检测总RNA质量的两种方法比较研究_梁婧娴
西南民族大学学报·自然科学版第38卷第1期
Journal of Southwest University for Nationalities⋅Natural Science Edition Jan. 2012
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___________________________ 收稿日期：2011-10-26 通讯作者：徐亚欧(1957-), 男, 教授. E-mail: xuyaou@163.com.
文章编号: 1003-2843(2012)01-0069-04 检测总RNA质量的两种方法比较研究
梁婧娴, 陈志成, 贺庆华, 江容娥, 徐亚欧 （西南民族大学生命科学与技术学院, 成都 610041） 摘 要: 采用普通琼脂糖凝胶电泳和甲醛变性胶电泳两种方法对小鼠、藏绵羊的新鲜组织及非洲绿猴肾细胞提取的总RNA进行检测, 比较两种方法对总RNA质量检测的特点. 结果显示: 甲醛变性胶对总RNA质量检测结果明显优于普通琼脂糖凝胶, 证明对总RNA质量的检测更适合采用甲醛变性胶电泳法. 关键词:总RNA质量；琼脂糖凝胶电泳；变性胶电泳 中图分类号: Q7 文献标识码：A doi：10.3969/j.issn.1003-2483.2012.01.15
总RNA的提取技术是分子生物学研究的基础, 总RNA的质量（纯度及完整性）是后续实验成功与否的前提, 因此检测总RNA的纯度及完整性至关重要. 凝胶电泳由于其操作简便、快速、灵敏等优点, 使它成为分离、鉴定和提纯核酸的首选标准方法. 凝胶电泳分离RNA, 是通过观测泳道中28S和18S rRNA带型清晰程度和二者的相对亮度来确定RNA的质量. 普通的琼脂糖凝胶[1]一般用于分离不同大小的DNA, 也有些研究人员用于检测总RNA的质量, 本文总结了总RNA提取及两种检测RNA质量的方法并对其进行讨论.
1 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 实验样品 用高温烘烤过的剪刀分别采取藏绵羊的真胃组织、小鼠腿肌组织；另取培养的非洲绿猴肾细胞, 迅速置于液氮中保存备用. 1.1.2 实验主要仪器及试剂 GEL DOC2000凝胶成像系统（美国BIO-RAD公司）, WAP Biowave核酸蛋白检测仪(英国Biochrom 公司), 高速冷冻离心机（Centrifuge 5415R, Eppendorf, Inc）, Bio-Rad POWER PacHV 稳压电泳仪（美国BIO-RAD公司）, 研钵等；Trizol Reagent（美国Invitrogen公司）, 异丙醇, 氯仿, 无水乙醇, 琼脂糖（西班牙Biowest ReGular公司）, MOPS（美国SIGMA公司）, 甲醛, 2×RNA Loading Dye（美国Fermentas公司）, Rnase Free dH2O（TaKaRa
公司）. 1.2 实验方法 提取RNA所用的玻璃、陶瓷、金属器具经180℃烘干6h, 移液枪头、EP管等均用DEPC水处理并高压灭菌. 电泳槽以及其他塑料电泳设备均用双氧水浸泡过夜后, 再用DEPC处理水冲洗, 置于超净工作台备用. 