红细胞计数、红细胞形态检查、血红蛋白测定
临床三大常规检验基础知识
临床三大常规检验基础知识在现代医学中，临床检验技术在辅助临床诊断与治疗的过程中发挥了极其重要的作用。
随着医学科学的飞速发展，临床检验技术的自动化程度不断提高，检验项目更是日趋完善。
在众多新项目不断涌现的今天，临床检验最基本的血、尿、便三大常规仍旧受到大家的重视，为什么呢？因为初诊检查三大常规可以了解患者的生理情况，对所患疾病进行初步判断；治疗过程中检查三大常规能够评估患者的预后情况。
因此，不论是我们检验工作者还是临床医师熟练掌握临床三大常规检验的基础知识都是必要的。
1 血常规检验基础知识血常规检验是血液检验项目中最基础及最常用的检验，在绝大多数疾病的临床诊断中都有应用，主要包括血细胞计数及相关参数测定、血细胞形态学检査。
随着科学技术的发展，自动化仪器的应用使血常规检验快速、项目扩展、参数增多，因此，血常规检验能及时、准确、随机、全面反映机体的基本功能状况。
血常规检验取材容易，检测便捷，仍然是筛检疾病、遴选其他实验检査的首要程序。
血细胞主要分为红细胞、白细胞与血小板。
通过检验血细胞数量及相关参数、血细胞形态，能够筛选出一些疾病。
红细胞是血液中数量最多的有形成分，其主要生理功能是作为携氧或二氧化碳的呼吸载体和维持酸碱平衡等。
临床可通过各项红细胞参数检验和红细胞形态观察对贫血和某些疾病进行诊断或鉴别诊断。
常用的红细胞检査项目有：红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞形态观察、红细胞平均指数计算、网织红细胞计数、嗜碱性点彩红细胞计数和红细胞沉降率测定等。
外周血白细胞检验是血常规检验的重要项目之一，以下情况可以检査白细胞：①感染、炎症、组织损伤或坏死、中毒、贫血。
②结缔组织病、骨髄抑制（电离辐射、细胞毒药物、免疫抑制剂、抗甲状腺药物等）。
③恶性肿瘤、白血病、骨髄增殖性疾病和淋巴组织增殖性疾病等。
计数外周血的白细胞数量、检査染色条件下各种白细胞的形态并分类计数，是诊断疾病，尤其是对恶性血液病进行初步诊断和评估疗效的基本指标。
《诊断学》 第一节 血液一般检测
（1）嗜碱性点彩（basophilic stippling） ：红细胞内含有细 小嗜碱性点状物质，是核糖体凝集而成的。有时与嗜多色性 并存，也可发现于有核红细胞胞质内。大量增多并呈粗颗粒 状点彩，多见于铅中毒，也可见于骨髓增生旺盛的其他贫血
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如巨幼细胞贫血等。 （2）染色质小体（Howell-Jolly body） ：红细胞内含有圆 形紫红色小体，直径约 0.5～1μ m，1 个或数个，是核的残余 物质， 亦可出现于晚幼红细胞中， 此小体多见于溶血性贫血、 巨幼细胞贫血、红白血病及其他增生性贫血。 （3）卡-波环（Cabot ring） ：成熟红细胞内出现一条很细 的淡紫红色线状体呈环形或“8”字形，曾认为是核膜的残余 物。目前认为可能是纺锤体的残余物或是胞质中脂蛋白变性 所致。提示严重贫血、溶血性贫血、巨幼细胞贫血、铅中毒 及白血病等。 （4）有核红细胞（nucleated erythrocyte） ：正常成人有 核红细胞均存在于骨髓之中，外周血涂片中除在新生儿可见 到有核红细胞外，成人如出现有核红细胞，均属病理现象。 主要见于：①各种溶血性贫血；②红白血病；③髓外造血， 如骨髓纤维化；④其他，如骨髓转移癌，严重缺氧等。 二、白细胞的检测 （一）白细胞计数 【参考值】 成人（4～10）×109／L；新生儿（15～20）×109／L；6 个月～2 岁（11～12）×109／L。 【临床意义】 白细胞总数高于正常值（成人为 10×109／L）称白细胞
