流式细胞术免疫表型分析在多发性骨髓瘤及其他浆细胞疾病诊断中的应用
流式细胞报告单解读
流式细胞报告单解读流式细胞报告单是一种用于评估细胞表面标记物和细胞内分子的方法。
它可以提供有关细胞类型、数量和状态的信息，对于研究细胞免疫学、疾病诊断和治疗的发展至关重要。
在解读流式细胞报告单时，需要了解报告单中所包含的内容以及每一项指标的意义和临床应用。
本文将从流式细胞报告单的基本结构、常见参数及其解读开始，详细介绍如何解读流式细胞报告单，并强调其在临床诊断和治疗中的重要性。
一、流式细胞报告单的基本结构流式细胞报告单通常包括样本信息、检测项目、检测结果、参考范围和临床意义等内容。
样本信息包括检测样本的来源、采样时间等；检测项目列出了进行的各项检测指标；检测结果包括各项指标的具体数值；参考范围是对正常范围的描述，用于比较检测结果；临床意义则解释了各项指标的意义及其可能的临床意义。
二、常见参数及其解读1. 细胞表面标记物检测流式细胞报告单中常见的细胞表面标记物包括CD3、CD4、CD8、CD19等。
它们可以用来鉴定不同类型的免疫细胞，并对免疫功能进行评估。
比如CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的比例可以反映机体的免疫功能状态，CD19+ B细胞数量的变化可以反映某些免疫相关疾病的发展。
2. 细胞内标记物检测流式细胞分析还可以用来检测细胞内分子，比如细胞因子、细胞凋亡标记物等。
这些标记物的变化可以反映细胞活性、炎症程度等，对某些疾病的诊断和监测具有重要意义。
3. 免疫表型分析通过流式细胞分析，可以进行免疫表型分析，以评估细胞亚群的分布和比例。
比如在肿瘤免疫治疗中，通过分析肿瘤微环境中免疫细胞的分布和功能状态，可以为个体化治疗方案提供重要依据。
4. 数据解读及综合分析在解读流式细胞报告单时，需要综合各项指标的变化，结合临床病史、临床表现及其他检查结果进行综合分析。
只有这样，才能更准确地评估患者的疾病状态，为临床诊断和治疗提供更有力的支持。
三、流式细胞分析在临床诊断和治疗中的重要性1. 诊断及疾病监测流式细胞分析可以帮助科研人员和临床医生对多种疾病进行诊断和监测，如各类肿瘤、免疫相关疾病、感染性疾病等。
流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用1. 引言流式细胞术（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生命科学研究和临床诊断的技术。
通过使用流式细胞仪，可以对生物细胞进行快速、精准的多参数分析，为科学家和医生提供了大量的有关细胞的信息。
流式细胞术已成为生物学领域的重要工具，被广泛应用于细胞分析、免疫表型分析、药物筛选等领域。
2. 原理流式细胞术基于细胞在封闭流动系统中单个通过的原理。
其基本流程包括样本制备、细胞标记、细胞检测和数据分析。
2.1 样本制备样本制备是流式细胞术的第一步，它需要将待检测的细胞样本制备成单细胞悬浮液。
这可以通过细胞培养、组织切片或体液等方式获得细胞样本。
重点是要避免细胞凝聚和聚集，以确保细胞在流式细胞仪中单个通过。
2.2 细胞标记细胞标记是流式细胞术的关键步骤之一。
它使用荧光染料或抗体等标记物与目标细胞发生特异性反应。
荧光染料可以通过不同的通道发出不同波长的荧光信号，从而实现多参数分析。
细胞表面标记的抗体通常与荧光素共价结合，以产生可检测的荧光信号。
同时，可以利用染料进行细胞内部器官或分子的标记，以更详细地研究细胞的功能和结构。
2.3 细胞检测细胞检测是流式细胞术中最关键的步骤之一。
它通过流式细胞仪将标记后的细胞悬浮液以单个细胞的形式通过单个检测区域。
这些细胞在流式细胞仪中被激活并产生荧光信号。
光电传感器将捕获和记录这些荧光信号，并将其转化为数字信号，供数据分析使用。
2.4 数据分析数据分析是流式细胞术的最后一步。
通过对获得的荧光信号的数字化处理，可以获得有关细胞的详细信息，包括细胞表面标记物的表达水平、细胞数量统计、细胞大小等信息。
