的有力手段，是目前唯一能将数千种蛋白质同时分离与展示的分离技术，其高分辨率、高重复性和兼具微量制备的性能是其他分离方法所无与伦比的。
双向电泳技术、计算机图像分析与大规模数据处理技术以及质谱技术被称为蛋白质组研究的三大基本支撑技术。
可见双向电泳在蛋白质组学研究中的重要性。
就像Fey和Larsen在他们的综述中提到：“尽管人们都想有新技术取代它，可是如果希望对细胞活动有全面的认识，其他技术无法在分辨率和灵敏度上与双向电泳相媲美”。
1.2双向电泳基本原理1975年,意大利生化学家O’Farrell发明了双向电泳技术[1],双向电泳是指利用蛋白质的带电性和分子量大小的差异,通过两次凝胶电泳达到分离蛋白质群的技术。
双向电泳技术依据两个不同的物理化学原理分离蛋白质。
第一向电泳依据蛋白质的等电点不同,通过等电聚焦将带不同净电荷的蛋白质进行分离。
在此基础上进行第二向的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,它依据蛋白质分子量的不同将之分离。
双向电泳所得结果的斑点序列都对应着样品中的单一蛋白。
因此，上千种蛋白质均能被分离开来，并且各种蛋白质的等电点，分子量和含量的信息都能得到。
双向电泳的
IPG IEF 中pH梯度的选择 pH梯度的选择
常用方法：先宽后窄，先线性后非线性， 先短后长，预试验确定。
胰酶对脱色后蛋白质的消化 质谱的多肽指纹图、 质谱的多肽指纹图、微测序分析 质谱结果的生物信息学分析和比对 新蛋白质的发现
蛋白信息的 初步获得
其它实验 的进一步 验证
蛋白质组研究的基本技术路线
蛋白质样品的制备 双向电泳 凝胶中的蛋白 混合肽 肽指纹图 肽序列质谱数据 蛋白质质量 数据搜索 新的或已知蛋白 蛋白转录后修饰的鉴定 N端测序 端测序 图像分析 溶液中的蛋白
双向电泳的 技术流程和样品制备
史须 北京大学人类疾病基因研究中心
基因组学与蛋白质组学
基因组学： 蛋白质组学：可视为分子生物学的大规模筛选 技术，目的在于归类细胞中的蛋白质的整体分 布，鉴定并分析感兴趣的个别蛋白，最终阐明 它们的关系与功能。 上述两种学科的研究内容在互补的水平上研究 了细胞的分子架构，又都在各自的水平上提供 了增强对方效应的信息，因此二者存在有很强 的且带有系统性相互关系。
增加样品溶解性的手段
变性剂： 变性剂：通过改变溶液中的氢键结构使蛋白质充分伸 展，将其疏水中心完全暴露，降低接近疏水残基的能 量域。其典型代表是尿素和硫尿。 表面活性剂： 表面活性剂：经过变性剂处理而暴露蛋白质的疏水基 团后，还常需至少一种表面活性剂来溶解疏水基团。 常用的表面活性剂有离子去污剂SDS、非离子去污剂 Triton X-100和NP-40、两性离子去污剂CHAPS、OBG 等。其中CHAPS和SB3-10最好。 还原剂： 还原剂：在变性剂和表面活性剂联用条件下，加用还 原剂可使已变性的蛋白质展开更完全，溶解更彻底。 常用含自由巯基的DTT或β-巯基乙醇，以及不带电荷 的三丁基膦（TBP）进行还原。
双向电泳
另一方面，溶液中的两性电解质又破坏了水的解离平衡：
H2O
H++OH－
使溶液的pH有所改变。当某一两性电解质的pI较低，即释
放质子（ H+ ）能力较强，使溶液 pH 值下降，这类两性电
解质称为酸性两性电解质；而pI高的两性电解质可使溶液
1.2.1组合摸式：双向电泳主要是电荷分离——分子质量分 离的组合摸式。 （ 1 ）第一向为电荷分离：通过聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦 毛细管电泳将样品按蛋白质等电点的差异进行分离。 （ 2 ）第二向为质量分离：通过 SDS— 聚丙稀酰胺凝胶电 泳按相对分子质量大小不同进行分离。
1.2.2分类：双向电泳根据其第一向使用的介质的不同可以
们到达净电荷为零的位置时才停止。
具有最低和最高等电点的分子带电荷最多，泳动速度最快， 所以pI梯度的形成开始在正、负级两端，然后不同pI的载 体两性电解质分子逐渐到达它们自己的等电点位置而形成
一个连续的pI梯度。如图所示。
A
B
C
载体两性电解质在电场中形成pI梯度的模式图
A 原始状态 B pI梯度的形成过程 C连续pI梯度的形成
出的优点。
图 等电聚焦的“聚焦效应”
等电聚焦电泳根据蛋白质等电点不同而将其分离，也可以根据蛋白 条带在pH梯度中形成的位置测定其等电点。
