混合型饲料添加剂甘露寡糖的检验操作规程
甘露寡糖替代抗生素对肉鸡的影响
甘露寡糖替代抗生素对肉鸡的影响抗生素作为饲料添加剂应用于畜牧业已经有四五十年的历史了，长期使用抗生素虽然提高了畜禽生产力，但也造成了药物残留、耐药菌产生、动物免疫功能下降等危害，甚至威胁到人们的身体健康。
随着许多国家开始严格限制抗生素的使用，抗生素替代品研究逐渐成为热点。
甘露寡糖（mannose oligosaccharide,MOS）是由几个甘露糖分子或甘露糖与葡萄糖通过a-1,2、a-1,3、a-1,6糖苷键组成的寡聚糖，作为一种新型饲料添加剂，甘露寡糖不但可以促进有益菌增殖，还能吸附病原菌，改善肠道微生态，增强机体免疫力，提高动物生产力。
他克服了抗生素的缺点，用量少、纯天然、无残留且稳定性强，在提高家禽及幼龄动物日增重及饲料转化率、降低死亡率、增强动物免疫力等方面有明显作用，能在较大程度上取代抗生素，在动物营养上有良好的应用前景，本研究通过饲养试验探讨了甘露寡糖替代抗生素对肉鸡生产性能的影响，以及饲料中添加甘露寡糖对肉鸡免疫器官发育的影响。
1、材料与方法甘露寡糖金霉素和黄霉素为市售产品1.1试验动物与分组试验选用同一种鸡场生产的同批次1日龄艾薇因商品苗鸡900只，随机分为3组，每组300只，分别为对照组、抗生素组、甘露寡糖组，饲养期42天。
试验设计见表1.表1试验设计分组组别处理对照组无抗生素组金霉素100mg/kg+黄霉素5mg/kg甘露寡糖组甘露寡糖1g/kg1.2试验日粮根据艾薇因商品代肉仔鸡的营养需要标准，制定基础日粮配方，见表2表2 日粮成分及营养水平组成原料 0-21天 22-42天玉米 57.6 60.85豆粕 33.3 30.5豆油 2.69 2.73鱼粉 2.0 2.0石粉 1.64 1.58磷酸二氢钙 1.36 0.951%小鸡预混料 1.0 1.0食盐 0.25 1.0蛋氨酸 0.15 0.14赖氨酸 0 0营养水平代谢能 2.95 3.0粗蛋白 21.0 20.0钙 1.0 0.90总磷 0.45 0.35赖氨酸 1.15 1.08蛋氨酸 0.5 0.481.3饲养管理及免疫程序饲养管理参照（avian肉鸡饲养手册）进行，平面饲养，自由采食，自由饮水，通风换气良好，因为器具定期洗刷，消毒，按常规程序进行免疫接种。
甘露寡糖的作用机制及其在动物生产中的应用
甘露寡糖的作用机制及其在动物生产中的
应用
甘露寡糖是一种新型的低聚糖，具有多种生理功能，如调节肠道菌群、增强免疫力、降低血糖和胆固醇等。
其作用机制主要是通过调节肠道菌群来发挥作用。
肠道菌群是人和动物肠道内的微生物群落，对宿主的健康有着重要的影响。
甘露寡糖可以作为肠道菌群的营养源，促进有益菌的生长，如双歧杆菌和乳酸菌等，同时抑制有害菌的生长，如大肠杆菌和沙门氏菌等。
这种作用可以改善肠道菌群的平衡，提高肠道健康水平，从而增强免疫力，降低炎症反应，预防肠道疾病的发生。
甘露寡糖还可以通过调节胰岛素的分泌来降低血糖和胆固醇。
研究表明，甘露寡糖可以促进胰岛素的分泌，提高胰岛素敏感性，从而降低血糖和胆固醇的水平。
这种作用可以预防糖尿病和心血管疾病的发生。
在动物生产中，甘露寡糖可以作为一种新型的饲料添加剂，用于改善动物的生长性能和健康水平。
研究表明，甘露寡糖可以提高动物的饲料利用率，增加体重增长率，同时降低肠道疾病的发生率。
这种作用可以提高动物的生产效益，降低养殖成本，从而促进动物生产的可持续发展。
甘露寡糖具有多种生理功能，其作用机制主要是通过调节肠道菌群
来发挥作用。
在动物生产中，甘露寡糖可以作为一种新型的饲料添加剂，用于改善动物的生长性能和健康水平。
随着人们对健康和环境的关注度不断提高，甘露寡糖的应用前景将会越来越广阔。
