药学概论-第五章 药物分析学-(一)
(药物分析学)第一章药物分析学导论
❖ 而药物分析学的进一步发展也需要生物学、 医学 、 理学和工学的技术支撑
多学科交叉特征明显
生物学 （医学、 细胞、分子、 生化）
高内涵 分析
体内动 态分析
复杂体 系分析
药物分析
药物学药理 学科技问题
3000
AsB
Abundance(cps)
2500 2000
AsC
1500
1000
DMA As(III)
MMA As(V)
500
0
0
200
400
600
800
Time(sec)
AsC：胂胆碱
AsB：胂甜菜碱
AsⅢ：三价砷（亚砷酸）
ＤＭＡ：二甲基砷酸 AsⅤ：五价砷（砷酸） MMA:甲基砷酸
1%HCl萃取含雄黄样品的价态分析:
研究方案
MSn
氘代
MSn
鉴定结构
生 o料物体系r药原
裂解 规律
（A）加合锂的赖诺普利的能量谱
通过加和锂离子有效改变了 赖诺普利与其RSS异构体之间 结合力,从而在二级质谱及能 量谱中出现较大差异，能在 线有效地区分这对异构体
（B）加合锂赖诺普利RSS异构体的能量谱
J Mass Spectrom. 2010; 45: 89–96
O2N H NN
O2N
NO2
DPPH (purple)
DPPH-H (yellow)
二苯基苦肼基自由基(1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazyl，简称DPPH) ，是一 种很稳定的以氮为中心的自由基，若被测物能清除它，则提示被测物具有降低羟 自由基、烷自由基或过氧自由基等自由基的有效浓度，打断脂质过氧化链反应的 作用。 DPPH本身显紫色，具有清除DPPH自由基能力的物质能使其还原成 黄色的二苯基苦肼（diphenylpicrylhydrazine, DPPH-H）。
第五章 药物定量分析与分析方法验证
第五章药物定量分析与分析方法验证第1节定量分析样品的前处理一、概述定量分析时需根据所选的分析方法、分析对象的结构与性质以及药物制剂的处方组成对试样进行不同的前处理，用以满足不同的分析方法对试样定量分析的具体要求。
但大多数化学原料药可以不经过特殊处理，使用适当的溶剂溶解后直接采用滴定分析法、分光光度法或色谱法测定，而对于药物制剂的前处理主要考虑处方组成中干扰组分如何排除。
该内容在第十七章“药物制剂分析概论”中详细介绍。
故本节主要介绍含金属或含卤素、硒、硫、磷等特殊元素的药物分析前处理方法。
定量分析样品的前处理方法与金属或卤素在分子中的结合状态直接相关，若有机药物中含有金属或卤素，其药理作用部分主要为金属和卤素，分析时必须测定其所含的金属或卤素。
如果有机药物中的卤素原子直接与脂肪链上的碳原子相连接，其分子结合状态不甚牢固，可在碱溶液中回流解离为无机离子直接分析；如果卤素原子与芳环上的碳原子相连接，其分子结合状态相对牢固，需在碱性溶液中加还原剂回流才能使结合状态解离再行分析。
如果有机药物中的金属原子不直接与碳原子相连，多为有机酸及酚的金属盐或配位化合物，称为含金属的有机药物，其金属原子在分子结构中的结合状态不够牢固，在水溶液中直接解离出金属离子。
若其有机结构部分不干扰测定，可直接在溶液中进行金属的鉴别或含量测定；如果金属原子直接与碳原子以共价键相连接，其金属原子在分子结构中的结合状态比较牢固，在溶液中一般不能解离出金属离子，需经适当前处理，使有机结合状态金属转变为无机金属化合物，才可进行分析测定。
根据以上卤素和金属原子于有机药物分子中结合状态的差异，样品的前处理方法大体分为两类：一是不经有机破坏的样品前处理方法；二是经有机破坏的样品前处理方法。
简要叙述如下：二、不经有机破坏的样品前处理当金属原子或卤素原子在药物分子中的结合的不甚牢固时，样品的前处理可以不经有机破坏。
（一）直接测定法本法适用于金属原子不直接与碳原子相连的含金属的有机药物或某些碳-金属键（C-M）结合不牢固的含金属的有机药物，在水溶液中可以解离，所以不需要进行破坏，能够直接进行滴定。