3第二向电泳——SDS电泳的基本原理
3.1蛋白质-SDS复合物
(1)SDS的作用：SDS是一种阴离子去污剂，它在水溶液中
以单体和分子团(micellae)的混合形式存在，作为一种变性
中存在三个物理效应和四个不连续性的分离系统。
3.2.1三个物理效应
橡胶树胶乳C-乳清双向电泳样品制备技术的建立及优化
关键词 ：橡胶树 ｃ乳 清；双 向电泳 ；Ｔ Ｍ 丙酮沉淀法；双 乙法；超声助溶 ． Ｃ
Ｄ ｉ１ ． ６ ￣ｉｓ． ０ －７ １ ０ ２０ ． ４ ｏ： ０ ９ ９ ． ｎ１ ９７ ９ ． １ ． ０ ３ ｓ ０ ２ ３０
中图分类号 ：Ｑ ４ —３ ￥ ９ ． ９ ６３ ； ７ ４１
文献标识码 ：Ａ
文章编号 ：１０ ．７ １２ １）３０ １ ．５ ０９７ ９ （０ ２０ ．０ ６０
Ｏｐ ｉ ｚ ｔｏ ｆ ｒ ｔ ｉ ｅ ａ ａ ｉ ｎ Ｓ ｉ ｂ ｅｆ ｒ２ ＤＥ ｆ ｔｍｉａ ｉ ｎ ｏ ｏ ｅｎ Ｐｒ ｐ ｒ ｔ ｕ ｔ ｌ － Ｐ ｏ ａ ｏ ｏ Ｈｅ ｅ ｒ ｓｌ ｎ ｉ ｓ ｒ ｍ ｖ ａｂ ａ ｉ ｅ ｓｓＣ．ｅ ｕ ｉ
Ａｇ ｉ ｕ ｔ ｒ ｃ ｅ ｃ ｓ ｒｃ ｌ ａ Ｓ ｉｎ ｅ ，Ｄａ ｚ ｏ ７１ ３ ，Ｈａｎ ｎ Ｃｈｎ ；２ Ａｇ ｃ ｌ ａ ｌ ｇ ｆ Ｈａｎ ｎ Ｕｎ ｖ ｒ ｉ ，Ｄａ ｚ ｏ ，Ｈａ ｎ ｎ ｕｌ ｎ ｈ ｕ ５ ７ ７ ｉ ａ ｉ ａ ． ｒ ｕ ｔ ｌ Ｃｏ ｌ ｅ ｏ ｉ ａ ｉ ｅ ｓ ｙ ｉ ｒ ｕ ｅ ｔ ｎｈ ｕ ｉａ
双 乙法＋ 超声处理 ） 所获得 的ｃ乳清蛋 白样品的溶解性大幅增加 ， 白 率高达８ ７ ｇ Ｅ － 清， 一 蛋 得 ． ｒ ／ Ｃ乳 ４ａ ｍ 为传统Ｔ Ｍ Ｃ
丙酮法 的１ 倍 ；同时降低 了盐 离子浓度 ，等 电聚焦 时升压顺利 、聚 焦完全 ，双 向电泳的图谱 质量明显改善 ， ． ６ 在银染２ 胶 上可获得 １ ０ 个蛋 白点 ，为传统Ｔ Ｍ 丙酮 法的２ 倍 。本文对胶乳ｃ 乳 清蛋 白样品制备方法进行 深 Ｄ ６ ２ Ｃ ． ７ ．
双向电泳法
双向电泳法双向电泳法（Bidimensional Electrophoresis，2-DE）是一种常用的蛋白质分离技术，可以同时分析样品中上千种蛋白质。
本文将详细介绍双向电泳法的原理、步骤和应用。
原理双向电泳法结合了等电聚焦（IEF）和SDS-PAGE两种技术，通过两个维度的分离将复杂的蛋白质混合物分解为一系列单独的斑点。
在第一维度中，根据蛋白质的等电点（pI）进行分离；在第二维度中，根据蛋白质的分子量进行分离。
通过将这两个维度的分离结果叠加，可以获得高分辨率的蛋白质图谱。
双向电泳法的关键步骤如下：1.等电聚焦（IEF）：在第一维度中，使用等电聚焦技术将样品中的蛋白质按照其等电点进行分离。
等电聚焦是一种基于蛋白质在电场中向氧化物离子（OH-）或氢离子（H+）方向移动的分离方法。
在等电聚焦过程中，蛋白质会在pH梯度中向其等电点迁移，直到净电荷为零。
通过控制pH梯度和应用的电压，可以将蛋白质在等电聚焦过程中分离开。
2.SDS-PAGE分离：在第二维度中，将第一维度的等电聚焦凝胶与SDS-PAGE凝胶垂直叠加。
在SDS-PAGE凝胶中，蛋白质通过聚丙烯酰胺凝胶的孔隙随着电场的作用向阳极迁移。
由于SDS（十二烷基硫酸钠）的存在，蛋白质在SDS-PAGE凝胶中的迁移速度与其分子量成反比。
因此，蛋白质在SDS-PAGE 凝胶中会根据其分子量进行分离。
3.染色和分析：经过双向电泳分离后，凝胶可以通过染色方法显示出一系列斑点，每个斑点代表一个蛋白质。
常用的染色方法包括银染法、荧光染色、贵金属染色等。
对于银染法，它在灵敏度和线性范围上具有优势。
染色后可以使用成像设备捕捉图像并进行定量分析。
通过对斑点的比较和定量，可以识别不同样品之间的差异和变化。
步骤双向电泳法的步骤如下：1.样品制备：将待分析的生物样品（如细胞提取物）进行蛋白质提取，并使得蛋白质在石蜡中可溶解。
常用的方法包括总蛋白提取、亲和层析、激光捕获等。
2.等电聚焦（IEF）：将蛋白质样品与具有连续pH梯度的凝胶进行接触。
双向电泳步骤--标准操作完整版
