作物品种转基因检测规程
转基因植物的检测鉴定方法、遗传转化技术及新技术
PCR检测
• PCR是在体外快速特异地扩增目的基因DNA片段 的有效方法。能在几小时内使pg水平的起始物达 到ng水平,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭 染色后很容易观察,不通过杂交分析就可以鉴定出 基因组中的一些顺序。
• 但由于PCR扩增十分灵敏，有时会出现假阳性扩 增，因而对外源基因是否整合需要进行扩增产物 的Southern杂交。
＊已获得专利许可
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Site-specific recombinasemediated transgene excision
loxP
Cre
Transgene
loxP
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Cre
Transgene
llooxP
loxP
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外源基因去除（Gene-deletor)
• “外源基因去除”技术的要点之一是在目标植 物中加入了受DNA调空片段启动子控制的特殊基 因，该基因在启动子的作用下，可根据科学家的 意愿，在需要的时间和部位将外源基因和自身从 转基因植物中切掉，从而使转基因作物的花粉、 种子、果实不再含有外来基因，或将外来基因从 人们所需食用的部分（如植物的茎、叶、块茎） 彻底清除掉，达到用转基因作物生产出非转基因 食品的目的，从根本上解决了长期困扰人们的转 基因植物基因扩散问题和转基因食品的安全性问 题。
ATP
dsRNA
siRNA
蛋白复合物
RISC
靶 正义链
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mRNA
3、无选择标记转化
• 可消除选择标记基因对转基因作物安全性 方面的影响
• 可消除选择标记基因对重复多基因转化叠 加所带来的困难
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marker-free转基因植株
• 共转化法＊(基因枪与农杆菌转化) • 转座元法 • 重组酶法＊ • MAT(Multi-auto transformation)法＊ • 替代法＊
PCR扩增检测转基因大豆、玉米
【实验步骤】 基因组DNA浓度和纯度的鉴定
取5μL样品溶于95μL三重蒸馏水中，用 Biophotometer分 析DNA的浓度，通过它对提取大豆DNA测OD值。并记 录数据。由OD260nm/OD280nm判定基因组DNA的浓度， 其比值在1.7~2.0之间较好，符合PCR检测要求。
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是 一种选择性体外扩增DNA的方法，其基本原理类 似 于 DNA 的 天 然 复 制 过 程 。 它 包 括 : 变 性 (Denature) 、 退火(Anneal)和延伸(Extension)三个基
外源基因( EPSPS)特异性扩增 12 3 4567M 12
外源终止子(NOS) 特异性扩增
外源启动子(CaMV35S)特 异性扩增
1 未加模板对照 2 转基因大豆、玉米 3~7 非转基因大豆、玉米
PCR假阳性结果 1． 引物设计不当，应调换引物 2． 循环参数不合适，导致非特异性扩增 3． 靶序列的交叉污染
大豆凝集素(Lectin)基因、玉米特异性内源基
因IVR为内参 ？
西医学是最近三四百年来建立在解 剖学、 生物学 及现代 科学技 术基础 上、发 展起来 的一门 以“解 剖人、 肉体人 ”为概 念的、 新兴的 现代医 学科学 理论体 系。主 要采用 科学实 验方法 ，从宏 观到微 观，直 至目前 的分子 基因层 次水平 ，发展 极为迅 速，超 过其它 任何一 门医学 科学， 成为世 界医学 史上的 主流。 医学、比较医学、后现代医学、行为 医学等 所谓“ 医学” ，都称 不上一 门独立 的医学 科学， 关于这 一点在 灵魂医 学有关 章节中 将有相 关点评 。
【实验步骤】
大豆、玉米DNA 提取--改良的CTAB法
转基因植物的生产和检测方法
转基因植物的生产和检测方法转基因植物是繁殖用于人类消费的农作物，其基因被修改以抵御虫害和提高产量。
转基因的技术对世界的食品安全、环境保护和农业产量增加产生了重要的影响。
但是，随着转基因产品的不断推广和应用，对于检测其是否安全和透明的要求也越来越高。
本文将介绍转基因植物的生产和检测方法。
一、转基因植物的生产方法转基因植物的生产方法主要分为两种，一种是基因枪法，另一种是农杆菌介导的转基因法。
