细胞计数及活力测定
细胞活力检测实验报告
一、实验目的细胞活力是细胞生物学研究中非常重要的指标，能够反映细胞在特定条件下的生长、代谢和功能状态。
本实验旨在通过多种方法检测细胞活力，了解细胞在不同条件下的生长情况，为后续实验研究提供依据。
二、实验材料1. 细胞：人胚胎肾细胞（HEK293）2. 试剂：台盼蓝染色液、CCK-8试剂盒、Resazurin细胞活力检测试剂盒、ATP含量测定试剂盒、细胞培养液、培养基、PBS缓冲液等3. 仪器：显微镜、酶标仪、细胞计数板、细胞培养箱、超净工作台等三、实验方法1. 台盼蓝染色法（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。
（2）用PBS缓冲液洗涤细胞，加入适量的台盼蓝染色液，室温孵育5分钟。
（3）用PBS缓冲液洗涤细胞，观察细胞染色情况。
2. CCK-8试剂盒检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。
（2）弃去原培养液，加入100μl新鲜培养基。
（3）加入10μl CCK-8试剂，避光孵育2小时。
（4）用酶标仪检测450nm波长下的吸光度（OD值）。
3. Resazurin细胞活力检测试剂盒检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。
（2）弃去原培养液，加入100μl新鲜培养基。
（3）加入10μl Resazurin试剂，37℃孵育4小时。
（4）用酶标仪检测570nm和600nm波长下的吸光度（OD值）。
4. ATP含量测定法检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。
（2）弃去原培养液，加入100μl ATP含量测定试剂盒，室温孵育10分钟。
（3）用酶标仪检测560nm波长下的吸光度（OD值）。
四、实验结果与分析1. 台盼蓝染色法通过显微镜观察，活细胞不着色，死细胞被染成蓝色。
细胞增殖及细胞活力检测方法
细胞增殖及细胞活力检测方法1.细胞计数法细胞计数法是最常用的细胞增殖检测方法之一、该方法通过显微镜观察细胞密度和数量来判断细胞的增殖情况。
首先，将培养皿中的细胞样本取出，使用显微镜观察细胞的形态和数量，然后用显微镜同时观察已知数量的细胞，计算出单位面积或体积中的细胞数量，最后通过比较细胞数量的变化来评估细胞的增殖情况。
2.三(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑盐(MTT)法MTT法是一种常用的细胞活力检测方法。
MTT是一种黄色噻唑盐，可以通过还原作用转化为紫色的甲氧基-4-硝基苯胺（formazan），这个转化过程是仅在活细胞中发生的。
首先，将MTT溶液加入细胞培养皿中，细胞内的活细胞色素（还原酶）可以将MTT转化为紫色的formazan。
然后，用溶剂将formazan溶解，测量溶液的吸光度，就可以通过测量吸光度的变化来评估细胞的活力。
3.荧光素酶体积法（ATP法）ATP法是一种用于检测细胞的能量代谢水平的方法。
ATP是细胞内的能量分子，在细胞进行代谢活动时会不断产生。
将细胞样品加入含有高能底物的反应溶液中，ATP酶将底物中的ATP转化为体积比较大的荧光素酶（luciferin）。
接下来，荧光素酶与荧光素生成一个反应产生的发光，发光强度与ATP浓度成正比。
通过测量发光强度来评估细胞的活力。
4.分子探针染色法分子探针是一种与特定分子结合的荧光标记物质，可以通过显微镜观察细胞中特定分子的分布和浓度。
常用的分子探针有细胞核染色剂（如DAPI），线粒体染色剂（如JC-1），胞质钙染色剂（如Fluo-3）等。
将细胞与特定分子探针共同孵育，根据分子探针的荧光强度和分布情况，可以评估细胞内特定分子的含量和活动水平，从而间接评估细胞的增殖和活力。
5.流式细胞术流式细胞术是一种基于细胞的物理和化学性质，通过细胞悬浮液在液体流动中的传递和分析的技术。
通过染色、抗体标记、荧光探针等方法，可以区分和分析细胞的不同类型和状态。
细胞生物学细胞计数法和MTT法
实验题目：细胞增殖和活力的检测方法一、摘要：细胞增殖是生物体生长和繁殖的基础，当细胞增殖发生异常时往往会导致疾病的发生，比如肿瘤的发生就是细胞增殖失控的结果。
掌握细胞增殖和活力的检测是从事细胞生物学研究的一个重要方面。
针对细胞增殖和活力的检测方法有很多，这些方法除了能用于细胞本身增殖特性的研究、还能应用于药物毒副性检测，生长因子对细胞增殖和活力的影响等。
