细胞活性测定
mtt法检测细胞活性实验报告
mtt法检测细胞活性实验报告MTT法检测细胞活性实验报告细胞活性是评估细胞健康和功能的重要指标。
在细胞培养实验中，MTT法被广泛应用于评估细胞的存活率和代谢活性。
本实验旨在通过MTT法检测细胞活性，探究不同处理条件对细胞的影响，并分析实验结果。
实验材料和方法：1. 细胞培养：选取人类肺癌细胞株A549作为实验对象，通过传代培养维持细胞的生长状态。
2. 细胞处理：将A549细胞均匀分配到不同处理组，包括对照组和实验组。
实验组根据需求添加不同浓度的药物处理，对照组则不添加药物。
3. MTT法测定细胞活性：将处理后的细胞悬液均匀分配到96孔板中，每组设置3个孔位。
加入MTT溶液，孵育一定时间后，加入溶解液，最后测定吸光度。
实验结果：通过MTT法测定细胞活性，我们得到了以下结果。
1. 实验组A：添加药物A处理的细胞活性明显下降。
随着药物A浓度的增加，细胞存活率呈现逐渐下降的趋势。
最高浓度的药物A处理组，细胞存活率仅为对照组的30%。
2. 实验组B：添加药物B处理的细胞活性呈现剂量依赖性下降。
低浓度的药物B处理组，细胞存活率与对照组相近。
高浓度的药物B处理组，细胞存活率显著下降，仅为对照组的50%。
3. 实验组C：添加药物C处理的细胞活性呈现非线性变化。
低浓度的药物C处理组，细胞存活率略高于对照组。
中等浓度的药物C处理组，细胞存活率降低，但仍高于对照组。
高浓度的药物C处理组，细胞存活率显著下降，仅为对照组的40%。
讨论与分析：根据实验结果，我们可以得出以下结论。
1. 药物A对A549细胞具有明显的抑制作用。
随着药物A浓度的增加，细胞存活率逐渐降低，表明药物A可能具有抗肿瘤活性。
然而，高浓度的药物A处理组细胞存活率仅为30%，可能存在细胞毒性作用。
2. 药物B对A549细胞的影响呈现剂量依赖性。
低浓度的药物B处理组细胞存活率与对照组相近，可能对细胞没有明显影响。
然而，高浓度的药物B处理组细胞存活率下降，表明药物B可能对细胞产生抑制作用。
细胞活力检测方法
细胞活力检测方法
1. 代谢活性检测法：测定细胞内代谢产物的含量或分泌物的释放量，如MTT法、SRB法、LDH脱氢酶活性测定法等。
2. 流式细胞术：利用染色或荧光标记的抗体与特定的细胞表面分子结合，通过流式细胞术检测细胞状态。
3. 荧光显微镜：利用荧光探针或染色剂染色，通过显微镜观察细胞内部结构、代谢活性等。
4. 内源性酶活性测定法：测定细胞内特定酶的活性，如蛋白酶、酸性磷酸酶等。
5. 表型分析：通过观察细胞外形、大小、颜色等特征，评估细胞的生长状态。
6. 细胞周期分析：通过检测细胞的DNA含量，确定细胞的周期阶段。
7. 活细胞成像技术：如实时荧光成像技术，能够非侵入性地记录细胞活力变化的动态过程。
总之，细胞活力检测方法有多种，可以根据具体需要选择合适的方法。
实验三 荧光显微镜化学测定和细胞活性测定
思考
一．实验目的 二．实验原理 三．实验用品 四．实验方法
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实验目的
• 学习荧光显微镜的使用 • 了解荧光显微技术原理和方法 • 荧光技术在细胞化学学习方面的应用
• 掌握细胞活力测定的方法 • 学习辨别细胞的死活
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实验六
实验原理
• 荧光显微镜是用于检测显微镜尺度下 荧光信号的显微镜。活性物质受到光 照或其他形式的能量后释放出其中一 部分以光为形式的能量的现象被称为 荧光现象这样的活性物质称为荧光物 质 • 荧光可以分为自发荧光和次生荧光。 有些生物体受到短波光照射时直接发 出荧光。
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物镜
• 由于激发标本和收集荧光都是由同一物镜 来实现的，所以物镜是能透过紫外光的特 制物镜，荧光效率与所用的物镜的数值孔 径的4次方成正比，所以用数值孔径较大的 浸液物镜的效果更好。
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目镜
• 荧光亮度与目镜放大倍数的平方成反比。