基因枪法是通过射入改造后的DNA 直接向植物细胞内导入外来基因，从而实现转基因植物的创建。
而农杆菌介导的转基因法则是通过把拥有外来基因的细菌注入植物细胞内，再将细菌注入特定的细胞壁，使得外来基因稳定地嵌入植物的基因组中。
当然，在此基础上，科学家还使用了一些远离传统种植法的技术，例如如基因编辑工具CRISPR-Cas9。
基于如此多样化的转基因生产方法，科学家们已经可以创造出各种不同类型的转基因植物。
二、转基因植物的检测方法转基因植物的检测方法主要包括了两类：一是用于提取DNA的样品，二是用于检测的样品。
在前人研究的基础上，当前有两种常见检测方法：PCR和ELISA。
PCR(聚合酶链反应)是目前主流的转基因检测技术，它能够根据材料提取的DNA进行基因片段扩增，从而检测模板所对应的基因是否存在。
PCR技术以灵敏度、特异性高、复查和修复能力强著称，不过，PCR技术存在可能会观察到错误反应的问题。
另外一个常见的检测技术是酶联免疫吸附法(ELISA)，它特别适用于筛查含水量较低的复合样品。
ELISA是一种抗体检测技术，它基于抗体结合了基因，在测试物接口中发生颜色反应，显示基因存在或不存在。
这种方法也常用于通过检测植物组织中蛋白质水平的方法来检测转基因。
总之，用于转基因检测的技术越来越精准和可靠，从而让我们可以安心地使用和消费转基因植物农作物。
同时，也可以使用这些技术来帮助农民更好地掌握农田信息，从而进一步提高农产品的营养价值和商品价值。
转基因试验安全规定(3篇)
第1篇一、引言随着科学技术的不断发展，基因工程技术在农业领域的应用日益广泛。
转基因生物（GMOs）的研发和应用，为农业生产带来了新的希望和机遇。
然而，转基因生物的安全性也引起了广泛的关注和争议。
为了确保转基因试验的安全，防止潜在的风险对人类健康、动植物、微生物和生态环境造成危害，我国制定了《农业转基因生物安全管理条例》等相关法规，对转基因试验的安全规定进行了详细规定。
本文将详细阐述转基因试验的安全规定。
二、转基因试验的定义和分类1. 定义：转基因试验是指利用基因工程技术改变生物基因组构成，对转基因生物进行的研究和试验活动。
2. 分类：- 按试验阶段分类：包括实验室研究、中间试验、环境释放、生产性试验和申请安全证书等阶段。
- 按试验目的分类：包括研究性试验、验证性试验、评价性试验等。
三、转基因试验的安全规定1. 申请与审批：- 从事转基因试验的单位或个人，应当向国务院农业行政主管部门提出申请。
- 申请内容包括试验目的、试验方案、试验地点、试验期限、试验生物等。
- 国务院农业行政主管部门根据《农业转基因生物安全管理条例》和相关法规，对申请进行审查，并作出批准或不批准的决定。
2. 试验生物的安全性评估：- 试验生物应当符合《农业转基因生物安全管理条例》规定的安全标准。
- 试验生物的安全性评估包括对人类、动植物、微生物和生态环境可能产生的影响进行评估。
- 安全性评估应当依据科学原则，采用科学方法，确保评估结果的准确性和可靠性。
3. 试验地点的选择：- 试验地点应当符合以下条件：- 生态环境良好，有利于试验生物的生长和繁殖。
- 与周边生态环境相协调，不会对周边生态环境造成危害。
- 便于管理和监控。
4. 试验过程的监控：- 试验过程中，应当对试验生物的生长、繁殖、生理、生化等指标进行监测，确保试验生物的安全。
- 发现异常情况，应当及时采取措施，防止风险扩大。
- 试验结束后，应当对试验生物进行无害化处理。
5. 试验信息的公开：- 试验单位应当及时向国务院农业行政主管部门报告试验情况，包括试验结果、发现的问题等。
(技术规范标准)转基因抗虫棉花检测技术规范
转基因抗虫棉花检测技术规范——定性PCR 筛查方法（试行）编制说明为进一步加强对转基因抗虫棉花的安全监管，维护研发者、经营者和生产者的合法权益，保障人类健康和生态环境安全，根据《农业转基因生物安全管理条例》及其配套管理办法的规定和《关于加强转基因抗虫棉安全管理与监督检查的通知》(农办科[2005] 15号)的要求，满足开展技术检测工作的需要，特制定本技术规范。
1、编制原则本技术规范的编制遵循以下原则：(1)法治性：本技术规范的编制，严格执行国家法律法规和强制性标准的规定，以保证国家和研发者、经营者、生产者的权益。
(2)可靠性：本技术规范的编制，力求反应相关领域研究成果的先进性、成熟性和代表性，以保证检测结果的精确性和重复性。
(3)实用性：本技术规范的编制，力求把经济实用和技术实用结合起来，以保证检测的操作简便和费用低廉。
(4)规范性：本技术规范的编制，力求做到技术内容叙述正确无误、文字表达简明易懂，以保证检测人员准确把握。
(5)操作性：本技术规范的编制，力求将操作过程中的要点进行细化和量化，以保证检测人员操作方便。