二、实验原理：〔1〕细胞计数法：最简单直接的方法：传统细胞计数的方法是用血球计数板，原理：将一定量的细胞悬液载入固定体积的玻片夹层中，在显微镜下数出细胞数量，然后换算出原始的细胞悬液浓度。
使用自动化细胞计数器，它通过拍下计数界面照片，利用软件程序设定去识别细胞，实现自动化计数。
好处:这种方法能兼容台盼蓝染色，染上蓝色的细胞视为死细胞，直接观察就能大致判断细胞的活力状态，计数后能定量分析细胞存活率。
缺点:①它的灵敏度低②线性范围太窄，细胞浓度低于 10 万个/ml 则计数不准确。
〔2〕 MTT 法MTT 称为噻唑蓝，是一种黄颜色染料。
定义：MTT 比色法是一种通过检测细胞代谢活性间接反映细胞增殖的方法。
原理：活细胞线粒体里的酶能够将外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，活细胞数量越多，形成的有色沉淀越多，通过测定颜色的深浅也就是吸光值来反映细胞代谢活性的强弱，而细胞代谢活性与细胞数量呈正比，从而反映细胞数量的多少。
缺点： MTT被还原形成的有色沉淀需要溶解后才能比色，检测用时较长，检测结果会受到沉淀溶解效果的影响。
三、实验材料和用品：细胞计数法：待测细胞悬液、细胞计数板、盖玻片、普通光学显微镜、微量移液器及枪头、酒精棉球、吸水纸、台盼蓝染液MTT法：贴壁细胞（A549 肺癌细胞株）酶标仪、酶标板振荡器、超净工作台，倒置显微镜，CO2培养箱、96 孔培养板，EP 管及管架，微量移液器及枪头、5mg/ml MTT 溶液，DMSO 溶液，1640 完全培养液四、实验操作（细胞计数法）：实验过程分为四个环节：（首先）清洁细胞计数板及盖玻片—（然后）镜检计数室—（接着）细胞加样—（最后）细胞计数具体操作细节如下：1、清洁细胞计数板及盖玻片：用 75%酒精棉球仔细擦拭细胞计数板的计数室区域，接着擦拭盖玻片，放置吸水纸上自然晾干；2、镜检计数室：1）细胞计数板和盖玻片干燥后，将盖玻片覆盖到细胞计数板的计数室部位；2）在显微镜下观察擦拭效果，确定计数室区域已擦拭干净、能清晰看到计数室的大方格及中方格3）直接平行移出计数板，平放在实验台上；3、待测细胞加样：1）将待测细胞悬液混匀后，吸取 10ul 细胞悬液加入 EP 管，然后再吸取10ul台盼蓝染液加入 EP，混匀，染色静置 2 分钟。
细胞活力研究检测指标
细胞活力研究检测指标细胞活力研究通常涉及多种检测指标，以评估细胞的生理状态、代谢活性和功能。
以下是一些常见的检测指标：1. 细胞增殖能力：1)MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物）试验：通过测量活细胞中线粒体脱氢酶的活性来评估细胞增殖。
2)CCK-8（Cell Counting Kit-8）试验：类似于MTT，但使用水溶性四唑盐WST-8，减少了实验步骤。
3)BrdU（5-溴脱氧尿苷）掺入试验：通过检测BrdU在DNA合成期的掺入来评估细胞增殖。
2. 细胞存活率：1)细胞计数：直接使用血球计数板或自动细胞计数器计算活细胞数量。
2)台盼蓝染色：排除法，活细胞不会吸收台盼蓝，死细胞会被染成蓝色。
3. 细胞凋亡检测：1)Annexin V/PI染色：通过流式细胞仪检测细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻和细胞膜完整性来识别早期和晚期凋亡细胞。
2)TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记）试验：检测DNA断裂，是细胞凋亡的标志。
4. 细胞周期分析：流式细胞仪：使用PI或Hoechst染料对DNA进行染色，分析细胞周期分布。
5. 细胞代谢活性：1)ATP含量测定：ATP是细胞能量代谢的重要指标。
2)乳酸脱氢酶（LDH）释放：衡量细胞膜完整性和细胞损伤程度。
6. 氧化应激指标：1)ROS（活性氧物种）检测：使用荧光探针如DCFH-DA进行检测。
2)抗氧化酶活性：如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）等。
7. 蛋白质和基因表达：1)Western blot：检测特定蛋白质的表达水平。
2)qPCR（实时定量聚合酶链反应）：检测特定基因的mRNA表达水平。
8. 细胞信号通路活性：磷酸化蛋白检测：通过Western blot检测特定蛋白的磷酸化状态来评估信号通路的激活。
9. 细胞粘附和迁移能力：1)划痕试验：评估细胞迁移能力。
2)侵袭和迁移试验：使用Transwell小室评估细胞的侵袭和迁移能力。
细胞功能检测