细胞裂解（蛋白质提取）一、试剂配置：PBS配方PBS缓冲液一般作为溶剂氯化钠(MW 58.44) 130mM 8g氯化钾(MW 74.5) 2.7mM 0.2g十二水和磷酸氢二钠(MW 358) 10 mM 3.63g磷酸二氢钾(MW 136) 2 mM 0.24g加水至1L配好后进行高压灭菌。
Washing buffer（500mL）配方Tris（MW 121.1） 10mM 0.605g蔗糖（MW 342） 250mM 42.75g加水溶解，用HCl调pH至7.0后用孔径为0.22µm滤膜过滤（使用1M盐酸略高于2750uL调pH）裂解储液配方（细胞）：尿素(MW 60.06) 7M 4.2g硫脲(MW 76.12) 2M 1.52gCHAPS(MW614.89) 4%（W/V）0.4g 加超纯水定容至10mL后经0.22µm一次性滤膜过滤，过滤后分装成20小管，每小管500uL，-20℃冰箱保存。
裂解储液配方（组织）：尿素(MW 60.06) 5M 3g硫脲(MW 76.12) 2M 1.52gCHAPS(MW614.89) 2% 0.2gTris（MW 121.1） 40mM 0.048g加超纯水定容至10mL后经0.22µm一次性滤膜过滤，过滤后分装成20小管，每小管500uL，-20℃冰箱保存。
裂解液：裂解液储液 100uLIPG buffer（pH可选） 2% 2uLPi 2uLNucLease mix（100×） 1uLPMSF（100mM：20mg/mL） 1mM 1uLDTT（0.411g/mL） 40mM 1.5uLPi：每片使用200uL超纯水溶解后按10 uL分装考马斯亮蓝G-250：考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。
其光吸收值与蛋白质含量成正比。
双向电泳的样品制备 GE公司ppt实用资料
+ DNase
- DNase
13 / GE / 7/23/2021
质脂
May interact with membrane proteins, “consume” detergents and form insoluble precipitates
Remedies: • organic solvents (ethanol) • phenol • protein precipitation (e.g. TCA/acetone, 2-D Clean Up Kit)
7/ GE / 7/23/2021
干扰物质
• Proteases
• Nucleic acids
• Polysaccharides
• Plant phenols
• Lipids
• Salt ioห้องสมุดไป่ตู้s
• Insoluble material
8/ GE / 7/23/2021
如何使蛋白酶失活
Problem: Cell lysis → endogenous proteases set free → proteolytic attack → artifacts (Mr, pI)
Nucleases will not work in 8 M urea
“electrophoretic desalting I”: remove salt ions by appropriate electrode papers in a gel-side up focusing device (Ettan IPGphor Manifold,
(pI ~5, MW ~30 kDa)
Reductant (DTT, 2-mercaptoethanol)
双向电泳实验流程
双向电泳实验流程样品制备( Sample preparation ) 固相预制胶条的水化( IPG strip rehydration ) 第一向等电聚焦( IEF)胶条的平衡( IPG strip equilibration )第二向SDS-PAG电泳(SDS-PAGE electrophresis )凝胶的染色及检测( Detection/Staining )PDQuest软件分析(Software analysis )质谱鉴定( Protein identification )目录第一章实验材料1．1 IPG 预制胶条及载体两性电解质1．2 蛋白质定量试剂盒及其试剂1．3 蛋白样品制备试剂盒及其试剂1．4 化学试剂1．5 蛋白质Marker1．6 染色试剂1．7 注意事项第二章SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳2. 