1.2.1 总RNA提取方法 参照Trizol Reagent说明, 用Trizol法提取动物组织总RNA, 具体步骤如下: 先将研钵充分预冷, 取约100mg组织样品放入已预冷的研钵中进行研磨, 边研磨, 边加液氮, 研磨组织样品至粉末状后（无明显可见颗粒）迅速将样品转移到预先加有1mLTrizol的1.5mL离心管中, 震荡混匀；室温静第38卷 70 西南民族大学学报·自然科学版 ___________________________________________________________________ 置5min, 4℃ 12,000rpm离心10min；将上清液转移至新的1.5mLEP管中, 加入所用Trizol1/5体积的氯仿, 用手上下颠倒混匀, 直至溶液呈乳白色；室温静置5min, 4℃下12,000rpm离心15min；将上层溶液小心转移至新的EP管中, 加入等体积的异丙醇, 上下颠倒混匀, 室温静置10min后, 4℃下12,000rpm离心10min；小心弃去上清, 向含有沉淀的离心管中缓慢加入1mL预冷的75%乙醇, 轻轻上下颠倒, 清洗沉淀, 4℃下7500rpm离心5min；弃上清, 室温干燥2min, 加入适量RNase free dH2O溶解沉淀. 提取非洲绿猴肾细胞总RNA方法如下: 取适量培养的非洲绿猴肾细胞, 离心后去除培养液；加1mL预冷的PBS洗细胞一次, 再离心后去除PBS液；加1mLTrizol到细胞沉淀EP管中, 用移液枪轻轻吹打混匀；裂解细胞后的步骤与提取动物组织总RNA方法相同. 1.2.2 核酸蛋白检测仪检测总RNA浓度及质量 在检测RNA质量前, 将核酸蛋白检测仪预热10min. 用与溶解RNA相同的RNase free dH2O调零, 测定RNA样品的OD值, 所有RNA样品A260/A280比值均在1.7与2.0之间, 表明RNA纯度较高、质量较好. 1.2.3 电泳检测总RNA完整性方法 (1) 普通琼脂糖凝胶 用1×TBE缓冲液（pH 8.0）配制1%的琼脂糖凝胶, 加入适量GoldViewTM核酸染料. 由核酸蛋白检测仪测定RNA浓度, 计算电泳点样量: 绵羊真胃RNA约30µg, 小鼠腿肌RNA约40µg, 非洲绿猴肾细胞RNA约13µg. 点样后, 以5V/cm电泳, 当指示剂跑过胶板的1/2时, 终止电泳, 用凝胶成像系统检测. (2) 甲醛变性胶 配制1%的甲醛变性凝胶: 用14.4mL ddH2O使0.2g琼脂糖熔化后加入2mL 10×MOPS缓冲液并混合均匀, 冷却至60℃左右时在通风橱中加入3.6mL37%的甲醛, 混匀后制胶[2-5]. RNA电泳前处理: RNA
样本和2×RNA Loading Dye 等体积混合, 70℃热浴10min, 冰浴3min, 上样前短暂离心. 以5V/cm预电泳5min后点样, 点样量与对应的普通琼脂糖凝胶的样品量相同, 然后用与预电泳时同样电压进行电泳[1], 当指示剂跑过
胶板的1/2, 可终止电泳；电泳凝胶置凝胶成像仪中观察, 拍照.
2 结果与分析 2.1 电泳结果 同一RNA样品在甲醛变性胶凝胶与普通琼脂糖凝胶电泳中比较表明: 甲醛变性胶凝胶上28S rRNA和18S rRNA谱带较普通琼脂糖凝胶电泳谱带亮度高, 而5S rRNA谱带亮度较弱（图1Ａ、图2Ａ、图3Ａ）, 且28S rRNA谱带亮度是18S rRNA谱带亮度的2倍左右, 说明被检测的总RNA完整性较好；但同样的组织样品提取的RNA在普通琼脂糖凝胶电泳中成像上显示, 28S rRNA和18S rRNA谱带很淡, 5SrRNA谱带则亮度较高（图1B、图2B）. 在普通琼脂糖凝胶电泳鉴定从非洲绿猴肾细胞中提取的RNA时显示与甲醛变性胶凝胶检测的结果一致（图3A、3Ｂ）. 提示, 细胞RNA的提取过程对RNA的破坏比提取组织RNA要少, 细胞RNA与组织RNA的稳定性、空间结构可能有所不同.