数据分析可以使用专业的流式细胞仪软件完成，也可以使用其他数据分析软件进行更复杂的数据处理。
3. 应用流式细胞术作为一种全面、高通量的细胞分析技术，广泛应用于各个领域。
3.1 免疫学研究流式细胞术在免疫学研究中得到了广泛应用。
通过对免疫细胞的表面标记物进行检测，可以评估免疫细胞亚群的数量、功能和表达水平。
多发性骨髓瘤患者初诊时临床及实验室特点分析
多发性骨髓瘤患者初诊时临床及实验室特点分析摘要】目的：对多发性骨髓瘤（MM）患者初诊时临床及实验室结果进行分析，以期了解MM初诊特点，防止临床误诊漏诊。
方法：回顾2014年至2017年我院196例多MM患者初诊的临床病历资料，记录患者的临床特征、实验室指标[血红蛋白、肌酐、尿本周蛋白、血清免疫固定电泳、骨髓细胞学、流式细胞术]，分析MM患者的临床及实验室特点。
结果：MM初诊通常不具备典型症状，以骨痛就诊伴随轻中度贫血、肾功能不全表现、BJP阴性为主。
结论：MM初诊表现形式多样极易误诊漏诊，临床早期应予以高度重视。
【关键词】多发性骨髓瘤；初诊；临床特点；实验室特点【中图分类号】R733.3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）36-0031-02【Abstract】Objective The clinical and laboratory results of patients with multiple myeloma (MM) were analyzed in order to understand the characteristics of the initial diagnosis of MM and prevent misdiagnosis of misdiagnosis.Method Reviewing the clinical medical records of 196 patients with multiple MM patients from 2014 to 2017, the clinical characteristics, laboratory indicators [hemoglobin, creatinine, urine week protein, serum immunofixed electrophoresis, bone marrow cytology, and flow cytometry] were recorded, and the clinical and laboratory characteristics of MM patients were analyzed.Results MM was typically do not have typical symptoms, with bone pain associated with mild-to-moderate anemia, renal insufficiency and BJP negative performance.Conclusion In the early stage of clinical diagnosis, it should be highly regarded.【Key words】Multiple myeloma; To begin; Clinical features; Laboratory characteristics多发性骨髓瘤(MM)是一种起源于浆细胞系统的恶性肿瘤，该病大约占血液系统恶性肿瘤的10%，最近的美国癌症协会（ACS）的统计数据表明，MM的发病率正在逐年增加，其发病情况不容忽视。
流式细胞术
流式细胞术一. 流式细胞术概述流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,•它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。
