检测标准确认表_轮状病毒
新开展的检测标准确认表
编号：GXCDC/QBG 20－04 第1页；共1页
参数名称 轮状病毒 检测标准名称及年代号 感染性腹泻诊断标准（WS271-2007）
仪器设备及设备编号
MULTISKAN MK3酶标仪（C.2.05.2869）
环境条件
全外排生物安全柜3台，高压灭菌锅2台，实验室内装紫外灯，满足BSL-2，
人员
技术
状况
检验人员共6人，其中硕士2人（33%），所学专业为分子生物学专业，从事本岗位年限分别为10年和5年；本科3人（50%），所学专业为卫生检验，从事本岗位年限分别为15年、5年、1年；专科1人（17%），所学专业为卫生检验，从事本岗位年限26年。主管技术3人，占所有检验人员50%，技师3人，占所有检验人员50%。
方法
验证
结果
在新标准《感染性腹泻诊断标准》（WS271-2007）中涉及的检验方法中，本科室拟开展轮状病毒 ELISA检测方法。新启用的标准《感染性腹泻诊断标准》（WS271-2007）与原使用标准《感染性腹泻的诊断标准及处理原则》（GB17021-1997）比较，轮状病毒
ELISA检测方法没有发生实质性改变。
参照《感染性腹泻诊断标准》（WS271-2007）对轮状病毒 ELISA检测方法进行验证，按照试剂盒说明书进行检测，待测 份标本，其中 份阳性， 份阴性，设置的阴性对照、阳性对照、空白对照均成立。
检测人/日期： 年 月 日
检测
部门
批准
检测部门负责人/日期： 年 月 日
备注：此表格适用于扩标准，一式两份，一份检测部门存档，一份交质量管理科存档。
轮状病毒检测与婴幼儿腹泻
轮状病毒检测与婴幼儿腹泻
摘要：轮状病毒是引起婴幼儿及各种幼龄动物非细菌型腹泻的主要病原体 ,研究轮状病毒生物学、流行病学、实验室检测技术等对对于防止轮状病毒暴发流行，早期诊断，早期治疗等具有重要意义。
关键词：轮状病毒，婴幼儿，腹泻
轮状病毒是一种双链核糖核酸病毒，属于呼肠孤病毒。由澳大利亚科学家 Bishop 于 1973
年首次在严重腹泻的婴儿胃肠道内发现。该病毒由于外观酷似车轮而得名，它是婴儿与幼儿腹泻的单一主因，几乎世界上每个大约五岁的小孩都曾感染过轮状病毒至少一次。然而，每一次感染后人体免疫力会逐渐增强，后续感染的影响就会减轻，因而成人就很少受到其影响。轮状病毒可分为 A-G 等 7 个群，它们通过感染小肠上皮细胞，从而造成细胞损伤，引起腹泻。A、B、C 群轮状病毒是人兽共患，A 群轮状病毒是引起婴幼儿重症腹泻的主要原因 , B组与成人腹泻有关[1]，A组是科学工作者研究的重点。全世界每年因轮状病毒感染导致的 5 岁以下低龄儿童腹泻病例约有 1.11 亿，每年导致 50 万到 60 万婴幼儿死亡[2]，全世界每年因轮状病毒感染导致的 5 岁以下低龄儿童腹泻病例约有 1.11 亿，约 2500 万例患儿需要寻医就诊，200
万人需要住院治疗，其中死亡人数高达 352,000-592,000 人，据调查，在撒哈拉以南的非洲和亚洲地区，超过三分之一的婴幼儿腹泻及胃肠炎疾病是由轮状病毒引起的，每年导致 50 万到
60 万婴幼儿死亡 [2]。在我国，0 ～ 2 岁以内的婴幼儿人数约为 4000 万人（含新生儿），每年大约有 1000 万婴幼儿患轮状病毒感染性胃肠炎，占婴幼儿人数的 1/4。因此，能够快速有效地诊断轮状病毒性腹泻是医学界的重要课题。
