显微切割技术
显微剪加工制作方法
显微剪加工制作方法英文回答：Micro-cutting is a manufacturing method used to create intricate shapes and patterns on various materials. It involves the use of a microscope to carefully manipulate and cut the material, allowing for precise and detailed results. There are several techniques and tools that can be used for micro-cutting, including laser cutting, electrical discharge machining (EDM), and mechanical cutting.Laser cutting is a popular method for micro-cutting due to its high precision and versatility. It uses a focused laser beam to vaporize or melt the material, creating the desired shape or pattern. This technique is commonly used for cutting thin materials such as metal foils or polymers. The advantage of laser cutting is its ability to produce complex shapes with minimal distortion or damage to the surrounding material.EDM, on the other hand, is a non-contact cutting method that uses electrical discharges to remove material from the workpiece. It is particularly useful for cutting hard and brittle materials such as ceramics or semiconductors. The EDM process involves the creation of a spark between an electrode and the workpiece, which erodes the material and creates the desired shape. This technique allows for high precision and can produce intricate patterns with sharp edges.Mechanical cutting methods, such as milling or drilling, can also be used for micro-cutting. These techniquesinvolve the use of sharp cutting tools to remove material from the workpiece. While not as precise as laser cuttingor EDM, mechanical cutting methods are often more cost-effective and can be used for a wider range of materials. They are commonly used for cutting metals or plastics in industries such as electronics or automotive manufacturing.In addition to the cutting techniques, the choice of cutting parameters and tooling is crucial for achieving the desired results in micro-cutting. Factors such as cuttingspeed, feed rate, and tool geometry can greatly affect the