【检验项目】网织红细胞检测（RET）
医学专业大学毕业论文-网织红细胞相关参数测定在贫血初筛诊断中的意义
【摘要】目的：评价网织红细胞(RET相关参数测定在贫血初筛诊断中的意义。
方法：应用贝克曼库尔特LH_750自动血液分析仪对患者的RET百分比(RET%、RET 绝对值(RET#、未成熟RET指数(IRF、平均RET体积(MRV、平均球形红细胞体积(MSCV和强光散射RET百分比和绝对值(HLR%和HLR#进行检测。
结果：溶血性贫血RET%、RET#、IRF、MRV、MSCV、HLR%、HLR#与正常对照组比显著增高(P<0.01；缺铁性贫血RET%、RET#、IRF、HLR%、HLR#与正常对照组比稍高，但无统计学意义,而MRV、MSCV与正常对照组比有统计学意义(P<0.01；再生障碍性贫血RET%、RET#、IRF、HLR%、HLR#与正常对照组比明显降低(P<0.01，而MRV、MSCV与正常对照组比无统计学意义；急性白血病RET相关参数与正常对照组比无统计学意义。
结论：RET相关参数测定可以更细微、全面地描述RET的成熟度，从而更好地评价骨髓造血的功能，对贫血初诊有重要的实用价值。
【关键词】网织红细胞相关参数；LH_750型自动血液分析仪；贫血；诊断［Abstract］Objective：To evaluate the significance of reticulocyte(RET_related parameters determination in anemia preliminary diagnosis. Methods：RET_related parameters(reticulocyte percentage(RET%, RET count(RET#, immature RET fraction(IRF, mean RET volume(MRV, mean sphered cell volume(MSCV, high light scatter RET percentage and absolute value(HLR% and HLR#were determined using LH_750 automatic blood analyzer in patients with anemia. Results： RET%, RET#, IRF, MRV, MSCV, HLR% and HLR# in patients suffering from hemolytic anemia(HAwere obviously higher than those of normal control group(P<0.01, while RET%, RET#, IRF, HLR% and HLR# in patients with iron deficiency anemia(IDAwere slightly higher than those of normal control group, but there were no significant differences among them, however, the statistical significance existed between patients suffering from IDA and normal control group in MRV and MSCV(P<0.01. RET%, RET#, IRF, HLR% and HLR# in patients with aplastic anemia(AAwere markedly lower than those of normal control group(P<0.01, while there was no statistical significance in MRV and MSCV, There was no significance in RET_related parameters between patients suffe_ringfrom acute leukemia and normal control group. Conclusion： RET_related parameters are able to describe overall the mature of RET in detail, and to evaluate hematopoiesis of the bone marrow and to present an important value in anemia preliminary diagnosis.［Key Words］reticulocyte_related parameter, LH_750 automatic blood analyzer, anemia, diagnosis血细胞分析仪的普遍应用，扩大了血液学常规检测的范畴，所提供的各种参数已日益受到重视。
网织红细胞测定讲稿
血沉过程一般分为3期： 1、缗钱状红细胞形成期，一般要经 过数分钟至10min. 2、 快速沉降期，形成缗钱状红细胞 以等速下降，约40min.