1、轮状病毒广泛存在于自然界，耐热，耐酸碱，结构稳定，传染性很强，潜伏期 3 天左右，轮状病毒是借由粪口途径传染的，病人和隐性带毒者均可为传染源。秋季是轮状病毒性腹泻的高发期。婴幼儿轮状病毒性腹泻病程一般可持续 3 至 9 天，感染发病初期表现为流涕、咳嗽、发热、咽部疼痛等感冒症状，每日腹泻次数在数次至数十次不等，且伴有呕吐、腹痛，因此容易被误诊为胃肠型感冒。轮状病毒随带毒者粪便排出体外，通过粪一口途径感染病人后，在患儿的十二指肠粘膜细胞中增殖，引起十二指肠粘膜表面绒毛变短钝指肠表皮细胞内二糖酶减少，从而影响患儿肠道对盐类、糖类和水分的正常吸收，造成腹泻[2] ，还能够通过胃肠屏障进入血液，引起轮状病毒血症，造成呼吸系统、中枢神经系统、其他消化器官以及循环系统的损害，导致患儿引起肺炎、中毒性心肌炎等严重并发症，更甚者还可合并脑炎、肺炎、肠出血、肠套叠或病毒性心肌炎而危及生命。轮状病毒肠道外多器官的感染并发症已成为导致患儿死亡的重要原因之一[3]。在我国，每年的 10 月至次年的 2 月均有一个婴幼儿腹泻的发病高峰，病原学研究证实，这些病例的 40%-60% 都是由轮状病毒引起的。婴幼儿轮状病毒性腹泻病程一般可持续 3 至 9 天，感染发病初期表现为流涕、咳嗽、发热、咽部疼痛等感冒症状，每日腹泻次数在数次至数十次不等，且伴有呕吐、腹痛，因此容易被误诊为胃肠型感冒。因此对轮状病毒感染的正确检出在疾病治疗中显得非常重要。尽管有一些药物可缓解轮状病毒感染引起的临床症状，但目前还没有治疗轮状病毒感染的特效药物。由于目前的防治措施还不十分有效，因此发展快速、准确、早期的检测方法，对于防止轮状病毒暴发流行，早期诊断，早期治疗等具有重要意义。
轮状病毒、腺病毒二合一抗原检测试剂盒(乳胶法)说明书
轮状病毒、腺病毒抗原检测试剂盒（乳胶法）说明书
【产品名称】
通用名称：康珠生物轮状病毒、腺病毒抗原检测试剂盒（乳胶法）
【包装规格】
1人份/袋，20袋/盒。
【预期用途】
本产品用于体外定性检测婴幼儿腹泻患者粪便中的A群轮状病毒和腺病毒抗原。
人类轮状病毒（Human RotaVirus，HRV）感染是婴儿和小孩重度脱水性胃肠炎最常见的原因，3月龄后的婴儿最可能发生重度腹泻和脱水，几乎所有人在其3~5岁时都感染过HRV。轮状病毒于1973年被人类认识，Bishop等于在澳大利亚墨尔本腹泻儿童的十二指肠活检物通过电镜检出该病毒。轮状病毒属于呼肠孤病毒科，为球型无包膜的双股RNA病毒。腺病毒(adenovirus)是一种没有包膜的直径为70～90 nm的颗粒，由252个壳粒呈廿面体排列构成。腺病毒是DNA病毒，主要在细胞核内繁殖，耐温、耐酸、耐脂溶剂的能力较强，一般通过呼吸道传染。
【检验原理】
本检测试纸条采用高度特异性的双抗体夹心反应原理及免疫层析分析技术，试纸卡为两窗试纸卡，在试纸卡左边的窗口的试纸条上含有被预先固定于膜上测试区（T）抗A群轮状病毒抗体和质控区（C）的羊抗鼠抗体，乳胶标记垫上包被有乳胶颗粒标记的抗A群轮状病毒单克隆抗体；右边的窗口的试纸条上含有被预先固定于膜上测试区（T）抗腺病毒抗体和质控区（C）的羊抗鼠抗体，乳胶标记垫上包被有乳胶颗粒标记的抗腺病毒单克隆抗体，测试时，标本与预包被在左边的试纸条上的乳胶颗粒标记的抗A群轮状病毒单克隆抗体（或者与预包被在右边的试纸条上的乳胶颗粒标记的抗腺病毒单克隆抗体）混合，并在毛细效应下向上层析。如是A群轮状病毒阳性，左边试纸