图1藏绵羊真胃组织RNA 图2 小鼠腿肌组织RNA 图3 非洲绿猴肾细胞RNA 注: A. 变性胶 B. 非变性胶 注: A. 变性胶 B. 非变性胶 注: A. 变性胶 B. 非变性胶 71 第1期 ___________________________________________________________________
梁婧娴 等: 检测总RNA质量的两种方法比较研究
2.2 分析 在琼脂糖凝胶电泳中影响样品泳动速度的主要因素之一是样品的物理性质: 包括电荷多少、分子大小、颗粒形状和空间结构[6-7]. 一般来说颗粒带电荷的密度愈大, 样品泳动的速度愈快；颗粒物理形状愈大, 与支持物的摩
擦力越大, 泳动速度越小. 即样品泳动的速度与样品颗粒的分子大小、介质粘度成反比；与颗粒所带电荷成正比. 此外, 电源电压、电流强度以及电泳缓冲液的离子浓度也对核酸电泳迁移率有一定影响. 在低电压时, 线型核酸片段的迁移率与所加电压成正比. 但随着电场强度地不断增加, 不同分子量的核酸片段的迁移率将以不同的幅度增长, 片段越大, 因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大, 随之琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小. 因此, 一般所加电压不超过5v/cm[8]. 电泳缓冲液的浓度越高, 即其离子强度越高, 导电性越强, 从而影响核酸的
迁移率. 但是离子强度过高会使电泳时产热过多, 导致凝胶熔化. 故选择适当的电压、合适的电泳缓冲液浓度, 是保证电泳方法准确检测鉴定物质的必备条件. 在适宜的电压、同一浓度同种支持物以及同样的离子强度条件下, RNA样品的分子量及其空间构型决定了其泳动速率. 由于总RNA中有线型单链, 也有部分折叠双链型, 分子质量大的却由于呈折叠型而跑得更快, 结果得到的条带不能有效按RNA分子量大小进行分离. 甲醛变性琼脂糖凝胶中, 甲醛使蛋白质变性, 除去了Rnase；另外, 上样前对RNA进行处理使RNA变性, 使之呈线型单链. 单链RNA在甲醛变性胶中的迁移速度与其分子质量的log10成正比例, 28S rRNA大约4800bp(3800bp), 18S rRNA大约1900bp. 根据这个原理, 以RNA的条带判断其完整性较为准确. 本实验中同一RNA样本在普通琼脂糖凝胶电泳及甲醛变性琼脂糖凝胶电泳的结果证明了在甲醛变性胶检测总RNA过程中, RNA的泳动速度完全是由RNA分子量大小确定的, 说明在对总RNA质量检测中, 采用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳其效果明显优于普通琼脂糖凝胶电泳.
3 讨论 琼脂糖凝胶电泳是当前核酸研究中最常用的方法, 它有许多优点: 简单、快速、灵敏、成本低. 琼脂糖凝胶电泳常用于分析DNA, 由于琼脂糖制品中往往带有核糖核酸酶杂质, 所以用于分析RNA时, 必须加入蛋白质变性剂, 如甲醛等[9]. 聚丙烯酰胺凝胶的孔径比琼脂糖凝胶要小, 所以可用于分析分子量小于1000bp的DNA片段
和RNA. 但是聚丙烯酰胺凝胶上的RNA样品用溴化乙锭染色荧光较暗, 不能检测浓度低的样品. 同样分子量大小的RNA, 在同样条件下进行电泳时, RNA分子的形态决定电泳的效果 . 此外, 在进行普通琼脂糖凝胶电泳的过程中, 杂质会导致部分RNA降解, 因此需用甲醛变性胶进行检测RNA. 由于动物组织RNA的提取与细胞RNA的提取过程不同, 所得的RNA电泳效果及完整性也有所不同. 在动物组织RNA的提取过程中, 首先要用机械剪切力将组织破碎, 期间可能导致极少部分RNA断裂降解. 组织的组成比较复杂, 并非同一种细胞组成, 不同细胞中的RNA的二级结构状态和数量可能有所不同, 但是对组织RNA与细胞RNA的空间结构是否存在差异有待进行深入研究.