3、细胞堆积期，又称缓慢沉积期或 堆挤期，此时红细胞堆积在试管底 部。健康人血沉波动于一个狭窄范 围内，而在许多病理情况下血沉可 明显增快。
二、检测原理
五、质量控制
（一）、网织红细胞目视计数误差较 大，影响因素主要有： 1、操作人员对网织红细胞认识不同； 2、用煌焦油兰乙醇染液时，应待乙 醇完全挥发干后才能加入血液，否 则可使血液凝固，染色时间要充足。
3、血涂片质量好坏，血膜厚薄； 4、计数红细胞数量的多少和计数方法 等； 5、染液与血液比例以1：1为宜，严重 贫血时可适当增加血液比例 ；
（四）、Zeta红细胞沉降率测定：
1、原理：红细胞表面唾液酸所带负 电荷形成zeta电位，使红细胞之间 互相排斥，在血浆中保持一定的悬 浮稳定性。
肿瘤患者化疗过程
网织红细胞动态变化
结果：化疗后骨髓造血功能明显受抑，白细胞、 网红及血小板极度降低，其中中性粒细胞绝对数 降至0.02×109/L以下、网红绝对数降至10×109/L 以下，高荧光强度网红百分率和中荧光强度网红 百分率(HFR%+MFR%)逐步降至最低水平或0，网红 分类几乎全部由低荧光强度网红(LFR)组成。造血 功能开始恢复时高荧光强度网红和中荧光强度网 红的出现或升高较中性粒细胞绝对数达到 0.2×109/L早4.5天（中位数）、达到0.5×109/L 早7.5天（中位数），较网红绝对数（RET#）达到 正常范围低限早15天（中位数）。
6、目前，首选Miller窥盘法计数网织红细胞。
（二）、仪器法：虽可计数红细胞10000－50000 个，但如存在Howell-Jolly小体、有核红细胞、 巨血小板，则可见假阳性。
(三)网织红细胞计数
三、操作步骤
1.于小试管中加入染液2滴。 2.在已加入染液的小试管中加入新鲜全血2滴，立即混匀，室温下 静置15-20min。
3.制片：去混匀染色血液1滴制成薄血涂片，自然干燥。
4.观察：低倍镜下观察红细胞分布和染色情况，选择红细胞分布 均匀、着色好的部位。
5.计数：在油镜下，在Miller窥盘下计数。
临床应用： • ＞3提示溶血性贫血或急性失血性贫血； • ＜2提示为骨髓增生低下或红细胞系成熟障碍性贫 血。
（2）评价疗效
网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别给予铁剂、维
生素B12或叶酸治疗2~3d后，网织红细胞计数值开始上升，
7~10d达到最高(10%左右)；两周以后逐渐降至正常水平， 红细胞、血红蛋白开始升高。 骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造血功能，网 织红细胞计数值上升。
思考题
一溶血性贫血患者，红细胞计数2.6x1012/L，血细胞比 容0.29，网织红细胞计数相对值为35%，如何报告网织 红细胞检测结果？
（2）显微成像系统：
图2-21 Miller窥盘结构示意图
试剂器材
1、试剂 新亚甲蓝溶液 2、器材 静脉采血用具、EP管、载玻片、推片、 显微镜、香柏油、二甲苯及擦镜纸、Miller窥盘 或直径约20 mm（较目镜内径稍小）的圆形硬 纸片（正中央开一边长为3mm的菱形或正方形 小孔，置目镜光阑处，用于缩视野法计数）
【方法】
1．普通显微镜法 活体染料的碱性着色基团可与
网织红细胞RNA的磷酸基结合，使RNA胶体间的负电
荷减少而发生凝缩，形成蓝色的点状、线状或网状结
构。 2．血液分析仪法 特殊染料与网织红细胞中RNA 结合后进行RNA定量，可精确计数网织红细胞占成熟 红细胞的百分数（Ret%），并可根据RNA含量将网
实验三网织红细胞计数血沉测定专家讲座
实验三网织红细胞计数血沉测定
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▪ 器材 显微镜、试管、吸管、玻片、推片、 香柏油、擦镜纸、擦镜液
▪ 试剂 新亚甲蓝 ▪ 标本 新鲜全血
实验三网织红细胞计数血沉测定
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操作步骤
▪ 1.加染液 将Ret染液2滴加至小试管中，做好标识。
▪ 2.加血 在已加入染液小试管内注入新鲜全血2滴， 马上混匀。
实验三网织红细胞计数血沉测定
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注意事项
▪ 1.试剂准备 推荐使用新亚甲蓝染液, 试剂应定 时配制, 用前过滤。
▪ 2.染色 染液与血液比以1:1为宜,染色时间不能 过短。试剂用后及时盖好盖子, 以免挥发。