条上的乳胶标记抗体在层析过程中先与标本中的A群轮状病毒结合，随后结合物会与固定在膜上的抗A群轮状病毒抗体结合，在测试区（T）内会出现一条红色条带。这条带是特异性的抗体-抗原-乳胶标记抗体复合物在膜上结合形成的。如是阴性，则测试区（T）内将没有红色条带。同理如是腺病毒阳性，右边试纸条上在测试区（T）内会出现一条红色条带。如是腺病毒阴性，则右边测试区（T）内将没有红色条带；无论A群轮状病毒或者腺病毒是否存在于标本中，在左右两边的质控区（C）内都会出现一条红色条带。质控区（C）内所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
两种方法检测婴幼儿腹泻轮状病毒结果的比较
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1页 两种方法检测婴幼儿腹泻轮状病毒结果的比较
【关键词】 轮状病毒；婴幼儿；腹泻
轮状病毒(rotavirus,RV)是婴幼儿胃肠道感染中的主要病源［1］。文献报道住院婴幼儿胃肠炎约80%为RV感染所致［2］。由于病毒型别繁多，交叉保护性差等特点，使RV感染的预防困难重重［3］。因此RV的检测，对RV肠炎的诊断尤为重要。我们对快速诊断轮状病毒的金标免疫层析法与酶联免疫吸附法(ELISA)的检测结果进行了比较,现将比较结果报道如下。
1 材料方法
1.1 材料来源 2006年6月至2006年12月来我院就诊的528例婴幼儿腹泻粪便标本。根据年龄分成三组：0个月～6个月66例，6个月～1岁364例，1岁～6岁98例。
1.2 方法
1.2.1 金标免疫层析法 采用北京万泰生物药业公司生产的免疫胶体金RV诊断试剂盒。操作方法严格按试剂盒进行。
1.2.2 ELISA法检测 采用卫生部兰州生物制品研究的检测轮状病毒酶标试剂盒，严格按照试剂盒说明书进行操作。
2 结果
见表1。
表1 528例患儿粪便两种方法检测结果（略）
注:A：金标法检测阳性患儿，大便普通培养和致病性大肠杆如有你有帮助，请购买下载，谢谢！
2页 菌培养均为阴性，均符合RV肠炎诊断标准［4］。B：6个月以上腹泻患儿两种方法阳性率比较P<0.01。
3 讨论
RV属呼肠病毒科,为双链RNA病毒［5］,消化道为主要传播途径,RV肠炎发病年龄主要为6个月～1岁。RV主要侵犯十二指肠和空肠,可导致患儿脱水、酸中毒和电解质紊乱,甚至RV病毒血症。RV肠炎患儿临床表现轻重不一，恢复情况差别大,RV感染亦有呈无症状感染［6］。因此及时准确的RV快速检测,对临床治疗具有重要意义。目前,用于RV检测的实验方法很多:如电镜、分子生物学、免疫荧光等,但均由于设备昂贵,操作繁琐，很难快速向临床提供及时的诊断依据［7］。用ELISA检测粪便标本浸出液中的病毒抗原,应用广、较敏感、简便，是RV检测较好的方法之一，但文献报道有非特异抗性反应,有假阳性,曾有人提出它不适用于新生儿中查RV,亦有人认为至少无症状新生儿中不适用［8］。我们用ELISA法查0个月～6个月腹泻患儿粪便标本，RV抗原阳性数达57.6%。比文献报道ELISA法查正常新生儿中的RV阳性率50%［9］略高，而用胶体金检测法查0个月～6个月患儿粪便标本阳性为13.6%。发展中国家每年RV感染性腹泻约有87
婴幼儿腹泻轮状病毒监测
婴幼儿腹泻轮状病毒监测
了解四川地区哨点医院轮状病毒腹泻流行状况和特点，为疫苗研制和疫情控制提供科学依据。方法 四川监测点（成都市儿童医院）监测对象为5岁以下腹泻的门诊和住院患儿，收集2006-2010年患儿的粪便标本进行轮状病毒检测和分型，使用ELISA进行病毒检测，RT-PCR进行病毒分型。结果 972例腹泻患儿送检标本中检测到353株轮状病毒抗原阳性，阳性率为36.3%，6月龄-2岁幼儿是轮状病毒感染的高发年龄段，轮状病毒腹泻发病的高峰季节是10-12月份。结论 轮状病毒是四川地区哨点医院婴幼儿腹泻的重要病原，毒株流行型别显示一定的规律性和多样性。