饲料原料检验操作技巧规章
《饲料质量安全规范》操作规程汇编质检部（原料检验操作规程）徐州金牌药业有限公司二〇一六年目录添加剂预混合饲料的原料操作规程 (1)维生素A乙酸酯微粒 (2)维生素E粉 (4)维生素D3微粒 (6)维生素K3（亚硫酸氢钠甲萘醌） (8)维生素B1（硝酸硫胺） (10)维生素B2（核黄素） (12)维生素B2（核黄素）流动性微粒－80％ (14)烟酸 (16)烟酰胺 (18)D-泛酸钙 (20)维生素B6 (22)叶酸 (25)维生素B12（氰钴胺）粉剂 (27)饲料添加剂维生素C (29)2％D-生物素 (31)硫酸铜 (34)硫酸亚铁 (36)硫酸锰 (38)硫酸锌 (40)碘化钾 (42)碘酸钙 (44)氯化钠 (46)饲料级1％亚硒酸钠 (48)饲料级DL-蛋氨酸 (50)L-赖氨酸盐酸盐 (52)混合型饲料添加剂的原料检验操作规程 (54)牛磺酸 (55)谷氨酸钠 (57)吡啶甲酸铬 (59)饲料级富马酸 (62)柠檬酸 (64)食品添加剂乳酸 (65)甘露寡糖 (66)嗜酸乳杆菌 (68)活性干酵母（酿酒酵母） (70)枯草芽孢杆菌 (72)地衣芽孢杆菌 (73)饲料级轻质碳酸钙 (74)添加剂预混合饲料的原料操作规程1 维生素A乙酸酯微粒2 维生素E粉3 维生素D3微粒4 维生素K3（亚硫酸氢钠甲萘醌）5 维生素B1（硝酸硫胺）6 维生素B2（核黄素）7 维生素B2（核黄素）流动性微粒－80％8 烟酸9 烟酰胺10 D-泛酸钙11 维生素B612 叶酸13 维生素B12（氰钴胺）粉剂14 饲料添加剂维生素C15 2％d-生物素16 硫酸铜17 硫酸亚铁18 硫酸锰19 硫酸锌20 碘化钾21 氯化钠22 饲料级1％亚硒酸钠23 饲料级DL-蛋氨酸24 L-赖氨酸盐酸盐维生素A乙酸酯微粒Vitamin A acetate beadlets[质量标准依据] GB 7292-1999分子式：C22H32O2分子量：328.49（按1995年国际相对原子质量）1.技术要求1.1 外观和性状本品为淡黄色至棕褐色颗粒状粉末。
甘露醇检验方法确认
甘露醇检验方法确认1 确认目的检验方法是质量保证体系的重要组成部分，《药品生产质量管理规范(2010年修订)》第十章“质量控制与质量保证”第二百二十三条规定:采用《中华人民共和国药典》及其他法定标准收载的检验方法，不需要进行检验方法的确认，企业应当对检验方法进行确认，以确保检验数据准确、可靠“。
甘露醇执行的时《中国药典》2010年版二部标准，应当对该原料的分析方法进行确认，以确认该检验方法能够始终如一地符合客观实际的数据或结果，可用于该原料的检验。
2 适用范围适用于本公司甘露醇原料的检验工作。
3 职责部门部门职责责任人工作划分方案起草、培训、协调确认工作、方检验方法确认小组织实施、起草确案起草、培训、组组认报告织实施、书写报告采购所需试剂试负责原料的采购物料供应部药、标准品、对照及协助取样工作品等按方案进行确认，QC 负责确认实施负责记录的收集整理质量管负责现场监控，协理部调确认活动，确认QA 现场全程监控文件归档，组织确认文件的会审批准确认方案和质量总监批准方案和报告确认报告4 概述我公司甘露醇按《中国药典》2010年版二部第83页相关内容进行检验，属于法定标准，因此我们选用原中国食品药品监督管理局认证中心编制的药品GMP指南》质量控制实验室与物料系统分册有关药品分析方法验证与确认第一法对该分析方法进行确认。
确认过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写确认方案变更申请及批准书，报确认小组批准。