(6)兼容性：本技术规范的编制，参考和借鉴了国外同类标准或规范内容，以保证既符合国情又尽可能与国际接轨。
2、编制依据本技术规范编制的法律依据主要有：(1)《农业转基因生物安全管理条例》——中华人民共和国国务院令第304号；(2)《农业转基因生物安全评价管理办法》——中华人民共和国农业部令第8号；(3)《农业转基因生物进口安全管理办法》——中华人民共和国农业部令第9号；(4)《农业转基因生物标识管理办法》——中华人民共和国农业部令第10号。
3、适用范围转基因抗虫棉花可从以下三个方面进行检测：(1)筛查检测：利用通用序列分别设计引物对棉花Sad1内标准基因、CaMV35S启动子、NOS终止子以及cry1Ac基因或者cry1Ab基因或者cry1Ac和cry1Ab的融合基因进行PCR扩增，筛查确定样品是否含有转基因成分，以判断送（抽）检样品是否为转基因抗虫棉花。
ELISA方法检测转基因产品(蛋白质检测方法)
(一)适用范围本办法适用于转基因大豆及其初级加工产品中CP4 EPSPS蛋白的检测，也适用干含有CP4 EPSPS蛋白的其他转基因植物检测。
(二)试验原理酶标板表面包被有特异的单克隆捕捉抗体。
当加上测试样品时，捕捉抗体与抗原特异性结合，未结合的样品成分通过洗涤除去。
洗涤之后，加入与辣根过氧化物酶偶联的多克隆抗体，该抗体可与CP4 EPSPS蛋白的另一个抗原表位特异结合，洗涤之后，加入辣根过氧化物酶的显色底物。
H RP可催化底物产生色彩反应，色彩信号与抗原浓度在一定范围内呈线性关系。
显色一定时光后，加入终止液终止反应。
在450nm波长测每一孔的光密度。
(三)试剂1．检测试剂盒通常提供的试剂(1)大豆抽提缓冲液缓冲液，pH7.5,(2)大豆分析缓冲液磷酸盐缓冲液，Tw een-20,BS A,pH7.4(3)包被有单克隆捕捉抗体的酶标孔。
(4)与辣根过氧化物酶偶联的兔抗。
(5)偶联抗体稀释剂10％热灭活的小鼠血清。
(6)显色底物。
(7)终止液0.5％。
(8)10倍浓缩的洗涤缓冲液PBS,Tw een-20,pH7.1,(9)与基质匹配的阴性和阳性标准品，如0.1%、0.5%、1%、2%、5％。
2．其他需要预备的试剂(1)70％的溶液(体积比)取700m L甲醇加水定容至1000 m L。
(2)95％的。
(四)仪器设备1．通常试验室仪器设备。
2.酶标仪；多通道移液器。
3．孔径450 um的滤膜；孔径150 um的滤膜。
(五)操作步骤1．样品的预处理取500g以上大豆，粉碎、微孔滤膜过滤。
在操作过程中当心避开污染，避开局部过热。
定性检测的微孔滤膜孔径应为450 um，保证孔径小于450um的粉末质量占大豆样品质量的90％以上。
定量检测的样品先用孔径为450 um的微孔滤膜过滤后，再经孔径为150um的微孔滤膜过滤，过滤得到的样品量只要能满足检测要求即可。
对于其他类型的材料采纳类似的办法处理。
在检测不同批次样品之间应将处理大豆样品的全部设备举行彻底清洁。
转基因植物及其产品的检测方法
转基因植物检测依据
启动子、目基因、终止子；选择标记基因 • 启动子：CaMV 35s和土壤农杆菌的nos启动子 • 终止子：土壤农杆菌的nos终止子 • 目的基因：近百种 • 选择标记基因：
✓抗生素抗性基因：新霉素磷酸转移酶基因npt-Ⅱ/ 潮霉素磷酸转移酶hpt
✓除草剂抗性基因：bar基因和als基因
组织化学染色：检测gus基因表达产物的方法 萤光测定法：
– gus基因 – 萤光素酶 – gfp基因
NanoLuc™ 萤光素酶
转基因植物检测 ---外源基因表达产物的检测
免疫学检测法：
– ELISA： – 试剂条检测： – Western blot：
转基因植物 及其产品的检测方法
转基因植物（GMO）
• 自1983年首例转基因植物问世以来，其商 业化种植面积和经济效益迅速扩大。
✓ 提高农产品产量、品质 ✓提高植物对生物和非生物胁迫的抗性
• 转基因植物及其食品的生物安全性
✓对环境的影响及生态效应 ✓食品的安全性
• 转基因植物及产品的检测
定性及定量
转基因植物检测---外源基因检测
PCR检测：
– 常规PCR – 多重PCR – 巢式PCR – 实时荧光定量PCR – PCR-ELISA – PCR-genescan
核酸杂交检测
– 印记杂交 – 斑点杂交 – 细胞原位杂交
基因芯片技术
– GMO芯片试剂盒
转基因植物检测 ---外源基因表达产物的检测
转基因检测的主要技术方法及基本流程