quality of the cut. For example, a higher cutting speed may result in a smoother surface finish, while a lower feed rate can reduce the risk of tool breakage. It is important to carefully optimize these parameters based on the material properties and desired outcome.Micro-cutting is widely used in various industries, including electronics, aerospace, and medical device manufacturing. It allows for the creation of intricate components and structures that cannot be achieved through conventional machining methods. For example, micro-cutting is used to fabricate microelectromechanical systems (MEMS), which are tiny devices with both mechanical and electrical components. These devices are used in applications such as sensors, actuators, and microfluidic systems.In conclusion, micro-cutting is a versatile and precise manufacturing method that allows for the creation of intricate shapes and patterns on various materials. Whether it is through laser cutting, EDM, or mechanical cutting, the choice of technique and cutting parameters is crucialfor achieving the desired results. This method has revolutionized industries such as electronics and medical device manufacturing, enabling the fabrication of complex microstructures that are essential for modern technology.中文回答：显微剪加工是一种用于制作各种材料上复杂形状和图案的制造方法。
生物显微镜技术6-显微操作技
Leica转基因操作系统 LdcaASTP实现了把光学显微镜和显微操 作器的电控元件组合在同一控制部件内的第一台“转基因操作系 统”。用同一个控制器可以同步调控显微镜和显微操作器。
显微操作(NARISHIGE)系统 Nikon与NARISHIGE合作的结晶。 *采用油压传动的远程驱动*针对不同用途，可灵活选择不同 的配置方案
克隆羊“多莉”
克隆羊之父维尔莫特
克隆羊“多莉” 和它生下的小羊
细胞核移植技术流程
①供体体细胞经细胞培养后，提取细胞核；
②提取卵巢卵母细胞，在其减数分裂第二次 分裂中期除去细胞核，制成无核细胞质；
③将供体核与无核卵母细胞质融合，并培养 成早期胚胎；
④将早期胚胎移植到代孕母体子宫内，发育 成新个体。
显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、 嵌合体技术、胚胎移植、显微切割、细胞膜 打孔、外源基因显微注射导入等，是现代生 物学重要的实验技能之一。
第一节 显微操作仪
显微操作仪目前使用较为广泛的有两类： 一类为球面、齿轮机械传动操作式，如德
国Leica公司生产的MicromanipulatorM； 一类为液压传动操作式，如日本Narishige
细胞核移植技术，主要是用来研究胚胎发育过程中， 细胞核和细胞质的功能，以及二者间的相互关系； 探讨有关遗传，发育和细胞分化等方面的一些基本 理论问题。
细胞核移植技术已有几十年的历史。
