基因工程思考题答案
基因工程第三章分子克隆载体
2、可扩增性 质粒就其复制方式而言分为两类：松弛型复制及严谨型复
制。严谨型质粒每个细胞中拷贝数有限，大约 1 ～几个；松驰型
质粒拷贝数较多，可达几百。
严谨控制型 拷贝数少，一般<10个，分子量大；
松弛控制型 拷贝数多，10-200个，分子量小；
复制受限，受细菌宿主DNA复制系 统的控制；
复制不受细菌DNA复制系统限制， 当宿主蛋白质合成受抑制时（如培 养中加入抗生素时），其拷贝数可 猛增至1000-3000之多，该性质对 基因工程技术十分有利。
7、载体DNA的分子量适当，可容纳较大的外源DNA片段。
第一节 质粒载体
一、质粒的基本特性
质粒(plasmid)：是 独立于许多细菌及某些 真核细胞染色体外共价 闭合环状的DNA分子， 能独立复制的最小遗传 单位，大小在1—200kb 之间。和病毒不同，它们 没有衣壳蛋白（裸DNA）。
绝大多数质粒DNA是双链环形，它具有3种不同的构型:
来自pSCl01的 四环素抗性基因 Tetr
来自RSF2124的 氨苄青霉素抗性基 因Ampr。
特点
1. 具有多个单一的限制性内切酶位点。
2. Tetr中有BamH1切点（G↓GATCC）和SalⅠ切点 （G↓AATTC），Ampr中有PstⅠ切点（CTGCA↓G）。
3. 利用ColEl的复制子，所以在细胞中是多拷贝的，可通过氯 霉素使质粒拷贝数进一步扩增。
基因工程
第三章 分子克隆载体
商丘师范学院 马原松
பைடு நூலகம்
第三章 分子克隆载体
教学目的和要求:本章主要阐明用于核酸操作的各种载体: 质粒载体、噬菌体载体和单链丝状噬菌体载体等。通过 本章的学习要求学生了解质粒的基本特性，λ噬菌体的 分子生物学，穿梭载体、整合载体、解离载体等其它载 体；理解大肠杆菌表达载体；掌握质粒载体的工作原理， 噬菌体载体种类及工作原理，粘粒载体、噬菌粒载体的 工作原理。 重点、难点：质粒载体、噬菌体载体的种类和工作原理。 教学方法：讲授、讨论、计算机辅助教学等
高中生物 选修 基因工程 细胞工程 微生物 生态工程 练习题 有答案
于嘉弈选修部分练习题60min完成，或者分二次，每次5个选择3个填空，30min左右完成1、培育转基因抗虫棉，采用的方法是A．诱变育种B．杂交育种C．基因工程D．单倍体育种2、基因工程的操作步骤：①目的基因与运载体结合②将目的基因导入受体细胞③目的基因的检测与鉴定④提取目的基因。
正确的操作顺序是A．③②④①B．②④③①C．④①②③D．③④①②3、下列有关基因工程的叙述正确的是A．用同种限制性核酸内切酶切割载体与含目的基因的DNA片段可获相同黏性末端B．以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列相同C．检测到受体细胞中含有目的基因就标志着基因工程育种已经成功D．质粒上的抗生素抗性基因有利于质粒与外源基因连接4、下图是某生态工程示意图，有关说法错误的是A．用玉米的副产品玉米芯生产木糖醇，可增加经济效益B．用残渣来培育食用菌和蛆蛹，实现了物质的多级利用C．用蛆蛹粪便作为有机肥还田，运用了能量循环再生的原理D．该生态工程的运转离不开人的管理5、下列关于细胞工程的叙述，错误的是（）A．植物体细胞杂交过程和动物细胞融合的原理不完全相同B．去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理C．通过光学显微镜观察比较白菜细胞的形态，可以检验其细胞壁是否已被除去D．某种植物甲乙两品种的体细胞杂种与甲乙两品种杂交后代的染色体数目相同6、相对细菌和植物细胞而言，动物细胞离体培养更需关注培养基的渗透压，这是因为动物细胞A．没有成熟大液泡，渗透压调节能力差B．渗透压远高于细菌或植物细胞的渗透压C．没有细胞壁，对培养基的渗透压更敏感D．生长缓慢，各生长阶段对环境的渗透压要求不同7、下列有关植物组织培养的叙述，正确的是（）A．愈伤组织是一团具有分生能力的薄壁细胞B．愈伤组织有叶绿体，代谢类型是自养需氧型C．培育过程中包含着有丝分裂、减数分裂和细胞分化等过程D．二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株8、在微生物的实验室培养中，下列哪项操作不需要在无菌条件下进行A．配制培养基B．倒平板C．接种D．