药物分析 课件 第五章 药物的杂质检查详述
相同条件：即平行原则，两者在所用试剂、反应条件、 反应时间、实验顺序等方面均相同，以保证结果的可比性。
（2）方法
供试品溶液与对照液在相同条件下反应，比 较结果，确认杂质是否超过规定。
比较结果:比色法或比浊法
药品合格
药品不合格
二、药物的杂质检查方法
大致分为三种： 1. 对照法（限量检查法） 2. 灵敏度法 3. 比较法
1. 对照法（限量检查法）
注意：平行原则
(1)对照法:系指取一定量对照品(纯杂质)溶液与一
定量供试品溶液在相同条件下处理后，比较结果， 以确定杂质的含量是否超过杂质对照液的量（限 量）。
按杂质的产生 按杂质的结构分类 与存在的特点 分类
1. 影响药物稳定性的杂 质 2. 对人体有毒性作用的 杂质 3. 信号杂质
1. 一般杂质 1.无机杂质 2. 特殊杂质 2.有机杂质
注意：药典中规定的检查项目，是指正常生产和储存中可 能产生并需控制的杂质。
药典中未规定检查的杂质，一般有以下几种情况：
• （1）灵敏度法 在检测的条件下，以待检杂质反应的灵 敏度作为该杂质的最大允许量。
• 即系指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下， 不得有正反应出现。
• （2）特点 ：不需对照品；不必知道杂质含量
• 该法不需要对照液，而是以不出现阳性反应为 标准。如蒸馏水中检查氯化物，要求在50ml水中 加入硝酸银试液，不得发生浑浊。
(4) 所用金属器皿及装置等引入杂质：不耐酸碱的 金属设备；含金属离子的器皿、管道使药物最终 引入砷盐、铅、铁、铜、锌等金属杂质。
• 2.贮藏过程引入的杂质
药物分析学课件 各论第五章抗菌药物与抗生素类的分析5-15
[示例] 盐酸洛美沙星含量的戊烷磺酸钠离子 对HPLC 测定
诺氟沙星乳膏含量的UV测定
含量测定
•
对照品溶液的制备 精密称取在105℃干燥至恒重的诺
氟沙星对照品适量,加氢氧化钠液（0.02mol/L）制备成每
1ml中含4μg的废液。
• 供试品溶液的制备精密称取适量（约相当于诺氟沙星 4mg）置分液漏斗中，加氯仿15ml，振摇使膏体溶解后， 用氢氧化钠液（0.02mol/L）25、20、20与10m（分次提 取（每次提取时加饱和氯化钠溶液1ml）收集提取液置 100ml量瓶中，用氢氧化钠液（0.02mol/L）稀释至刻度， 滤过，弃去初滤液，精精密量取续滤液10ml，置100ml量 瓶中，用氢氧化钠液（0.02mol/L）稀释至刻度，摇匀， 即得。 测定法 取对照品溶液与供试品溶液，照分光光度
醋酸铵高氯酸钠 溶液-乙腈(85:15)
检测波长 294nm
C18柱 10μl进样
离子对色谱
混合对照溶液
左氧氟沙星0.12mg /ml
环丙沙星6μg /ml 杂质E 6μg /ml
外标法
另取左氧氟沙星对照 品适量，同法测定
供试品溶液
供试品约60mg 50ml 取5ml
500ml
第二节 -内酰胺类抗生素分析
N
O
氧氟沙星
代表药物
第四代药物： O
O
F
CO2H
F
CO2H
N
N
N
N
HN
O
N
O
? 左氧氟沙星
加替沙星
NH2 O
F
CO2H
H N
H
F
O CO2H
N
N
药物分析学第五章复习检测题及答案