迄今为止，已有下面9种供核类型的体细胞核移植 后代产生：胎儿成纤维细胞 、成体乳腺细胞 、卵 丘/颗粒细胞 、输卵管/子宫上皮细胞 、肌肉组织 的细胞 、成体耳部成纤维细胞、睾丸支持细胞 、 小鼠尾尖细胞 、初乳的乳腺上皮细胞
激光显微切割_单细胞PCR技术在霍奇金淋巴瘤IgH基因检测中应用
关键词 : 淋巴瘤 , 霍奇金 ; 激光 显微切 割 ; 单 细胞 ; 聚合 酶链
mmo l/L , dNT Ps 200 m o l/L, 引物 0 5 mo l/L ( 引物序列来 ), 牛血 清白蛋 白 1 g /L, DNA l首轮扩 聚合酶 1 25 U。单轮常 规 PCR 引物 HBB. P 2 1 / P 2 2; 半 巢式 StepdownPCR 首轮扩增引物同前 , 第二轮以 1 增产物作模板 , 引物 HBB. P 5 /P 2 2 。 % PCR 反应条件 : 热 启动 , 95 ∀ 预变性 10 m in , 单轮常规 PCR 95 ∀ 变性 60 s 、 55 ∀ 退火 60 s 、 72 ∀ 延伸 60 s , 72 ∀ 后延伸 7 m in , 循环 50 次 ; 半巢式 S tepdown PCR 变 性、 延伸 同 前 , 以 73 ∀ 、70 ∀ 、67 ∀ 、 64 ∀ 、 61 ∀ 、 58 ∀ 依次 退火循 环 , 首轮扩增 循环 42 次 , 第二轮循环 36 次。 1. 2. 6 Ig H 基因重排检 测 [ 1] PCR 反应 体系中各成 分的浓 度同上 , 半巢式 PCR 首 轮扩增 引物 FR 3A / L J H, 第 二轮以 3 l首 轮扩增产物 作为 模板 , 引 物 FR 3A / VL J H。 热启 动 , 95 ∀ 预变性 5 m in; 首轮扩增 95 ∀ 80 s ; 第二轮扩增 95∀ 60 s, 65 ∀ 2 m in 、65 ∀ 60 s , 72 ∀ 4 m in、 72 ∀ 80 60 s, 72 ∀ 60 s, 32 次循 s 循环一次 , 后接 35 个循环 , 即 95 ∀ 90 s , 65 ∀
收稿日期 : 2007 - 04- 26 修回日期 : 2007- 12- 28 基金项目 : 贵州省优秀青年科技人 才基金 ( 黔 教高发 2000371 号、 黔 科通 200298号 ) 作者单位 : 遵义医学院附属医院病理科 , 遵义 563003 作者简 介 : 匡晓 燕 , 女 , 硕 士 , Байду номын сангаас 讲。 Te: l ( 0852 ) 3142597, E m ai: l kxy0326 @ yahoo. com. cn 邓 飞 , 男 , 博 士 , 教 授 , 硕 导 , 通 讯 作 者。 T e:l ( 0852 ) 8925881, E m ai: l m dproffeid eng @ hot m ai. l com
激光捕获显微切割技术在食管鳞癌蛋白质组学研究中的应用
ｍｅｓ ｎｌｐ ￣ ｎｉ ａ ｏ ｏ
ｌ ｉｅ ｇｌｅ ｃ ｈ ｒ ｉ （ － Ｅ ｔｃｎｑ ｅａ ｄ ｃｍｐｔｒａｓ ｔ ｍ ｇ ａ ｓ ｅｅ ｕｅ ｏ ａａ ｚ ｅ ａ ｄ ｅ ｌ ｔ ｏｅ ｓ ２ Ｄ ） ｈｉｕ ， ｏ ｕｅ－ｓｉｅ ｉａ ｅ ａｌ ｉ ｗ ｒ ｓｄ ｔ ｎｌ ｅ ｔ ｍ ｅ ｍｐ ｓ ｅ ｎ ｓｄ ｎ ｙｓ ｙ ｈ
ｉｇｅ ｏｙｃｙ ｍｉｅ ｇｌＲｅｕｔ：￣ｅ ａｔｒ ｍ ｃｏｉ ｅｔｎ ｏ ｔｎ ｄ ｐ ｒ ｏｊｃｖ ｅ ｓ ｎ ｙｅ ｅ ｉａｅ ｏ ｌ ｍａ ｓｏ ｐ ｌ ｒｌ ｄ ｅ ． ｓｌ Ｉ ｓｒ ｃｐｕ ｉｒ ｓ ｃｏ ｂａ ｅ ｕｅ ｂｅｔ ｅ ｃｌ ． ａ ｚｄ ｔ ｍ ｇ ｐ ｙ ｆ ａ ａ ｓ ｓ． ｅ ｄｓ ｉ ｉ ｉ ｌＡ ｌ ｈ ｆ ｏ —
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【 ｂｔ ｃ］ ｂｅｔ ｅＴ ｘｌｄ ｈ ｉｕｂ ｏ ｉ ｄ ｃｌ ｔ ｅ，ｃ ｕ ｅ ｈ ｍａ ｓｐ ａｅｌｓｕｍｏｓ ｃｌ ｃｒｉｏ ａ ｃｌ ｎ Ａ ｓ ａｔＯｊｃｖ ：ｏ ｅｃ ｅ ｔｅ ｄｓ ｒ ｆｍｘ ｅ ｙ ｓａｑ ｉ ｕ ｎ ｅｏｈ ｇａ ｑ ａ ｕ ｅ ａｃｎｍ ｅｓ ａｄ ｒ ｉ ｕ ｔ ｅ ｌ ｐ ｒ ｌ ｌ
维普资讯
重 庆 医科 大 学 学 报 ２０／ 第 ３ ０ ＂年 ２卷 第 ２期 （ｏ ｍａ ｆ ｏ ｇ ｉｇＭｅ ｉ ｌ ｎｖ ｒｉ ０ ＂ Ｖ １ ２Ｎｏ２ Ｊ ｕ ｌ ｎ ｑｎ ｄｃ ｉ ｓｔ ２ ０ ． ｏ． ．ｌ ｏ Ｃｈ ａＵ ｅ ｙ ／ ３
激光显微切割在肿瘤研究中的应用