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荧光技术是生命科学研究的重要手段。 1. 荧光显微镜对细胞凋亡的形态学观察 2. 流式细胞术检验细胞特性 3. 荧光技术在微丝骨架研究中的应用 4. 荧光原位杂交的应用 5. 绿色荧光蛋白在动物细胞分子生物学中的 应用 6. 免疫荧光抗体的制备
可与核酸亲和的荧光活体染料。荧光显微镜 下核呈绿色，细胞质呈黄色。 与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发 出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光， 与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料 具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA 染色。因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透 过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧 光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大 小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上 致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而 坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
MTT比色法-细胞增殖及细胞活性测定-实验
MTT比色法*本实验要严格无菌操作，遵守细胞间操作流程。
操作流程及步骤：1、配制MTT溶液[1-7]。
以96孔板实验操作计算用量96孔板：高糖：60孔*180=10800ulMTT：60孔*20ul=1200ul2、先将原有培养液弃去，用PBS洗洗两次[8-9]。
3、将配制好的MTT溶液每孔200ul加入96孔板中，孵箱孵育3-4小时。
4、弃MTT液，MTT加入培养4h后，结晶可充分形成。
将上清去掉，该过程要注意不能把Formazan结晶移走[10]。
5、每孔加入150ulDMSO，摇床10min，使结晶物充分溶解。
在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
6、测OD值，酶标液设置波长范围：490nm-----492nm 510nm-----562nm[11]。
7、终点法----波长492----选择样本范围----读取----原始数据----输出----保存。
心得体会及注意事项：1、配制MTT溶液要避光。
2、MTT浓度网上查得5mg/ml。
3、经过0.22um微孔滤膜滤过。
4、血清和双抗会影响MTT染色效果，故培养液用不含血清和双抗的高糖。
5、计算配制溶液剂量，有时枪不准或损失较多，每板多加1ml高糖。
6、96孔板最外层不用所以总计孔数为60孔。
7、高糖180ul+MTT20ul(每孔)）。
8、操作过程要防止吹落细胞，加液延碧缓慢加入。
9、PBS液要高压灭菌过的。
10、有人直接用移液器将上清移走，也有人建议先铺几张滤纸在桌面，然后将96孔板轻轻倒置，这样上清便被滤纸吸走，以减少结果的损失。
11、96孔板底部要洁净，否则OD值不准。
目的及原理MTT实验目的：细胞增殖及细胞活性测定。
MTT实验原理：为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜(DMSO )能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
细胞活性测定
细胞活性测定方法细胞活性指标通常包括细胞膜对核酸染料的通透性，代谢活性，膜电位等。
核酸染料有多种，如EB带有单个自由正电荷，能通过完整细胞膜。
而PI，TO—PRO—1，TO-PRO-3等等带一个有四铵基团和两个或两个以上正电荷的染料是不能通过完整细胞膜进入细胞内的。
因而吸收了这些多电荷染料的细胞被认为是非活性的。
另外，一些酸性染料，如上面提到的台盼兰，曙红等都是膜非通透性。
代谢活性是另一重要指标，它通过细胞内的酶的活性来判定。
使用细胞某种酶的底物，它能通过（或是不能通过）完整细胞膜，在细胞内被酶切而产生荧光性，膜不通透性产物，能在细胞膜完好的细胞内存留，在细胞膜不完整的细胞内散失很快。