1 溶液的配制2. 2 SDS-PAGE 凝胶的配制2. 3 操作方法2. 4 注意事项ATy -_*双向电泳3. 1 溶液配制3. 2 操作步骤3. 3 注意事项附录1 双向电泳完整的操作步骤附录2 聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配置附录3 细胞样品的一般处理步骤附录4组织样品的一般处理步骤第一章实验材料1．1 IPG 预制胶条及载体两性电解质Bio-Rad公司），-20 C冰箱保存，每包12根一）IPG 预制胶条（美国项目规格货号原价（元）IPG 预制胶条pH 3-10 ，7 cm 163-2000 799 IPG 预制胶条pH 3-10 ，7 cm ，nonlinear （NL）163-2002 799 IPG 预制胶条pH 4-7 ，7 cm 163-2001 799 IPG 预制胶条pH 3-6 ，7 cm 163-2003 799 IPG 预制胶条pH 5-8 ，7 cm 163-2004 799 IPG 预制胶条pH 7-10 ，7 cm 163-2005 799 IPG 预制胶条pH 3.9-5.1 ，7cm 163-2028 799 IPG 预制胶条pH 4.7-5.9 ，7cm 163-2029 799 IPG 预制胶条pH 5.5-6.7 ，7cm 163-2030 799 IPG 预制胶条pH 6.3-8.3 ，7cm 163-2031 799 IPG 预制胶条pH 3-10 ，11cm 163-2014 957 IPG 预制胶条pH 3-10 ，11cm，nonlinear （NL）163-2016 957 IPG 预制胶条pH 4-7 ，11cm 163-2015 957 IPG 预制胶条pH 3-6 ，11cm 163-2017 957 IPG 预制胶条pH 5-8 ，11cm 163-2018 957 IPG 预制胶条pH 7-10 ，11cm 163-2019 957 IPG 预制胶条pH 3.9-5.1 ，11cm 163-2024 957 IPG 预制胶条pH 4.7-5.9 ，11cm 163-2025 957 IPG 预制胶条pH 5.5-6.7 ，11cm 163-2026 957 IPG 预制胶条pH 6.3-8.3 ，11cm 163-2027 957 IPG 预制胶条pH 3-10 ，17cm 163-2007 1079 IPG 预制胶条pH 3-10 ，17 cm ，nonlinear （NL ）163-2009 1079 IPG 预制胶条pH 4-7 ，17cm 163-2008 1079 IPG 预制胶条pH 3-6 ，17cm 163-2010 1079 IPG 预制胶条pH 5-8 ，17cm 163-2011 1079 IPG 预制胶条pH 7-10 ，17cm 163-2012 1079 IPG 预制胶条pH 3.9-5.1 ，17cm 163-2020 1079IPG 预制胶条pH 4.7-5.9 ，17cm 163-2021 1079 IPG 预制胶条pH 5.5-6.7 ，17cm 163-2022 1079 IPG 预制胶条pH 6.3-8.3 ，17cm 163-2023 1079 IPG 预制胶条pH 3-10 ，18cm 163-2032 1079 IPG 预制胶条pH 3-10 ，18cm，nonlinear （NL ）163-2033 1079 IPG 预制胶条pH 4-7 ，18cm 163-2034 1079 IPG 预制胶条pH 3-6 ，18cm 163-2035 1079 IPG 预制胶条pH 5-8 ，18cm 163-2036 1079 IPG 预制胶条pH 7-10 ，18cm 163-2037 1079 IPG 预制胶条pH 3.9-5.1 ，18cm 163-2038 1079 IPG 预制胶条pH 4.7-5.9 ，18cm 163-2039 1079 IPG 预制胶条pH 5.5-6.7 ，18cm 163-2040 1079 IPG 预制胶条pH 6.3-8.3 ，18cm 163-2041 1079 IPG 预制胶条pH 3-10 ，24cm 163-2042 1292 IPG 预制胶条pH 3-10 ，24cm，nonlinear （NL ）163-2043 1292 IPG 预制胶条pH 4-7 ，24cm 163-2044 1292 IPG 预制胶条pH 3-6 ，24cm 163-2045 1292 IPG 预制胶条pH 5-8 ，24cm 163-2046 1292 IPG 预制胶条pH 7-10 ，24cm 163-2047 1292 IPG 预制胶条pH 3.9-5.1 ，24cm 163-2048 1292 IPG 预制胶条pH 4.7-5.9 ，24cm 163-2049 1292 IPG 预制胶条pH 5.5-6.7 ，24cm 163-2050 1292 IPG 预制胶条pH 6.3-8.3 ，24cm 163-2051 1292（二）载体两性电解质（美国Bio-Rad公司），4C冰箱保存项目货号原价（元）Bio-Lyte 3/10 Ampholyte ，40%，10ml 163-1112 1704 Bio-Lyte 3/10 Ampholyte ，40%，25ml 163-1113 2463 Bio-Lyte 3/5 Ampholyte ，20%，10ml 163-1132 3275 Bio-Lyte 4/6 Ampholyte ，40%，10ml 163-1142 3713 Bio-Lyte 4/6 Ampholyte ，40%，25ml 163-1143 9287 Bio-Lyte 5/7 Ampholyte ，40%，10ml 163-1152 2984 Bio-Lyte 5/7 Ampholyte ，40%，25ml 163-1153 7540 Bio-Lyte 6/8 Ampholyte ，40%，10ml 163-1162 3569 Bio-Lyte 6/8 Ampholyte ，40%，25ml 163-1163 8187Bio-Lyte 7/9 Ampholyte，40%，10ml 163-1172 3479 Bio-Lyte 8/10 Ampholyte ，20%，10ml 163-1182 1912Bio-Lyte 5/8Ampholyte，40%，10ml 163-1192 3275Bio-Lyte 5/8Ampholyte，40%，25ml 163-1193 8114（三）等电聚焦上样缓冲液（美国Bio-Rad 公司），4C冰箱保存项目货号原价（元）100x ReadyStrip Buffer , for pH 7-10 IPG Strips , 1ml 163-2093 744Bio-Lyte 3/10 Ampholyte , 100x, 1ml 163-2094 396100x ReadyStrip Buffer ，for pH 6.8-8.3 IPG Strips ，1ml 163-2095566 100x ReadyStrip Buffer ，for pH 5.5-6.7 IPG Strips ，1ml 163-2096 774100x ReadyStrip Buffer ，for pH 4.7-5.9 IPG Strips ，1ml 163-2097 545100x ReadyStrip Buffer ，for pH 3.5-5.1 IPG Strips ，1ml 163-20985921．2 蛋白质定量试剂盒及其试剂项目货号报价（元）Protein Assay Kit I , bovine 丫-globulin standard 500-0001 919Protein Assay Kit II ，BSA standard 500-0002 919Protein Standard I, bovine 丫-globulin , 1 bottle 500-0005429 Protein Assay Dye Reagent Concentrate，450ml 500-0006 690Protein Standard II，bovine serum albumin，1 bottle 500-0007 365Quick Start Protein Assay Kit I ,Bradford 法500-0201 934De Protein Assay Kit I , bovine 丫-globulin standard 500-0111 2281 De Protein Assay Kit n, BSA standard 500-0112 2281 RC DC Protein Assay Kit I , 丫-globulin , Lowry 法500-0121 3183 RC DC Protein Assay Kit II , BSA standard , Lowry 法500-0122 31831．