细胞功能检测细胞功能检测是指对生物样品中的细胞进行测试和分析，以评估其功能状态和活性水平。
这种检测可以用于研究细胞生理学、疾病诊断和治疗等领域。
下面介绍几种常见的细胞功能检测方法。
1. 细胞生存和增殖检测：这种检测方法可以评估细胞的生存能力和增殖速度。
常见的方法包括细胞计数、细胞活力和增殖指标的测定。
细胞计数可以用显微镜观察和细胞计数仪进行，细胞活力可以通过测定细胞色素c释放量、ATP产量等指标来评估，增殖指标包括细胞周期、有丝分裂指数等的测定。
2. 细胞凋亡检测：细胞凋亡是正常的细胞死亡过程，对维持组织结构和功能起着重要作用。
细胞凋亡的检测可以使用多种方法，如细胞凋亡标记物的染色、DNA片段化检测和细胞凋亡相关蛋白的测定等。
常用的染色方法有TUNEL法、AnnexinV染色法等，可以直接或间接地检测细胞凋亡的存在和程度。
3. 细胞分化检测：细胞分化是未分化细胞向特定细胞类型发育和成熟的过程。
细胞分化的检测可以通过测定特定分化标记物的表达来评估。
例如，神经细胞的分化可以通过检测神经元特异性标记物如神经元特异性聚糖、神经元特异性酶等的表达来判断。
4. 细胞迁移和侵袭检测：细胞迁移和侵袭是细胞在体内的基本生理过程，在肿瘤的发生和转移中具有重要的作用。
细胞迁移和侵袭能力的检测可以使用Transwell迁移实验、划痕愈合实验等方法，通过观察细胞通过细胞孔隙和划痕进入下一层细胞的能力来评估。
5. 细胞代谢功能检测：细胞代谢是维持细胞生命活动所必需的重要过程之一，包括能量代谢、蛋白质合成和降解、核酸代谢等。
细胞代谢功能的检测可以通过测定细胞中某些代谢产物的含量、酶活性的测定、氧化还原能力的测定等来评估。
细胞功能检测是实验生物学研究和临床医学诊断的重要手段之一。
通过细胞功能检测，人们可以了解细胞在不同条件下的功能状态和活性水平，从而更好地研究细胞生理学机制、发现新的疾病标记物和药物靶点，为疾病的诊断和治疗提供新的线索和方法。
细胞增殖及细胞活力检测方法1
细胞增殖及细胞活力检测方法1细胞增殖及细胞活力检测方法1细胞增殖是指细胞数量的增加，是生物体生长和发育的基础过程。
细胞活力是指细胞代谢水平和功能状态的综合体现。
细胞增殖和细胞活力的检测方法在细胞生物学和生物医学研究中非常重要。
本文将介绍一些常用的细胞增殖和细胞活力检测方法。
一、细胞增殖检测方法1.平板计数法：平板计数法是一种直接计数方法，通过显微镜观察计数细胞数量。
首先，将细胞悬液均匀地涂布在显微镜滑片上。
然后，使用显微镜对细胞进行计数。
这种方法简单直接，但在大量细胞计数时比较耗时。
2.显微镜观察法：显微镜观察法是另一种直接计数方法。
通过显微镜观察细胞在培养皿中的覆盖度，以评估细胞增殖。
这种方法可以快速获得细胞增殖信息，但由于操作主观性较强，结果可能存在一定的误差。
3. MTT法：MTT法是一种间接计数方法，通过测定细胞代谢能力来估计细胞增殖。
首先，将MTT试剂加入细胞培养皿中，MTT会被活细胞还原成紫色的甲基化四氮唑盐（formazan）。
然后，通过比色法测定培养基中的甲基化四氮唑盐含量，从而间接反映细胞的增殖情况。
MTT法具有操作简便、结果可重复性好的优点。
4.WST-1法：WST-1法也是一种间接计数方法，通过测定细胞膜透过性来估计细胞增殖。
首先，将WST-1试剂加入细胞培养皿中，WST-1会被细胞色素P450酶一氧化还原成形成可溶性产物。
然后，通过光密度测定产生的产物浓度，从而间接反映细胞的增殖情况。
WST-1法灵敏度高，操作简单。
二、细胞活力检测方法1.ATP酶联反应法：ATP酶联反应法是一种直接测定细胞活力的方法。
ATP是细胞内的能量分子，可以反映细胞代谢水平。
通过酶联反应，将ATP转化为发光物质，然后使用发光仪测定发光强度，间接反映细胞活力。
这种方法灵敏度高，但样品处理复杂。
2.细胞膜透过性检测法：细胞膜透过性检测法是一种间接测定细胞活力的方法。
细胞在不同状态下，细胞膜透过性会发生变化。
实验报告细胞活力
一、实验目的1. 了解细胞活力的概念和测定方法。
2. 掌握MTT法和CCK-8法测定细胞活力的原理和操作步骤。
3. 通过实验验证细胞活力测定方法的有效性。
二、实验原理细胞活力是指细胞生长、增殖和代谢的能力。
细胞活力测定是细胞生物学和分子生物学实验中常用的技术，用于评估细胞增殖和细胞毒性。
常用的细胞活力测定方法有MTT法、CCK-8法等。
1. MTT法：MTT法是一种通过检测细胞代谢产物（如NADH）还原MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-2,5-二苯基四唑溴化物）生成甲紫（Formazan）的量来间接反映细胞活力的一种方法。