▪ 3.标本 应及时染色, 及时测定。 ▪ 4.计数 选择红细胞分布均匀, 网织红细胞着色
实验三网织红细胞计数血沉测定
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二、血液沉降率测定（魏氏法）
参考值 ＜50岁: 男性 < 15mm/h 女性 <20mm/h
＞50岁: 男性 < 20mm/h 女性 <30mm/h
实验三网织红细胞计数血沉测定
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注意事项
1.严格控制采血量，使抗凝剂与血液百分比为 1: 4。
2.血沉管应垂直放置，不得倾斜。
实验三网织红细胞计数血沉测定
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白细胞计数
一、目标
掌握显微镜白细胞计数方法。
二、原理
用白细胞稀释液将血液稀释
一定倍数, 同时破坏溶解红细胞。 将稀释血液冲入计数池后, 在显微 镜下计数一定体积内白细胞数, 经 换算求出每升血液中白细胞数。
实验三网织红细胞计数血沉测定
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三、器材
显微镜、改良计数板、血盖片、试管、微量 吸管、加样枪、乳胶吸头、纱布
肝硬化患者网织红细胞多参数的变化及临床意义分析
肝硬化患者网织红细胞多参数的变化及临床意义分析目的：观察分析肝硬化患者外周血网织红细胞（RET）多参数的变化和临床意义；方法：选取代偿、失代偿肝硬化患者各30名及30例正常健康体检者，分为代偿性肝硬化组、失代偿性肝硬化组和正常对照组，以全自动血细胞分析仪对上述三组受检者的外周静脉血进行检验，观察三组网织红细胞多参数的变化；结果：除了HLR%之外，对照组的测定指标均明显低于肝硬化患者，且RET%指标还会随着病情的恶化而上升，在代偿组和失代偿组之间差异变现明显（P均0.05）。
1.2 研究材料本组研究采用希森美康XE-5000全自动血细胞分析仪及其原装配套试剂；紫盖EDTA-K2真空采血管。
严格按照试剂及仪器操作章程规范使用。
1.3 检验方法三组受检者均空腹12h，于清晨采静脉血2ml，在EDTA-K2真空采血管内混匀后于2h内上机检测。
测定三组的网织红细胞百分比（RET%）、网织红细胞绝对值（RET#）、网织红细胞平均体积（MRV）、高散射光强度网织红细胞百分比（HLR%）、未成熟网织红细胞指数（IRF）。
1.4统计学方法：采用SPSS19.0统计软件，计量资料采用（x±s）示，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验，若P＜0.05，差异有统计学意义。
2.结果3. 讨论当肝脏细胞因为肝硬化而损伤时，会导致造血因子减少从而引起患者造血不足，又长期慢性失血、消化吸收功能障碍所致造血原料缺乏、脾功能亢进等多种原因亦引起贫血的发生[1]。
本组研究中三组受检者HLR%差异较小，而正常对照组的RET%、RET#、MRV 、IRF均明显低于肝硬化患者，此研究结论是由于两组肝硬化患者长期慢性失血、肝功能减退等致使外周血细胞减少，导致骨髓造血活跃；又由于MRV是反映网织红细胞大小的重要参数，研究中其较正常对照值高说明肝硬化患者多为巨幼红细胞性贫血，这是因为其对叶酸、维生素B12吸收不良且红细胞膜表面的胆固醇卵磷脂代谢异常使红细胞变形性和结构发生一定改变所致。
网织红细胞各参数的检测在贫血性疾病中的临床意义
网织红细胞各参数的检测在贫血性疾病中的临床意义蒋叙川;钟军【摘要】目的：探讨网织红细胞（RET ）相关参数检测在贫血性疾病中的临床意义。
方法应用Sysmex XE-5000全自动血液分析仪对患者的 RET 百分比（RET％）、RET 绝对值（RET ＃）、高荧光强度网织红细胞百分比（H FR％）、中荧光强度网织红细胞百分比（M FR％）、低荧光强度网织红细胞百分比（L FR％）以及未成熟网织红细胞比率（IRF）进行检测，并与对照组进行比较分析。
结果溶血性贫血患者LFR％降低，RET％、RET ＃、HFR％、M FR％以及IRF均比对照组明显升高，差异有统计学意义（ P＜0．01）；再生障碍性贫血患者RET％、RET ＃、HFR％、MFR％、LFR％以及 IRF明显降低，差异有统计学意义（P＜0．01）；缺铁性贫血患者 RET％、RET ＃、H FR％、M FR％、L FR％以及IRF比对照组稍增高，但差异无统计学意义。