３２ 蛋 白质组学研究 ＿ ＬＤ Ｍ 技术与与二维凝胶电泳和生 物质谱等技术结合 ， 组成 了蛋 白质 组学技术 。该技术对人类基 因组在不同病理条件下所表达的蛋 白质组进 行研究 ，建立蛋白 “ 指纹 ”库 ，对疾病的早期诊断 、早期治疗具有深远 意义 。Ｌ ｗ ｉ ａ ｒ 等采用Ｌ Ｄ ｅ Ｍ 对结肠癌标本进行切割 ，分离 出结肠癌细胞和 正常 的结肠上皮细胞 ， 通过二维凝胶电泳 和质谱技术确定了细胞角蛋 白 ８（ｙ ｋｒ ｉ ８ 等３ ｃｔ ｅ ｔ ） 种在结肠癌 中特异改变的蛋 白质 ，可以进一步来确 ｏ ａｎ 定新的分子标志物或蛋 白质靶 ，对癌症进行早期诊断。
ｏ ｎ ｌ ｅｌ ｆｏ ｃ ｍｐ ｅ ｉ ｕ ｓ Ｂ ｏ ｅ ｈ ｉ ｕ ｓ １ ９ ｆ ｉ ｇｅｃ ｌ ｒ ｍ ｏ ｌｘｔ ｓ ｅ ． ｉｔ ｃ ｎｑ ｅ ， ９ ９； ２ ： ３ ８ ３ ５ ｓ ｓ ｓ ６ ２ —３ ．
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显微手术技巧
显微手术技巧
显微手术技巧是一种在显微镜下进行的外科手术技术，通过显微镜放大器官或组织，使外科医生能够进行更精确，更精细的操作。
以下是一些常见的显微手术技巧：
1. 显微镜调节：外科医生需要使用显微镜来观察操作目标，因此熟悉显微镜的调节和操作是必要的。
这包括通过放大和对焦来获得清晰的显微图像。
2. 稳定手术场景：由于显微手术需要非常精细的操作，手术场景的稳定性非常重要。
外科医生需要使用专业的外科显微镜支架或固定设备来固定手术场景，以确保手术的稳定性。
3. 细致操作：在显微手术中，外科医生需要进行一系列精细的手术操作，如切割、缝合、缝线、吻合等。
这些操作需要细心、耐心和精确的手眼协调能力。
4. 微创手术：显微手术通常采用微创技术，即通过较小的切口或穿孔进行手术。
外科医生需要借助显微镜来引导手术器械的进入和操作，以减小手术创伤和出血。
5. 团队合作：显微手术通常需要医生和护士等多个专业人员的配合。
团队合作、默契和互助非常重要，以确保手术的成功和安全。
总的来说，显微手术技巧需要医生经过专门的培训和实践，熟悉显微镜的操作和显微手术的步骤。
随着技术的不断进步，显微手术在外科领域的应用越来越广泛，为患者提供了更好的手术效果和更快的康复。
探究激光捕获显微切割技术在法医物证检验中的应用
探究激光捕获显微切割技术在法医物证检验中的应用发布时间：2022-07-26T07:38:46.703Z 来源：《医师在线》2022年3月6期作者：钟倩安刚通讯作者陈梅君易红[导读]探究激光捕获显微切割技术在法医物证检验中的应用钟倩安刚通讯作者陈梅君易红（四川福森特司法鉴定所；四川成都610041）摘要：目的对激光捕获显微切割技术应用于法医物证检验的效果进行讨论。
方法对样本进行制备和染色，制作细胞涂片并对DNA分型结果进行对比。
结果上皮细胞数量为2时，无法得出检验结果；数量为10时，可获得部分基因座结果；数量为25时，可获得全部基因座结果；精子细胞数量为10和50时，可获得部分基因座结果；数量为100时，可获得全部基因座结果。
结论激光捕获显微切割技术可用于法医物证检验，作为重要的破案手段，值得进一步推广应用。
关键词：激光捕获显微切割技术（Laser capture microdissection (LCM) technology）；细胞分离；混合生物检材；DNA检验在强奸类型的案件中，案发现场通常会存在大量男女混合物质，为了确定强奸犯的身份，需要在混合物质中提取出男性的部分，但是差异裂解法往往很难有效去除女性成分，导致难以得到单纯男性STR（短串联重复序列）分型，对犯罪嫌疑人身份的确定产生了较大阻碍。
相关资料显示，激光捕获显微切割技术(LCM)可以在显微镜下从组织切片中分离、纯化单一类型细胞群或单个细胞，起到分离细胞的效果，最终得到单一DNA分型。
因此，本研究将以模拟强奸案现场的精斑样本为研究资料，对法医DNA检验应用激光捕获显微切割技术效果进行讨论，现总结如下。
1 材料与方法1.1 材料模拟强奸案现场遗留的精斑。
1.2 方法样品处理：剪碎带有混合精斑的检材，放入1.5mL离心管中，加入1ml去离子水，保持15min的浸泡振荡，使用底部带孔套管13000r/min离心3min，去除载体，并去除上清液。
激光捕获显微切割结合低体积扩增技术研究
刑侦技术 ＨＡＩ ＸｌＡ ＫＥ ＸＵＥ 激光捕获显微切割结合低体积扩增技术研究术 １．福建省公安厅刑事技术总队，福建省刑事科学技术重点实验室２．福州市鼓楼区公安分局刑事技术大队 李 斌 吕 政 曾宪海’ 戈文东