3 蛋白样品制备试剂盒及其试剂项目Ready-Prep 2-D Cleanup KitReadyPrep Sequential Extraction Kit Tributylphosphine （TBP ），200mM ，0.6ml ReadyPrep Sequential Extraction Kit Reagent 1货号原价（元）163-2130 2533163-2100 2969163-2101 539 1vial 163-2102 1116ReadyPrep Sequential Extraction Kit Reagent 2 ，1vial 163-2103 909 ReadyPrep Sequential Extraction Kit Reagent 3 ，1vial 163-2104 646 ReadyPrep 2-D Starter Kit 163-2105 3250 ReadyPrep 2-D Starter Kit Rehydration/Sample Buffer 163-2106 331 ReadyPrep Starter Kit Equilibration Buffer I ，with DTT 163-2107 508 ReadyPrep Starter Kit Equilibration BufferII 163-2108 498E.coli Protein Sample ，lyophilized ，2.7mg 163-2110 446ReadyPrep Overlay Agarose，50ml 163-2111 287 ProteoMiner Protein Enrichment SmallCapacity Kit 163-3006 3699 ProteoMiner Protein Enrichment Large-Capacity Kit 163-2007 5618 Aurum Serum Protein Mini Kit 732-6701 1513 Aurum Affi-Gel Blue Mini Columns 732-6708 1873 ReadyPrep Protein Extraction Kit (Cytoplasmic/Nuclear) 163-2089 4919 ReadyPrep Protein Extraction Kit (Membrane I) 163-2088 4919 ReadyPrep Protein Extraction Kit (Membrane II) 163-2084 2986 ReadyPrep Protein Extraction Kit (Signal) 163-2087 28151．4 化学试剂项目尿素Urea，250g 尿素Urea，1kgAG 501-X8 (D)Mixed Bed ResinCHAPS ，1gTriton X-100 ，500mlDTT (Dithiothreitol )，1gDTT (Dithiothreitol )，5g Tributylphosphine ( TBP )，200mM ，0.6ml 碘乙酰胺Iodoacetamide，30g 溴酚蓝( Bromophenol Blue )，10g 矿物油( Mineral Oil )，500ml SDS，100gSDS，1kg Tris ，500g Tris ，1kg 低熔点琼脂糖，25g 甘氨酸，1kg 货号161-0730161-0731142-6425161-0460161-0407161-0610161-0611163-2101163-2109161-0404163-2129161-0301161-0302161-0716161-0719161-3111161-0718原价（元）22268527713904212917315391429501298368199181311511360713甘氨酸，2kg 161-0724 1671 丙烯酰胺(Acrylamide ), 99.9% , 500g 161-0101 