菌液稀释9、下列关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述中，不正确的是A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，高温、高压灭菌后倒平板B．取104、105、106倍土壤稀释液和无菌水各0.1ml涂布不同平板C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24~48小时D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数10、下列动植物克隆所用技术与原理不相符的是A．胰蛋白酶处理——酶的专一性B．离体植物体细胞培养成愈伤组织——脱分化C．动物细胞培养——细胞的全能性D．克隆羊的诞生——细胞核的全能性11、（15 分）科研人员将绿色荧光蛋白（GTP）基因导入金鱼的受精卵中进行有关研究，请回答：（1）上述过程中的GTP基因称为 , 该基因可由 mRNA 形成。
基因工程实验-biochemlab
实验二 基因组总ＤＮＡ提取
一、实验目的
掌握酚氯仿法提取ＤＮＡ的原理和操作。
生物的大部分或几乎全部ＤＮＡ都集中在细胞核或类核中。DNA在体内通常都与蛋白质结合，蛋白质对DNA制品的污染常影响到以后的DNA操作过程，因此需把蛋白质除去，一般采用酚氯仿抽提法。苯酚、氯仿对蛋白质有极强的变性作用，而对DNA无影响。经苯酚、氯仿抽提后，蛋白质变性而被离心沉降到酚相与水相的界面，DNA则留在水相，少量的或与DNA紧密结合的蛋白质可用蛋白酶予以去除。DNA制品中少量的RNA无影响，必要时可加入不含DNase的RNase去除RNA污染。
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五、思考题
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如果实验对照组本不该长菌落的平板上长出了一些菌落，你将如何解释这种想象？
01
实验目的
02
掌握重组质粒的转化方法
03
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实验六 重组质粒的转化
转化是将外源DNA 分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种手段。
化学转化法 利用Cacl2处理感受态受体细胞，然后通过热休克处理，即置于42℃高温热激90s，热休克后，是受体菌在不含抗生素的培养液中生长至少半小时以上，使其表达足够蛋白质，以便能在含抗生素的平板上生长菌落。
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ＤＮＡ重组、转化 ＭＨＣ与pMD18-T连接 DH5a感受态细胞制备
转化、平板涂布、培养
筛选与鉴定 抗生素抗性筛选 挑单菌落培养 提取质粒 质粒酶切、电泳检测
2.微量移液器的使用
将微量移液器按钮轻轻压在第一挡 垂直握持微量移液器，使吸头浸入页面下几毫米，千万别将吸头直接插到液体底部 缓慢、平稳地松开控制按钮，吸上样品液。否则液体进入吸头太快，导致液体倒吸入移液枪内部，或吸入体积减少。 等1s后将吸头提高液面，并使吸头在容器壁擦过 平稳把按钮压到第一停点，在把按钮压到第二停点以排出剩余液体、 提起微量移液器，使吸头在容器壁擦过 然后按吸头弹射器除去吸头
生物技术制药 第二版 课后思考题及答案(全)
1. 生物技术制药分为哪些类型？生物技术制药分为四大类：（1）应用重组DNA技术(包括基因工程技术、蛋白质工程技术)制造的基因重组多肽，蛋白质类治疗剂。
（2）基因药物，如基因治疗剂，基因疫苗，反义药物和核酶等（3）来自动物、植物和微生物的天然生物药物（4）合成与部分合成的生物药物2．生物技术制药具有什么特征？（1）分子结构复杂（2）具有种属特异性（3）治疗针对性强，疗效高（4）稳定性差（5）基因稳定性（6）免疫原性（7）体内的半衰期短（8）受体效应（9）多效性（10）检验的特殊性3.生物技术制药中有哪些应用？应用主要有：（1）基因工程制药：包括基因工程药物品种的开发，基因工程疫苗，基因工程抗体，基因诊断与基因治疗，应用基因工程技术建立新药的筛选模型，应用基因工程技术改良菌种，产生新的微生物药物，基因工程技术在改进药物生产工艺中的应用，利用转基因动植物生产蛋白质类药物（2）细胞工程制药：包括单克隆抗体，动物细胞培养，植物细胞培养生产次生代谢产物（3）酶工程制药（4）发酵工程制药4.