通过检测荧光强度就可知细胞代谢活性。
FDA(fluorescein diacetate)和CTC（5-cyano-2,3-ditolyl tetrazolium chloride）是常用的两种底物。
前者虽然透过细胞膜的速度较慢，但它的产物基本不往外通透。
后者经细胞内脱氢酶催化而具有荧光性，能提供细胞呼吸代谢系统活性和细胞膜完整性信息。
正常细胞的细胞膜两侧维持着一个胞内为负的膜电位为梯度，带正电的亲脂性染料，如Cyanines类能因电梯度而通过细胞的脂双层膜聚积在活细胞内，带负电的亲脂性染料如oxonols会被排除在外。
不再维持着膜电位梯度的细胞里，则会吸收更多Oxonols类染料。
用流式细胞仪测量的方法优点是，灵敏，荧光强度精确定量，快速高通量的检测逐个细胞，可同时检测细胞的多个活性指标，提高可信度，结果具有统计意义。
缺点是，实验较MTT等复杂，费用较高。
常用的细胞活性测定方法有台盼蓝染色法、克隆（集落）形成法、3H放射性同位素掺入法、MTT法等。
其中MTT法以其快速简便，不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。
但MTT法形成的Formazan为水不溶性的，需要加有机溶剂溶解，由于在去上清操作时会有可能带走小部分的Formazan，故有时重复性略差。
鉴定细胞活性的实验方法
能发生质壁分 离的 ， 表示这些细胞
是活的 ； 不能发 生质壁分离 的， 表示这些 细胞是死 的。
有的碎屑的一端 ， 在染液 中涂抹几 下 ， 上盖玻 片。 放 盖
②观察 线粒体 ： 在高 倍显微镜 下观察经过 染色 的的人
染色 １ ２ ｒ ｎ ０～ ０ ｉ 后倾 出溶液 ， 自来水 反复冲洗种子 ， ａ 用
３ １ 原理 健 那绿染液 是专一性染线 粒体 的活 细胞 ．
染料 ， 它可穿过 活细胞 膜进入 细胞 内。线粒 体 中细胞 色素氧化酶能 够使 染料 保持 氧化状 态 （ 即有 色状 态 ）
则部分活细胞也会着色 ， 会干扰计 数。
３ 健 那 绿 染 色 法
４ ３ 实验 步骤 ．
①先将待测 种子用水浸泡 ３— ｈ 待 ４，
充分 吸胀后取 出一部 分种子 ， 水 中煮 沸 ３～ ｍｉ， 在沸 ５ ｎ
作为死种子。②取 浸好 的新种 子、 陈种子 和死 种子各
５ ， ０粒 如为小 麦和 玉米 ， 则用 单面 刀 片沿胚 部 中线纵 切成两半 ， 中一半 用于测 定。③ 将备好 的种子 分别 其 放在培养皿 内 ， 加入红墨水溶液 ， 以浸没种子 为度。④
２３ 实验步骤 ①制备酵母菌细胞悬液 。②染 色 ： ． 取
９ Ｌ酵母菌细胞 悬液 移入 试管 中 ， １ Ｌ０ ４ 台盼 ｍ 加 ｍ ． ％
蓝溶液 ， 混匀 ， 然后用吸管滴 加到血球计数板上 的盖玻
４ ２ 仪 器药品及材料 ① 红墨水溶 液的配制 ： ． 取市售
红墨水稀释 ２ 倍 （ 份红墨水加 ｌ ０ １ ９份 自来 水 ） 作为染
０ ３／ Ｌ 糖 溶 液 。 ．ｇ ｍ 蔗
不同方法测细胞活性的优缺点
MTT MTS CCK-8原理活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
MTS是一种新合成的四唑类化合物，与MTT原理相同，MTS也是通过被活细胞内线粒体内的多种脱氢酶还原成橙黄色的Formazan从而反映细胞活力情况。
CCK-8在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物（Formazan）。
生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。
用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
