高效液相色谱法测定郁金饮片中姜黄素的含量_雷云霞

在上述色谱条件下，精密吸取对照品溶液(浓度为 0.00208mg/ml)和温郁金供试品溶液各 20μl，分 别注入液相色谱仪，测定，然后每隔 6 小时测定一次，考察 12 小时，再于 24 和 48 小时各考察一次。 结果表明，对照品和温郁金供试品溶液至少在 48 小时内测定结果稳定，姜黄素对照品峰面积的 RSD 为 1.52%（n=5），温郁金供试品中姜黄素峰面积的 RSD 为 1.05％（n＝5）。 3.8 重复性试验
取温郁金粉末约 1.0g，精密称定，共 5 份，以下按含量测定方法进行测定，测得姜黄素的平均含 量分别为 0.0106mg/g，RSD 为 0.54％,说明本方法重复性良好。重复性试验结果见表 5。
测定次数
表 5 重复性试验结果 含量（mg/g） 平均含量（mg/g）
RSD（%）
0.010 1
0.0106
184
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3.4 系统适应性试验考察 在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 20ul，分别注入液相色谱仪，测定。
结果表明，分离度为 1.87 和 1.90，达到基线分离，且保留时间适中。对照品的保留时间和峰形与供试 品均一致。因此该分析条件可行。对照品和供试品高效液相色谱图见附图 2—6。 3.5 线性关系考察
175 150 125 100
75
50 25
0
0
2.5
5
7.5
10
12.5
15
17.5
20
min
附图 泽泻各炮制品以及标准品的 HPLC 图谱
高效液相色谱法测定郁金饮片中姜黄素的含量
雷云霞 1，孙立立 2，杨书斌 2，王娇 2
（1.济南市妇幼保健院；2.山东省中医药研究院）
[摘 要] 目的：建立高效液相色谱法测定郁金饮片中姜黄素含量的定量分析方法。方法：采用超声提取法， 选用色谱柱：Lichrospher ODS C18(4.6×150mm，5μm)，流动相：乙腈-水（5%冰醋酸）（45：55），检测波长： 420 nm，流速：1ml/min，柱温：室温，进行高效液相色谱测定。结果: 在上述色谱条件下，姜黄素进样量在 0.4160-0.0208ug 范围内与其峰面积呈良好的线性关系（r =0.9999），平均回收率为 99.75 %（n=5），RSD 为 1.20%(n=5);精密度试验对照品和供试品 RSD 分别为 1.28%，1.10%(n=5)，；稳定性试验表明对照品和供试品 溶液 48 小时内稳定；重复性试验 RSD 为 0.54%(n=5)。结论：该测定方法简单可行，结果准确，重复性好， 可用于温郁金、黄丝郁金饮片中姜黄素的含量测定。 [关键词] 郁金饮片；姜黄素；高效液相色谱法；含量测定
在上述色谱条件下，取姜黄素对照品适量，加甲醇稀释后作为样品溶液，以甲醇为参比，用紫外 分光光度计在 190～900nm 波长范围内扫描，测定姜黄素的最大吸收波长为 420nm,故选定检测波长为 420nm.检测波长选择见附图 1。 3.2 对照品溶液的制备
精密称取姜黄素对照品 5.20mg，置 25ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取 5ml 置 50ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为姜黄素对照品溶液储备液，浓度为 0.0208mg/ml。
郁金具有行气化瘀，清心解郁，利胆退黄的功效，临床常用于经闭痛经，胸腹涨痛、刺痛，热病 神昏，癫痫发狂，黄疸尿赤。中国药典 2000 年版[1]收载有 4 个入药品种，分别为姜科植物温郁金 Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling、姜黄 Curcuma longa L.、广西莪术 Cuecuma Kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang 或蓬莪术 Curcuma Phaeocaulis Val.的干燥块根。前两者分别习称“温郁金”和“黄丝郁金”，其 余按性状不同习称“桂郁金”或“绿丝郁金”。现代研究表明，郁金具有免疫抑制、降血脂、保肝、抗真 菌、抗氧化、抗肿瘤、中枢抑制等多种药理活性[2]。据文献检索，郁金中含有少量挥发油、姜黄素等 成分，其中姜黄素为其降血脂、抗氧化、抗炎的主要有效成分[3]；其含量以黄丝郁金最高，比莪术高 近百倍，同一植物根茎含量高于块根[4]。本文选用反相高效液相色谱法建立了郁金饮片中姜黄素的含 量测定方法，测定了三种不同品种十批郁金饮片中姜黄素的含量，实验结果证明，该法简单易行、准 确、精密度及重现性俱佳，可作为制定黄丝郁金饮片质量标准的参考依据。
取黄丝郁金饮片粉末 0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，密塞，称定重量， 超声提取 30 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，置旋转蒸发 仪低温回收甲醇，定容于 25ml 量瓶中，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，作为黄丝郁金供试品溶 液。