基因工程药物制造的主要程序有哪些？基因工程药物制造的主要步骤有：目的基因的克隆，构造DNA重组体，构造工程菌，目的基因的表达，外源基因表达产物的分离纯化产品的检验5.影响目的的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些？（1）外源基因的计量（2）外源基因的表达效率：a、启动子的强弱 b、核糖体的结合位点 c、SD序列和起始密码的间距 d、密码子组成（3）表达产物的稳定性（4）细胞的代谢付荷（5）工程菌的培养条件6.质粒不稳定分为哪两类，如何解决质粒不稳定性？质粒不稳定分为分裂分为分裂不稳定和结构不稳定。
质粒的分裂不稳定是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象；质粒的结构不稳定是DNA从质粒上丢失或碱基重排，缺失所致工程菌性能的改变。
提高质粒稳定性的方法如下：（1）选择合适的宿主细菌2）选择合适的载体（3）选择压力（4）分阶段控制培养（5）控制培养条件（6）固定化7.影响基因工程菌发酵的因素有哪些？如何控制发酵的各种参数？影响因素：（1）培养基（2）接种量（3）温度（4）溶解氧（5）诱导时机的影响（6）诱导表达程序（7） PH值8.什么是高密度发酵？影响高密度发酵的因素有哪些？可采取哪些方法来实现高密度发酵？高密度发酵：是指培养液中工程菌的菌体浓度在50gDCW/L以上，理论上的最高值可达200gDCW/L 影响因素：（1）培养基（2）溶氧浓度（3）PH (4)温度（5）代谢副产物实现高密度发酵的方法：（1）改进发酵条件：a、培养基 b、建立流加式培养基 c、提高供养能力（2）构建出产乙酸能力低的工程菌宿主菌：a、阻断乙酸产生的主要途径 b、对碳代谢流进行分流 c、限制进入糖酵解途径的碳代谢流 d、引入血红蛋白基因（3）构建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌9.分离纯化常用的色谱分离方法有哪些?它们的原理是什么?方法有离子交换色谱、疏水色谱、反相色谱、亲和色谱、凝胶过滤色谱及高压液相色谱。
2013_食品微生物学复习思考题(附答案)
1、（V ）原核生物细胞中的DNA发现在染色体和质粒中。
2、（X ）病毒被认为是原核生物因为它们具备全部原核生物的特征。
3、（X ）所有细菌都有细胞壁。
4、（X ）微生物中的原生动物、真菌和细菌被认为是真核生物。
5、（X ）在微生物生长的稳定期，细胞快速分裂。
6、（X ）微生物单菌落的成员全都来自一个单个细胞的祖先。
7、（X ）为了抵御干旱环境，某些原生动物产生芽孢。
8、（X ）在实验室中细菌很难形成菌落。
9、（V ）用来固化细菌培养基的多糖是琼脂。
10、（V ）为了进行新陈代谢微生物体内必须有一定量的水。
11、（X ）精确定量某些成分而配制的培养基称为天然培养基，又名半合成培养基。
13、（X ）真菌、原生动物和单细胞藻类中主要的繁殖方法是二分裂。
14、（X ）出芽生殖过程在病毒中是可以普遍见到的。
15、（X ）称为嗜碱菌的那些细菌是能够在pH7.0以上生长的。
16、（X ）真菌最适的生长条件是有点碱性的。
17、（V ）特殊抗微生物剂的选择取决于待处理物品中种类控制的微生物种类、抗微生物使用时的环境条件。
18、（X ）有机物可促进抗微生物剂成功的使用。
19、（X ）消毒剂指的是消除所有微生物包括微生物的孢子。
20、（X ）抗生素的抗微生物效果一般低于消毒剂和防腐剂。
21、（X ）放在煮沸的水中灭菌需要30分钟。
22、（X ）干热较湿热灭菌效果好，因为干热适用于灭菌的物质如粉料物质、玻璃制品、设备和油料物质。
23、（V ）巴斯德消毒法是一种防腐的方法，如牛奶、啤酒和果汁，但没有灭菌效果。
24、（X ）微波对微生物有很严重的副作用，因它们与生物的核酸反应，改变它们的结构。
25、（X ）酸类中用于食品防腐和控制微生物生长的是乙酸、丙醇和苯甲酸。
26、（X ）只发现有一种抗生素可用于治疗一种严重的肺病——结核病。
27、（V ）对已知细菌种分类列表的权威手册是《伯杰氏系统细菌学手册》。
28、（V ）所有藻类都是真核生物。