轮状病毒是世界范围内引起病毒性腹泻的主要病原之一，可引起人类腹泻的轮状病毒有A、B、C 3组：A组轮状病毒是导致为婴幼儿重症腹泻的主要原因， B组轮状病毒主要感染青少年并呈暴发流行，而C组轮状病毒在成人中散发存在[1]。在我国，每年秋冬季节40％-60％的婴幼儿重症腹泻由A组轮状病毒引起，估计每年可造成2万左右5岁以下幼儿死亡。轮状病毒流行型别随地域的不同和时间变化表现为不同的流行规律和特点[2]，从2006-2010年，四川省按国家病毒性腹泻监测方案选择成都市儿童医院为国家级监测点，共采集腹泻标本999份，对其中的972 份进行了轮状病毒、杯状病毒、星状病毒和肠道腺病毒抗原检测分析，以探讨其中轮状病毒感染与婴幼儿腹泻的关系[3]，现将检测结果分析如下。
1. 材料与方法
1.1 资料来源 选取国家级监测点成都市儿童医院2006-2010年的999名腹泻监测
的门诊和住院患儿，进行个案调查和实验室检测。其中男性620例，女性379例，男女之比
为1.64:1，患儿年龄为0-5岁。腹泻诊断标准：每日排便3次或3次以上，且大便性状有改变（呈稀便、水样便等）。
1.2 方法 收集2006-2010年5岁以下腹泻患儿999份大便，用Elisa对972份标本进行RV抗原检测，并对其中的245份阳性标本采用RT-PCR进行RV的G、P分型。同时对杯状病毒、肠道腺病毒和星状病毒进行抗原检测。
婴幼儿腹泻粪便中A群轮状病毒检测结果分析
婴幼儿腹泻粪便中A群轮状病毒检测结果分析
目的：分析A群轮状病毒（RV）引起婴幼儿急性腹泻的特征。方法：采用A群轮状病毒金标法检测试剂对2012年度溧水区中医院400份婴幼儿腹泻的粪便标本进行有无RV病毒的检测。结果：在400例有不同腹泻症状的婴幼儿粪便中检出156例RV阳性标本占总体的39%，其中10-12月份检出80例RV阳性粪便占总体的51.28%（80/156），6个月-2岁年龄段RV阳性检出116例占总数的74.36%（116/156），其中检出男性RV阳性病例118例阳性率达39.07%（118/302），女性RV阳性38例阳性率为38.78%（38/98）。结论：我院由A群轮状病毒引起的婴幼儿腹泻主要集中在10-12月龄，婴幼儿的6月-2岁间为A群轮状病毒感染的高峰期。
标签：婴幼儿；轮状病毒；腹泻
轮状病毒是一类呼肠病毒科、双链核糖核酸属的病毒，该种属的病毒总共有七种，其中轮状病毒A是最常见的一种[1]。轮状病毒引起的肠炎是婴幼儿时期最常见的消化系统疾病之一，该病毒感染时除了引起消化系统疾病之外，还常可能引起其他器官损伤[2]，另外也有研究显示，轮状病毒引起的腹泻是婴幼儿死亡的主要原因之一[3]。轮状病毒的发病机理为该种病毒侵犯儿童的小肠绒毛顶端的柱状上皮时，该上皮细胞就会因受到影响而发生一系列的病理性变化，这种些变化严重的影响了肠道的吸收功能，使人体发生吸收障碍，因而，水分无法正常排除，大量的积聚在肠腔内，最终引起水样的腹泻[4]。