优点1、简单、快捷，准确测定细胞的增值反应，能避免由于人为操作因素造成的试验误差，大大地提高了试验结果的准确性1、操作简单，比MT T高效，产生水溶性的Formazan，无需用DMSO溶解；2、由于MTS被还原后生成的甲瓒产物颜色较深，吸光度值变异范围大，使测定更加敏感准确，阴/阳性的判断也比较容易；3、快速，作用时间2-3小时为最佳，而MTT需4小时；4、重复性好，还原产物稳定1、使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；2、检测快速；3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT；5、对细胞毒性小；6、为1瓶溶液，毋需预制，即开即用；7、水溶性，不需换液，尤其适用于悬浮细胞缺点1、由于MTT经还原所产生的甲臜不溶于水，需被溶解后才能检测，对实验结果的准确性产生影响；2、不太适合悬浮细胞活性检测1、试剂比较贵1、与MTT相比，CCK-8和XTT的价格比较贵；2、CCK-8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加XTT SRB LDH释放法XTT作为线粒体脱氢酶的作用底物，被活细胞还原成水溶性的橙黄色甲臢产物。
细胞活力检测方法
细胞活力检测方法细胞活力是指细胞内外环境稳定，细胞结构完整，代谢活跃，功能正常的状态。
细胞活力的高低直接影响着生物体的生长、发育、免疫功能等多个方面。
因此，准确、快速地检测细胞活力对于生物学研究和临床诊断具有重要意义。
下面将介绍几种常见的细胞活力检测方法。
一、MTT法。
MTT法是一种常用的细胞活力检测方法。
其原理是将MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物）加入培养基中，MTT会被细胞内的还原酶还原为可溶性的紫色产物，然后用溶剂将产物溶解，最后用酶标仪测定其吸光值。
吸光值越高，代表细胞内还原酶活性越高，细胞活力越强。
二、CCK-8法。
CCK-8法是一种新型的细胞活力检测方法，其原理是将CCK-8（Cell Counting Kit-8）溶液加入培养基中，CCK-8会被细胞内的还原酶还原为橙黄色的产物。
然后用酶标仪测定其吸光值，吸光值越高，代表细胞内还原酶活性越高，细胞活力越强。
相比MTT法，CCK-8法更为灵敏和稳定。
三、荧光染料法。
荧光染料法是一种常用的细胞活力检测方法，其原理是利用荧光染料（如FDA、PI等）染色活细胞和死细胞，然后观察染色情况来判断细胞的活力。
活细胞呈绿色荧光，而死细胞呈红色荧光。
通过计数活细胞和死细胞的比例，可以间接反映细胞的活力情况。
四、细胞代谢物测定法。
细胞代谢物测定法是一种直接反映细胞活力的方法。
通过测定细胞产生的代谢产物（如乳酸、ATP等）的含量，可以客观地评价细胞的活力情况。
这种方法不仅可以用于细胞培养液的检测，也可以用于组织样本的检测。
综上所述，细胞活力的检测方法有多种多样，每种方法都有其独特的优势和适用范围。
在实际应用中，我们可以根据具体情况选择合适的方法来检测细胞活力，以便更好地开展生物学研究和临床诊断工作。
希望本文介绍的内容对您有所帮助。
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细胞活性测定方法细胞活性指标通常包括细胞膜对核酸染料的通透性，代谢活性，膜电位等。
核酸染料有多种，如EB带有单个自由正电荷，能通过完整细胞膜。
而PI，TO—PRO—1，TO-PRO-3等等带一个有四铵基团和两个或两个以上正电荷的染料是不能通过完整细胞膜进入细胞内的。
因而吸收了这些多电荷染料的细胞被认为是非活性的。
另外，一些酸性染料，如上面提到的台盼兰，曙红等都是膜非通透性。
代谢活性是另一重要指标，它通过细胞内的酶的活性来判定。
使用细胞某种酶的底物，它能通过（或是不能通过）完整细胞膜，在细胞内被酶切而产生荧光性，膜不通透性产物，能在细胞膜完好的细胞内存留，在细胞膜不完整的细胞内散失很快。
通过检测荧光强度就可知细胞代谢活性。
FDA(fluorescein diacetate)和CTC（5-cyano-2,3-ditolyl tetrazolium chloride）是常用的两种底物。
前者虽然透过细胞膜的速度较慢，但它的产物基本不往外通透。
后者经细胞内脱氢酶催化而具有荧光性，能提供细胞呼吸代谢系统活性和细胞膜完整性信息。
正常细胞的细胞膜两侧维持着一个胞内为负的膜电位为梯度，带正电的亲脂性染料，如Cyanines类能因电梯度而通过细胞的脂双层膜聚积在活细胞内，带负电的亲脂性染料如oxonols会被排除在外。
不再维持着膜电位梯度的细胞里，则会吸收更多Oxonols类染料。
用流式细胞仪测量的方法优点是，灵敏，荧光强度精确定量，快速高通量的检测逐个细胞，可同时检测细胞的多个活性指标，提高可信度，结果具有统计意义。
缺点是，实验较MTT等复杂，费用较高。
常用的细胞活性测定方法有台盼蓝染色法、克隆（集落）形成法、3H放射性同位素掺入法、MTT法等。