基因工程高考题附标准答案
（2）下表是4种玉米自交系幼胚组织培养不同阶段的结果。据表可知，细胞脱分化时使用的激素是_____________________，自交系_____________________的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体。
（3）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带插入其内的片段转移到受体细胞。筛选转化的愈伤组织，需使用含___________________________的选择培养基。
_____________________________________________________________。
（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为________________，加入了________________作为合成DNA的原料。
（4）当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是__________________________。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是____________________________________________。
（2）研究者对X和M植株的相关基因进行了分析，结果见图2.由图可知，M植株的P基因发生了类似于染色体结构变异中的_______________变异，部分P基因片段与L基因发生融合，形成P L基因（P L）。以P-L为模板可转录出_______________，在_______________上翻译出蛋白质，M植株鼠耳叶形的出现可能与此有关。
②检测P L DNA需要提取基因组DNA，然后用PCR技术对图2中_____________（选填序号）位点之间的片段扩增。
基因工程复习知识点
基因工程复习资料一、知识点1.根据基因工程的定义，能替代基因工程的术语。
2. 含有II型限制性内切酶切位点的DNA 片段的特点。
3.已知一双链DNA分子，分别用限制酶Ⅰ、限制酶Ⅱ切割单独切割得到不同片段；同时用限制酶Ⅰ和限制酶Ⅱ切割时，得到另外的片段，据此分析该双链DNA分子结构及酶切位点情况。
4．质粒分子生物学的描述。
5．在植物基因工程中广泛使用的载体。
6．质粒带有α互补的 lacZ'标记基因，那筛选培养基中加入显色底物和诱导物分别为？7．载体常用的选择性标记：抗生素、生化标记、营养缺陷型标记的包括哪些（要能区分缩写符号）。
8．DNA双链是靠什么化学键维持？9．能有效区分重组子与非重组子的是方法有哪些？10．离体cDNA 合成中所涉及的工具酶是有哪些？11．强化基因转录的元件是哪些？12．基因调控元件中属于负调控顺式作用元件的是哪些？13．关于包涵体的叙述。
14. 在单子叶、双子叶植物及动物的遗传转化过程中，应用最成功的间接转化法分别是什么15. 在对转基因植物进行分子鉴定时，检测外源基因的整合、表达、转录，分别可以采用哪些方法？16．细菌存在限制-修饰的现象，其生理意义是什么？17．Taq DNA 聚合酶的发现使得 PCR 技术的广泛运用成为可能，是利用其哪个特点？18．关于柯斯质粒（cosmid）描述。
19．Cosmid、 -DNA 、 Plasmid几种常用载体的装载量大小比较20．载体质粒 pBR322上的两个选择性标记： Ap r、 Tc r。
它们分别含有一个单一酶切位点： Pst I 、 Sph I。
若将一外源基因插入Ap r中的Pst I位点，那么转化子和重组子如何筛选，若插入Sph I又如何筛选？21．DNA-DNA,DNA-RNA分子杂交的化学原理是什么（靠什么维持其双链稳定性）？22．cDNA 法获得目的基因的特点表现为？23．原核生物启动子的特征是有哪些？24．强化 mRNA 翻译的元件是哪些？25．高等哺乳类动物基因在大肠杆菌中高效表达时，包涵体形成的原因是？26.动物基因转移法中的胚胎干细胞法有何特点？（）27. 如何正确理解基因漂移？28.熟悉pBR322、pUC18/19载体的组成元件及作用、简写所代表的含义。
分子生物学第五章课后思考题答案【修订版】