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增多，低于正常值（成人为 4×109／L）称白细胞减少。白细 胞总数的增多或减少主要受中性粒细胞数量的影响，淋巴细 胞等数量上的改变也会引起白细胞总数的变化。白细胞总数 改变的临床意义详见白细胞分类计数中临床意义的有关内容。 外周血涂片，经 wright 染色后观察其形态，白细胞可分 为下列 5 种类型，即中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒 细胞、淋巴细胞和单核细胞，各种类型白细胞的特点及其变 化的临床意义叙述如下： （二）白细胞的分类计数 【粒细胞】 1．中性粒细胞（neutrophil，N） 在外周血中可分为中
红细胞计数血红蛋白定量
四. 注意事项
1.KCN为剧毒药品，防污染。 2.HiCN转化液不能存于塑料瓶中。
否则CN-下降，结果偏低。 3.分光光度计应定期校正并使用
配套的比色杯。 4.标准曲线或K值应定期校正。
HiCN法 参考方法
优点：操作简便；显色快，结果稳定。 缺点：氰化钾有剧毒；
高白细胞或高球蛋白血症等可致浑浊； HbCO转化慢。
四. 方法 1.小试管加RBC稀释液2.0ml。 2.采血，取血10ul。 3.擦去管外的血，轻吹入试管底部，
再清洗吸管2~3次，立即混匀。 4.混匀后充入计数室，静置3~5 min，
高倍镜下计数。
充液位置 充液位置
为 红 细 胞 计 数 区 域
压线细胞的计数原则：数左不数右，数上不数下
( RBC )
二、应用
常用于白细胞分类计数、网织红细胞 计数和点彩红细胞计数等。
骨髓造血干细胞 Epo 红系祖细胞
原红 早幼红 中幼红 晚幼红 网织红 红细胞
erythrocyte red blood cell
红细胞形态检查 红细胞计数（RBC） 血红蛋白测定（Hb,HGB） 血细胞比容测定（Hct,HCT,Ht,PCV） 红细胞平均指数 红细胞体积分布宽度 网织红细胞计数（Ret,RET） 点彩红细胞计数 红细胞沉降率测定（ESR）
大量失血尚未补液前：
红细胞总量减少,但RBC和Hb测定值不能反映。
水潴留：
红细胞总量未减少,但RBC和Hb测定值显示减少。
脱水：
红细胞总量未减少，但RBC和Hb测定值显示其 增多，如贫血时则可掩盖贫血。
1.Hayem红细胞稀释液各成分有什么作用？ 2.改良Neubauer计数板中央大方格内每一中
红细胞计数和血红蛋白测定
红细胞计数和血红蛋白测定
【方法】
1.红细胞计数用显微镜计数法；光电比浊法；自动血细胞计数法。
2.血红蛋白测定用目测比色法；氰化高铁法；自动血细胞仪。
【临床意义】
参考值：
1.红细胞与血红蛋白增多指成年男性红细胞≥6.0×1012/L，血红蛋白>170g/L；成年女性红细胞>5.5×1012/L，血红蛋白>160g/L。
临床分相对性红细胞增多(多见于脱水血浓缩)和绝对性红细胞增多(心肺疾患、慢性缺氧、肿瘤或肾脏疾患所致的促红细胞生成素增加，真性红细胞增多症)。
2.红细胞及血红蛋白的减少①生理性减少(生理性贫血)：见于妊娠、婴幼儿、老年人；②病理性减少(贫血)：分轻、中、重、极度4级贫血；并分为红细胞生成减少，红细胞破坏过多，失血三大类。
3.红细胞形态学改变染色血涂片见红细胞大小、形态、胞浆着色及结构的异常改变，有助于推断贫血的病因。
红细胞计数血红蛋白测定的原理