婴幼儿期RV所致的腹泻主要以粪——口传播途径为主，具有明显的季节性，多发于秋冬两季节，而且每年的10-12月份腹泻婴幼儿轮状病毒感染率比其它的月份明显的高出了许多，临床显示，这段时期是感染的高峰期，也就是说不仅是高发期，而且是流行期。它的潜伏期为一般1-2天，患者发病初期表现流涕、咳嗽、发热、咽炎等感冒症状，病程一般2-6天，每天腹泻次数在8-20次不等，若治疗不及时或治疗方法不正确，患儿容易出现脱水、肺炎及中毒性心肌炎等症状，严重时甚至危及生命。为了进一步了解婴幼儿A群RV感染的流行情况，我们在2012年1月—2012年12月对前来我院就诊的有不同腹泻症状的患儿进行A群RV抗原检测，通过研究经验的总结，为将来能为婴儿腹泻疾病中的A群轮状病毒早期检测，以及实现该种疾病的早期治疗，提供保障，防止在盲目实施治疗时，发生抗生素的滥用而使正常的菌群发生失调，进而延迟腹泻，耽误治疗的情况。
婴幼儿腹泻轮状病毒的检测及结果分析
婴幼儿腹泻轮状病毒的检测及结果分析
摘要：目的 分析和了解婴幼儿腹泻中轮状病毒的感染情况。方法 选取我院在2012年10月~2014年10月期间收治的婴幼儿腹泻患儿95例为实验研究对象，患儿状病毒为引起婴幼儿腹泻的主要病原体之一，其较为容易感染的人群为6个月~2岁的婴幼轮状病毒的检测采用胶体金法，并根据不同年龄段和不同季度进行结果的统计和分析。结果 本次实验研究中共有患儿95例，其中轮状病毒检测为阳性的患儿有46例，其检测阳性率为48.4%。结论 轮儿，同时高发的病毒流行季节为冬季，粪便中轮状病毒的检测对临床诊断有着积极的作用和意义。
关键词：婴幼儿腹泻；轮状病毒；胶体金法
婴幼儿腹泻为临床上的一种常见病和多发病，导致这一疾病发生的主要原因之一就是轮状病毒、腺病毒抗原和空肠弯曲菌感染，对患儿的生活质量和身心健康均造成了一定的影响和阻碍[1]。在引起婴幼儿腹泻的各种致病菌中最为常见的就是轮状病毒，其属于呼肠病毒科，同时，也属于双链RNA病毒，其发病的机制为轮状病毒侵入患儿倡导后是肠粘膜上皮变形、坏死、微绒毛剥脱，进而导致小肠吸收面积减少，损害患儿小肠粘膜的回收水分和电解质的能力，使肠液大量积累与肠内引起腹泻[2-3]。本文选取我院在2012年10月~2014年10月期间收治的婴幼儿腹泻患儿95例为实验研究对象，分析和了解了婴幼儿腹泻中轮状病毒的感染情况，并取得了相对较为满意的效果，现将实验结果总结报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料
本文选取我院在2012年10月~2014年10月期间收治的婴幼儿腹泻患儿95例为实验研究对象，其中男性患儿有47例，女性患儿有49例，小于0.5岁的患儿有24例，0.5~2岁的患儿有49例，2~6岁的患儿有22例，患儿存在的主要临床症状为排黄色水样便，腹泻、无黏液和脓血，排便的次数在一天5~10次之间，严重的患儿排便次数可能超过10次，患儿的体温也会在不同程度上有所提高。
A群轮状病毒检测操作规程
杭州余杭邦尔医院检验科 临检室项目SOP文件
133 文件编号：YHBE-JYK-LJS-44 标准操作规程
A群轮状病毒检测 编制人：王渊
生效日期：2018年1月1日 审核人：钟剑
版本号/修订号：1/3 批准人：张延亮
发布部门：检验科 共3页
1．检验目的
轮状病毒是在全世界范围内造成婴幼儿急性肠胃炎的主要因素。在我国，每年春秋冬季均有一个婴幼儿腹泻的发病高峰，病原学研究证实，这些病例的40%-60%是由轮状病毒引起的。通过检测粪便标本中A群轮状病毒抗原，适用于临床婴幼儿腹泻患者A群轮状病毒感染的辅助诊断。
2．方法原理
以抗A群轮状病毒多克隆抗体包被硝酸纤维素膜、以胶体金标记的小鼠抗A群轮状病毒VP6单克隆抗体为结合物，利用免疫层析原理来检测粪便标本中的轮状病毒抗原。（胶体金法）