分子生物学第五章作业1、哪些重要的科学发现和实验推动了DNA重组技术的产生及发展？答：近半个世纪来，分子生物学主要取得了三大成就：第一，20世纪40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质，解决了遗传的物质基础问题；第二，50年代提示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制,解决了基因的自我复制和世代交替问题；第三，50年代末至60年代，相继提出了“中心法则”和操纵子学说,成功地破译了遗传密码，充分认识了遗传信息的流动和表达。
但事实上，DNA分子体外切割与连接技术及核苷酸序列分析技术的进步直接推动了重组DNA技术的产生和发展。
其中，限制性内切核酸酶和DNA连接酶等工具酶的发现和应用是现代生物工程技术史上最重要的事件。
DNA重组技术的产生及发展过程中比较重要的科学发现和实验如下：1957年A.Kornberg从大肠杆菌中发现了DNA聚合酶I。
1965年S. W. Holley完成了酵母丙氨酸tRNA的全序列测定；科学家证明细菌的抗药性通常由"质粒"DNA所决定。
1967年年世界上有五个实验室几乎同时宣布发现了DNA连接酶。
1970 年H.O.Smith，K.W.Wilcox和T.J.Kelley分离了第一种限制性核酸内切酶。
H.M.Temin和D.Baltimore从RNA肿瘤病毒中发现反转录酶。
1972-1973 年H.Boyer，P.Berg等人发展了DNA重组技术，于72年获得第一个重组DNA分子，73年完成第一例细菌基因克隆。
1978 年首次在大肠杆菌中生产由人工合成基因表达的人脑激素和人胰岛素。
1981 年R. D. Palmiter和R. L. Brinster获得转基因小鼠；A. C. Spradling和G. M. Rubin得到转基因果蝇。
1982 年美、英批准使用第一例基因工程药物--胰岛素；Sanger等人完成了入噬菌体48,502bp全序列测定。
基因工程模拟测试含参考答案
基因工程模拟测试含参考答案 一、单项选择题（每小题2分，共30分）1、切取牛的生长激素和人的生长激素基因，用显微注射技术将它们分别注入小鼠的受精卵中，从而获得了“超级鼠”，此项技术遵循的原理是 A ．基因突变：DNA→RNA→蛋白质 B ．基因工程：RNA→RNA→蛋白质C ．细胞工程：DNA→RNA→蛋白质D ．基因重组：DNA→RNA→蛋白质2．在基因工程中，科学家所用的“剪刀”、“针线”和“载体”分别是指( )A.大肠杆菌病毒、质粒、DNA 连接酶B.噬菌体、质粒、DNA 连接酶C.限制酶、RNA 连接酶、质粒D.限制酶、DNA 连接酶、质粒3．不属于质粒被选为基因运载体的理由是 （ ）A ．能复制 B.有多个限制酶切点 C ．具有标记基因 D ．它是环状DNA4．下列四个粘性末端中，由同一种限制酶切割产生的一组是 （ ）①②③ ④A ．①②B ．②③C ．③④D ．②④5．质粒是基因工程中最常用的运载体，它的主要特点是①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④蛋白质 ⑤环状RNA ⑥环状DNA⑦能“友好”地“借居”A ．①③⑤⑦B ．①④⑥C ．①③⑥⑦D ．②③⑥⑦ 6．人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因的主要作用是A . 提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B. 有利于对目的基因是否导入进行检测C. 增加质粒分子的分子量 D ．便于与外源基因连接7． 基因工程的操作步骤：①使目的基因与运载体相结合，②将目的基因导入受体细胞，③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求，④提取目的基因，正确的操作顺序是（ ）A ．③②④① B.②④①③ C ．④①②③ D ．③④①②8．基因工程是在DNA 分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ）A ．人工合成基因B ．目的基因与运载体结合C ．将目的基因导入受体细胞D ．目的基因的检测和表达9．不属于基因工程方法生产的药物是A ．干扰素B ．白细胞介素C ．