5 确认条件及计划实施时间5.1 确认条件:厂房设施经过确认符合要求，所需仪器设备已经过确认、校正(验)并符合要求。
5.2 计划实施时间:与物料进厂检验同步进行。
6 确认依据文件《药品生产确认指南》(2003年版)《药品生产质量管理规范》(2010年修订)《中华人民共和国药典》2010年版二部《药品GMP指南》质量控制实验室与物料系统分册《甘露醇质量标准》《甘露醇原料检验SOP》7 确认内容与可接受标准根据《药品GMP指南》质量控制实验室与物料系统分册确定方法确认方式一:由两名检验人员分别独立队同一批产品进行检验(如可能，使用不同的仪器)，比较两人的检验结果来证明方法在本实验室(人员、分析仪器、试剂等)的适用性。
甘露寡糖的生理功能及在动物生产中的应用
促进剂的作用。大量研究表 明， 甘露寡糖在改善饲料品质、 高仔猪、 提 家禽和幼龄反 刍动物 的日 增重及饲料转化率、 降低死亡率、 增强动物免疫力等方面有明显作用， 并能在较大程度
上 取代 抗 生素。
关键 词 ： 露寡 糖 ；生理功 能 ； 物生产 甘 动
Ｔｈ ｈ ｓｏ ｏ ｉａ ｕ ｃｉ ｎ ｏ ａ ｎ ｓ － ｉ ｏ ａ ｃ ａ ｉ ｅ ｅ Ｐ ｙ ｉ ｌｇ ｃ ｌＦ ｎ ｔ ｆＭ ｎ ｏ ｅ—Ｏｌ ｓ ｃ ｈ ｒｄ ｏ ｇ ａ ｄ ｉ ｐ ｉａ ｉｎ ｉ ｉ ａ ｒ ｄ ｃｉ ｎ ｎ ｔ Ａｐ ｌ ｔ ｎ Ａｎ ｍ ｌＰ ｏ ｕ ｔ ｓ ｃ ｏ ｏ
而引起 了公众的争议 ， 至今仍激烈进行。随着人 们认识 的不断深人 ， 对食品和环境质量的要求不 断提高， 对抗生素带来的弊端有 了越来越深刻的
认识： 如破坏肠道菌群的生态平衡 ， 产生耐药菌 株， 药物残留直接危害人类健康 ， 破坏生态环境 引起生态污染等。世界范围内， 抗生素的使用越 来越受到限制 。特别是近些年 ， 人类对动物食品 安全性的关注程度 日益提高 ， 提倡绿色食 品、 生 态畜牧业 ， 对禁止在饲料 中添加抗生素及其他药 物、 激素 的 呼声更 加 高 涨 。许 多 国家 和地 区 （ 如 欧盟） 相继颁布了法令 ， 禁止或限制某些抗生素
自 Ｄ ｍ ｇ （ ９５ 发 明磺胺类药 物， ｈｉ ｏ ａｋ １３ ） Ｃａ ｎ 等（９０ 证实青霉素可 以作为一种有效 的化学 １４ ） 治疗 药 物 以来 ， 菌药物 的研 究 、 选 、 抗 筛 合成 及应 用迅速发展 ， 进入“ 抗生素时代” ９０年美 国 。１５ 食 品与药 物管 理局 （ Ｄ 首 次 批准 抗 生 素用 作 Ｆ Ａ） 饲料 添加剂 后 ， 世界各 国相继 进行抗 生素 的饲 喂 试验 ， 并用 于 生产 。近 几 十 年里 ， 用抗 生 素 应 饲 用于饲料中， 极显著地提高了动物生产的效率 ， 为人类提供 了大量而经济的畜禽产品。但在其 应用不久后的 ２ 世纪 ５ ０ ０年代中期 ， 就因畜产品 的残留和耐药性菌株的产生及耐药 因子 的传递 可能对人体健康及人 、 畜疾病治疗产生有害影响
混合型饲料添加剂嗜酸乳杆菌的检验操作规程
混合型饲料添加剂嗜酸乳杆菌的检验操作规程
Lactobacillus acidophilus
1、质量标准来源：GB/T 20191-2006
2、名称：嗜酸乳杆菌
3、检验过程
3.1、感官：取本品适量，置于非太阳光直射条件下的明亮处，目视检测，本品色泽一致，无发霉变质、结块及异味、异臭。
3.2、粒度：精密称取本品100g，置于0.400/0.25mm金属丝编制筛中，手动或机械振摇10分钟，本品应100％通过0.400/0.25mm 金属丝编制筛。
3.3、水分：取本品1g，精密称定，置于经105℃烘干至恒重的扁形称量瓶中，在105℃条件下干燥至恒重，减失重量应不得过
4.0%。
3.4、嗜酸乳杆菌的测定：