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樟帮盐炙法
标准品
VWD1 A, Wavelength=208 nm (ZX\ZX041005.D) mAU
80
60
40
22.761
20
0
0
2.5
5
7.5
10
12.5
15
17.5
20
22.5
min
VWD1 A, Wavelength=208 nm (D:\DQ2\ZX120017.D) mAU
取温郁金、桂郁金饮片粉末 1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，密塞，称定 重量，超声提取 30 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，置旋 转蒸发仪低温回收甲醇，定容于 5ml 量瓶中，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，作为温郁金、桂郁 金供试品溶液。
1 仪器、试药和供试样品 1.1 仪器：Agilent 1100 Series 高效液相色谱仪(美国)；Agilent 8453 紫外分光光度仪(美国)；KQ3200 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；BECKMAN COULTER-AllegraTM6 centrifuge 台式高速离 心机；939 全自动薄层制板器(重庆南岸贝尔德仪器厂)；METTLER TOLEDO 1/100000 天平(瑞士)； MILLI-Q 超纯水纯化系统 。 1.2 试药：姜黄素对照品（中国药品生物制品检定所）；甲醇（色谱纯，天津四友）；水为超纯水，其 它试剂均为分析纯。 1.3 供试样品：安徽沪谯中药饮片厂自制郁金中试产品，批号：桂 04051601，桂 04051602，桂 04051603， 桂 04051604，桂 04051605，桂 04051606, 温 04051607，温 04051608，黄丝 04051609，黄丝 04051610。 2 色谱条件
在上述色谱条件下，精密吸取对照品溶液（浓度为 0.00208mg/ml）和温郁金供试品溶液各 20μl， 分别注入液相色谱仪，测定；对照品溶液和温郁金供试品溶液分别各测定 5 次，结果姜黄素对照品峰 面积的 RSD 为 1.28%，温郁金供试品姜黄素峰面积的 RSD 为 1.10%，表明精密度良好。 3.7 稳定性试验
供试液
表 1 不同提取方法测定结果
提取溶剂
提取方法
姜黄素（mg/g）
1
乙醚-甲醇
超声 0.5h
0.0107
2
乙醚-甲醇
超声 0.5h
0.0108
3
甲醇
超声 0.5h
0.0107
4
甲醇
超声 0.5h
0.0108
试验结果表明：上述两种提取方法测得的姜黄素含量相差无几，说明两种提取方法效果一致。为 简便，选用直接用甲醇超声提取 0.5h 作为本品的提取方法。 3.3.2 供试品溶液的制备
精密量取姜黄素对照品溶液储备液 5ml，置 50ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为 姜黄素对照品溶液，浓度为 0.00208mg/ml。 3.3 供试品溶液的制备 3.3.1 供试品溶液提取条件的选择
参照文献报道:①乙醚脱脂后，加甲醇超声提取 0.5h ②直接用甲醇超声提取 0.5h,进行比较试验： 取温郁金饮片（批号：04051607）粉末 2 份各 1.0g，精密称定，按方法①分别置具塞三角烧瓶或圆底 烧瓶中，分别精密加入乙醚 50ml，进行超声提取 0.5h，过滤弃去乙醚液，药渣晾干，再精密加入甲醇 50ml，称定重量，超声提取 0.5h，取下放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取 上清液，于旋转蒸发仪低温回收甲醇，定容于 5ml 容量瓶中，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过；另 取 2 份按②直接精密加入 50ml 甲醇，称定重量，超声提取 0.5h，取下放冷，再称定重量，用甲醇补足 减失的重量，摇匀，离心，取上清液，于旋转蒸发仪低温回收甲醇，定容于 5ml 容量瓶中，摇匀，用 微孔滤膜（0.45μm）滤过，作为供试品液 1-4。在上述色谱条件下，精密吸取供试品溶液 1－4 各 20μl, 分别注入液相色谱仪测定，结果各提取方法姜黄素均能达到基线分离，测得的姜黄素峰面积基本一致。 测定结果见表 1。
表 6 回收率试验结果
加入姜黄素量 测得量
（ug）
（ug）
回收率 （%）
RSD
X （%） （%）
1
0.5439
5.76
6.24
11.87
97.83
2
0.5824
6.17
6.24
12.42
100.2
3
0.5491
5.82
6.24
12.03
99.52
99.75
1.20
4
0.6799
7.21
6.24
13.51
色谱柱：Lichrospher ODS C18 柱（4.6×150mm，5um）；流动相：乙腈：水（5%冰醋酸）（45:55）；