青霉素D ．乙肝疫苗10．基因治疗是指（ ）A.对有基因缺陷的细胞进行修复，从而使其恢复正常，达到治疗疾病的目的T A G G C C A TT A C C G G T AB.把健康的外源基因导入到有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的C.运用人工诱变的方法，使有基因缺陷的细胞发生基因突变恢复正常D.运用基因工程技术，把有缺陷的基因切除，达到治疗疾病的目的11．在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是()A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体C．用基因枪法将重组DNA分子导入烟草受体细胞D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞12、下列关于各种酶作用的叙述，不正确的是( )A．DNA连接酶能使不同脱氧核苷酸的磷酸与脱氧核糖连接B．RNA聚合酶能与基因的特定位点结合，催化遗传信息的转录C．一种DNA限制酶能识别多种核苷酸序列，切割出多种目的基因D．胰蛋白酶能作用于离体的动物组织，使其分散成单个细胞13、下列关于蛋白质工程的说法不正确的是( )A．蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构，使之更加符合人类的需要B．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构C．蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子D．蛋白质工程与基因工程密不可分，又被称为第二代基因工程14．利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要的产品。
基因工程实验
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五、实验注意事项
1 用微波煮胶时，胶液的量不应超过三角瓶容量的 1/3，否则易溢出
2 煮好的胶应冷却至50℃左右时再倒，以免制胶板变 形，并减少漏胶的机会
加入等体积的氯仿， 12000rpm，离心5分钟，取上清
加入1/10体积的3MNaAc，加2倍体积的预冷的无水乙 醇，混匀。
置于-70℃冰箱约10min以上或者-20℃冰箱30min至 数个小时
11
12000rpm离心15分钟（4℃），倒掉酒精，离心几秒，
用移液枪尽可能除去酒精
用0.5ml70 %酒精洗DNA沉淀一次，离心2分钟，倒掉 酒精
3
当加入中性缓冲液调和时，变性的质粒 DNA又恢复到原来的构型，而染色体DNA 不能复性，它们之间交联形成不溶性网状 结构，并与细胞碎片、蛋白质、SDS等结 合沉淀下来。
通过离心沉淀，细胞碎片、染色体DNA 及大部分蛋白质等可被除去，而质粒DNA 及小分子量的RNA则留在上清液中。混杂 的RNA可用RNaseA消除。再用酚／氯仿 处理，可除残留蛋白质
真核生物的基因组DNA为双螺旋结构，在在碱性溶 液中，双链DNA氢键断裂，双螺旋结构遭破坏而发生 变形，而基因组DNA分子量相对较大，在碱性PH条 件下其线性的大分子量基因组DNA不能复性，而形成 缠连的网状结构与蛋白质等共沉淀。
15
2 异丙醇和无水乙醇对核酸沉淀的优缺点 答：异丙醇和乙醇都能与与任意比例的水相混合。异 丙醇比较疏水，能很更好地沉淀核酸，乙醇可以去 盐，它比异丙醇更亲水，所以能去掉一些盐离子。 异丙醇沉淀量多，但杂质也多，增加了后续实 验风险。其优点为：所需容积小且速度快，适用于 浓度低，而体积大的DNA样品的沉淀。一般不需要 在低温条件下长时间放置。缺点为：易使盐类（如 NaCl、蔗糖）与DNA共沉淀；在DNA沉淀中异丙 醇难以挥发除去 乙醇是沉淀DNA乙醇是首选的有机溶剂，对盐 类沉淀少，DNA沉淀中所含的衡量乙醇易蒸发去处， 不影响以后的实验。在适当的盐浓度下，2倍样品 容积的95％乙醇可有效沉淀DNA。其缺点是总体积 较大。需在-20放置很长时间，30分钟-1小时，同 时DNA微溶于乙醇，使用乙醇沉淀会使部分DNA溶 解损失
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1 基因工程思考 ?答案 一、填空题