3.4.1 试剂和培养基
3.4.1.1 稀释液：0.85%生理盐水经121℃高压灭菌20分钟；3.4.1.2 改良MC培养基：经121℃高压灭菌20分钟，在无菌条件下注入灭菌后的平皿中，每个平皿约注入15ml培养基。
3.4.2 操作步骤
3.4.2.1 以无菌操作将经过充分要匀的试料25g（或25mL）放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内配成1:10的均匀稀释液。
混合型饲料添加剂谷氨酸钠的检验操作规程
M——试样质量，单位为克(g)。
2.1.4允许差
同一试样测试结果，相对平均偏差不得超过0.3%。
2.2干燥失重的测定
2.2.1测定方法
称取样品1～2g（准确至0.0002g），置于已在105℃烘箱中干燥至恒重的称量瓶中，打开称量瓶瓶盖，置于105℃烘箱中，干燥至恒重。
2.1.3计算
谷氨酸钠的含量（X1）以质量分数表示，按式（1）计算：
式中：0.093 57——1.00mL高氯酸标准溶液﹝c(HCIO4)=1.000mol/L﹞相当于谷氨酸钠（C5H8NNAO4 H2O）的质量，单位为克(g)；
V1——试样消耗高氯酸标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）；
V0——空白消耗高氯酸标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）；
2.2.2计算和结果的表示
干燥失重XБайду номын сангаас（以质量分数计，数值以%表示）按下式计算：
式中：M1——干燥前的样品加称量瓶重，g；
M2——干燥后的样品加称量瓶重，g；
M——样品质重，g。
混合型饲料添加剂谷氨酸钠
[质量标准依据]：GB/T 8967-2007
分子式：C5H8NNaO4.H2O
分子量：187.13
1技术要求
1.1外观和性状
无色至白色结晶状颗粒或粉末，易溶于水，无肉眼可见杂质。具有特殊鲜味，无异味。
1.2项目和指标
项目
指标
谷氨酸钠/(%) ≥
99.0
pH
6.7～7.5
干燥失重≤
0.5
2试验方法
2.1谷氨酸钠含量
2.1.1试剂和溶液
高氯酸标准滴定溶液﹝c(HCIO4)=0.1mol/L﹞；按GB/T 601配置与标定；
混合型饲料添加剂饲料级富马酸的检验操作规程
Feed grade─fumaric acid
[质量标准依据]：NY/T920－2004
分子式：C4H4O4
相对分子质量：116.07
1.技术要求
1.1外观：
无臭，白色晶体粉末或细粒。
1.2项目与指标
项目
指标
富马酸含量，% ≥
99.0
干燥失重，% ≤
0.5
水分含量，% ≤
1.0
2.富马酸含量测定
2.1试剂和溶液
甲醇；酚酞指示液（10g/L酚酞乙醇溶液）；氢氧化钠标准滴定溶液（g试样（准确至0.0001g）置于250ml锥形瓶中，加50ml甲醇，在热水浴上慢慢加热使其溶解，冷却后加酚酞指示剂2～3滴，用氢氧化钠标准滴定溶液，滴定至出现粉红色，且30秒不退色即为终点，同时进行空白试验。
3.3计算和结果的表示
以质量百分数表示的富马酸含量（X1）按式（1）计算：
（1）
式中：c——氢氧化钠标准滴定溶液的实际浓度，mol/L；
V1——滴定样品时消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，ml；
V0——滴定空白时消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，ml；
m——试样的质量，g；