结论网织红细胞相关参数检测可以更准确反映网织红细胞的成熟状态，从而判断骨髓的造血功能，对不同类型的贫血性疾病的诊断、治疗具有重要参考价值。
%Objective To explore the clinical significance of reticulocyte (RET )-related parameters determina-tion in anemia diagnosis .Methods Reticulocyte percentage (RET% ) ,RET count (RET#) ,percent of high fluores-cent reticulocyte (LFR% ) ,percent of middle fluorescent reticulocyte (MFR% ) ,percent of low fluorescent reticulo-cyte (HFR% ) ,and immature RET fraction (IRF) of patients were determined by Sysmex XE-5000 automated blood analyzer and compared with the control group .Results LFR% of patients suffering from hemolytic anemia decrea-ses ,RET% ,RET # ,HFR% ,MFR% and IRF of patients suffering hemolytic anemia were obviously higher than those of normal control group and thedifference is quite significant (P< 0 .01);while RET% ,RET # ,HFR% , MFR% ,LFR% and IRF of patients with aplastic anemia were significantly reduced (P< 0 .01);RET% ,RET # , HFR% ,MFR% ,LFR% and IRF of patients suffering iron-deficiency anemia were slightly higher than those of nor-mal control group ,but there were no significant differences amongthem .Conclusion RET-related parameters are a-ble to reflect the mature of reticulocyte more accurately ,so it can evaluate the hematopoiesis of the bone marrow and it present an important value in the diagnosis and treatment of different types of anemia .【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2014(000)015【总页数】2页(P2133-2134)【关键词】网织红细胞相关参数;血液分析仪;溶血性贫血;缺铁性贫血;再生障碍性贫血【作者】蒋叙川;钟军【作者单位】四川省简阳市人民医院 641400;四川省简阳市人民医院 641400【正文语种】中文网织红细胞（RET）是从骨髓释放到外周血的成熟红细胞的前体细胞，是介于晚幼红细胞脱核至完全成熟的红细胞之间尚未成熟的红细胞，是反映骨髓造血功能的指标之一［1］。
网织红细胞参数的临床应用
网织红细胞参数的临床应用网织红细胞是未完全成熟的红细胞，是反映骨髓造备功能的重要指标。
全血细胞分析仪给我们提供了网织红细胞更多的参数，这些参数对多种疾病的诊断，治疗及监测有竟要的意义。
尤其在贫血的诊断和治疗后评估骨髓造血反应方面有着重要的作用。