其中MTT法以其快速简便，不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。
但MTT法形成的Formazan为水不溶性的，需要加有机溶剂溶解，由于在去上清操作时会有可能带走小部分的Formazan，故有时重复性略差。
为了解决这个问题，研究人员又开发了很多种水溶性的四氮唑盐类：如XTT、CCK-8（WST-8）等。
1．MTT法MTT：化学名：3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲臜产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲臜的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT法显色的条件（1）pH 值对MTT 实验结果的影响:MTT 实验体系的pH 值是影响实验结果的另一重要因素。
在偏碱性的环境中本底偏高,稳定性较差。
随放置时间延长而升高;偏酸性试液的实验结果比较稳定。
（2）酚红和血清对MTT 实验方法的影响:酚红是一种pH 中性指示剂,血清是细胞生长必需的营养成份,两者都是细胞培养液的基本成份。
酚红在pH7.0, 以上试液中呈紫红色,在570 nm 有较大光吸收值。
血清蛋白在有机溶剂中容易变性形成絮状沉淀,影响透光度。
（3）异丙醇等用作Formazan 溶剂,无须酸化也能消除酚红的影响: 为了消除酚红对MTT 实验结果的影响,Mosmann (1983) 提出用酸化异丙醇作Formazan 溶剂,酸化异丙醇可将酚红显示的紫红色转变为无色。
Francois (1986) 认为酸化异丙醇溶解Formazan 改变了原光谱特性,降低灵敏度,提出改用无酚红的培养基。
未经酸化的异丙醇在一定条件下也可以消除酚红的影响。
异丙醇等有机溶剂本身为弱酸性,能够中和中性和弱碱性试剂,如RPMI21640 (pH7.3) 。
当异丙醇与RPMI - 1640 的溶量比达到1∶1 以上时即可将酚红的紫红色转变成无色。
（4）细胞代谢酶存在部位对MTT 实验结果的影响:细胞线粒体产生的琥珀酸脱氢酶是细胞生长代谢产物,这种酶裂解MTT形成Formazan 是MTT实验方法的理论基础。
琥珀酸脱氢酶的产生和分布规律与MTT检验方法的灵敏度和稳定性有很大关系（5）MTT使用浓度选择:在不饱和状态下,或是细胞密度一定,MTT 不饱和;或是MTT一定,细胞密度不饱和,Formazan 的生成量分别与MTT浓度和细胞分泌的酶活性量呈线性关系。
达到饱和状态以后,两者为非线性关系。
为了提高MTT 实验方法的灵敏度,在细胞密度一定的条件下,应该使用MTT饱和浓度。
MTT的饱和浓度与细胞种类、细胞活力状态有关因此MTT 最佳使用浓度要视情况而定。
（6）MTT的酶裂解反应时间选择:MTT 在细胞培养体系中被细胞内线粒体产生的琥珀酸脱氢酶裂解生成Formazan ,完成这一反应需要一定时间。
MTT 裂解反应2.5h 反应已基本完成,3 h 反应相当完全,通常MTT实验应选择3 小时的反应时间。
（7）MTT的理化性质对其条件影响很大MTT是一种黄色粉状物,溶于水性溶剂,也溶于有机溶剂,但在有机溶剂中的溶解力低于水性溶剂,常温下需要较长时间才能溶解。
MTT 水溶液在pH 7.0 以下稳定,3～5周内不变性,在pH7.0 以上溶液中不太稳定,在异丙醇溶液中1 周内变色,2～3 周内变成兰紫色。
MTT 溶液呈黄色,在410 nm 波长处有最大吸收峰,随波长增大吸收值很快下降,至500 nm处趋于最低值。
MTT由酶裂解生成Formazan。
Formazan 不溶于水性溶剂,易溶于有机溶剂。
乙醇,丙醇,异丙醇,乙二醇甲醚,DMSO 等都是比较好的溶剂,Formazan 的有机溶液呈兰紫色。
细胞增殖实验通常在聚苯乙烯培养板上进行, 四氯化碳、10 %SDS 和二氧六环对培养板有溶蚀性,不宜使用。
DMSO 和SDS 对Formazan 也有较好的溶解性,但凝固点太高,10 ℃以下不能用; 丁醇等长碳链醇溶解Formazan 后与水相不混溶,呈分层液,不适合作Formazan溶剂。
2．XTT法XTT：化学名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide，作为线粒体脱氢酶的作用底物，被活细胞还原成水溶性的橙黄色甲臜产物。
