花生分离蛋白提取工艺优化研究
二次通用旋转组合设计法优化米糠蛋白提取工艺
全脂米糠由广东省农业科学院水稻研究所提供， 蛋白质含量 １２．２１ ％。
试 剂 ： 盐 酸（ ０．１ ｍｏｌ／Ｌ） 、氢 氧 化 钠（ １ ｍｏｌ／Ｌ） 、硫 酸 铜、硫酸钾、浓硫酸等， 均为国产分析纯。 １．２ 主要试验仪器
ＨＨ－ ４ 型数显恒温水浴锅、ＪＢ，９０－ Ｓ 型数字显示转 速电动搅拌机、ＰＦＳ－ ３Ｃ 型酸度计、真空 ２Ｌ－ １ 型冷冻干 燥机、ＴＤＬ－ ５ 型离心机。
７ １ － １ － １ １ １ － １ － １ １ １ １ ４１．５１
８ １ － １ － １ － １ １ １ １ １ １ １ ３７．８０
９ １ － １．６８ ０ ０ ０ ０ ０ ２．８３ ０ ０ ４４．２０
１０ １ １．６８ ０ ０ ０ ０ ０ ２．８３ ０ ０ ８６．１０
１１ １ ０ － １．６８ ０ ０ ０ ０ ０ ２．８３ ０ ７３．７１
心 １０ ｍｉｎ→倾去上清液→真空冷冻干燥→测定蛋白质
含量。
１．３．２ 蛋白质含量的测定
米 糠 蛋 白 质 含 量 采 用 凯 氏 定 氮 法 ［பைடு நூலகம்（］ ＧＢ／Ｔ５５１１－
１９８５） ， 蛋 白 质 换 算 系 数 为 ５．９５。
１．３．３ 蛋白质提取率的计算［８］
米
糠
蛋
白
提
取
率（％）＝
Ｗ１ Ｗ０
×１００ ％
［２］ 房梁． 加速发展我国食用变性淀粉［Ｊ］．工业技术经济，２００１（６）： ８６￣ ８７．
［３］ 王 海 英 ， 郭 祀 远 ， 陈 玲，等． 植 酸 改 性 淀 粉 的 制 备［Ｊ］．食 品 工 业 科 技，２００３，２４（３）： ６７￣６８，７１．
［４］ 陈 夫 山 ， 刘 丹 凤 ， 魏 德 津．变 性 淀 粉 取 代 度 的 测 定［Ｊ］．纸 和 造 纸 ， １９９９（１）： ４． 收稿日期： ２００６－ ０８－ ２２
葵花籽粕蛋白提取及分离纯化工艺优化探究
葵花籽粕蛋白提取及分离纯化工艺优化探究作者：包少文来源：《广东蚕业》 2020年第9期DOI：10.3969/j.issn.2095-1205.2020.09.11包少文（银川能源学院宁夏银川 750000）作者简介：包少文（1988- ），男，汉族，研究生，助教，研究方向：生物、食品方向。
摘要为了进一步优化葵花籽粕蛋白提取和分离纯化工艺，文章运用正交试验法和参数自由组合试验法分别进行蛋白提取试验、蛋白分离纯化试验，旨在为工艺优化提供参考。
关键词提取；分离纯化；葵花籽粕蛋白中图分类号:TS229 文献标识码:A 文章编号:2095-1205(2020)09-25-02目前，我国葵花籽蛋白利用率较低，蛋白提取和分离纯化两项工艺存在较大提升空间[1-2]。
为了进一步优化工艺，文章运用正交试验法，对工艺优化进行浅析。
1 试验材料及设备1.1 材料与试剂（1）采用自制法制备的葵花籽粕；（2）EDTA、HCl、(NH4)2SO4、NaCl、NaHCO3、Na2HPO4、NaOH、NaH2PO4、分析纯。
1.2 主要设备（1）电热恒温箱，设备型号为DRH-100，产自广东省环境保护仪器设备厂；（2）电子天平，设备型号为AL-104，产自梅特勒-托利多有限公司；（3）pH测试计，设备型号为pHS-3C，产自海虹益仪器仪表有限公司；（4）水浴锅，设备型号为HH-S，产自巩义市予华仪器有限责任公司；（5）高级蛋白纯化系统，设备型号为AKTApurifier PH/C10，产自通用公司。
2 葵花籽粕蛋白提取工艺优化2.1 提取操作要点料液的调配控制比例为1:08、1:10、1:12、1:14、1:16、1:18，环境温度保持在30 ℃、40 ℃、50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃，在水浴锅中浸提蛋白，蛋白提取试验时间控制为0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h，碱液pH值为12，确保碱液能够完全溶解蛋白质。
花生球蛋白和伴球蛋白的功能特性及构象研究
[5]
1.3 实验方法 1.3.1 花生球蛋白与伴球蛋白的制备