Abstract：Reticulocyte is not fully mature red blood cells，is an important index reflecting bone marrow preparation function. Whole blood cell analyzer provides us with reticulocyte parameters of red blood cell more，diagnosis of these parameters on various diseases，have the significance to the treatment and monitoring. Especially in the diagnosis and treatment of anemia after the assessment of bone marrow hematopoietic reaction plays an important role.Key words：Anemia；Ret；LFR；MFR；HFR；IRF網织红细胞（reticulocyte，Ret）是未完全成熟的红细胞。
是反映骨髓红系造血功能以及判断贫血和相关疾病疗效的重要指标。
在贫血的断和监测骨髓对治疗的反应方面具有重要的临床价值。
近年来随着高性能全自动血细胞分析仪的应用，网织红细胞的检测进入了新的阶段，为网织红细胞计数提供了更为先进的检测方法。
全血细胞分析仪也给我们提供了网织红细胞更多的参数，对于疾病的诊断和治疗有具有一定的价值。
1 网织红细胞的生成Ret是介于有核红细胞和成熟红细胞之间的一种过渡形式的未成熟红细胞，约占循环红细胞总数的1%，因细胞内残存的核糖体RNA经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后在显微镜下呈网状而得名[1]。
网织红细胞计数标准操作程序
网织红细胞计数标准操作程序1.检验目的通过对网织红细胞计数，判断机体造血功能的旺盛程度。
2.检验原理网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞质内尚有嗜碱性的RNA物质，经新亚甲蓝或煌焦油蓝活体染色后呈浅蓝色或深蓝色网状结构。
3.标本ETDA-K2抗凝血或新鲜外周血。
4.试剂新亚甲蓝枸橼酸氯化钠染色液。
5.操作步骤5.1在小试管中加入染色液2滴；再加入静脉血（或末梢血）2滴，混匀后放置37℃恒温水箱中。
5.2 温育15分钟后取1滴混悬液制成涂片。
5.3在油镜下直接观察1000个红细胞中Ret数。
6.结果计算直接观察法：网织红细胞比例=计数1000个红细胞中的网织红细胞数/10007.生物学参考区间网织红细胞比例：成年人：0.005~0.015；新生儿：0.03~0.06；儿童:0.005~0.015。
8.实验室解释8.1增加表示骨髓造血功能旺盛。
见于各类增生性贫血，溶血性贫血增加尤为显著；巨幼细胞贫血、缺铁性贫血分别应用维生素B12、叶酸或铁剂治疗后显著增多，表示有治疗效果；也是放疗和化疗以及骨髓移植和EPO治疗后骨髓造血功能恢复的指标。
8.2减少常见于骨髓增生受抑抑制、再生障碍性贫血和纯红细胞再生障碍。
9.变异的潜在来源标本应在4小时内进行处理。
置于清洁的棕色瓶中保存，染色液应无沉淀。
新亚甲蓝染料为WHO所推荐，着色强且稳定，背景清晰，利于计数；室温<15℃时，放37℃恒温水箱；用瑞士-吉姆萨染液复染后，可使Ret计数结果减少。
10.参考文献10.1尚红、王毓三、申子瑜《全国临床检验操作程序》，第四版，人民卫生出版社。
网织红细胞及其荧光强度检测的临床意义
网织红细胞及其荧光强度检测的临床意义目的探讨流式细胞检测结合核酸荧光染色技术在网织红细胞(Ret)及其荧光强度分析中的临床应用价值。
方法应用Sysmex XT——2000i全自动血液分析仪分析不同类型贫血患者的网织红细胞和荧光强度的变化。
结果130例贫血患者与30例正常人群比较,其Ret 绝对值及其Ret百分比有不同程度的升高、轻度降低或显著降低;荧光强度的变化差异较大,表现为低荧光强度网织红细胞比率(IFR)降低,幼稚网织红细胞比率(IRF)、中荧光强度网织红细胞比率(MFR)和高荧光强度网织红细胞比率(HFR)升高,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。
结论网织红细胞荧光强度分析是骨髓造血系统抑制和恢复较敏感的指标,可作为某些贫血诊断和鉴别诊断的初筛指标及对判断和监测骨髓的损伤程度和预后具有重要的临床意义。
标签：贫血; 网织红细胞计数; 荧光强度; 临床应用网织红细胞(Ret)是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未成熟的红细胞,其胞质内存留多少不等的嗜碱物质RNA,其RNA含量越多,Ret越不成熟,反之亦然。