1．70
2．(1)分子水平上的操作； (2)细胞水平上的表达 3．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择 4．限制性酶切图谱 5．属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名 6．(1)减少酶量； (2) 缩短反应时间； (3)增大反应体积 7．EcoK；EcoRl
8. GGCC;异源同工酶(同裂酶) 9． 枯草杆菌蛋白酶； (1)5'-3'合成酶的活性； (2)3'-5'外切核酸酶 10. 碱性磷酸酶; 5'端的磷酸基团 11. Ca2+
13. DNA 聚合酶 I ：5'一 3'外切核酸酶; 5'一 3'合成酶 14. S1 核酸酶切割; DNA 聚合酶补平 15. 核酸水解酶 H; RNA 16. 质粒 DNA ;病毒 DNA ;质粒和病毒 DNA 杂合体 17. 复制区： 含有复制起点; 选择标记： 主要是抗性基因; 克隆位点： 便 于外源 DNA 的插入 18. 质粒消除 (或治愈 ) 19, pMBI ; pSCIOI; pSF2124(R质粒) 20. 1000kb； 300kb 21. 严紧
22. pBR322 和 M13 ; pMBI ;转座子 23. 它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源 DNA 的扩增；对某些噬菌体 (如 噬菌 )的遗传结构和功能研究得比较清楚， 其大肠杆菌宿主系统的遗传也研 究得比较详尽 24. 没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记 25. 质粒； 噬菌体； 45 (1) 分子量大， (2)酶的多切点， (3)无选择标记 26. 2
27．复制区； IG 区 28. 75% 〜105% 29. 螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性 30. 中和 DNA 分子的负电荷，增加 DNA 分子间的凝聚力 31. (1)合成探针；(2)合成cDNA ; (3)用于PCR反应；(4)进行序列分析 32. T—载体 33. 第二链合成时形成的发夹环 34. 乙醇使 DNA 分子脱水 35. (1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止 信号 36. 接受外源 DNA 的生理状态 37. (1)黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接 法 38. 基因组 DNA 克隆； 基因组 DNA 文库 39. cDNA克隆；cDNA文库 40. 聚合酶链式反应 (PCR) 41.0 C；42 C 42. (1)遗传学方法； (2)物理筛选法； (3)核酸杂交法； (4)表达产物分析法 43. 插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选 44. 基因组 DNA；cDNA 45. Klenow 酶填补的方法； T4DNA 聚合酶 46. (1)用 M13 噬菌体载体合成单链 DNA 探针； (2)从 mRNA 反转录合成单链 cDNA探针；(3)用不对称PCR合成单链DNA探针 47. 外源基因是否进行了转录 48. 两种不同的细胞群体能够表达不同的基因， 即在一个群体中能够表达一些基 因，而在另一个细胞群体中不能表达这些基因 49. Northern 印迹 50. Southern 印迹 51. 5' 3'合成酶；3' 5'外切核酸酶 52. (1)克隆的是完整的基因； (2)使用的是表达载体； (3)不含内含子 3
53. ⑴印迹的对象不同：Northern是RNA , Southern是DNA ; (2)电泳条件不同， 前者是变性条件，后者是非变性条件 54 . ( 1 )抗体能够被吸附到固体支持物上； (2)同一个抗原可以同几种抗体结合； (3) 抗体能够被标记
、选择题 (单选或多选 ) 1. c ； 2. c； 3. b； 4. b 5. b， C， d， e ； 6 . c ； 7 . b ； 8. d； 9. d； 10.