《药物分析学》第五章巴比妥类药物的鉴别复习检测题一、选择题1．在碱性条件下加热水解产生氨气使红色石蕊试纸变蓝的药物是（）A、乙酰水杨酸B、异烟肼C、对乙酰氨基酚D、盐酸氯丙嗪E、巴比妥类2．巴比妥类药物在非水介质中酸性增强，若用非水法测定含量，常用的指示剂为（）A、酚酞 B、甲基橙 C、结晶紫D、甲基红－溴甲酚绿E、以上都不对3．药典规定用银量法测定巴比妥类药物的含量，所采用的指示终点的方法为（）A、永停滴定法 B、内指示剂法 C、外指示剂法D、电位滴定法E、观察形成不溶性的二银盐4．在碱性条件下与AgNO3反应生成不溶性二银盐的药物是（）A、咖啡因B、尼可杀米C、安定D、巴比妥类E、维生素E5．非水液中滴定巴比妥类药物，其目的是（）A、巴比妥类的Ka值增大，酸性增强B、增加巴比妥类的溶解度C、使巴比妥类的Ka值减少D、除去干扰物的影响E、防止沉淀生成6．药典规定用银量法测定巴比妥类药物的含量，所采用的指示终点的方法为（）A、永停滴定法 B、加淀粉－KI指示剂法 C、外指示剂法D、加结晶紫指示终点法E、以上都不对7．巴比妥类药物的酸碱滴定法的介质为（）A、水－乙醚B、水－乙晴C、水－乙醇D、水－丙酮E、水－甲醇8．司可巴比妥与碘试液发生反应，使碘试液颜色消失的原因是（）A、由于结构中含有酰亚胺基B、由于结构中含有不饱和取代基C、由于结构中含有饱和取代基D、由于结构中含有酚羟基E、由于结构中含有芳伯氨基9．在胶束水溶液中滴定巴比妥类药物，其目的是（）A、增加巴比妥类的溶解度B、使巴比妥类的Ka值减小C、除去干扰物的影响D、防止沉淀生成E、以上都不对10．巴比妥类药物与银盐反应是由于结构中含有（）A、△4－3－酮基B、芳香伯氨基C、酰亚氨基D、酰肿基E、酚羟基11．与碘试液反应发生加成反应，使碘试液颜色消失的巴比妥类药物是（）A、苯巴比妥B、司可巴比妥C、巴比妥D、戊巴比妥E、硫喷妥钠12．巴比妥类药物与AgNO3作用下生成二银盐沉淀的反应，是由于基本结构中含有（）A、R取代基B、酰肼基C、芳香伯氨基D、酰亚氨基E、以上都不对13．巴比妥类药物用非水溶液滴定法时常用的有机溶剂为二甲基酰胺，滴定剂为甲醇钠的甲醇液，常用的指示剂为（）A、甲基橙B、酚酞C、麝香草酚兰D、酚红E、以上都不对14．巴比妥类药物在非水介质中酸性增强，若用非水法测定含量，常用的指示剂为（）A、酚酞B、甲基橙C、麝香草酚兰D、结晶紫E、甲基红－溴甲酚绿15．根据巴比妥类药物的结构特点可采用以下方法对其进行定量分析，其中不对的方法（）A、银量法B、溴量法C、紫外分光光度法D、酸碱滴定法E、三氯化铁比色法二、多选题1．硫喷妥钠与铜盐的鉴别反应生产物为：（）A、紫色B、蓝色C、绿色D、黄色E、紫堇色2．巴比妥类药物的鉴别方法有：（）A、与钡盐反应生产白色化合物B、与镁盐反应生产白色化合物C、与银盐反应生产白色化合物D、与铜盐反应生产白色化合物E、与氢氧化钠溶液反应生产白色产物3．巴比妥类药物具有的特性为：（）A、弱碱性B、弱酸性C、易与重金属离子络和D、易水解E、具有紫外吸收特征4．下列哪种方法可以用来鉴别司可巴比妥：（）A、与溴试液反应，溴试液退色B、与亚硝酸钠－硫酸反应，生成桔黄色产物C、与铜盐反应，生成绿色沉淀D、与三氯化铁反应，生成紫色化合物5．下列哪种方法能用于巴比妥类药物的含量测定：（）A、非水滴定法B、溴量法C、两者均可D、两者均不可三、填空题1．巴比妥类药物的母核为，为环状的结构。
药物分析概论
绪论
一、药物分析的性质与任务
（二）药物分析的任务 1. 保证临床用药的安全和有效
首要任务是保证用药的安全和有效。 在药品的生产、经营与临床使用等环节 对药品进行全面的质量控制与监督。
2019/12/27
一、药物分析的性质与任务
（二）药物分析的任务 1. 保证临床用药的安全和有效
依据科学的方法、稳定的技术路线、先 进的生产设备条件和科学规范的生产管理， 才能够稳定地生产出质量合格的药品。确保 其：安全、有效和质量可控。
2019/12/27
绪论
二、药品质量与管理规范
(一）中国药品管理法规
国家药品食品管理局依据《药品管理法》 制定了相关的管理规范
(GLP、GCP、GMP、GSP和GAP等)
2019/12/27
一、药物分析的性质与任务
（二）药物分析的任务
4. 药代动力学研究与治疗药物监测
揭示药物在人或动物体内的动态变化规律； 阐明药物的吸收、分布、代谢及排泄过程和 特点； 开展治疗药物的分析监测，进行个体化给药.