2.还原血红蛋白（reduced hemoglobin, Hbred）：未 与O2结合时的Hb。
3.高铁血红蛋白（hemiglo -bin, Hi）或正铁血红蛋白 （methemoglobin, Mhb）: Fe 2+被氧化成Fe 3+。
▪ 1%Hb的铁呈Fe3+状态，称为高铁血红蛋白 （Hi）。
Hb的合成受激素的调节：Epo和雄激素。
▪ 注意事项：1. 如α-链或β-链合成障碍，使三种正常 血红蛋白比例异常，即各型地中海贫血；如多肽 链发生氨基酸置换、丢失、加长，称为血红蛋白 病。
2.病理情况下可出现硫化血红蛋白（SHb）。
（二）血红蛋白衍生物及其吸收光谱
测定方法
显微镜计数法 血液分析仪法
（一）显微镜计数法
【检测原理】 采用等渗稀释液将血标本稀释一定倍数，滴入血 细胞计数室中，显微镜下计数一定区域内红细胞 数，经换算得每升血液中红细胞数量。
【器材】 微量吸管，采血针，小试管，计数板，盖片，棉球， 显微镜。 【试剂】红细胞稀释液：任选一种 1.Hayem稀释液：氯化钠1.0g、硫酸钠（含10个结晶 水）5.0g，氯化高汞0.5g，蒸馏水加至200mL，过 滤后使用。 氯化钠---调节渗透浓度 硫酸钠---提高比重防止红细胞粘连 氯化高汞---防腐剂，有毒
5个中方格内红细胞数
或= 100
×1012/L
【报告方式】
RBC（/L）= .
× 1012/L
【方法学评价】 1．手工显微镜法 2．血液分析仪法
为目前主要临床检验细胞计数方法 变异系数（coefficient of variation, CV ）小。
红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义
红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义一．参考区间
红细胞计数和血红蛋白测定的结果呈正相关，它们的临床意义基本相同，但血红蛋白在贫血
红细胞计数医学决定水平：高于6.8×10/L，应采取治疗措施;低于1.5×10/L应输血。
二．病理变化
1.红细胞和血红蛋白病理性减少【红细胞和血红蛋白减少称为贫血】
①.造血原料不足或利用障碍：缺铁、叶酸、维生素B12。
②.红细胞丢失过多：各种原因导致的急、慢性失血，如外伤、溃疡、肿瘤等。
③.红细胞寿命缩短：各种原因所致的溶血性贫血，如脾功能亢进、蚕豆病。
④.促红细胞生成素（EPO）分泌减少：如慢性肾疾病所致贫血。
⑤.造血功能障碍：鉴于某些药物导致的骨髓造血功能抑制；造血系统疾病，如再生障碍性
贫血、白血病、骨髓纤维化等。
2.红细胞和血红蛋白病理性增多
①.相对性增多：是由于各种原因人体水分丢失过多。
血浆量减少所致。
这是暂时性增多，
只要适当补充水分，就能恢复正常。
②.绝对性增多：指血浆容量不变，红细胞和血红蛋白的绝对值增加，可分为原发性和继发
性两种。
⑴．继发性红细胞生成增多：集体因长期缺氧，如严重慢性心、肺疾病，如肺源性心脏病。
发绀型先天心脏病，肺气肿。
⑵．原发性红细胞生成增多：机体并不缺氧，无促红细胞分泌增加而红细胞数量持续增多，
见于真性红细胞增多症。
03[1].红细胞计数、血红蛋白定量
![03[1].红细胞计数、血红蛋白定量](https://img.taocdn.com/s3/m/805ad324af45b307e871973d.png)
计数误差
技术误差 固有误差：仪器误差 计数域误差
质量控制
1避免技术误差，纠正仪器偏差 2缩小计数域误差 3排除异常标本的干扰 4室内、室间质量评价
（Hemoglobin，Hb或HGB） Hemoglobin，Hb或HGB） （原卟啉、Fe2+） 原卟啉、 亚铁血红素 （原卟啉、Fe2+） 原卟啉、 亚铁血红素