在一定条件下，活细胞内的脱氢酶可以将MTT还原成甲紫，甲紫呈紫色，其颜色的深浅与细胞活力成正比。
2. CCK-8法：CCK-8法是一种基于细胞代谢产生乳酸脱氢酶（LDH）的原理，通过检测LDH将CCK-8还原成水溶性甲偶氮盐的量来反映细胞活力的一种方法。
在一定条件下，活细胞内的LDH可以将CCK-8还原成甲偶氮盐，甲偶氮盐呈黄色，其颜色的深浅与细胞活力成正比。
三、实验材料1. 细胞：待测细胞系2. MTT试剂：3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-2,5-二苯基四唑溴化物3. DMSO（二甲基亚砜）：用于溶解MTT4. CCK-8试剂：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二硫唑基)-2H-四唑5. 96孔板：用于细胞培养和实验操作6. 细胞培养试剂：RPMI-1640培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素7. 其他：移液器、吸头、酶标仪、水浴锅、恒温培养箱、超净工作台等四、实验方法1. 细胞培养：将待测细胞系按照一定密度接种于96孔板中，置于恒温培养箱中培养至细胞贴壁生长。
2. MTT法测定细胞活力：（1）将细胞培养至一定密度后，加入MTT试剂，置于恒温培养箱中继续培养；（2）待细胞代谢完成后，加入DMSO溶解甲紫；（3）使用酶标仪在490nm波长处检测吸光度值。
细胞活力检测方法
细胞活力检测方法细胞活力是指细胞内外环境稳定，细胞结构完整，代谢活跃，功能正常的状态。
细胞活力的高低直接影响着生物体的生长、发育、免疫功能等多个方面。
因此，准确、快速地检测细胞活力对于生物学研究和临床诊断具有重要意义。
下面将介绍几种常见的细胞活力检测方法。
一、MTT法。
MTT法是一种常用的细胞活力检测方法。
其原理是将MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物）加入培养基中，MTT会被细胞内的还原酶还原为可溶性的紫色产物，然后用溶剂将产物溶解，最后用酶标仪测定其吸光值。
吸光值越高，代表细胞内还原酶活性越高，细胞活力越强。
二、CCK-8法。
CCK-8法是一种新型的细胞活力检测方法，其原理是将CCK-8（Cell Counting Kit-8）溶液加入培养基中，CCK-8会被细胞内的还原酶还原为橙黄色的产物。
然后用酶标仪测定其吸光值，吸光值越高，代表细胞内还原酶活性越高，细胞活力越强。
相比MTT法，CCK-8法更为灵敏和稳定。
三、荧光染料法。
荧光染料法是一种常用的细胞活力检测方法，其原理是利用荧光染料（如FDA、PI等）染色活细胞和死细胞，然后观察染色情况来判断细胞的活力。
活细胞呈绿色荧光，而死细胞呈红色荧光。
通过计数活细胞和死细胞的比例，可以间接反映细胞的活力情况。
四、细胞代谢物测定法。
细胞代谢物测定法是一种直接反映细胞活力的方法。
通过测定细胞产生的代谢产物（如乳酸、ATP等）的含量，可以客观地评价细胞的活力情况。
这种方法不仅可以用于细胞培养液的检测，也可以用于组织样本的检测。
综上所述，细胞活力的检测方法有多种多样，每种方法都有其独特的优势和适用范围。
在实际应用中，我们可以根据具体情况选择合适的方法来检测细胞活力，以便更好地开展生物学研究和临床诊断工作。
希望本文介绍的内容对您有所帮助。
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2．细胞活力 ①将细胞悬液以0.5ml加入试管中。 ②加入0.5ml 0.4%台盼兰染液，染色2一3分钟。 ③吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片。 ④镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数， 计细胞活力。 死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞， 活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。另外，活力 测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液 对原细胞悬液的加倍稀释作用。
【作业与思考题】