2019/12/27
一、药物分析的性质与任务
（二）药物分析的任务 发展趋势： 静态——常规分析
2019/12/27
绪论
一、药物分析的性质与任务
（二）药物分析的任务 1. 保证临床用药的安全和有效
➢ 贮藏过程中的质量控制(稳定性考察) ——确定贮藏条件和管理方法
2019/12/27
一、药物分析的性质与任务
（二）药物分析的任务
1. 保证临床用药的安全和有效
药物分析在药品经营中的应用—
药品均有特定的稳定性特征，受到温度、湿度 和光照等环境因素的影响，会发生降解，因其质 量变化。
中国药科大学药物分析课件第五章
4. 与重金属反应
(1)与Ag+的反应
R1 R2 CO C CO NH N C ONa + AgNO3 + Na2CO3
R1 R2 CO C CO N Ag N C ONa + NaHCO3 + NaNO3
6. 紫外吸收光谱特征
主要特点：随着电离级数的不同，巴比
妥类药物的紫外光谱会发生显著的变化。 也就是说，溶液 pH 值的不同以及取代基 的不同会对紫外光谱产生影响。
A. H2SO4溶液 （0.05mol/L） B. pH9.9缓冲液 C. NaOH溶液 （0.1mol/L）
巴比妥类药物的紫外吸收光谱
可溶性的
R1 R2 CO C CO N Ag Ag R1 R2 CO C CO N Ag N C O + NaNO3 N C ONa + AgNO3
白色
(2)与Cu2+的反应
巴比妥类药物 + 铜吡啶试液
硫喷妥钠 + 铜吡啶试液
吡啶
紫色或紫 色沉淀
吡啶
绿色
R1 R2
CO NH C CO NH C O
水—吡啶
R1 R2
CO C
N C OH
CO NH
部分离子化
R1 C R2
CO
N C O
+ H+
CO NH
2+ N 2 N + CuSO4 N Cu + SO2 4
2
R1 R2
CO C
N C O
药物分析-第5章-药物的含量测定ppt课件
.
32
（3）在测定时或改测其它检品时，应用待测溶液冲洗吸收池3～4次，用 干净绸布或擦镜纸擦净吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨 损），放入样品室每次方向应一致。
（4）取吸收池时，应拿毛玻璃两面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油 污。使用完后及时用测定溶剂冲净，再用纯化水冲净，用干净绸布或 擦镜纸擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防尘保存。若吸收池内外壁 沾污，用脱脂棉缠在细玻璃棒上蘸上乙醇，轻轻擦试，再用纯化水冲 净。
（2）含量测定：
a.对照品比较法：
b.吸收系数法 ：
含量 %A样C对稀释倍 10数 % 0 A对M V样
含量%=
1C0V 0稀释倍 E1 1c% m 数 A L1
V稀释倍数
00
10% 0
M 样品
M 样品
.
18
c.比色法：供试品本身在紫外-可见区没有强吸收，或在紫外区
虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度，可加入适当的显色剂显
也不同，达到分离的目的。
液相色谱法：以液体为流动相 气相色谱法：以气体为流动相
.
22
一、高效液相色谱法
高效液相色谱法：采用高压输液泵将规定的流动相泵
入装有填充剂的色谱柱将待测组分进行分离测定的色谱方 法。
化学键合相色谱：最广泛的
将固定相的官能团键合在载体上，形成的固定相 ，一般属于 分配色谱法，不易流失
（6）标准溶液 已知准确浓度的溶液（mol/L）
.