鸢尾属植物花器官总RNA不同提取方法的比较分析
2021年34卷1期 西"农业学&Voe.34 No.1 SouthwestChinaJouenaeoeAgeicuetueaeSciences113文章编号：1001 -4829(2021)1 -0113 -06 DOI ：10. 16213/j. cnki. scjgs —02I. 1.017莺尾属植物花器官总RNA 不同提取方法的比较分析罗梦瑶打王有国1*，马璐琳2*(1-云南农业大学园林园艺学院，云南昆明650201 ； 2.云南省农业科学院花卉研究所/云南省花卉育种重点实验室/国家观赏园艺工程技术研究中心，云南昆明650205)摘要：【目的】为了探索更适合*尾厲植•花朵总RNA 的提取方法。
【方法】以新鲜的*尾(K- tectorum Maxim.)和-冻的西南*尾(I. bulleyana Dykes )的花/为材—，#别采用TOzoi 法、TransZoi Plant 试剂盒法和EasyPure Plant RNA Kit 试剂盒法等3种方法 提取它2的花/f RNA ,通过琼脂糖5胶B 泳检测RNA 的完整性，1用超微量紫外#4系统检测RNA 的纯度和浓度，比较3种 不同试剂提取得到的f RNA 的质量和浓度。
【结果】对于-冻的西南*尾花/组织，只有TransZoi Plant 试剂盒法可以提取出纯度好、浓度高的RNA 。
而对于新鲜的*尾花/,3种方法提取出的RNA 均可用于后续试9,但质量和浓度有一定差异,EasyPure PlantRNA Kit 试剂盒法提取出的RNA 质量最好且产量较高;TransZoi Plant 试剂盒法提取出的RNA 质量较好但产量最高；TOzoi 法提取出的RNA 5质较好但产量最低。
【结论】综合植•样品材—、RNA 纯度和得率及费用等因素，EasyPure Plant RNAKit 试剂盒法适 合需要获得高质量的RNA 和有新鲜的植物材料时使用；TransZg Plant 试剂盒法适合在需要大量RNA 但对RNA 的质量要求不是 很高时使用，且较适合&用于尾花朵。
总RNA 的提取电泳检测及浓度和纯度的测定
总RNA 的提取、电泳检测及浓度和纯度的测定撰写人：黄晶一、实验原理1、总RNA的提取见分子克隆（第三版）上册P522 “用一步法从细胞和组织中同时制备DNA、RNA和蛋白质”2、RNA的电泳见分子克隆（第三版）上册P540 “按大小分离RNA: 在含有甲醛的琼脂糖凝胶上进行的RNA电泳”3、RNA的浓度及纯度测定见分子克隆（第三版）下册P1695 “DNA或RNA的分光光度法测定”二、实验准备1、配制0.1%的DEPC水，37℃培养箱内放置过夜，之后灭菌两次。
2、准备大、中、小进口枪头各一盒，1.5ml进口离心管、0.2ml 进口PCR管各一瓶，灭菌两次（公用）3、准备研钵（n）、勺子（n+1）、50ml、100ml量筒各一个，180℃烤4小时以上（n=提取RNA的个数）4、10×MOPS缓冲液、甲醛、30％双氧水、胶布、氯仿（sigma）、异丙醇（sigma）、75％乙醇（以上试剂及物品公用，实验前请确定其是否齐备）三、实验步骤（一）总RNA的提取1．液氮研磨组织，取100mg组织，加入1ml Trizol，室温放置5min2．加入200ul氯仿，剧烈振荡混匀，室温放置3min，之后4℃，12000g,离心15min 3．上清移入新管，加入1/5体积的氯仿，剧烈振荡混匀，室温放置3min, 之后4℃，12000g,离心15min4．上清移入新管，加入等体积的异丙醇，混匀，室温放置10min,之后4℃，12000g,离心15min5．弃上清，加入1ml 75%乙醇，振荡，4℃，7500g,离心5min6．弃上清，室温晾干，之后加入40ul DEPC水溶解（RNA不要完全干燥，否则不利于溶解）（二）RNA的电泳1．用3％-30％的双氧水浸泡RNA专用的电泳槽及胶板、梳子10分钟以上2．之后用0.1%的DEPC水洗涤3．