通过使用核酸荧光染料多聚亚甲基可对细胞胞浆中的核酸物质(RNA)进行染色,越不成熟的Ret其荧光越强,反之,成熟Ret荧光极少或最弱,故将Ret分成高荧光强度网织红细胞(HFR)、中荧光强度网织红细胞(MFR)、低荧光强度网织红细胞(LFR)三部分。
IRF定义为中、高荧光强度区域内Ret百分数之和(MFR+HFR),为不成熟Ret比例,可更灵敏的反映骨髓造血系统的状况。
我院使用的具有全自动网织红细胞计数、荧光强度自动化分析及成熟度分类功能的Sysmex X T-2000i 血细胞分析仪,广泛用于临床血液常规标本的检测,为临床提供了大量的分析参数和研究参数,现将网织红细胞及其光强度分析的临床应用情况报道如下。
1 材料与方法1.1 研究对象2009年1～11月本院住院患者均为首诊并未做过输血及抗贫血治疗。
2013血液检验复习指导：网织红细胞计数的检测方法
网织红细胞计数的检测方法：
（1）普通光学显微镜法：用煌焦油蓝等活体染色方法显示红细胞内网状结构，并在显微镜下计数1000个红细胞中所占的网织红细胞数，以百分比或分数数表示。
可分为试管法和玻片法，试管法操作简便，容易掌握，重复性较好，被列为手工网织红细胞计数的参考方法；玻片法取血量少，但染色时混合血液中的水分容易蒸发，造成染色时间偏短，结果偏低，因其携带方便，适宜于床边采血操作。
显微镜法受主观因素影响较多，且耗时费力。
（2）网织细胞计数仪法：用荧光染料使含RNA的网织红细胞着色，用流式细胞仪（FCM）计数并计算出网织红细胞的百分比，并客观地将网织红细胞分成高荧光强度网织红细胞（HFR）、中荧光强度网织红细胞（MFR）、低荧光强度网织红细胞（LFR），荧光强度越高，网织红细胞越幼稚。
这种分型对于化疗、放疗及移植患者治疗过程的监测、骨髓造血功能的分型有临床价值。
（3）血液分析仪法：最新型的血液分析仪，采用流式细胞法也可对Ret作分类计数，并提供与网织红细胞相关的多个参数，包括红细胞绝对值（Rct）、网织红细胞百分比（Rct%）、网织红细胞平均体积（MCVr）、网织红细胞血红蛋白分布宽度（HDWr）、网织红细胞血红蛋白浓度（HCR）、网织红细胞平均血红蛋白浓度（MCHCr）；低荧光强度Ret（LFR）、中荧光强度Ret （MFR）、高荧光强度Ret（HFR）、Ret成熟指数RMI 【RMI=（MFR+HFR）/LFR×100】。
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【检验项目】网织红细胞检测（RET）
抽取静脉血1.8ml，加入到含有乙二胺四乙酸钾溶液的抗凝真空试
管中，并轻轻颠倒10次使之充分混匀，不得有凝块、不得形成泡沫，
总量不得超过2.0±0.2ml，采血后2小时内送检。
参考区间
网织红细胞百分数：
成人：
0.005~0.015
新生儿： 0.03~0.06
儿童： 0.005~0.015
网织红细胞绝对数：
成人： （0.027~0.116）*10*12/L
临床意义
(一)判断骨髓红细胞造血情况
1．网织红细胞增多：表示骨髓红细胞生成旺盛。常见于：
(1)溶血性贫血，溶血时由于大量网织红细胞进入血液循环，RET
可增至6%~8%或以上，急性溶血时，可达到20%至50%以上，绝对
值常超过100*10*9/L。急性失血后5~10D网织红细胞达到高峰，2
周后恢复正常。
(2)放射治疗和化学治疗后，造血恢复时，可见RET短暂和迅速增
高，是骨髓恢复较敏感的指标。
(3)红系无效造血时，骨髓检查表明红系增生活跃，而外周网织红
细胞计数正常或轻度增高。
2、网织红细胞减少：见于再生障碍性贫血、溶血性贫血再障危象
时。
典型的再生障碍性贫血网织红细胞计数低于0.005，网织红细胞绝
对值低于15*10*9/L,为诊断其标准之一。
(二)观察贫血疗效
缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血治疗过程中，如RET增高，表明治
疗有效，说明骨髓增生功能良好；如RET不增高，则表明治疗无效，
并提示有骨髓造血功能障碍，需进一步检验。缺铁性贫血、巨幼细胞
性贫血患者治疗前，网织红细胞计数仅轻度增高（也可正常或减少），
给予铁剂或维生素B12、叶酸治疗后，用药3～5天后，网织红细胞计
数开始上升，7～10天达高峰，2周左右，网织红细胞计数逐渐下降，
表明治疗有效。
RET是贫血患者随访检查的项目之一。
（三）骨髓移植后监测骨髓造血恢复
骨髓移植后第21天，如RET大于15*10*9/L，常表明无移植并发
症；RET小于15*10*9/L，伴中性粒细胞和血小板增高，可能为骨髓
移植失败。