［摘要］ 目的：研究激光捕获显微切割技术联合应用低体积扩增技术，建立一套微量混合样本ＤＮＡ的检验方法。方法：使用 ＰＡＬＭ系统切割捕获目标细胞，弹射到低体积扩增玻片的反应位点上，消化细胞，提取ＤＮＡ，使用Ｉｄｅｎｔｉｆｉｌｅｒ＠试剂盒在１．５ 体系中进行ＰＣＲ扩增。结果：分别捕获１Ｏ个口腔上皮细胞、２０个精子细胞，成功获得１６个完整的ＳＴＲ基因座分型谱带。结 论：激光捕获显微切割技术联合应用低体积扩增技术适用于法医学中微量混合样本ＤＮＡ检验。 ［关键词】 法医物证学激光捕获显微切割低体积扩增ＳＴＲ分型
激光捕获显微切割（Ｌａｓｅｒ ｃａｐｔｕｒｅ ｍｉｃｒｏｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ，ＬＣＭ） 技术主要应用于病理学、肿瘤学、发育生物学、神经生物学 中，可以从复杂组织中快速准确地分离均一陛样品组分Ｌ１＇３】。 因其可在显微镜直视下捕获目标细胞，以排除异质性细胞的 影响，为解决困扰法医物证检验的难题——混合样品ＤＮＡ 的检验分析提供新的解决方案，受到了法医科学工作者的重 视与应用。而低体积扩增技术（如安利快得系统）采用显微 镜玻片平面印刷技术，整个ＰＣＲ反应体系为ｌ ，半球状的 空间构象为微量反应提供了最佳的环境，使灵敏度大大提高 Ｈ】。本实验将激光捕获显微切割和低体积扩增技术相结合， 建立微量混合样本ＤＮＡ的检验方法，探讨其在法医ＤＮＡ检 验中应用的可行性。 １材料与方法 １．１实验样本 样本一：志愿者口腔拭子。 样本二：实际强奸案件中的卫生纸。 １．２主要仪器和试剂 ＰＡＬＭ激光显微切割捕获系统（Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ公司，德国）， ＰＥＮ１．０玻片，ＡＧ４８０Ｆ ＡｍｐｌｉＧｒｉｄ微量反应玻片与密封油， ０．０４ｍｏｌ／Ｌ ＰＫ溶液，０．０５ｇ／ｍｌ龙胆紫染液（国药集团化学试剂 有限公司，中国），Ｉｄｅｎｔｉｆｉｌｅｒ￣试剂盒（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ公 司，美国），ＡｍｐｌｉＳｐｅｅｄ ＡＳＮ４００ ＰＣＲ扩增仪（Ｏｌｙｍｐｕｓ欧 洲生命科学公司，德国），离心机，ＡＢＩ ３１３０ＸＬ型遗传分析 仪（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ公司，美国）。 １．３实验方法 １．３．１制备细胞悬液 在样本一放人加有７ｏ０ 去离子水的ＥＰ管内，震荡洗脱 ５ｍｉｎ，使拭子上的细胞充分脱落，弃去拭子。 用剪刀剪取ｌｃｍ×ｌｃｍ大小样本二置于ＥＰ管内，剪碎， 加ｌｍＬＴＮＥ室温浸泡３０ｍｉｎ，期间不断震荡，套管离心去除载 体。 １．３．２涂片 细胞悬液１３０００ｆｆｍｉｎ离 ￣，３ｍｉｎ，吸取上清液，保留约 ３０ｐＬ，加入适量的龙胆紫染液，混匀染色５ｍｉｎ。吸取５ｐＬ， 轻轻涂铺在ＰＥＮ１．０玻片上，用热快３７℃烘干１０～１５ｍｉｎ。 １．３．３切割 将玻片放置在ＰＡＬＭ激光显微切割捕获系统的载物台 上，显微镜下查找选择结构清晰、完整的单个细胞（样本一 为口腔上皮细胞，样本二为精子细胞），用绘制工具，通过 软件依次选定标记需要分离的目标细胞，切割细胞。切割的 激光束能量要适中，以切割后膜面在视野中稍变模糊为宜。 １．３．４收集 切割下的口腔上皮细胞弹射到加０．７５ｇＬ ＰＫ溶液的 ＡＧ４８０Ｆ Ａｍｐ１ｉＧｒｉｄ微量反应玻片位点上。切割下的精子细胞 弹射到加０．７５ 含有ＰＫ和ＤＴＴ的裂解液（０．１ｍｇ／ｍＬ ＰＫ， ５ｍｍｏｌ／Ｌ ＤＴＴ）的ＡＧ４８０Ｆ ＡｍｐｌｉＧｒｉｄ￣量反应玻片位点上。 分别捕获５、１０、１５、２０、３０个细胞，每个细胞数重复３次。 １．３．５ ＤＮＡ提取 ５ 密封油密封玻片位点，静置５ｍｉｎ，待反应液沉到玻 片上后，口腔上皮细胞５６￣Ｃ消化ｌｈ，９５￣Ｃ变性１５ｍｉｎ；精子 细胞５６￣Ｃ消化２ｈ，９９℃变性１０ｍｉｎ。 １．３．６扩增 加入０．７５１ａＬ ＰＣＲ反应液（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｌｅｒ￣试剂盒，配比为：
激光显微切割简易操作手册
激光显微切割简易操作1.开机：先开电脑 CTR6500控制器，显微镜自检，自检结束后前面触摸屏上显示基本信息开laser 控制器，打开电源开关，把钥匙拧到on 的位置，laser控制器预热5-10分钟，待右侧指示灯变绿如果使用荧光，打开EL6000的光源开关双击桌面上显微切割软件的快捷方式，进入软件。
2.TL-BF明场切割过程：1)点击样品夹unload，选择样品夹类型，放上样品，磨面朝下，点击continue，样品夹退回机器；2)点击收集管unload，选择收集管类型，安装收集管，PCR管半径值默认为3，8连排为4，点击continue，收集管退回机器；3)选择收集管盖/孔。