它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA 含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度＞95%。
在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。
国内使用的流式细胞仪主要由美国的两个厂家生产:BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)。
流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。
BECKMAN-COULTER公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL, B-D•公司最新产品为FACS Vantage和FACS Calibur。
EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur 是临床型;EPICS ALTRA和 FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能,•多用于科学研究。
二.流式细胞仪主要技术指标1．流式细胞仪的分析速度：一般流式细胞仪每秒检测1000～ 5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。
2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。
3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～０.5μm。
4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，,一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。
骨髓瘤指南共识解读：多发性骨髓瘤的疗效评估(全文)
骨髓瘤指南共识解读：多发性骨髓瘤的疗效评估（全文）MM疗效评估指标概述多发性骨髓瘤（MM）的疗效评估体系最初是来自欧洲骨髓移植协作组（EBMT）的疗效标准，之后，国际骨髓瘤工作组（IMWG）采纳了这一标准，并做了一定程度的修订。
中国多发性骨髓瘤诊治指南也基本上参考IMWG的疗效标准，并且原则上建议在治疗期间，每隔30-60天进行一次疗效评估。
骨髓瘤的疗效评估相比白血病要复杂很多，主要是因为骨髓瘤的生物学特点比较特殊，骨髓瘤细胞在骨髓里面的分布是局灶性的，它的评估指标大体上可以分为三个部分，肿瘤细胞分泌产物、肿瘤细胞、整体影像学。
肿瘤细胞分泌产物看M蛋白，治疗以后M蛋白数量下降，下降的比例可作为疗效评估的一个重要基石。
但是精确检测M蛋白并不容易，因为会有多克隆正常浆细胞分泌的免疫球蛋白混杂其中。
M蛋白的检测方法进行M蛋白定量最常见的方法就是免疫比浊法，其原理是当可溶性抗原与相应抗体特异结合，二者比例合适时，在特殊的缓冲液中它们快速形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液体出现浊度。
利用现代光学测量仪器对浊度进行测定从而检测抗原含量。
它的优点是简便、快速。
缺点是测得的结果为免疫球蛋白的总量，所以没有办法区分它是单克隆的，还是多克隆的免疫球蛋白。
而血清蛋白电泳能够克服这一缺点，测定时可以进行M蛋白比例的计算。
对于IgG型MM，如果在血清蛋白电泳上出现M蛋白条带，M 蛋白条带的定义是高与底之比大于2，就可以认为它是M蛋白的片段，即单克隆的免疫球蛋白。
计算血清M蛋白就是用总蛋白乘以M蛋白在整体当中所占的比例。
对于轻链型MM，轻链分子量较小，容易进入尿液，所以轻链型MM疗效判断应该着重进行尿液检测，它的计算跟血中M蛋白类似，先测得24小时尿的总蛋白量，然后再乘以尿蛋白电泳当中M蛋白片段的比例，即得出24小时尿M蛋白的量。