0.05804——与1.00ml氢氧化钠标准滴定溶液［c（NaOH）＝1.000mol/L］相当的以克表示的富马酸的质量。
4.干燥失重的测定
4.1方法提要
将试样在105～110℃烘至恒重，根据加热前后的减量确定水分含量。
4.1.1仪器、设备
称量瓶：60mm×30mm。
4.1.2分析步骤
称取约2g试样（精确至0.0002g），置地已恒重的称量瓶中，移入电热恒温干燥箱内，在105～110℃下干燥一小时取出，放入干燥器中，冷却至室温。
甘露寡糖在家禽生产中的应用研究进展
472018·8摘 要 甘露寡糖是酿酒酵母细胞壁的成分之一，能结合致病菌鞭毛，抑制病原菌繁殖，具有调节肠道菌群平衡、改善肠道健康和提高免疫力等作用。
文章综述了甘露寡糖的来源、作用机理及对家禽生产性能、免疫力、肠道结构和菌群的影响。
在过去的几十年，抗生素因为能够导致动物体内细菌的耐药性，其作为生长促进剂应用于动物生产受到密切的关注，欧盟从2006年开始禁止饲料中添加抗生素，因此，对畜牧业研究人员来说，寻找一种既能促进动物健康又能保证家禽产量和生产性能的抗生素生长促进剂的替代品，变得尤为重要。
植物及微生物来源的饲料添加剂具有安全、作用剂量范围宽、副作用小等优点，在家禽应用中受到极大关注。
近年来，许多试验证明生物饲料添加剂能显著改善家禽生长性能、免疫反应和肠道健康，这些研究显示，小肠在营养吸收过程中起主要作用，肠道适宜的结构和功能对提高家禽生产性能和健康是有效的。
研究表明，如果肠绒毛的表面积增加，肠道对营养物质的消化和吸收能力就会提高。
幼禽的肠道微生态菌群是不稳定的，很容易受到外界环境的影响，致病菌引起的临床感染是外界因素之一，因此，家禽保证肠道益生菌处于平衡状态成为决定家禽最终健康水平和基因表达水平的主要因素。
益生元作为饲料添加剂的一种，自身不能被甘露寡糖在家禽生产中的应用研究进展胡红伟* 闫凌鹏 麻啸涛 陈茹茹 张婵娟 杨京娥（山西大禹生物工程股份有限公司）消化，但可以通过选择性的促进或刺激消化道内益生菌的生长。
寡糖根据来源不同，分为天然寡糖及合成寡糖，种类繁多，常见的寡糖有甘露寡糖、果寡糖、异麦芽寡糖、木寡糖、几丁质寡糖等。
甘露寡糖作为抗生素生长促进剂的替代物，家禽生产中广泛应用。
甘露寡糖能够提高家禽采食量和饲料利用率等生长性能参数，添加甘露寡糖能够提高盲肠双歧杆菌和乳酸菌等益生菌群。
甘露寡糖通过增加肠道益生菌受体位点来提高益生菌数量，同时能够增加肠道挥发性脂肪酸和lgA等抗体的数量。
饲料添加剂生产工艺与质量控制技术及检测(2008成都)
过滤
真空浓缩
调配
喷雾干燥
叶黄素
图11-2 叶黄素提取工艺路线图
水作为溶剂提取法制备生产饲料添加剂 （一）黄芪多糖制备生产
水浸提 黄芪 过滤 黄芪多糖 喷雾干燥 真空浓缩
12-2 黄芪多糖提取工艺路线图
图12-1 黄芪多糖的分子结构示意图
5.后加工法制造工艺特点和实例 是指采用物理方法对一些饲料添加剂进行物理性状的改 善，使其适合饲料加工和养殖业的特殊需要。如包膜维生素 C、维生素AD3E微囊等。 后加工工艺的主要有稀释、包被、制粒、乳化等。进行 饲料添加剂产品后加工的必要性具体体现在以下两方面：一
图2-2 甜菜碱盐酸盐制备生产工艺路线图
无机化学合成法制备生产饲料添加剂
（一）硫酸亚铁的制备 硫酸亚铁是配合饲料生产过程中不可缺少的一种矿物质微量元素， 其分子式为FeSO4∙xH2O。 硫酸亚铁制备工艺流程见图 3-1
氯化亚铁 + 稀硫酸
铁粉做催化剂 硫酸亚铁
图3-1 硫酸亚铁制备工艺流程图
（二）磷酸氢钙的制备 磷酸氢钙是配合饲料生产过程中不可缺少且用量较大的一种矿物质 饲料添加剂，其分子式为CaHPO4 ∙xH2O 磷酸氢钙制备工艺流程见图4-1 磷矿石粉 + 磷酸 石灰水 硫酸