相对缺氧， 三. 剧烈体力运动和劳动 相对缺氧，↑ 妊娠中、 血液稀释， 五. 妊娠中、后期 血液稀释，↓
一. 相对性增多 血液浓缩 二. 绝对性增多 1. 原发性红细胞增多 常见于真性红细胞增多症等 2. 继发性红细胞增多 常见于：心血管疾病、肺部疾病、 常见于：心血管疾病、肺部疾病、 异常血红蛋白病等
红细胞检验的意义
贫血的诊断和形态学分类 骨髓造血功能评价与疗效观察 动态观察疾病的变化 治疗监测与安全防护
( red blood cell count, RBC )
一. 原理 等渗稀释液将血液稀释一定倍数 将血液稀释一定倍数， 用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充 入计数池中， 入计数池中，于显微镜下计数一定体积 内的红细胞数， 内的红细胞数，经过换算求得每升血液 中的红细胞数量。 中的红细胞数量。 二. 器材 1.显微镜 2.微量吸管 1.显微镜 2.微量吸管 3.计数板 改良Neubauer 计数板： Neubauer计数板 3.计数板：改良Neubauer计数板
1.红细胞手工显微镜计数法： 1.红细胞手工显微镜计数法： 红细胞手工显微镜计数法 原理、改良Neubauer计数板的结构、 Neubauer计数板的结构 原理、改良Neubauer计数板的结构、 操作方法、结果计算及注意事项。 操作方法、结果计算及注意事项。 2.血红蛋白测定 血红蛋白测定： 2.血红蛋白测定： 氰化高铁血红蛋白(HiCN) (HiCN)测定法 氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法 十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法 3.红细胞计数和血红蛋白测定的参考 3.红细胞计数和血红蛋白测定的参考 值及临床意义。 值及临床意义。
临床检验基础-红细胞及血小板检验
临床检验基础 红细胞及血小板检验红细胞检验目录红细胞检验目的要求1.掌握红细胞计数、血红蛋白测定的原理、方法、参考范围及临床意义。
2.掌握红细胞比容、红细胞沉降率的测定原理、方法学评价及临床意义。
3.掌握红细胞平均指数的计算方法及临床意义。
4.掌握网织红细胞计数的原理、方法、参考范围及临床意义。
5.熟悉红细胞检验的质量保证。
6.了解红细胞的生理和血红蛋白的组成。
红细胞检验一、红细胞计数(手工计数法)原 理用等渗稀释液将血液稀释一定 倍数， 充入计数池中， 于显微镜 下计数一定体积内的RBC数 ，经过 换算求得每升血液中的RBC数量。
器 材显微镜、微量吸管、改良Neubauer计数板。
红细胞检验一、红细胞计数(手工计数法)检测试剂1. Hayem稀释液：由NaCl 、Na2SO4、HgCl2和蒸馏水组成 。
其中由NaCl和Na2SO4调节渗透压，Na2SO4还可以提高稀释液比重防止细胞粘连，HgCl2为防腐剂。
该稀释液的主要缺点是遇到高球蛋白症患者， R BC易因蛋白沉淀而凝集。
2. 枸橼酸钠甲醛盐水溶液： 由枸橼酸钠、 甲醛、 NaCl及蒸馏水组成。
其中NaCl和枸橼酸钠调节渗透压 ，枸橼酸钠还具有抗凝作用， 甲醛为防腐剂。
配制简单 ， 可时RBC 在稀释后较长时间内形态不发生改变且不凝集，应用较广。
3. 生理盐水或含1%甲醛的生理盐水：仅在急诊或无上述两种稀释液时临时使用。