点击对话框左下方的收集装置，选择收集管盖/孔（A、B、C或D），被选中的管盖，颜色由红变绿。
4)点击micro control，选择TL-BF，选择物镜的倍数，FL调到最大，一般切割大的区域选择6.3X或10X，如果是单细胞20、40、60倍，如果切割亚细胞器、染色体用150X；5)找到样品画面，对焦，调出清晰画面，如果画面效果不好，点击camera菜单下的setting window，调节自动白平衡，调好画面后，关闭界面；6)找到目标区域，选择single（单图切割）还是multi(多图切割)，选择draw+cut，画出要切割的区域，有line , 椭圆，矩形，画完区域选择指定的收集管，点击下面收集管，颜色与区域一样，在shape list中可以看到收集管的位置；7)点击laser menu下的laser control，调节激光的设置，开始可以把power 低一点，切割的aperture窄一点看看效果，摸索条件，specimen balance调到0；8)点击start cut 开始切割，如果切割很好，不用修改激光参数，如果不好适当调整激光参数；9)切割结束后，点击collector，查看收集管中切割的样品，找到样品，点击收集管unload，退出收集管，进行后续实验；10)点击specimen回到样品界面；11)测量。
显微操作技术-汪艳
转基因动物技术的主要步骤
• 获取外源目的基因 • 外源目的基因导入生殖细胞或胚胎干细胞 • 选择携带目的基因的细胞，选择体外培养系统
和宿主动物 • 转基因胚胎的发育及鉴定 • 筛选所得的转基因动物
转基因动物的技术路线
• 经典的技术路线
目的基因 显微注射
已交配的 取出
移植 受体动物 妊娠
供体动物
受精卵
精子
体外受精 成熟卵细胞
转基因动物
妊娠
胚胎移植
囊胚
受体动物子宫
特点：卵母细胞导入目的基因后再与精子受精。
提高动物的生产性能
（1）改良畜禽生产性状
在转基因“硕鼠”的启发下，人们试图通过 外源基因的导入提高畜禽产品产量，加快生长速 度，减少饲料消耗和改良产品品质。
（2）提高畜禽抗病力
传染病的流行以及动物源性人畜共患病的爆 发，已对畜牧生产和人类生活产生了巨大的影响。
通过显微操作系统对欲选取的材料进 行切割分离并收集用于后续研究的技术。 显微切割技术可以简单、快速地从含有不 同成分的组织中非常特异的分离出同质细 胞来进行后续分析，大大削弱组织中异质 细胞的混淆作用。染色体显微切割技术是 细胞遗传学与分子遗传学相结合的一项桥 梁技术。
胚胎分割（A）和显微切割（B）图例
世界第一只转基因动物
世界首只转基因灵长类动物 ——-安迪
显微操作技术:
是指在高倍倒置显微镜下，利用显微操作 器（micromanipulator），这是一套能控 制显微注射针在显微镜视野内移动的机械 装置，用来进行细胞或早期胚胎操作的一 种方法。
显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、 嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等 。
（5）玻璃注射针头：可购买厂商拉制好的商品，也可用拉 针仪自行拉制 。
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显微切割技术中国医科大学科学实验中心显微切割技术( 显微切割技术(Microdissection) Microdissection)：是在显微 状态或显微镜直视下通过显微操作系统对欲 选取的材料（组织,细胞群，细胞，细胞内组 分或染色体区带等）进行切割分离并收集用 于后续研究的技术。
显微切割技术实际上属 于在微观领域对研究材料的分离收集技术， 因此应用此技术往往是许多要深入的研究工 作中起始的重要一步。
是一种有效的细胞纯化技术， 是一种有效的细胞纯化技术 ， 可在基本不损伤细 胞内DNA 胞内DNA、 DNA 、RNA和蛋白质并保持组织细胞结构完整的条件 RNA 和蛋白质并保持组织细胞结构完整的条件 下，从组织中分离出同质细胞群 从组织中分离出同质细胞群、 同质细胞群、单个细胞甚至亚细胞 结构。
结构。
技术的必要性： 技术的必要性： 研究对象的异质性 研究对象的异质性 研究材料日趋微小 研究材料日趋微小基于流式细胞术 流式细胞术的荧光激活细胞分选： 流式细胞术 显微切割是目前从组织或细胞单层分离亚群细 显微切割 胞的有效方法，同时实现将组织中每种细胞群显微切割技术能够使作为研究对象，其分子表达谱会非常接近体内 状态 离心技术我们分离得到特异的 目的细胞，而没有周 围细胞的污染。