配制1.2%的含有甲醛的琼脂糖凝胶1）称取0.36g RNA专用的琼脂糖，加入24ml DEPC水，熔化后冷却到60℃2）加入3ml 10×MOPS，混匀后再加入3ml甲醛，之后再加入3ul EB4．用DEPC水配制1×MOPS 100ml作为电泳缓冲液，55V 预电泳30-40min5. RNA电泳样品的制备1）将6ul RNA样品、1ul 10×MOPS、1ul甲醛、2ul RNA上样缓冲液混匀2）65℃加热10min,之后冰浴2min,短暂离心后可上样6．60V 电泳30-40min7．紫外检测（三）RNA浓度及纯度的测定1. 运行分光光度计中测定RNA的程序2. 200ul DEPC水作为空白, 5ul RNA样品+295ul DEPC水作为测量样品3. 测量的RNA样品的OD260/280应在1.8-2.0之间4. RNA样品的实际浓度等于分光光度计显示浓度ｘ60四、注意事项1. 整个实验过程中要戴口罩、一次性手套，一次性手套应经常更换，防止污染RNase2. 实验试剂及物品大多数为公用，请养成良好的实验习惯，用毕放回原处，试剂或物品用完或快用完，告知负责人，及时补充3．烤箱不能过夜工作，以免发生火灾4．DEPC为疑似致癌物，操作时应戴口罩、手套，小心吸取，避免污染实验台及物品注：10×MOPS的配制方法0.627g MOPS溶于12ml DEPC水中，加入1.2ml 1M NaAc (DEPC水配制)，用2M NaOH 调pH 7.0, 加入0.75ml 0.2M EDTA, 之后加入DEPC水定容为15ml。
不同破壁方法提取酵母菌总RNA的比较
不同破壁方法提取酵母菌总RNA 的比较易 弋1，容元平1，程谦伟1，黎 娅1，王晓林2(1.广西工学院生物与化学工程系，广西 柳州 545006；2. 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室，北京 100071)摘 要：选择液氮碾磨、反复冻融、超声波、加玻璃珠漩涡振荡和蜗牛酶酶解5种方法破碎酵母菌细胞壁，再使用Trizol 法提取酵母菌总RNA ，通过对总RNA 进行质量浓度和纯度分析，比较不同破壁方法对酵母菌总RNA 提取的影响。
结果表明：在使用Trizol 法提取酵母菌总RNA 的实验中，反复冻融和液氮碾磨是较为有效且简便的酵母菌细胞壁破碎方法。
关键词：Tr iz ol 试剂；R NA 提取；酵母菌；破壁Comparison of Different Cell Wall Disruption Methods for Yeast Total RNA ExtractionYI Yi 1，RONG Yuan-ping 1，CHENG Qian-wei 1，LI Ya 1，WANG Xiao-lin 2(1. Department of Biological and Chemical Engineering, Guangxi University of Technology, Liuzhou 545006, China ；2. State Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity, Institute of Microbiology and Epidemiology, Academy of Military Medical Sciences of thePLA, Beijing 100071, China)Abstract ：Five methods such as liquid nitrogen grinding, repeated freeze-thawing, ultrasonic treatment, vortex shaking with glass beads and snailase hydrolysis were used to break the cell wall of yeast