花生脱壳，晾晒，脱红衣后粉碎，油脂用正己烷 常温提取 5 次 （油脂含量<1%） ， 残留溶剂在空气中挥 干， 制得花生脱脂粉。 制备花生球蛋白和伴球蛋白采 用 Chiou [1]等报道的提取方法。脱脂花生粉按 1:20 的比例加入含 0.5 mol/L NaCl， pH 7.9 的磷酸盐缓冲 溶液中，在室温下搅拌 2 h 后，于 3500× g，4 ℃下 离心 30 min。上清液加入硫酸铵使溶液饱和度达到 40%，在 4 ℃下搅拌 1 h 后，再于 3500× g，4 ℃下离 心 30 min，沉淀用上述磷酸盐缓冲液按 1:5 的比例 复溶，透析 48 h 并冷冻干燥后得到花生球蛋白。离 心后的上清液加入硫酸铵使其饱和度达到 60%，在 4 ℃下搅拌 1 h 后，于 3500× g，4 ℃下离心 30 min。 所 得 上清 液 继续 加 入硫 酸铵 使 溶液 饱和 度 达 到 85%，在 4 ℃下搅拌 1 h 后， 于 3500× g，4 ℃下离心 30 min，所得沉淀用磷酸盐缓冲液按 1:5 的比例复 溶，透析 48 h 并冷冻干燥后得到花生伴球蛋白。
1 2 1
Functional and Conformational Properties of Arachin and Conarachin
LIU Yan1 , ZHAO Guan-li2 , SU Xin-guo1 (1.College of Food, Guangdong Food and Drug V ocational College, Guangzhou 510520, China) (2.Institute of Agro-food Science and Technology, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China)
花生（Peanut）是一种重要的经济作物
摘要花生(Peanut)是一种重要的经济作物，除用于榨油外，还可直接食用。
在我国种植区域广阔，除西藏、青海、宁夏少数省区外，它在华北平原、渤海湾沿岸、华南沿海及四川盆地等都被广泛种植。
花生中所含的白藜芦醇（Resveratrol 略写为Res），是具有多种药理作用和生物活性的化合物，具有抗菌抗炎、抗氧化、预防心脏病、抗癌、抗血小板凝聚、保护肝脏、免疫调节、防辐射、雌激素作用、抗艾滋活性等，被誉为21世纪最有前途的抗癌药物之一，广泛应用于食品、医药、保健品、化妆品、食品添加剂等领域，具有重要的研究和开发价值。
目前市售的白藜芦醇及其制品，主要来源于从如虎杖、葡萄等植物中提取(这句话好像不完整)。
本文以花生植株为试验材料，较为系统地研究了花生植株的生物技术和次生代谢产物Res的提取、分离纯化工艺：进行愈伤组织诱导培养、摇瓶悬浮培养；建立花生细胞摇瓶悬浮培养的结构化动力学模型；研究诱导子对花生细胞生长和白藜芦醇积累的影响；进行花生细胞生物反应器悬浮培养的初步扩大试验；通过二次通用旋转组合试验设计方法优化超声波提取花生根中白藜芦醇的和大孔树脂纯化花生根中白藜芦醇的最佳工艺条件。
主要研究结果如下：1.在愈伤组织诱导培养中，培养基种类、外植体类型和激素配比对愈伤组织诱导及白藜芦醇含量有显著影响。
通过三元二次通用旋转试验确定愈伤组织诱导培养的最佳激素配比，从而得到最适培养基是：MS+2.50 mg/L 2,4-D+1.80 mg/L KT+3.00 mg/L 6-BA。
高产白藜芦醇花生细胞系生物量最大达到43.95 g/L，白藜芦醇产量最大达到9.07 mg/g。
2.悬浮培养过程中研究了摇床转速、接种量、pH和蔗糖浓度对悬浮细胞增殖倍数的影响。
通过四元二次通用旋转试验确定悬浮培养的优化条件为：摇床转速130 r/min，接种量38.00 g/L，pH5.80，蔗糖浓度40.00 g/L。
测定了培养过程中细胞组织的蛋白质含量、苯丙氨酸转氨酶活性、过氧化物酶活性，它们的变化都在一定程度上反映了悬浮细胞生长及白藜芦醇含量变化情况。
花生分离蛋白课程设计
花生分离蛋白课程设计一、课程目标知识目标：1. 学生能够理解蛋白质的基本概念、性质和功能；2. 学生能够掌握花生分离蛋白的提取原理和工艺流程；3. 学生能够了解蛋白质在食品工业中的应用。
技能目标：1. 学生能够运用实验技能，进行花生分离蛋白的提取操作；2. 学生能够通过观察、分析实验现象，得出正确的实验结论；3. 学生能够运用所学知识解决实际问题，提高解决问题的能力。