将试纸条插入用稀释液稀释好的标本中后，胶体金结合物与标本一起移动，当移动至硝酸纤维膜上的抗轮状病毒多抗时，如果标本中含有轮状病毒，则胶体金-轮状病毒结合物会与抗轮状病毒多抗结合，5-10分钟出现红色的检测线。多余胶体金结合物继续移动，将与包被在膜上的羊抗鼠IgG抗体结合，形成另外一条红色的对照线。
3．标本采集与处理
3.1在症状出现以后尽快收集粪便标本，无特殊要求。
3.2样本应该当天立即检测，如果不立即检测可在2-8℃冰箱保存1-2天。长时间保存需要于-20℃冷冻，使用前彻底解冻并回复到室温再检测。
4．分析系统
4．1分析试剂：北京万泰生物药业股份有限公司提供的配套的A群轮状病毒诊断试剂盒，规格为10test/盒，2-30℃干燥贮存，有效期18个月；在效期内使用试剂。
5．操作方法
如果在冰箱保存试剂盒，在使用前将试剂盒回复至室温。
5.1旋开滴管，取出采便勺，收取粪便1勺（100mg），放入有样本稀释液（生理盐水0.5ml）的滴管中，旋紧。
腹泻症候群病毒检测SOP
腹泻症候群病毒检测标准程序
一、标本处理（10%便悬液制备）
1.在每管中加入约900µL的轮状病毒标本稀释液（A组轮状病毒试剂盒中附带，为SAMPLE DILUENT）；
2. 在生物安全柜中将每一份粪便标本取100µL（固体取小豌豆大小），加入已标记好的EP管中；
3. 用漩涡振荡器剧烈震荡3次，每次10S，静止10MIN，8000 RPM离心5MIN；
4. 在生物安全柜中取上清进行下一步试验或于-20℃保存。
二、A组轮状病毒ELISA检测（PROSPECTTM ROTAVIRUS KIT, OXOID)
1．操作步骤如下：
（1）在试剂盒微孔滴定板中每孔加入100µL 10%便悬液上清，每批检测样本至少设一个阳性对照和一个阴性对照；
（2）每孔加2滴或100µL酶结合物（CONJUGATE），盖上盖子，室温（20-30℃）孵育 60＋/－5MIN；
（3）甩掉孔内液体，用稀释的洗液（每孔约350-400µL）洗五遍，如果用洗板机洗板，使用前校准洗板机，确保每次洗板完全充满和抽干。最后一次洗板之后，将微量滴定板在吸水纸上拍打几次，以除去孔内残留洗液；
（4）在每孔内加2滴或100µL底物（SUBSTRATE），盖上盖子，室温（20-30℃）孵育10MIN，此步骤可通过肉眼观察明显的蓝色判定为阳性结果；
（5）也可选择在每孔内加2滴或100µL终止液（STOP SOLUTION），在30MIN内进行OD450读数，临界值＝阴性对照OD450值＋0.10，OD450值大于临界值的样本判定为阳性结果。
图一 A组轮状病毒ELISA检测流程
三、核酸提取(可用同时提取病毒DNA和RNA的试剂盒)
QIAAMP®病毒核酸提取试剂盒
（1）在1.5 ML EP管中加入560µL AVL缓冲液（含CARRIER RNA）。
（2）将140µL 10％便悬液加入至EP管中的AVL缓冲液中，漩涡震荡混匀15S。
大便A群轮状病毒
检测原理：采用免疫层析双抗体夹心法，在硝酸纤维素膜上的检测区包被A群轮状病毒抗体，同时用胶体金标记A群轮状病毒单克隆抗体。检测时，如果样本内含有A群轮状病毒时，样本中的病毒可与试纸条前端的“胶体金—抗体”结合，形成免疫复合物，复合物沿膜带层析移动，并在包被了抗体的检测区形成一条红色线，判为阳性；如果样本内不含有A群轮状病毒时，检测区不会形成红色线，判为阳性。