for the extraction of total RNA by the Trizol method.Based on total RNA concentration and purity, these methods were compared for their effects on total RNA extraction from yeast. The results showed liquid nitrogen grinding and repeated freeze-thawing were the most effective and convenient methods for total RNA extraction from yeast by Trizol.Key words ：Trizol ；RNA extraction ；yeast ；cell wall disruption中图分类号：Q936 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2011)11-0161-04收稿日期：2010-09-03基金项目：广西壮族自治区青年科学基金项目(桂科青0991010)；广西壮族自治区教育厅科研项目(200707MS069)作者简介：易弋(1979—)，男，副教授，博士，主要从事生物工程研究。
检测mrna的方法
检测mrna的方法
检测mRNA的方法有很多种，以下是其中几种常用的方法：
1. RT-PCR（逆转录聚合酶链式反应）：这是一种常用的方法，通过将mRNA反转录成cDNA，然后进行PCR扩增，并使用荧光探针或染料检测目标mRNA的存在与否。
2. Northern blotting（北方杂交）：这种方法通过将RNA迁移至固定在膜上的DNA探针上，然后使用放射性探针或荧光标记的探针检测目标mRNA的存在及其大小。
3. In situ hybridization（原位杂交）：利用与目标mRNA互补的DNA或RNA 探针，在组织切片中直接检测mRNA分布。
4. RNA-Seq：这是最新的一种方法，通过高通量测序技术直接测定mRNA序
列和表达水平，可以提供全基因组范围内的mRNA信息。
这些方法各有优点和局限性，选择适当的方法取决于实验目的和研究对象的特点。
测RNA浓度
测RNA浓度：
nanodrop的话，一般浓度在40ng/ul以上的样品，定量还是比较准的，低于这个浓度，Nanodrop就不行了，因为我经常同时做chip和drop两种检测，所以这方面的经验还是有一些。
如果你的RNA浓度偏低，而且你要高精确的定量分析：
建议上 nano chip，有效测定范围在0.5ng/ul到50ng/ul，如果浓度低于这个，可以采用pico chip。
Nanodrop的话，一般浓度在40ng/ul以上的样品，定量还是比较准的，低于这个浓度，Nanodrop就不行了，因为我经常同时做chip和drop两种检测，所以这方面的经验还是有一些。
至于紫外分光光度计法，这个没试过，其实Nanodrop就是一种程序化的紫外分光光度计法，只不过流水线化做成一台仪器了，直接给值的，很方便。
另外chip的操作相对复杂，你自己取舍了。
但是一般用作next generation sequencing的RNA，感觉nanochip是定量常规检测。
至于一般要求的RNA，nanodrop检测可以满足要求。
:tuzi11::tuzi32:。
2种微藻总RNA提取方法的比较
（ 中国热 带农 业科 学 院热 带生物技 术研 究所 海 南海 口 ５ １０ １ ７ １１
２ 海 南 医学 院理 学院 生化 教研 室 海 南海 口 ５ １０ ） ７ １１