情感态度价值观目标：1. 学生培养对生物科学的兴趣和热情，增强探究精神；2. 学生形成严谨的科学态度，注重实验操作的规范性和安全性；3. 学生关注蛋白质在生活中的应用，认识到生物技术在人类生活中的重要性；4. 学生培养团队合作意识，提高沟通与协作能力。
课程性质：本课程为高中生物实验课，旨在通过实际操作，让学生深入了解蛋白质的性质、功能及其提取方法。
学生特点：高中学生具有一定的生物学基础，思维活跃，好奇心强，善于观察和思考，但实验操作能力有待提高。
教学要求：结合学生特点，注重理论与实践相结合，提高学生的实验操作能力、观察能力和解决问题的能力。
通过课程学习，使学生达到预定的知识、技能和情感态度价值观目标。
在教学过程中，关注学生的学习成果，为后续教学设计和评估提供依据。
二、教学内容1. 蛋白质基本概念：蛋白质的结构、分类、功能；2. 花生分离蛋白提取原理：蛋白质的溶解性、等电点、盐析等现象；3. 花生分离蛋白提取工艺流程：包括样品处理、蛋白提取、离心分离、盐析沉淀、洗涤、溶解、再沉淀等步骤；4. 实验操作技能：包括实验器材的使用、实验操作规范、实验现象观察等；5. 蛋白质在食品工业中的应用：如食品添加剂、保健食品等；6. 蛋白质含量测定方法：如凯氏定氮法、紫外分光光度法等。
教材章节：《生物》高中教材，第四章 生物大分子，第三节 蛋白质的性质与功能；第四节 蛋白质的提取与分离。
教学内容安排与进度：第一课时：蛋白质基本概念、提取原理及实验操作技能讲解；第二课时：花生分离蛋白提取工艺流程及实验操作；第三课时：蛋白质在食品工业中的应用及蛋白质含量测定方法；第四课时：实验结果分析、讨论与总结。
酶法制备花生多肽工艺条件优化的研究
按一定底物质量分数准确称取冷轧花生粕粉于
反应器中， 加入适量蒸馏水 ， 轻微搅拌至底 物均匀分 散于水中。然后在 ９ ０℃下加热 １ ｉ， ０ｒｎ 冷却到酶解 ａ
花生粕作为压榨花生油的一种副产物 ， 产量大 ， 来源广 ， 价格低， 且其 中含有 ３ ％ 一 ０ ０ ５ ％的花生蛋 白 质 。目 ， 国大部分花生粕作为饲料使用 ， 的 前 我 有 甚至作为废料丢弃 ， 不仅造成资源浪费 ， 而且污染环 境。开发花生粕提取花生多肽 ， 原料价格较低 ， 符合 节约型经济发展的需求。
２ １ 年 ７月 ０１
中国粮油学报
Ｊ ｕ ａ ｆ ｈ ｈｎ ｓ ｅｅ ｌ ｎ ｉ ｓｏ ｉｔ ｎ ｏ ｒ ｌｏ ｅ Ｃ ｉｅ ｅＣ ｒａｓａ ｄ Ｏ ｌ Ａ ｓ ｃａｉ ｎ ｔ ｓ ｏ
Ｖｏ ． ６， ． １ ２ Ｎｏ ７
第 ２ 卷第 ７ ６ 期
Ｊ １２ １ ｕ． ０ １
８０ ０Ｕ ｇ底物 ，Ｈ７ ７ 温度 ５ Ｃ 时间 ３ｈ 该 条件 下得 到的花 生 多肽羟 自由基 清除率 为 ６ ．５ 。 ７ ／ ｐ ． ， ５ｑ 、 ， ２ １％
关键 词 花 生 多肽 酶 水解 抗氧 化 优化
Байду номын сангаас
中 图分 类号 ：Ｓ２ Ｔ２ １
文献标 识码 ： Ａ
文 章编 号 ：０３— １４ ２ １ ）７— ０９— ６ １０ ０７ （０ １０ ０ ８ ０
中国粮油 学报
２ １ 年 第 ７期 ０１
黑花生的主要品质性状及黑花生衣色素的提取工艺研究
．衅一一内中国食品添加剂整竺堡壅赢悬觥糍谶怒黑花生的主要品质性状及黑花生衣色素的提取工艺研究王锋1，谭兴和h，邓洁红1，李林2(1．湖南农业大学食品科技学院，长沙410128；2．湖南农业大学生物科技学院，长沙410128)摘要：比较了绵新2号黑花生和其它几种在湖南栽培适应性强，丰产性能好的花生品种(中花4号，四粒红，彩花I号，W2—7，花312)花生衣和花生仁的蛋白质、脂肪含量等主要品质性状的差异，并研究了黑花生衣花色苷的提取工艺。
采用乙醇水溶液对黑花生衣色素进行提取，并应用正交试验设计来优化提取工艺参数。
研究表明，绵新2号黑花生衣含有较高含量的花色苷，其含量达到4．93m g／g干重。
以提取率作为衡量指标，通过正交试验得到较优的提取工艺条件为酒精浓度为50％，料液比为1：50，提取温度60℃，提取时间80rai n，在此条件下，黑花生衣中花色苷的提取率达到4．68m g／g，占总含量的94．9％。