当XTT与电子偶合剂（例如PMS）联合应用时，其所产生的水溶性的甲臜产物的吸光度与活细胞的数量成正比。
优点：1、使用方便，省去了洗涤细胞；2、检测快速；3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT。
缺点：XTT水溶液不稳定，需要低温保存或现配现用。
3．CCK-8法或称WST-8法CCK-8试剂中含有WST–8：化学名：2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2，4-二磺酸苯）-2H-四唑单钠盐，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物（Formazan）。
生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。
用酶联免疫检测仪在450nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。
优点：1、使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；2、检测快速；3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT；5、对细胞毒性小；6、为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。
缺点：1、与MTT相比，CCK-8和XTT的价格比较贵。
2、CCK-8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加。
由于是贴壁培养的细胞，在读吸光值时细胞培养板底部附着的细胞可能会对数值有一定的影响，因此建议在加入CCK-8 3－4小时后，将上清液重新吸取到另一干净的酶标板中进行读值，保证检测的准确性。
要防止反复使用同一瓶试剂后可能造成的试剂污染。
4. LDH释放法酸脱氢酶（LDH）在胞浆内含量丰富，正常时不能通过细胞膜，当细胞受损伤或死亡时可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH活性与细胞死亡数目成正比，用比色法测定并与靶细胞对照孔LDH活性比较，可计算效应细胞对靶细胞的杀伤%。
本法操作简便快捷，自然释放率低，可用于CTL及NK细胞活性测定及药物、化学物质或放射引起的细胞毒性，现已有LDH法测定CTL活性试剂盒（promega）。
应注意较高浓度FCS中所含LDH可能干扰结果。
5. 51铬（Cr）释放法本法结果准确、重复性好，但也存在以下不足：①使用放射性的51Cr不利于安全操作及废物处置，且需特殊测定仪器；②51Cr自发释放率高，常因不同靶细胞标记效率变化差别大而影响结果判定；③51Cr半衰期（27.8天），无法用于需多次测定的动物试验；④细胞共育时间短而试验操作步骤多，不能在单个细胞水平进行测定。
6. 荧光测定法：如：alamarBlue一步荧光测定法alamarBlue为活细胞代谢指示剂，易溶于水，进入细胞后经线粒体酶促还原产生荧光及颜色变化，可用以定量。
具体测定方法是：在靶细胞孔（T）、效应细胞孔（E）和实验孔（T+E）各加alamarBlue,共育6~24h后用板式荧光测定仪测530nm（发射）/590nm（散射）波长荧光强度，将T及E孔荧光均值相加后减去实验孔（T+E）荧光均值，与T孔荧光均值比较即可计算CTL对靶细胞的溶解%。
本法与51Cr释放法纺织厂较有以下特点：①特异性相当但灵敏度更高，重复性好，组内及组间差异很小。
②使用方便，无需预先标记靶细胞及离心和洗涤步骤，适用于大批量样品的高准确性自动测定。
③alamarBlue的使用浓度不影响细胞正常代谢及基因表达，可在无菌条件下测定后继续培养扩增细胞，有利于对培养细胞的连续监测及深入研究。
④还可测定淋巴细胞增殖或化学物质的细胞毒性及细胞凋亡。
⑤多种粘附或非粘附细胞系、细菌、真菌等可用作靶细胞，所需效应细胞数较少（3×105/孔即可）。
⑥含胎牛血清（FCS）及酚红的培养液也不干扰测定结果。
7. SRB也叫磺基罗丹明B，是在酸性条件下可特异性地与细胞内蛋白结合的染料，SRB染色后不象MTT那样很容易变色，染色后干燥的板子可以放置较长时间，而后再用Tris碱液溶解SRB，比色测定，对结果没有影响。