磷酸氢钙
图4-1 磷酸氢钙制备工艺流程图
生物合成法制备生产饲料添加剂 （一）半乳糖寡糖（Galactooligosaccharides)的制备 半乳糖寡糖是以乳清中的乳糖为原料，通过-半乳糖苷
酶作为催化剂，制备得到的聚合度DP 为2-10 的寡糖化合物。 图5-1 为半乳糖寡糖的分子结构式。
n
= 1- 8
工艺控制条件
工艺流程的控制重要于成品的出厂检验，应使用规范经济
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1.技术要求
1.1性状
浅灰色至深灰色粉末，无腐败、无异臭味。
1.2项目与指标
项目
指标
பைடு நூலகம்Ⅰ型
Ⅱ型
Ⅲ型
甘露寡糖含量，%，≥
20
15
5
水分，%，≤
6.0
2.乳酸含量测定
2.1试剂和溶液
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T 6682规定的三级水或相当纯度的水。
氢氧化钠溶液（0.160mol/L）。
2.5.3结果计算
试样中甘露寡糖X百分含量按（1）式计算：
...............................（1）
式中：
C-由标准曲线行到的试液甘露糖浓度，单位以微克每毫升（μg/mL）
V-样品定容体积，单位为毫升（mL）；
N-稀释倍数；
m-标样质量，单位为克（g）
2.6重复性
在重复性条件下两次平行测定值的相对偏值不大于5%。
PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）甲醇溶液（0.50mol/L）。
甲醇。
盐酸溶液（0.30 mol/L）。
硫酸溶液（2.0 mol/L）。
三氯甲烷。
磷酸盐缓冲液（0.1 mol/L pH 6.17）。
乙腈。
甘露糖标准溶液：精确称取甘露糖标准品0.0200 g，用蒸馏水溶解并定容于50 mL容量瓶，此溶液浓度为0.4 mg/mL。
2.4.2式样处理及衍生化
准确称取1.0 g（精确至0.0002 g）于50 mL具塞刻度试管中，加入硫酸溶液到25 mL并混匀，混匀充氮封管，于干燥箱中100℃恒温水解4h，冷却后过滤至50 mL容量瓶中，残渣用少量蒸馏水洗涤2次，定容至刻度。移取5 mL于10 mL容量瓶中，加入等量的稀氢氧化钠溶液中和，用水定容至刻度，摇匀后过滤，取滤液定溶到刻度，摇匀后过滤，取滤液100 μL，按标准溶液PMP衍生化的方法进行反应。
2.5测定
2.5.1高效液相色谱条件
色谱柱：C18，4.6 mm×250 mm×5 μm。
流动相：磷酸盐缓冲液：乙腈（83：17）。
流速：1 mL/min。
柱温：30℃。
进样体积：10 μL。
检测器：紫外检测器，250 nm波长。
2.5.2定量测定
取试样处理液和标准溶液各10 μL（或相同体积）注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰保留时间为依据进行定性，以峰面积对浓度作工作曲线，计算出试样溶液中对应的甘露糖的含量。
2.2仪器设备
高效液相色谱仪，紫外检测器。
干燥箱。
分析天平，感量0.01 mg。
2.4分析步骤
2.4.1标准溶液PMP衍生化
准确移取100 μL甘露糖标准液于1 mL的具塞试管中，加入100 μL氢氧化钠溶液，摇匀。再取50 μL混匀液于5 mL的具塞试管中，加50 μLPMP甲醇溶液，漩涡混匀；在70℃烘箱中反应100 min；取出，冷却至室温；加50 μL盐酸溶液中和；加水至1 mL，再加等体积的三氯甲烷，振摇，静置，弃去三氯甲烷相，如此萃取3次，将水相用0.45 μm滤膜过滤后供HPLC进样分析。