关键词：黑花生；品质性状；色素；提取中图分类号：T S202．3文献标识码：A文章编号：1006—2513f2009)05—0063—06St udy on t he m a i n qua l i t y pr ope r t i e s of bl ack pe anut and t he bl ack pea nut ski n pi gm e nt ext r act i ng t echnol ogyW A N G Fen91，T A N X i ng-heh，D E N G Ji e-hon91，L I L i n2(1．C ol l ege of Food Sci ence and Tec hnol ogy，2．C ol l ege of B i os ci enee and B i ot ec hnol ogy，H unan A gr i cul t ur a l U ni ver s i t y，C hangs ha410128；H unan A gri c ul t ural U ni ver s i t y，C hangs ha410128)A bs t r ac t：O i l a nd pr ot ei n cont ent W a S c o m par ed bet w e en bl ack pe anut(cul t i var M i a nxi n N o．1)w i t h80m e ot he r pe anu t cul t i vars(Z ho．ghna N o．4；Si l i hon g；C ai hua N o．1；W2—7；H ua312)．Fur t he rm or e，t he ext r act i ng t echno l ogy of bl ack pe anu t s ki n pi gm e nt w鹪st udi ed．The onhogonal desi gn m e t hod w船appl i ed i n st ud yi ng t he par am et e r s of t he既一t ra ct t ec hnol o gy of t he bl ack pean ut s ki n pi gm ent(B PSP)by et h an01．B l a ck pe anut s ki n co nt ai ned hi i sh anaount of舳t hocyani a s(4．93ra g／g)．By o．r t,．bogonal ex per i m en t，t he opt i m um ext r act i ve t e chni que pa r am et er s w e r e；e t ha nol c o n cent r at i on50％，ext r act i ve t em per a t ur e60℃．t he m i xt ur e r at i o of t he bl ack pe anut s ki n t o t he sol ven t w∞1：50a nd t he ext r act i ve t i m e w a s80r ai n．I n t hi s ci r cum s t anc e，t he r at i o of ext r act i on r e ache d t o4．68m g／g．w h i ch w a s94．9per-cent of t he t ot al ant hoe yani n s i n t he bl ack pe anut sk i n．K e y w o r ds：b l a ck pea nut；qual i t y pr oper t i e s；pi gm ent；ext r a ct i ng黑花生系采用高代材料、多方位配制有性杂交组合，经大量淘汰、筛选选育而成的。
花生叶片蛋白质双向电泳的方法与优化
＾ Ｃ Ｔ Ｉ －ＢＲｌＣＵＬｌＵｌｌｌｔ｜
＿帆髓Ｌ卜翱Ⅲ髓 华北农学报・２０１０，２５（２）：１ ３６－１ ３９