显微切割的特点2“原位”，利用显微切割技术是在组织细胞或染色体的原位取材，1 “细微”，由于是在显微状态并采用特殊的分 离收集手段，显微切割的对象可以达到微米 级，显微切割的精度可以达到毫微米级，因此 利用显微切割技术可以分离收集到象核仁和包 涵体及染色体特异区带这样细微的对象 。
因此所取材料的定位清楚，所研究对象的历史背景明确。
例如何杰 金氏淋巴瘤中瘤组织成分多样,特征性的瘤细胞(R-S细胞及其变异 型)占细胞成分的2%左右,且呈散在性分布,如果常规地用组织匀浆 的方式从组织中提取蛋白质或核酸，则既包含了来自瘤细胞的成 分，又包含了来自淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细 胞、组织细胞等多种非瘤细胞的成分,这样所提的蛋白质或核酸来 自何种细胞并不清楚，而如果用显微切割技术则可以选择我们需要 的细胞，以使研究对象的历史背景明确 。
组织标本3“同质”，显微切割技术可以保证所取材料一定层 次上的同质性，例如前面提到的它可以收集CD4或 CD8阳性的同质细胞 4“结合”，显微切割技术可以与多种分子生物学、 免疫学及病理学技术结合使用。
而且如何识别欲 切割的细胞及如何对已切割的细胞进行分析，则 需要和其它方法相结合。
分离纯化同质细胞群、 同质细胞群、单个细胞、 单个细胞、亚细胞成分DNARNA蛋白质DNA水平 DNA水平： 水平：结合测序、 结合测序、RFLP、 RFLP、SSCP、 SSCP、MSP等方 MSP等方 法 , 基因突变、 基因突变 、 染色体易位、 染色体易位、 甲基化改变等 方面的研究。
方面的研究。
RNA水平 RNA水平： 水平：结合Real 结合RealReal-time PCR、 PCR、cDNA芯片等 cDNA芯片等 技术， 技术，基因表达分析。
基因表达分析。
蛋白水平： 蛋白水平 ： 结合western 结合 western blot、 blot 、 2-D 电泳、 电泳 、 蛋白组学方法， 蛋白组学方法，肿瘤研究。
肿瘤研究。
显微切割的材料显微切割的材料可以是以各种方式贴附于固相支持物 上的各种组织细胞成分，其来源十分广泛，石蜡组织 切片、冰冻组织切片、细胞铺片、细胞爬片、细胞甩 片、培养细胞、常规制备的染色体等均可采用。
具体 选择何种材料根据研究目的的不同进行，如果显微切 割后需要进行RNA分析则通常采用冰冻组织切片或新制 备的细胞片；在回顾性研究中福尔马林固定石蜡包埋 的组织切片应用最为广泛。
影响标本中DNA 影响标本中DNA、 DNA、RNA、 RNA、蛋白质提 取量的因素 样品保存 固定方法 切片厚度 切割效率普通染色： 普通染色：苏木素， 苏木素，甲基绿等固定是保证获得高质高量的DNA，RNA和蛋白质最关键的步骤。
固定质 量依赖于固定液穿透组织的时间，固定温度和组织大小。
固定液在组 织中保留时间越长，由于广泛存在的RNA酶或蛋白酶，RNA或蛋白质降 解的就越多。
福尔马林是一种组织学试验室常用的固定液，因为其低 成本和能够快速穿透组织的特点，其缺点是福尔马林和蛋白质之间形 成广泛的交联。
这些交联的分解和变性将产生多肽和蛋白质的片段， 而不是完整蛋白。
因此高质高产量的RNA和蛋白质常规只能由冰冻或 乙醇固定的组织得到。
可逆交联剂的应用可能将成为福尔马林固定的 替代品。
可逆的交联剂如dithiobis (succinimidyl) propionate， 已经成功应用于LCM下游RNA扩增和cDNA的合成。
免疫染色： 免疫染色：是在切割之前进行免疫组化或免疫荧 光染色， 光染色，增强在复杂组织中对目的细胞的鉴别能 力，可以在形态上相似的细胞中选出在免疫表型 上明显不同的细胞， 上明显不同的细胞，如B和T细胞， 细胞，实现对功能分 类后的细胞进行分选。
类后的细胞进行分选。
免疫染色 主要用于研究DNA 主要用于研究DNA和 DNA和RNA 染色过程应注意， 染色过程应注意，使用高亲和力和高浓度的 抗体， 抗体，并尽量缩短免疫染色的时间， 并尽量缩短免疫染色的时间，减少对 DNA和 DNA和RNA的破坏 RNA的破坏。
的破坏。
显微切割的方式1手动直接显微切割是早期的切割方式，它是 直接在显微镜下手持切割用针分离组织或细胞 群，此种方式切割精度低，只适用于对较大块 组织中的局部区域或细胞群进行分离，切割单 个细胞十分困难。