有的中心不能进行尿蛋白电泳的检测，可测定替代尿M蛋白的量进行评估，即受累型尿轻链浓度，乘以24小时总尿量，得出来替代尿M蛋白的量。
浆细胞疾病诊断标准
浆细胞疾病诊断标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：浆细胞疾病是一类涉及浆细胞（一种产生抗体的白细胞）异常增殖的疾病，包括多发性骨髓瘤、轻链型淋巴浆细胞病和Waldenstrom巨球蛋白血症等。
浆细胞疾病的诊断是一项复杂的过程，需要综合考虑临床表现、实验室检查和影像学评估等多个方面。
下面将介绍一些常用的浆细胞疾病诊断标准，帮助临床医生更好地诊断和治疗这类疾病。
一、临床表现1.骨痛和骨折：多发性骨髓瘤是最常见的浆细胞疾病之一，患者常常出现骨痛和易发生骨折的症状。
2.贫血和感染：浆细胞疾病患者会出现贫血和易感染的表现，这是因为异常增殖的浆细胞干扰了正常造血功能。
3.肾功能损害：部分浆细胞疾病患者会出现肾功能损害的症状，包括蛋白尿、高钙血症等。
二、实验室检查1.免疫固定电泳：可检测血清或尿液中异常免疫球蛋白的存在，对于诊断浆细胞疾病和确定病情严重程度非常重要。
2.血液学检查：包括血象检查、骨髓穿刺等，可以发现浆细胞异常增殖和造血功能受损的表现。
3.肾功能检查：包括尿常规、肾功能指标等，对于评估肾功能损害的程度至关重要。
三、影像学评估1.骨骼X线片：可以显示骨质破坏、溶骨性损害等表现，对于多发性骨髓瘤的诊断具有重要意义。
2.CT或MRI：可对淋巴结、脏器等部位进行精细扫描，帮助确定病变范围和大小。
3. PET-CT：通过核素标记的正电子发射层析成像技术，可以更准确地评估浆细胞疾病的全身病变情况。
浆细胞疾病的诊断需要综合考虑临床表现、实验室检查和影像学评估等多个方面，只有全面了解患者的病情才能做出准确的诊断和治疗方案。
医生在诊断浆细胞疾病时，应当密切关注患者的临床表现，结合实验室检查和影像学评估结果，从而确诊疾病类型和分期，为患者制定个性化的治疗方案提供依据。
希望以上内容对于浆细胞疾病的诊断标准有所帮助。
第二篇示例：浆细胞疾病是一组以浆细胞克隆增殖为基础的多种疾病，包括多发性骨髓瘤、单克隆免疫球蛋白病和轻链沉积病等。
流式细胞术(免疫学检验课件)
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第四节 FCM的临床应用
一、淋巴细胞亚群分析
淋巴细胞是机体免疫系统中的一群重要细胞群， 是执行免疫功能和参与免疫调节的免疫活性细胞， 主要分为T细胞、B细胞和NK细胞3大类。
不同淋巴细胞表达的CD抗原都有独自的抗原特性， 在临床疾病发生过程中对各淋巴细胞的CD抗原进 行测定，对于判断机体免疫功能状态、了解免疫 相关疾病的发病机制具有十分重要的意义。
最常用的方法是酶消化法、机械法、化学处理法 和表面活性剂处理法等。
（四）石蜡包埋组织单细胞悬液制备
该制备方法的建立扩大了流式细胞术的应用范围， 有利于进行临床回顾性研究和利用。
常用的方法有二甲苯脱蜡法、组织清洁剂脱蜡法和 甲氧-双氧水处理法。
石蜡切片一般适宜厚度是40μm~50μm，脱蜡须彻底， 获取组织后，用酶进行消化处理，消化时间不宜过 长，以免细胞核被消化溶解，经过滤、漂洗后即可 获得单细胞悬液。
三、三参数直方图
三维坐标均为参数 （散射光或荧光）而 非细胞数
对复杂的细胞亚群观 察更为直观、准确， 但对其数据的统计分 析较难
四、多参数组合分析
FCM常常需要分析三个以上的参数，但软件技术 能够无法显示四维空间结构。
随着FCM多色荧光信号检测的发展，所得到的荧 光信号和散射光信号需根据需要进行组合分析以 获得所需的信息。
SSC信号的强弱与 细胞内颗粒结构的 质量成正比，用于 检测细胞内部结构 属性
前向散射光示意图 细胞大小
结构复杂程度
侧向散射光示意图
血
液
白
细
胞
粒细胞
散
点
单核细胞
图
淋巴细胞
荧光信号：由待检细胞上标记的特异性荧光染料 受激光激发后产生。