摘 要 以微 茫 藻 和 莱 茵 衣 藻 为 材 料 ． 比较 Ｔ ｉｏ 试 剂 法 和 Ｓ Ｓ Ｌ Ｃ 沉 淀 法 提 取 ２种 微 藻 总 Ｒ Ａ的 效 果 ．以 ｒｚｌ Ｄ－ ｉ１ Ｎ 期 筛 选 出适 合 微 藻 Ｒ Ａ的 提 取 方 法 。 结果 表 明 ，Ｓ Ｓ Ｌ Ｃ 沉 淀 法 能 从 微 茫 藻 中提 取 高 质 量 的 ＲＡ Ｎ Ｄ— ｉ１ Ｎ ．而 Ｔ ｉｏ ｒ ｚ ｌ法 和 Ｓ Ｓ ＬＣ Ｄ — ｉ １沉 淀 法 均 能 从 莱 茵 衣 藻 中 获 得 高 质 量 的 Ｒ Ａ 但 Ｔ ｉｏ Ｎ． ｒ ｚ ｌ法 更 为 简 单 有 效 。 Ｒ —Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ结 果 表 明 ， Ｓ Ｓ Ｌ Ｃ 沉 淀 法 提 取 的微 茫 藻 总 Ｒ Ａ和 Ｔ ｉ ｏ 法 提 取 的 莱 茵 衣 藻 总 Ｒ Ａ都 能 直 接 用 于 分 子 克 隆 和 基 因表 达 分 Ｄ— ｉ１ Ｎ ｒ ｚｌ Ｎ 析 等 分 子 生 物 学 实 验 关 键词
２ Ｄｅ ａｔ ｎ ｆＢ ｏｈ ｍｉ ｒ，Ｈａｎ ｎ Ｍｅ ｉａ ｏｌｇ ，Ｈａｋ ｕ ５ １ ０ ，Ｃ ｉａ ｐｒ ｍｅ ｔｏ ｉｃ ｅ ｓ ｙ ｔ ｉａ ｄｃ ｌＣ ｌ ｅ ｅ ｉｏ ７ １ ｈｎ ） １
Ａｂｓｒ ｃ Ｔｏ ｓ ｌｃ ｈ ｐ ｍ ｕ ｘ ａ ｔ ｎ ｍ ｅ ｏ ｏ ｏ ａ ｔａ ｔ ｅｅ ｔｔ ｅ ｏ ｔ ｉ ｍ ｅ ｔ ｃ ｏ ｔ ｄ ｆ ｒｔ ｔｌＲＮ Ａ ｒ ｍ ｉｒ ａ ｇ ｅ ｒ ｉ ｈ ｆｏ ｍ ｃ ｏ ｌａ ．Ｔｒｚ ｌｍ ｅｈ ｄ ａ ｉｏ ｔ ｏ ｎｄ
RNA含量的测定—紫外吸收法
精选文档，供参考！ RNA含量的测定—紫外吸收法 一、目的 1、掌握利用紫外吸光法测定RNA含量的原理和方法 2、了解紫外分光光度计的使用原理。 二、原理 核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统(－C＝C一C＝C 一)，能够强烈吸收250~280nm 波长的紫外光。核酸(DNA，RNA)的最大紫外吸收值在260nm 处。遵照Lambert-Beer 定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸物质的含量。在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收光也随之表现出明显的差异，它们的摩尔消光系数也随之不同。所以，在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行。 三、材料 1、干酵母粉（市售）。
2、0.2氢氧化钠溶液，2gNaoH溶于蒸馏水并稀释至1000ml。 3、标准RNA溶液：100μg/mL。 4、95%酸性乙醇和无水乙醇。 5、分析天平 6、紫外分光光度计 7、离心机和离心管 8、烧杯(10mL) 锥形瓶和玻璃棒 9、容量瓶(100mL) 10、移液管(5mL)和移液枪 11、试管和试管架。 四、操作 1、RNA的提取 置4g干酵母粉于 200ml锥形瓶中，加入0.2%NaOH溶液40ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌，后流水冷却，4000r/min，离心15分钟，留上清夜加入95%酸性乙醇40mL,边加边搅拌，后静置5-10分钟，再4000r/min离心5分钟，保留沉淀，再每次用10mL95%乙醇洗涤沉淀，3000r/min，离心5分钟，洗涤两次，再用无水乙醇洗涤两次，每次3000r/min离心5分钟，收集沉淀于滤纸上，沉淀即为粗RNA，晾干后测定RNA的浓度。 2、样品处理 称取0.2—0.25g粗品RNA，加入2ml0.2%的NaOH溶液，和1ml H2O溶解，调成糊状，再加入40—50ml H2O溶解，调节pH至7.0，然后定容至100ml。（再取2ml定容至100ml待测） 3、标准曲线绘制与样品测定 配制标准RNA溶液梯度，取11支试管，洗干净后，标号为0、1、2、3、4、5、6、7、A、B、C按下表，测定其Abs值，做出工作曲线 试管 0 1 2 3 4 5 6 7 A B C 标准RNA液（g/ml） 0 5 10 15 20 25 30 35 — — —