2机械辅助显微切割是利用普通光学显微镜的微调旋 钮控制切割针切割细胞,可采用30G1/2注射用针替代 需要专用拉丝设备制作的玻璃切割针,此方式切割精 度较手动直接显微切割的精度有了提高，可以达到 对较大的单个细胞的切割，而且此方式简单易行低 耗,尤其适合于基层和无专用设备的单位，但由于显 微镜的微调旋钮只能进行二微控制，对切割后的细 胞进行收集较为困难，且切割精度仍然较低3液压控制显微切割是采用液压式显微操纵系统配合倒 置显微镜进行显微切割，目前常用的操纵系统有日本 的Narishige和德国的Eppendorf液压显微操纵系统， 该系统同时可用在转基因动物及显微注射等实验中， 它通过液压系统可提供X轴、Y轴和Z轴三个方向的精确 的三微控制，其切割精度是目前各种方式中最高的， 也是很多实验室常用的方法，其不足是不能实现显微 切割的自动化,要收集较大量的目的组分时耗时长，效 率低。
4激光捕获显微切割是目前最为先进的方式,它快速方 便,可从大量的研究材料中迅速捕获较多的目的组分, 自动化程度高,但这需要昂贵的专用设备。
自动识别功能，大大节省切割时间，有效减少降解， 根据细胞的形状、大小、面积、周长，颜色、灰度， 可以设定不同的参数，比如颜色，面积，灰度，周长 等用最少的时间获得最大的切割效率激光捕获显微分离系统显微镜 显微镜载物台操纵系 统 CCD摄像 计算机及成像、控制 软件 激光激光压力弹射(LPC)技术：在直接光学显微观察的基础 上，利用激光能量对特定的组 织或细胞类型进行切割，同时 用激光脉冲所产生的压力把切 割后的目的样品弹射 (catapult)到收集帽(cap)中 富集起来，从而获得均一性的 样品。
原理铺片：将待分离样本按常规制备方法，铺在一张附有 薄膜的托片上。
三明治保护结构：将铺有样本的托片翻转后放置在一 张载玻片上，形成三明治保护结构。
样本被保护在膜 和玻片之间，切割时免受外界环境的污染。
放置收集管盖：把一个有一定黏性的Eppendorf管盖 放置在准备好的组织切片的膜上用于切割样品的收 集，同时它还有散射体的作用，能显著提高样本的成 像质量。
选择切割目标：通过CCD摄像机，在屏幕上实时监控待分 离的样本，使用鼠标勾画选择目标细胞或组织，也可将不 同类型的细胞分几组同时勾画出来，即可启动切割样本切割分离示例收集切割样品：切割完成后，提起Eppendorf管，由于管 盖具有黏性，切割下来的膜和样本即被黏附在管盖上，至 此完成了显微分离的操作，收集的样品进入后续实验。
全自动显微镜、 全自动显微镜、软件操作 金属卤素光源， 金属卤素光源，激发光强度可调 切割、 切割、收集一体化 目标自动识别 石蜡、 石蜡、冰冻切片、 冰冻切片、活细胞（ 活细胞（贴壁细胞）、 贴壁细胞）、涂 ）、涂 片、甩片、 甩片、树脂包埋组织 6.3x 、20x 、40x切割专用物镜 40x切割专用物镜主要应用： 主要应用： 从组织切片中获取同质目的细胞 从组织切片中获取同质目的细胞 GFP标记的 GFP标记的活细胞 标记的活细胞筛选 活细胞筛选工作原理： 工作原理：激光束通过物镜， 激光束通过物镜，由电脑控制沿 着设定好的路径切割， 着设定好的路径切割，即可获得需要的特定 细胞或组织， 细胞或组织，依靠重力作用收集。
依靠重力作用收集。
PEN（polyethylene naphthalate）6.3x 20 x 40 x物镜组织切片 PEN膜 载玻片激光束 载玻片 PEN膜 组织切片 收集管GFP（ GFP（green fluorescent protein） protein）标记 的活细胞筛选： 活细胞筛选： 目的： 目的：筛选稳定转染目的基因的细胞群稳定转染目的基因的细胞： 稳定转染目的基因的细胞：研究某个外源基因对 细胞某些生物学行为（ 细胞某些生物学行为（增殖、 增殖、凋亡、 凋亡、迁移、 迁移、侵 袭）的影响。
的影响。
稳定表达外源基因的肿瘤细胞接种 到动物体内可以直接观察体内成瘤和转移情况， 到动物体内可以直接观察体内成瘤和转移情况， 同时施加一些处理因素， 同时施加一些处理因素，如放化疗、 如放化疗、免疫生物治 疗等对体内肿瘤的疗效。
疗等对体内肿瘤的疗效。
将带有绿色荧光蛋白（ 将带有绿色荧光蛋白（GFP） GFP）标签的质粒载体连接 目的基因， 目的基因，转染进入细胞后， 转染进入细胞后，能够同时表达出GFP 能够同时表达出GFP 和目的基因， 和目的基因，GFP的表达和定位代表目的基因 GFP的表达和定位代表目的基因。
的表达和定位代表目的基因。
目 前GFP已经成为跟踪活组织或细胞内基因表达及蛋 GFP已经成为跟踪活组织或细胞内基因表达及蛋 白定位的常用标记物。
白定位的常用标记物。
表达融合蛋白GFP目的 基因利用LCM 利用LCM系统对活细胞筛选 LCM系统对活细胞筛选， 系统对活细胞筛选，就是将这些 表达GFP 表达GFP（ GFP（代表目的基因） 代表目的基因）的单细胞克隆 逐个挑选出来， 逐个挑选出来，分别培养扩增， 分别培养扩增，最终建立 稳定表达目的基因的细胞系。