红细胞检验一、红细胞计数(手工计数法)计数和计算1. 计数：在2 ml红细胞稀释液中加血10 μl ，混匀后 ，充入计数池 ，静置3～5 min后 ，在高倍镜下 ，计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细胞数。
计数时需 遵循一定方向逐格进行 ，以免重复或遗漏 ，压线细胞 (数左不数右、数上不数下)。
2. 计算公式：红细胞/L=N ×25/5× 10 × 106×200=N/100× 1012N表示5个中方格内数得红细胞数×25/5：由5个中方格红细胞数 ，换算为一个大方格红细胞数× 10：由一个大方格红细胞数 ，换算为1ml稀释血液内红细胞数× 106： 1L= 106ml×200：为血液稀释倍数红细胞检验一、红细胞计数(手工计数法)注意事项1. 清洁：使用前应擦拭保证计数板和盖玻片清洁。
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Hb的合成受激素的调节：Epo和雄激素。
▪ 注意事项：1. 如α-链或β-链合成障碍，使三种正常 血红蛋白比例异常，即各型地中海贫血；如多肽 链发生氨基酸置换、丢失、加长，称为血红蛋白 病。
2.病理情况下可出现硫化血红蛋白（SHb）。
（二）血红蛋白衍生物及其吸收光谱
5个中方格内红细胞数
或= 100
×1012/L
【报告方式】
RBC（/L）= .
× 1012/L
【方法学评价】 1．手工显微镜法 2．血液分析仪法
为目前主要临床检验细胞计数方法 变异系数（coefficient of variation, CV ）小。
【质量控制】 1．手工法 误差来源包括：标本、操作、器
HiN3法
血液分析仪法
1、氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法
1）原理：在Hb转化液中，除SHb外，Hb被高铁氰 化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CN-结合，生成 稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN），吸 收峰为λ540nm，毫摩尔消光系数为44 L·mmol1 ·cm -1 。因此根据标本的吸光度，即可求得血红 蛋白总量（不含SHb）。
材、固有误差（计数域误差） 2．仪器法 严格按操作规程；定期作室内和室间质控。
【参考值】 男性 : （4.00-5.50） × 1012/L 女性 : （3.50-5.00） × 1012/L 新生儿:（6.00-7.00） × 1012/L
【校正】WBC>100×109/L时，需校正： 实际红细胞/L=所数细胞总数－白细胞数 （正常红细胞：白细胞=750：1, 可忽略白细胞的 影响）
【器材】 微量吸管，采血针，小试管，计数板，盖片，棉球， 显微镜。 【试剂】红细胞稀释液：任选一种 1.Hayem稀释液：氯化钠1.0g、硫酸钠（含10个结晶 水）5.0g，氯化高汞0.5g，蒸馏水加至200mL，过 滤后使用。 氯化钠---调节渗透浓度 硫酸钠---提高比重防止红细胞粘连 氯化高汞---防腐剂，有毒
细胞系统，器官主要是在脾脏和肝脏；其次为骨 髓和其他部位。
二、红细胞计数
▪ 红细胞计数（red blood cell count,RBC）即测定单位 体积内红细胞数量。是血液一般检验的基本项目， 常作为诊断贫血和红细胞增多的主要指标之一。
测定方法
显微镜计数法 血液分析仪法
（一）显微镜计数法
【检测原理】 采用等渗稀释液将血标本稀释一定倍数，滴入血 细胞计数室中，显微镜下计数一定区域内红细胞 数，经换算得每升血液中红细胞数量。