血液流式细胞免疫分型
血液流式细胞免疫分型血液流式细胞免疫分型（Flow Cytometry Immunophenotyping）是一种常用于研究血液细胞群体特征的实验技术。
它通过流式细胞仪对单个细胞进行高速连续检测和分析，可以准确地鉴定和定量不同细胞类型及其亚群。
血液流式细胞免疫分型广泛应用于临床诊断、疾病监测和研究领域。
血液流式细胞免疫分型的原理是利用细胞表面分子的特异性抗原与相应荧光标记的抗体结合，通过流式细胞仪检测细胞中荧光标记物的荧光强度和散射信号，进而确定细胞的免疫表型。
不同的抗体标记不同的细胞表面标志物，可以对不同类型的细胞进行鉴定和分类。
血液流式细胞免疫分型可用于鉴定和分类多种血液细胞，如淋巴细胞、单核细胞、粒细胞和红细胞等。
在临床诊断中，血液流式细胞免疫分型常用于血液肿瘤的诊断和分期，如白血病和淋巴瘤等。
通过分析细胞表面标志物的表达情况，可以确定细胞的来源和分化状态，帮助医生制定合理的治疗方案。
血液流式细胞免疫分型还可以用于疾病监测和治疗效果评估。
在治疗过程中，通过连续追踪特定细胞亚群的变化，可以评估治疗效果和预测预后。
例如，在HIV感染者中，可以通过测定CD4+T细胞数量来监测疾病进展和指导抗病毒治疗。
此外，血液流式细胞免疫分型还可以用于检测免疫功能异常和自身免疫性疾病等。
血液流式细胞免疫分型的优势在于其高灵敏度、高特异性和高通量性。
通过流式细胞仪的高速连续检测，可以迅速分析大量样本，提高工作效率。
此外，血液流式细胞免疫分型还可以进行多参数分析，同时检测多个细胞表面标志物，更全面地了解细胞特征。
然而，血液流式细胞免疫分型也存在一些局限性。
首先，对于少数细胞数量较少的样本，如骨髓或淋巴结穿刺液，可能需要进行前处理或增加检测敏感性。
其次，标记物的选择和抗体的质量也会影响结果的准确性。
因此，在进行血液流式细胞免疫分型时，需要选择适当的抗体组合，并进行质量控制。
血液流式细胞免疫分型是一种重要的实验技术，可用于研究血液细胞群体特征、临床诊断和疾病监测。
单细胞 浆细胞分群
单细胞浆细胞分群
单细胞浆细胞分群是指将浆细胞这一类型的单个细胞按照其特征进行分类的过程。
浆细胞（Plasma cells）是免疫系统中的终末效应细胞，它们源自B淋巴细胞的分化，并负责产生和分泌大量的抗体以介导体液免疫反应。
在实验室或临床检测中，浆细胞分群可能涉及以下步骤：
1. 样本收集：从患者或实验动物体内收集含有浆细胞的样本，如血液、骨髓或淋巴组织。
2. 分离单细胞：使用诸如流式细胞术（FACS）、显微镜检查或自动细胞计数器等技术手段分离出单个浆细胞。
3. 表型分析：运用流式细胞术或免疫荧光染色技术，分析浆细胞表面的抗原表型，如CD19、CD20、CD27、κ/λ轻链等，以鉴定其是否为正常浆细胞或克隆性浆细胞。
4. 功能评估：测定浆细胞产生特定抗体的能力，可通过酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法来完成。
5. 遗传学分析：对浆细胞进行遗传学分析，如PCR、基因测序等，以检测克隆性扩张或基因突变。
6. 分群：根据浆细胞的表型和功能特征，将其划分为不同的亚群，如正常多克隆浆细胞、单克隆浆细胞、克隆性浆细胞病变等。
在一些疾病状态下，如多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma, MM），浆细胞可能出现克隆性增殖，导致浆细胞的异常分群。
这种异常的浆细胞群体可能会产生大量的单克隆免疫球蛋白，引起免疫功能紊乱和器官损伤。
浆细胞分群的研究对于诊断和治疗相关疾病具有重要意义，它有助于了解疾病的发展机制，指导个体化治疗方案的选择，以及监测治疗响应和疾病进展。
流式细胞术(贝克曼)
通过将流式细胞术与基因组学、蛋白质组学等技术相结合， 未来有望实现个体化医疗的精准诊断和治疗。这将为患者提 供更加定制化的治疗方案，提高治疗效果和生存率。
THANKS
感谢观看
血液学研究
造血干细胞研究