5
2.滴定液的配制和标定
基准物质：能用来直接配制标准溶液的化学试剂 滴定度：每毫升标准溶液相当于被测物质的质量
（g或mg），以符号T表示
直接法（不需标定） 间接法（标定）：先将其配制成近似于所需浓度
《药物分析》chapter5
解度不同，采用提取重量法测定杂质含量。
五、含量测定
（一）银量法
在滴定过程中，巴比妥类药物首先形成可 溶性的一银盐，当被测定的巴比妥类药物完全 形成一银盐后，稍过量的银离子就与巴比妥类
（六）薄层色谱行为特征
1、 薄层色谱法
取巴比妥类药物约50μg点于硅胶GF254薄层 板上，以氯仿-丙酮（4:1）混合液作流动相， 展开后，薄层板用温热空气流进 行干燥， 然后喷洒2%的氯化汞乙醇溶液，继之再喷洒 2%的1，5-二苯卡巴腙乙醇溶液。此时则在 紫色的背景上观察到巴比妥类药物的白色斑 点。
(三) 与重金属离子的反应
1．与银盐的反应
可溶性的一银盐
难溶性二银盐白色沉淀。
2．与铜盐的反应
铜离子吡啶溶液
稳定的配位化合物
3．与钴盐的反应
紫堇色配位化合物
4．与汞盐的反应
白色汞盐沉淀,能溶于氨试液
(四) 与香草醛(Vanillin)的反应
加乙醇后，其反应产物可转变为：
(五) 紫外吸收光谱特征
2、铜盐反应的方法 取供试品约50mg，加吡啶 溶液（1→10）5ml，溶解后加铜吡啶试液（硫 酸铜4g，加水90ml溶解后，加吡啶30ml，即得） 1ml，即显紫色或生成紫色沉淀。
（二）测定熔点
1、司可巴比妥钠的鉴别 取本品1g，加水100 ml 溶解后，加稀醋酸5ml，强力搅拌，再加水 200ml，加热煮沸使溶解成澄清溶液（液面无 油状物），放冷，静臵后析出结晶，滤过，结 晶在70℃干燥后，熔点约为97℃。 2、苯巴比妥钠的鉴别 中国药典的方法：取 本品约0.5g，加水5ml溶解后，加稍过量的稀 盐酸，即析出白色结晶性沉淀，滤过；沉淀用 水洗净，在105℃干燥后，熔点应为174℃178℃。
第五章药物定量分析与分析方法的验证新
重现性:
不同实验室，不同人测定的精密度
三、专属性(Specificity)
指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在 情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性。
四、检测限(Limit of Detection, LOD)
药物能被检出的最低浓度(µg/ml) 1.非仪器分析目视法 2.信噪比法 一般以信噪比（S/N）3:1或2:1的相应浓 度或注入量来确定检测限
用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为大黄素对照品储备 液。精密吸取 储备液0.2、0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、 9.0mL分别置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，按上述 色谱条件，分别进样10 μl，记录峰面积，以峰面积 ( y ) 为纵坐标、大黄素浓度 ( x ) 为横坐标进行线性回归，得 回归方程。 Y = 2.962 106 X － 4.958 103 r = 0.999 9 结果表明大黄素溶液在 6.92 μg·mL - 1 ~ 311 μg·mL - 1 之间呈良好的线性关系。
接近的程度。
回收率(Recovery)
3×3，至少9 个测定结果
回收试验法
回收率(%)
测得量 加入量
100%
加样回收试验 回收率(%) 测得量 本底量 100%
加入量
回收试验 ：空白+已知量A的对照 品（或标准品）测定，测定值为M
R=M（平均）/A *100%
加样回收试验：已准确测定药物含 量P的真是样品+已知量A的对照品 （或标准品）测定，测定值为M
七.范围
达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法 适用的高低限浓度或量的区间。
八、耐用性(Robustness)
测定条件稍有变动时，对测定结果的 影响程度 影响因素：被测溶液的稳定性，流动 相的组成和pH，商品柱的品牌，柱 温等