花生叶片蛋白质双向电泳的方法与优化 邵媛嫒 ，柳展基 ，王龙龙 ，毕玉平 （１．山东师范大学生命科学学院，山东济南２５００１４；２．山东省农业科学院高新技术中心，山东济南２５０１００） 摘要：以花生品种鲁花ｌ４为试验材料，提取叶片可溶性蛋白进行双向电泳分析。在三氯乙酸／丙酮沉淀法的基 础上，对样品抽提、样品溶解、胶条ｐＨ范围选择、蛋白上样量、ＳＤＳ一聚丙烯酰胺凝胶电泳等关键步骤进行改进，获得了 蛋白点较多、重复性好的双向电泳图谱，为开展花生叶片蛋白质组研究奠定了基础。 关键词：花生；可溶性蛋白；双向电泳；ＳＤＳ一聚丙烯酰胺凝胶电泳 中图分类号：ＴＱ９３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００—７０９１（２０１０）０２—０１３６—０４
Ｔｈｅ Ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｗｏ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ＥｌｅｃｔｒＯｐｈＯｒｅｓｉｓ ｆｏｒ Ｌｅａｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｐｅａｎｕｔｓ（Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ）
ＳＨＡＯ Ｙｕａｎ．ｙｕａｎ ，ＬＩＵ Ｚｈａｎ－ｊｉ ，ＷＡＮＧ Ｌｏｎｇ—ｌｏｎｇ ，ＢＩ Ｙｕ—ｐｉｎｇ ＇ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎａｎ ２５００１４，Ｃｈｉｎａ；２．Ｈｉ－Ｔｅｃｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｒｅ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｊｉｎａｎ ２５０ １００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｔｗｏ ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（２－ＤＥ）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ｌｅａｖｅｓ ｉｎ ｐｅａｎｕｔ ｃｕｌｔｉｖａｒ Ｌｕｈｕａｌ４．Ｈｉｇｈ ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ ｍａｐｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｏｎ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ＴＣＡ／ａｃｅｔｏｎｅ ｐｒｅ— ｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ｓｏｍｅ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ，ｓｕｃｈ ａｓ ｓａｍｐｌｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｐＨ ｒａｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｓｔｒｉｐｓ（ＩＰＧ），ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ ｓａｍｐｌｅ—ｌｏａｄｉｎｇ ａｎｄ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ．Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｗｉｌｌ ｂｅ ｈｅｌｐｆｕｌ ｔｏ ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ ｐｅａｎｕｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｐｅａｎｕｔｓ；Ｔｈｅ ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ；Ｔｗｏ－Ｄ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ；ＳＤＳ—ＰＡＧＥ