2.柠檬酸盐甲醛盐水 氯化钠 0.6g 调节渗透压 柠檬酸钠 1.0g 调节渗透压，抗凝 36%甲醛 1ml 防腐 蒸馏水加至100ml，过滤2次后使用。 3.生理盐水或加1%甲醛的生理盐水
【操作】 1.中号试管（15×100mm）加等渗稀释液2ml； 2.毛细血管采末梢血10μl加入上述稀释液，立即摇
1.氧合血红蛋白（oxyhemoglobin, HbO2）:Hb与O2结 合时形成。
2.还原血红蛋白（reduced hemoglobin, Hbred）：未 与O2结合时的Hb。
3.高铁血红蛋白（hemiglo -bin, Hi）或正铁血红蛋白 （methemoglobin, Mhb）: Fe 2+被氧化成Fe 3+。
红细胞计数、红细胞形态检查、血红蛋白 测定
目的要求
▪ 1.掌握：①红细胞计数、氰化高铁血红蛋白 测定的原理、方法、质量控制、参考值、 方法学平价及临床意义 ； ②红细胞形态。
▪ 2.了解：血红蛋白测定其他方法 。
目的要求
▪ 重点 :红细胞计数、血红蛋白测定的原理、血片 红细胞形态、
▪ 难点:红细胞检验的形态、质控。
一、概 述
1.红细胞的生成
Epo
骨髓造血干细胞---------红系祖细胞--------原红细胞----
无分裂能
早幼----中幼----晚幼----力--网织红细胞--4--8--h--成熟红细胞 每个原红细胞可以生成16个红细胞。
2.红细胞的破坏
▪ 健康人红细胞平均寿命120天。 ▪ 红细胞主要因衰老而消亡，破坏主要在单核-巨噬
2）器材： 分光光度计、移液管、微量吸管、试管等。 3）试剂：血红蛋白转化液（文齐液）成分如下 ①高铁氰化钾：使Hb转化成Hi ②氰化钾：使Hi形成HiCN ③无水磷酸二氢钾：防止混浊，调节pH值 ④TritonX100:非离子型表面活性剂，加速溶血，缩
匀（稀释200倍）； 3.充池，静置2min后以低倍镜计数中间大方格内四
角和中央5个中方格内的红细胞数。
未染色红细胞呈双凹盘形，有黄绿色折光。
红细胞计数
2ml稀释液
充分混匀
10ul血液 下计数
充池、静止 镜
3mm WBC
WBC
WBC
WBC
【计算】
红细胞数/L=5个中方格内红细胞×5 ×10 ×200 ×106/L
【分类】（每个珠蛋白分子含两条α 链和两条非α 链）
正常人：HbA （ α2β2） 占90% 白；
成人主要血红蛋
HbA2（ α2δ2 ） 占2%-3% 成人次要血红蛋白 HbF （ α2γ2 ） 占2%以下 胎儿主要血红蛋白
▪ 生理情况下，99%Hb的铁呈Fe2+状态，称为还原 血红蛋白，亚铁状态的Hb与氧结合称氧合血红蛋 白（HbO2).
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
【注意事项】 1.采血及摇匀迅速，防止血液凝固； 2.器械应防酸防碱且干燥； 3.充池要摇匀； 4.计数时，应识别酵母及白细胞。
三、血红蛋白测定
（一）血红蛋白的结构
▪ 血红蛋白结构： 由珠蛋白和亚铁血红素结合组成。
色素部分： Fe 2+ 亚铁血红素 原卟啉 Hb 蛋白质部分：珠蛋白
空间结构：每个血红蛋白有4条珠蛋白肽链， 每条肽链包裹1个亚铁血红素，形成具有 四级空间结构的四聚体。
4.碳氧血红蛋白（HbCO）、硫化血红蛋白 （SHb）：与O2结合的配位键被CO、S等占据。
5.氰化高铁血红蛋白（HiCN）：Hi与CN-结合而成。 波峰540nm，波谷504nm。
正常情况下，血液中血红蛋白主要是HbO2和 Hbred，以及少量HbCO和Hi。
（三）血红蛋白测定方法
手工法：
HiCN法 SLS-Hb法 AHD575法