两种检测总酸方法的比较
两种检测总酸方法的比较
刘捷;吴雨;刘颖
【期刊名称】《啤酒科技》
【年(卷),期】2003(000)012
【总页数】1页(P48)
【作者】刘捷;吴雨;刘颖
【作者单位】天冠酒业南阳啤酒有限公司473125
【正文语种】中文
【中图分类】TS262.5
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5.检测总RNA质量的两种方法比较研究 [J], 梁婧娴;陈志成;贺庆华;江容娥;徐亚欧因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
mrna表达检测方法
mrna表达检测方法引言mrna表达检测方法是生物学研究中常用的一种技术手段，通过检测细胞或组织中特定基因的mrna水平来研究基因的表达情况。
本文将系统介绍常见的mrna表达检测方法，包括定量PCR、原位杂交、RNA测序和基因芯片等。
定量PCR原理定量PCR（quantitative polymerase chain reaction）利用逆转录酶（RT）将mrna转录成相应的cDNA，再通过酶切和扩增步骤，利用荧光探针实时监测PCR产物的累积量。
根据标准曲线可以定量目标基因的mrna水平。
操作步骤1.提取总RNA并逆转录为cDNA。
2.设计引物和探针，注意要有特异性。
3.设置反应条件和程序，包括温度、时间和循环次数。
4.实时检测PCR信号并记录数据。
5.分析数据得到目标基因的mrna表达水平。
原位杂交原理原位杂交（in situ hybridization）是通过探针与目标细胞或组织中特定基因的mrna序列互补结合，从而检测目标基因的表达位置和强度。
常用的探针有放射性标记物或荧光标记物。
操作步骤1.制备组织切片或细胞载玻片。
2.制备探针，选择合适长度和特异性。
3.与探针进行杂交反应，使探针与目标mrna序列互补结合。
4.将未结合的探针去除，并进行信号增强。
5.通过显微镜观察、成像和分析。
RNA测序原理RNA测序（RNA sequencing）是一种高通量测定mrna的方法，可以检测细胞或组织中所有基因的mrna水平。
首先将mrna转录为cDNA，之后通过测序仪测定cDNA 的序列，最后通过基因组比对和计算得到基因表达量。
操作步骤1.提取总RNA并去除rRNA等非mrna。
2.逆转录为cDNA，并加入特定序列的引物。
3.进行测序，可以选择不同的测序平台和测序策略。
4.对测序结果进行生物信息学分析，包括基因组比对和计算基因表达量。
基因芯片原理基因芯片（gene chip）是一种高通量测定mrna的方法，通过固定探针来检测细胞或组织中基因的表达水平。
提出rna的金标准
提出rna的金标准
RNA的金标准可以是RNA完整性（RNA Integrity），也称为RNA完整性指数（RNA Integrity Number，RIN）。
RIN是一种用于评估RNA完整性的定量指标，其值在1到10之间。
RIN值越高，表示RNA样品的完整性越好，反之则越差。
RNA完整性是指RNA分子的完整程度和稳定性，包括RNA分子的长度、二级结构和三级结构等方面。
完整的RNA分子具有更高的稳定性和更高的产量，可以更好地用于各种分子生物学实验，如RT-PCR、Northern blotting、RNA-Seq 等。
为了获得高质量的RNA样品，需要采用一些特殊的方法，如用异丙醇或酚/氯仿等方法去除杂质、破碎细胞前使用冻融循环等。
此外，还可以使用一些商业化的RNA完整性检测试剂盒，如Agilent RNA 6000 Nano Assay等。
总之，RNA完整性是RNA样品质量的重要指标，其值越高，表示RNA样品质量越好，可用于各种分子生物学实验。