利用流式细胞术研究造血干细胞的自我更新、分化等 过程，有助于血液疾病的诊断和治疗。
白血病分型与诊断
通过流式细胞术对白血病细胞进行分型和鉴别，有助 于白血病的诊断和治疗。
红细胞与血小板检测
利用流式细胞术检测红细胞和血小板的数量和质量， 有助于贫血和出血性疾病的诊断和治疗。
04
流式细胞术的优缺点
优点
快速
灵敏度高
流式细胞术可以在短时间内处理大量样本 ，提高了检测效率。
流式细胞术能够检测到低浓度的细胞，灵 敏度较高。
多参数分析
自动化程度高
流式细胞术可以对细胞进行多参数分析， 包括细胞表面抗原、细胞内蛋白质和DNA 等。
流式细胞术通常采用自动化仪器进行操作 ，减少了人为误差和操作时间。
发展历程
20世纪50年代
流式细胞术的原理被提出，并开始应用于细 胞计数和大小测量。
20世纪80年代
计算机技术的引入，实现了自动化数据分析。
20世纪70年代
荧光染料和荧光显微镜的引入，使得多参数 检测成为可能。
21世纪
高通量测序技术的发展，推动了流式细胞术 在基因组学和蛋白质组学领域的应用。
应用领域
免疫学研究
用于检测免疫细胞表 面标志物、细胞因子 等，研究免疫细胞的 分化、发育和功能。
血液学研究
用于检测血液细胞， 诊断血液疾病，如白 血病、淋巴瘤等。
肿瘤学研究
用于检测肿瘤细胞的 表面标志物、基因突 变等，为肿瘤的诊断 和治疗提供依据。
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流式细胞术免疫表型分析在多发性骨髓瘤及其他浆细胞疾病诊断中的应用林阳;万岁桂【期刊名称】《标记免疫分析与临床》【年(卷),期】2013(020)001【总页数】3页(P60-62)【关键词】流式细胞术;免疫表型;多发性骨髓瘤;恶性浆细胞疾病;诊断【作者】林阳;万岁桂【作者单位】首都医科大学宣武医院血液科,北京,100053;首都医科大学宣武医院血液科,北京,100053【正文语种】中文【中图分类】R738.1多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是以骨髓内单克隆恶性浆细胞增生，伴有单克隆免疫球蛋白或轻链增多为特征的恶性肿瘤。
骨髓中异常浆细胞数量为其主要诊断标准和疗效判断依据之一，但是，MM有别于其他血液系统恶性肿瘤，骨髓瘤细胞在骨髓中往往呈灶性分布，骨髓穿刺部位不同，细胞数量差异很大。
有时肿瘤浆细胞和正常浆细胞形态学差异不大，形态学正确计数有一定困难。
近年来，随着单克隆抗体技术和流式细胞术的快速发展，流式细胞术免疫表型分析在MM诊断与鉴别诊断中的应用价值已得到广泛关注。
本文从恶性浆细胞的免疫表型特征、设门方法及抗体组合、诊断与鉴别诊断等综述如下。
1 良恶性浆细胞的免疫表型特征浆细胞为B淋巴细胞在抗原刺激下分化增殖而形成的一种不再具有分化增殖能力的终末细胞，其恶性增殖导致MM的发生。
虽然MM细胞是浆细胞起源，但是其表面CD分子表达与正常浆细胞并不完全相同。
CD138是跨膜硫酸乙酰肝素蛋白聚糖家族的成员，是一种细胞黏附分子，具有促进基质和细胞黏附、细胞增殖、维持细胞的分化类型和抑制肿瘤细胞生长等多种功能。
CD138分子为浆细胞分化抗原，从浆细胞祖细胞阶段开始出现，随着浆细胞的分化成熟其表达逐渐增强。
CD138在小鼠正常骨髓中的前B细胞上有表达，成熟B细胞缺乏，浆细胞阶段又重新表达。
在人正常骨髓中，无论是髓系或B淋系前体细胞以及成熟的淋巴细胞、单核细胞和粒细胞均不表达CDl38，仅浆细胞表达CDl38，因此CD138被认为是最具特异性的浆细胞标志［1］。
CD38分子是单链II型跨膜糖蛋白，与细胞的激活与增殖有关。
CD38出现在早期的前B和不成熟B细胞，在B细胞分化过程中丢失，而在浆细胞中重新出现并呈超强表达。
虽然早期髓系、B系前体细胞及成熟淋巴细胞、单核细胞和粒细胞尤其是激活的T淋巴细胞上等均有不同程度的CD38表达［2］，但其在浆细胞表面的表达强度明显强于其它造血细胞。
因此，CD38是识别浆细胞的一个特异性标志。