1．根据实验结果，画出生长曲线。 2．试述用MTT法测定细胞生长曲线的过程及注意事项。 3．细胞接种的密度与细胞生长曲线的测量结果之间有 什么关系？ 4．为什么细胞计数时，细胞悬液逸出槽外时要重做？
Experiment 18
细胞计数及活力测定
【实验目的】
1．练习进行细胞计数，并用细胞计数法绘制生长 曲线，以了解培养细胞的生长发育特性 2．掌握测定细胞活力的方法
【实验目的】
培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长 良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。 细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总 细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细 胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤 作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。 用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而 可以区分死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂 发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。
【注意事项】
1．细胞计数时的注意事项 ①消化单层细胞时，务求细胞分散良好，制成单个细胞悬液。否则 会影响细胞计数结果。 ②取样计数前，应充分混匀细胞悬液。在连续取样计数时尤应注意 这一点。否则，前后计数结果会有很大误差。 ③镜下计数时，遇见2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计数。 如细胞团占10%以上，说明消化不充分。 ④细胞数少于200个/10mm2或多于500个/10mm2时，说明稀释不当， 需重新制备细胞悬液。 ⑤在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液时，加液量不要溢出盖 片，也不要过少或带气泡。 ⑥在计数过程中，对大方格的边缘压线细胞应按数上不数下，数左 不数右的原则进行计数。 2．MTT法的原理是测定细胞线粒体琥珀酸脱酶的活性，反映的是细 胞代谢和增殖活力，而非绝对的细胞数量。
【实验材料】
一、材料：细胞悬液。 二、器材：普通显微镜、血球计数板、试管、吸管、酶标仪（或分 光光度计） 三、试剂：0.4％台盼兰，0.5％四甲基偶氮唑盐（MTT）、酸化异 丙醇 （1）0.4%台盼兰染液配制： 台盼兰 0.4克 加双蒸水至100 ml。 （2）MTT配制：MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的 基础液中。4℃下保存。 （3）酸化异丙醇配制：异丙醇中加入HCl使最终达0.04mol/L。
3．MTT法测细胞相对数和相对活力
活细胞中的琥珀酸脱氢酶可使MTT分解产生兰色结晶状甲赞颗粒积于细 胞内和细胞周围。其量与细胞数呈正比，也与细胞活力呈正比。 ①细胞悬液以1000rpm离心10分钟，弃上清液。 ②沉淀加入0.5－1ml MTT，吹打成悬液。 ③37℃下保温2小时。 ④加入4—5 ml酸化异丙醇（定容）。打匀。 ⑤1000 rpm离心，取上清液酶标仪或分光光度计570nm比色，酸化异丙 醇调零点。 注意：MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。
【实验内容】
1．细胞计数 ①将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。 ②将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片 和计数板之间。 ③静置3分钟。 ④镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左 侧和上方的。然后按下式计算： 细胞数/ml＝（4大格细胞总数/ 4）×10000 注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细 胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备 细胞悬液。