主要组成成份：测试卡、铝箔袋、说明书、滴管、测试卡主要万分、塑料底板、吸水滤纸、硝酸纤维素膜（包括包被有A群轮状病毒抗体的检测线和包被有抗鼠抗体的对照线）、金垫（附着有胶体金标记A群轮状病毒单克隆抗体）。滴管内样本稀释液、生理盐水。
储存条件及有效期
2-30℃干燥处保存，有效期18个月。
样本要求
1. 本试剂使用粪便上清液。
2. 样本应该当天进行检测；当天不能检测的样本，需低温冻存。
检验方法
1. 旋开滴管，取出采便勺，从粪便中收取一勺样本（约100mg）,取样后抹平勺面，放入装有样本稀释液的滴管中，旋紧滴管。
2. 振荡混匀，折断滴管上的盖帽。
3. 将测试卡平放干燥平面上。
4. 垂直而缓慢滴加2-3滴混匀后的样本（约80ul），至测试卡加样端中心。
5. 5-10分钟内判断结果，结果判断不可超过10分钟。
参考范围
阳性：出现两条红色线。
阴性：只出现一条对照线。
无效：无对照线出现，实验无效，应重复检测。
检验方法的局限性
1. 本试剂检测的阳性结果心须结合临床信息进行分析。
2. 由于反应原理的限制，本试剂检测结果阴性并不排除A群轮状病毒感染的可能。
3. 本试剂盒不能作为定量试刘使用。
4. 仅用于粪便上清液的检测。
注意事项
1. 不要使用放置时间过长、长菌或者反复冻融的样本，以避免标本污染、长菌而造成的非特异反应。
2. 采集粪便样本过量或者粪便样本过于粘稠可能会导致稀释后的样本堵塞检测卡、请将稀释样本自滴管中取出离心后取上清液进行检测。
婴幼儿腹泻轮状病毒检测及结果分析
婴幼儿腹泻轮状病毒检测及结果分析
一、概述
腹泻是指排便次数增多、粪便疏松、水样或黏液血便的症状。在婴幼儿中，轮状病毒是导致腹泻的主要病原体之一。轮状病毒（Rotavirus，RV）是一种双链RNA病毒，属于轮状病毒科，包括7种血清型（G1～G4、G9～G11），其中G1、G2和G3分别为临床上较为常见的三个亚型。RV感染多发生在6个月到2岁的婴幼儿中，是导致婴幼儿腹泻的主要原因之一。因此，早期发现并诊治婴幼儿轮状病毒感染非常重要。
本文将介绍婴幼儿轮状病毒检测及结果分析的相关知识。
二、检测方法
1. 肠道病毒培养法
肠道病毒培养法是传统的病毒检测方法之一，包括传统培养法和快速培养法。传统培养法需要3~7天才能获得结果，一般只适用于研究目的。快速培养法和传统培养法相比具有更高的灵敏度和特异性，且可以在1~2天获得结果，但仍需要技术人员有丰富的操作经验才能获得准确的结果。
2. 免疫学检测法
（1）酶联免疫吸附试验（ELISA） 轮状病毒ELISA检测法是一种简单、快速、经济的方法。该方法以特异性的抗轮状病毒抗体为探针，检测样本中的轮状病毒抗原。该方法操作简便，成本低廉，适用范围广，但灵敏度和特异性不如PCR法。
（2）荧光抗体检测法（FA）
荧光抗体检测法是一种快速的免疫学检测方法，它同样以抗体或探针为基础进行检测。相比ELISA，FA法具有更高的灵敏度和特异性，且可以检测多种病毒。
3. 分子生物学检测法
（1）聚合酶链式反应（PCR）
PCR是一种灵敏、特异且可重复的检测方法，能够对低剂量病毒进行检测。PCR法的灵敏度高，能够检测到病毒抗原在样本中的微量存在，同时可对病毒血清学分型，有助于了解不同血清型的轮状病毒在流行病学意义上的分布情况。
（2）实时荧光定量PCR（qPCR）
qPCR技术结合PCR技术和荧光测定技术，其结果可以快速、准确地分析并定量RNA分子的数目。相比传统PCR技术，qPCR具有较高的灵敏度和特异性，且能够快速、准确、定量检测病原体。