CD45是位于白细胞表面的白细胞共同抗原(leukocyte common antigen，LCA)，一个被确认的受体型蛋白酪氨酸磷酸酶，表达于除红细胞和血小板之外的所有造血细胞上。
正常的不成熟阶段的浆细胞表达高水平的CD45，在浆细胞分化发育中，CD45的表达逐渐下调［3］。
CD27分子属于肿瘤坏死因子受体家族，是成熟B淋巴细胞向浆细胞分化的一个重要分子，正常浆细胞均表达CD27。
CD117和CD34分子为干祖细胞的标记，在浆细胞表面不表达。
正常骨髓浆细胞尚表达泛B细胞抗原CD19，但不表达CD20。
CD56属于免疫球蛋白超家族的成员，是介导造血细胞粘附的粘附分子之一，是NK细胞的表面抗原，在正常成熟浆细胞上几乎不表达［4］。
恶性浆细胞免疫表型与正常浆细胞存在明显区别，虽然二者均表达CD38和CDl38，但二者的表达强度均呈异质性。
骨髓瘤细胞CD45呈弱表达或阴性，几乎不表达或很少表达CD19［5］，但大多数表达CD56［6-8］。
因此，CD38++CD138+CD19+CD56-与CD38++CD138+CD19-CD56+是鉴别良恶性浆细胞的主要免疫表型［6-9］。
此外，约半数MM细胞CD27表达缺失，尤其是在疾病复发和进展时更明显［10-11］。
部分MM细胞尚表达CD20，CD117，CD28，CD33［12］，因此，在检测恶性浆细胞时，CD19/CD56 与 CD20，CD117，CD27，CD28，CD33等联合使用可提高恶性浆细胞的检出率。
2 流式细胞术MM免疫表型分析的设门策略及抗体组合流式细胞术MM免疫表型分析时合理的设门方法是提高敏感性和可重复性的关键。
文献报道中的设门方法多数是以CD38，CD138和/或CD45表达为基础的，其中以CD38/散射光和CD138/散射光设门方法较为常用。
值得注意的是:采用CD38/SSC设门检测CD38表达相对较弱的MM细胞时易出现假阴性结果。
采用CD38/CD138设门虽可提高浆细胞检出率，但是因混有其它细胞的几率较高，易影响浆细胞异常免疫表型的分析。
采用CD38/CD45设门可减少污染其它细胞的几率，但同时也容易遗漏大多数CD45+的恶性浆细胞。
采用CD38，CD138，CD45及散射光特性联合分析，可提高异常浆细胞的检出率以及不同操作者间检测结果的一致性。
先使用CD38/CD138，而不是CD38/CD45设门，可确保不遗漏CD45+浆细胞。
EMN(european myeloma network)推荐使用4色或以上流式细胞术分析浆细胞，CD38，CD138，CD45和散射光特性至少在一管中同时分析，如果使用双参数分析主门必须包括CD38/CD138，其它管中至少包括2个标记来识别浆细胞，如果使用的流式细胞仪有充分的检测器，最佳的方法是每管中都包含CD38，CD45 和 CD138［8］。
分析恶性浆细胞和检查MM微小残留病时至少需要多少种抗体尚无定论。
已有的报道表明，包括CD19/CD56的组合适合于至少90%的患者，联合CD20，CD117，CD28和CD27可以将检出率提高到95%以上。
EMN已达成共识，仅使用单个抗原是不可能识别异常表型浆细胞的，无论是MM诊断还是微小残留病检测，至少使用 CD19/CD56，联合使用 CD20，CD117，CD28，CD27和胞浆免疫球蛋白轻链，异常浆细胞的检出率可达 100%［8］。
3 流式细胞术免疫表型分析在浆细胞肿瘤鉴别诊断中的作用浆细胞肿瘤为一组分泌单克隆免疫球蛋白的终末分化阶段B淋巴细胞增殖性疾病。
意义未明单克隆免疫球蛋白血症(monoclonal gammopathy ofundetermined signicance，MGUS)是最常见的浆细胞疾病之一，西方国家报道MGUS在50岁以上白种人中的发生率为3%，约1/3患者进展为MM，平均进展时间为2.5年。
其诊断标准为血清中M蛋白小于30 g/L，骨髓浆细胞数＜10%。
冒烟性骨髓瘤(Smoldering multiple myeloma SMM)是比MGUS更易进展为MM的浆细胞疾病，年进展为MM的发生率为10%［13］。