B
； 11. a； 12. a； 13. d； 14. b 15. d； 16. c； 17 . a， b； 18. a； 19. c
； 20. d； 21. c； 22. C； 23. b； 24. C； 25. d； 26. a， C， d； 27. b； 28. c
； 29. b； 30. a； 31 . c； 32. a,c,d,e， 33. a ， b， c； 34. b； 35. c； 36. c； 37. d
； 38. b； 39. c； 40. a； 41 . c； 42 . a， b， c； 43. b； 44. b ； 45. d； 46.
a
； 47. a； 48. c； 49. c； 50. b； 51 . c； 52. c； 53. b； 54. a,c,d； 55. a
； 56. b； 57. a， b； 58. c； 59. a ； 60. d ； 61 . b； 62. c；
三、简答题 1 . 答： San ger DNA测序法是建立在两个基本原理之上： (1) 核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由 5'端向 3'端聚合 (DNA 聚合酶参与了细 菌修复 DNA 合成过程 )； (2) 可延伸的引物必须能提供游离的 3'羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的 3'羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用 4 种双脱氧核苷酸终止反 应，则会获得 4 组长度不同的 DNA 片段。通过比较所有 DNA 片段的长度可以 得知核苷酸的序列。 2. 答：
盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。 3. 答：
回文序列是： 5'-CATATG-3， 4. 答：
GATATC； AAATTT ，因为它们是回文序列。 5. 答： 4
注意星活性，先低盐，后高盐；先低温酶，后高温酶；并且可以直接在换酶 前将第一种酶失活，再加第二种酶，否则，易产生星活性。或使用通用缓冲液。 6． 答：
由于反转录酶缺少在 E．coli DNA 聚合酶中起校正作用的 3'-5'外切核酸酶活 性，所以聚合反应往往会出错，在高浓度的 dNTP和Mg2+下，每500个碱 基中可能有一个错配。 7． 答：
所谓测序酶即是修饰了的 T7 DNA 聚合酶，是采用缺失的方法，从外切核酸 酶结构域中除去 28 个氨基酸，这样使 T7 DNA 聚合酶完全失去了 3'-5'的外 切核酸酶活性，只有5'---3'聚合酶的活性，而且聚合能力提高了 3〜9 倍, 测序时常用此酶。 8． 答： S1核酸酶作图是一种对RNA转录产物的末端和剪接位点进行作图的方法。 9. 答：
YAC 带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个 DNA 复制起 点，两个端粒。YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA，这是质粒和黏粒办 不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许 更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。 10．答： ( 1 )独立复制； (2)有选择标记； (3)有独特的酶切位点； (4)能转化但不
扩散。 11 ．答：
含有细菌质粒和克隆的真核生物 DNA 片段的杂种质粒，有两个复制起点和 既能在细菌又能在真核细胞中进行选择的选择标记，所以，很容易从一宿主 转到另一个宿主 (来回穿梭 )。 12. 答：
(1)削减分子量 (除去非必需区和整合区 )； (2)削减酶切位点； (3)添加选择 标5
记； (4)引入终止突变 13．答： (1) DNA 半保留复制的原理，在体外进行 DNA 的变性、复性和引物延伸。
(2) 至少要预先知道足够合成一对引物的靶 DNA 序列。 14．答： 基因组克隆包含所有不在 cDNA 中出现的内含子。 15．答： 化学合成一些长为10bp含有EcoRI识别位点的短的DNA片段，然后与待克 隆片段两端连接起来，如果用 EcoRI 切割这种连接片段，就会产生 EcoRI 的 单链末端。这种片段就可以插入到任何 EcoRI 的限制性内切酶位点中。 16 ．答： (1) COS位点可以自身环化； ⑵可以利用COS位点包装 噬菌体颗粒； (3) 可以感染寄主细胞； (4)利用质粒复制子复制，不整合、不裂解。 17 ．答： (1) 着丝粒； (2)端粒； (3)ARS 序列。 18 ．答： (1) 含有来自其他生物 DNA 的酵母人工染色体，叫 YAC； (2) 主要特性是可以克隆较大的外源片段。 19 ．答： PCR用双引物，体内复制用单引物。 20．答： 应注意的问题有：启动子、密码子、剪接、分泌。 21 ．答： 为了扩增突变体的 thyA 基因，先设计一对引物， 其中一个引物的序列与 thyA 基因的 5'端相同，另一个引物同该基因的 3'端互补。在引物的 5'端加上合 适U类限制性内切核酸酶的识别序列，以便于后来的克隆。将染色体 DNA
同引物混合后，进行PCR扩增。然后进行琼脂糖凝胶电泳，纯化扩增片段， 可以直接测序或克隆到合适的载体再测序。