In the wild world of modern agriculture, genetically modified organisms (GMOs) have be the rock stars of the crop game. These supercharged plants offer a whole host of benefits, like cranking up crop yields, telling pests and diseases to buzz off, and even packing some extra nutritional punch. But hold on to your hats, folks, because the rise of GMOs has also sparked some real head-scratchers about how they might affect our health and the environment. That's why we're in the market for snazzy new methods to suss out if there are GMOs hiding in our food and farm goodies. It's like a high-stakes game of hide and seek, but with science! Let's roll up our sleeves and get sleuthing for those sneaky GMOs. Go, team science!在现代农业的野外世界中，转基因生物（GMOs）一直是作物游戏的摇滚明星。
这些超充电的植物提供了一大堆好处，比如刺激作物产量，告诉害虫和疾病发作，甚至包装一些额外的营养打击。
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作物品种转基因检测规程
转基因技术是指通过人为干预，将外源基因导入作物品种，从而赋予其新的特征或改善其性状的一种生物技术。
转基因作物的引入对农业生产和食品安全产生了深远的影响。
为了确保转基因作物的安全性和合规性，转基因检测成为一个必要的环节。
本文将针对作物品种转基因检测规程进行详细阐述。
一、转基因检测的目的
转基因检测的目的在于鉴定作物品种中是否存在外源基因的导入。
通过检测可以确定作物品种是否为转基因作物，以及转基因事件的类型和数量。
这对于作物的品质评价、食品安全监管、种子市场监管以及国际贸易等方面具有重要意义。
二、转基因检测的方法
1. PCR检测法
PCR（聚合酶链反应）是一种常用的转基因检测方法。
通过PCR技术可以扩增目标基因片段，并进行后续的分析和鉴定。
PCR检测法可以高效、快速地鉴定转基因作物中是否存在特定的外源基因。
2. 实时荧光定量PCR检测法
实时荧光定量PCR是一种基于PCR原理的高灵敏度检测方法。
它可以定量检测样品中的目标基因片段，并提供准确的检测结果。
实时荧光定量PCR检测法广泛应用于转基因作物的快速鉴定和定量分析。
3. 蛋白质检测法
蛋白质检测法是一种通过检测样品中特定蛋白质的存在来确定作物品种是否转基因的方法。
该方法通过蛋白质电泳、免疫学方法等技术手段来进行转基因检测。
蛋白质检测法可以直接检测转基因作物中的外源蛋白质，对于某些转基因事件的鉴定具有重要意义。
三、转基因检测的样品准备
在进行转基因检测之前，需要对样品进行合适的处理和准备。
首先要确保样品的代表性，即从作物品种中随机抽取样品，以保证检测结果的可靠性。
其次，样品要进行充分的粉碎和混合，以保证样品中外源基因的均匀分布。
四、转基因检测的结果解析
转基因检测的结果通常以阳性和阴性来表示。
阳性结果表示样品中存在目标基因片段，即转基因作物；阴性结果则表示样品中不存在目标基因片段，即非转基因作物。
根据阳性结果的不同，还可以进一步分析转基因事件的类型和数量。
五、转基因检测的标准与监管
转基因检测的标准与监管是确保转基因作物安全性和合规性的重要手段。
各国和地区都制定了相应的转基因检测标准和监管政策。
这些标准和政策对转基因作物的生产、流通和消费进行了规范，以保障公众的食品安全和权益。
六、转基因检测的应用领域
转基因检测广泛应用于农业生产、食品安全监管和种子市场监管等领域。
通过转基因检测可以对转基因作物进行鉴定和定量分析，评估其品质和安全性。
同时，在国际贸易中，转基因检测也被用于检测转基因作物的合规性和贸易纠纷的解决。
七、转基因检测的挑战与展望
转基因检测面临着技术复杂性、方法标准化、样品处理等方面的挑战。
随着转基因技术的不断发展，转基因检测技术也在不断更新和改进。
未来，转基因检测技术将更加高效、准确，为转基因作物的安全性评估和监管提供更好的支持。
总结起来，作物品种转基因检测规程是确保转基因作物安全性和合规性的重要环节。
通过合适的检测方法和标准，可以对转基因作物进行鉴定和定量分析，保障公众的食品安全和权益。
转基因检测技术的发展将为转基因作物的安全评估和监管提供更好的支持，推动农业的可持续发展。