919 丙烯酰胺(Acrylamide ), 99.9% , 2kg 161-0103 3411 丙烯酰胺(Acrylamide ), 99.9% , 1kg 161-0107 1870 丙烯酰胺(Acrylamide ), 99.9% , 5kg 161-0108 8514 甲叉双丙烯酰胺（Bis）, 5g 161-0200 294 PDA (Piperazine Diacrylamide ), 10g 161-0202 1902 PDA (Piperazine Diacrylamide ), 50g 161-0203 17361 过硫酸氨(Ammonium Persulfate ), 10g 161-0700 155 过硫酸氨(Ammonium Persulfate )，100g 161-0754 1153 TEMED，5ml 161-0800 207 TEMED，50ml 161-0801 485 甘油Sigma硫尿Sigma1. 5 蛋白质标准品Marker项目货号原价（元）Unstained SDS-PAGE Standards，high range，200 'l 161-0303 689 Unstained SDS-PAGE Standards，low range，200'l 161-0304 689 Unstained SDS-PAGE Standards，broad range，200'l 161-0317 884 Polypeptide SDS-PAGE Standards，200._l 161-0326 692 Prestained SDS-PAGE Standards, high range，500^1 161-0309 689 Prestained SDS-PAGE Standards, low range，500^1 161-0305 689 Prestained SDS-PAGE Standards, broad range，500^1 161-0318 800 Precision Plus Std Unstained，1ml 161-0363 1168 Precision Plus Std Dual Color，500ul 161-0374 1080 2-D SDS-PAGE Standards，500 J 161-0320 1457 IEF Standards，pl range 4.45-9.6，250^1 161-0310 16211. 6染色试剂项目Coomassie Brilliant Blue R-250 , 10gCoomassie Brilliant Blue G-250 , 10gCoomassie Brilliant Blue R-250 Staining Solutions Kit Coomassie Brilliant Blue R-250 Staining Solutions ,货号原价（元）161-0400 413161-0406 670161-0435 1440 1L 161-0436 464Coomassie Brilliant Blue R-250 Staining Solutions ，4 X 1L 161-0437 1856 Coomassie Brilliant Blue R-250 Destaining Solutions ，1L 161-0438 488Coomassie Brilliant Blue R-250 Destaining Solutions ，4X 1L 161-0439 1952 Bio-Safe Coomassie Stain ，1L 161-0786 878 Bio-Safe Coomassie Stain ，5L 161-0787 3493 SYPRO Ruby Protein Gel Stain ，200ml 170-3126 2226 SYPRO Ruby Protein Gel Stain ，1L 170-3125 5725 SYPRO Ruby Protein Gel Stain ，5L 170-3138 16744Silver Stain Kit 161-0443 3933 Silver Stain Plus Kit （质谱兼容）161-0449 28541．7 注意事项1. 双向电泳中所用的化学试剂纯度要高，至少为分析级，尽量选用进口试剂。