其诊断标准为血清中M蛋白达到30g/L，骨髓浆细胞数≥10%，但缺乏相关的器官和组织损伤(related organ or tissue damage，ROTI)和CRAB症状(高钙血症、肾功能不全、贫血、溶骨损害)。
由于MGUS、SMM和MM的治疗方案截然不同，鉴别诊断非常重要。
文献报道，浆细胞肿瘤骨髓中常同时存在正常和异常2群浆细胞，正常浆细胞占骨髓总浆细胞的比值(NPC/BMPC)≥5%有助于MGUS与MM的鉴别诊断、评估MGUS和SMM向MM转化的危险程度以及识别预后良好型的MM。
80%以上的MGUS患者骨髓中NPC/BMPC比例大于5%，仅少数MM患者(＜15%)骨髓中NPC/BMPC＞5%，因此骨髓中NPC/BMPC＞5%可作为MGUS与MM鉴别诊断的确切参数。
Paiva，B等报道NPC/BMPC≥5%的MM患者与NPC/BMPC＜5%的MM患者比较，高危染色体异常的发生率低，治疗反应率好，中位无进展生存率(PFS)分别为54个月和42个月，中位总生存率(OS)分别为未达到89个月［14-15］。
骨髓NPC/BMPC＜5%的MGUS和SMM患者5年进展为MM的发生率分别为25%和63%。
而骨髓NPC/BMPC≥5%的MGUS和SMM患者5年进展为MM的发生率分别下降为5%和8%［16］。
浆细胞白血病(plasma cell leukaemia，PCL)不同于MGUS、SMM的另一种少见的浆细胞肿瘤，其诊断标准为外周血中浆细胞大于20%或绝对值大于2.0×109/L。
PCL有原发和继发之分，继发性PCL大多数继发于MM，为MM的终末表现之一，也有少数继发于华氏巨球蛋白血症(waldenstrom macroglobulinemia，WM)。
与MM相比，PCL患者对化疗药物反应差，生存率低。
免疫表型分析显示PCL细胞表面CD38、CD138、CD2、CD3、CD10、CD13、CD16 和 CD15 表达与 MM 相似，但 CD20呈强表达;CD56、CD117、CD9、HLA-DR 通常不表达［17］。
CD28有助于原发 PCL与继发 PCL鉴别，原发PCLCD28的表达频率明显低于继发PCL。
边缘区淋巴瘤(marginal zone lymphoma，MZL)、淋巴浆细胞样淋巴瘤(lymphoplasmacytoid lymphoma，LPL)的肿瘤细胞常具有浆细胞分化特征，单从形态学上很难与浆细胞肿瘤鉴别。
流式细胞术免疫表型分析在MZL、LPL与浆细胞肿瘤鉴别诊断中起一定的作用［18］。
研究结果显示LPL存在2群肿瘤细胞，1群为单克隆B细胞，表达CD20，CD79a和PAX5;另外1群为单克隆浆细胞，表达CD38、CD138和胞浆单克隆免疫球蛋白轻链。
LPL浆细胞不同于MZL和大多数MM细胞，可部分表达PAX5。
LPL浆细胞的另一个免疫表型特征为表达CD19和CD45，不表达CD56，类似于正常浆细胞表型，并同时表达胞膜和胞浆单克隆轻链［19］。
伴浆细胞分化MZL不同于LPL，仅1群有浆细胞分化的单克隆B淋巴细胞。
免疫表型为sIgdim/-，CD19+，CD20dim/-，CD138-，CD56-，CD38++，而不伴浆细胞分化MZL免疫表型为CD38dim/-，CD138-，CD20+ ，CD79b+ ，sIg+［20］。
小结多参数流式细胞术在浆细胞肿瘤诊断与鉴别诊断中起重要作用。
但因CD38，CD138不是浆细胞特有的抗原，在其它造血细胞和非造血细胞中均可表达，并在恶性浆细胞表面的表达强度成异质性，因此建议采用CD38，CD138，CD45及散射光联合设门，四色或以上抗体组合进行免疫表型分析。
胞浆免疫球蛋白轻链检测有利于多克隆与单克隆浆细胞的鉴别。
膜表面CD19/CD56联合胞浆免疫球蛋白轻链同时标记可提高恶性浆细胞的检出率。
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