基因工程试题及答案

合集下载

基因工程期末试题及答案

基因工程期末试题及答案

基因工程期末试题及答案一、选择题(每题2分,共20分)1. 基因工程是指利用现代生物技术手段对DNA进行操作和控制的一种技术。

2. 基因工程的主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。

3. DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。

4. 在基因工程中,限制性内切酶用于切割DNA分子,产生特定片段。

5. 基因工程可以产生转基因生物,通过对生物基因进行改造,使其具有特定的特性。

6. CRISPR/Cas9是一种常用的基因编辑工具,可以精确地修改基因组中的特定片段。

7. 基因工程在医学领域可以用于基因治疗,通过修复或替换异常基因,治疗遗传性疾病。

8. 在农业领域,基因工程可以用于改良作物,提高产量和抗病虫害能力。

9. PCR是一种常用的基因扩增技术,可以通过复制DNA片段来放大特定基因。

10. DNA梯度离心是基因工程中常用的分离DNA片段的方法。

二、问答题(每题10分,共30分)1. 请简要介绍基因工程的基本原理和主要方法。

基因工程的基本原理是通过对DNA进行操作和控制来改变生物的遗传性状。

其主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。

基因克隆是通过将特定DNA片段放入载体中,然后转化到宿主细胞中,使重组DNA在宿主细胞中大量复制。

PCR是一种基因扩增技术,通过在DNA复制过程中加入特定引物,使特定基因片段在体外大量扩增。

DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。

2. 什么是转基因生物?请举例说明。

转基因生物是指经过基因工程改造,将外源基因导入到目标生物体中,使其具有新的遗传性状的生物。

例如,将耐旱基因导入水稻,使其具有抗旱能力;将Bt毒素基因导入棉花,使其具有抗虫能力。

3. 基因工程在医学领域有哪些应用?举例说明。

基因工程在医学领域可以用于基因治疗、疫苗研发等。

例如,利用基因工程技术可以修复或替换患者体内异常基因,治疗遗传性疾病。

另外,基因工程也可以用于疫苗研发,通过基因工程技术将病原体的基因导入宿主细胞,产生病原体的抗原蛋白,从而刺激免疫系统产生抗体,用于预防传染病。

高一生物基因工程试题

高一生物基因工程试题

高一生物基因工程试题1.下列有关基因工程中运载体的说法,正确的是A.在基因工程的操作中,作为运载体的质粒都是天然质粒B.所有的质粒都可以作为基因工程中的运载体C.质粒是一种独立于细菌染色体外的链状DNA 分子D.作为运载体的质粒DNA分子上应有对重组DNA分子进行鉴定和选择的标记基因【答案】D【解析】在进行基因工程操作中,被用作运载体的质粒是在天然质粒的基础上进行过人工改造的,A错误;具有一至多个限制酶切点、具有标记基因的质粒才可以作为基因工程中的运载体,B错误;质粒是一种独立于细菌染色体外的环状DNA分子,C错误;作为载体的质粒DNA分子上应有对重组DNA进行鉴定和选择的标记基因,而且能在受体细胞中复制并稳定保存,D正确。

【考点】本题考查基因工程操作中的运载体的相关知识。

2.基因工程中不能作为运载体的是A.质粒B.动植物病毒C.细菌D.噬菌体【答案】C【解析】质粒、噬菌体、动植物病毒均可作为基因工程的载体.故选:C【考点】基因工程的原理及技术【名师】“分子运输车”--载体①载体具备的条件:能在受体细胞中复制并稳定保存;具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入;具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择.②最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子.③其它载体:噬菌体、动植物病毒3.在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中,下列操作错误的是A.用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸B.用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体C.将重组DNA分子导入受体细胞D.用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞【答案】A【解析】限制性核酸内切酶只能切割特定的脱氧核苷酸序列,而烟草花叶病毒的核酸是核糖核酸,A错误;构建基因表达载体时,需要用限制酶切割得到抗除草剂基因和切开载体,再用DNA连接酶将两者连接形成重组DNA,B正确;基因表达载体构建好之后,需要将重组DNA分子导入受体细胞(烟草原生质体),C正确;基因工程的最后一步是目的基因的检测和鉴定,可以用含有除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞,D正确。

基因工程试题及答案.doc

基因工程试题及答案.doc

基因工程试题一、名词解释(4 ‘*10)1.基因工程技术:按照人们的愿望,进行严密的设计,通过体外DNA 重组和转移等技术,有目的地改造生物种性,使现有物种在较短的时间内趋于完善,创造出新的生物类型。

2.感受态细胞:受体细胞经一些特殊方法(如CaC12、RbCl (KC1) 等化学试剂)处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性改变,成为能允许外源DNA 分子进入的细胞状态。

3.cDNA文库:从组织细胞中分离得到纯化的mRNA,然后以mRNA为模板,利用逆转录酶合成其互补DNA,再复制成双链cDNA片段,与适当载体连接后导入受体菌内,扩增,构建cDNA文库。

4.鸟枪法:指将某种生物体的全基因组或单一染色体切成大小适宜的 DNA 片段,分别连接到载体DNA上,转化受体细胞,形成一套重组兑隆,从中筛选出含有目的基因的期望重组子。

5.SD序列(Shine-Dalgarno):位于翻译起始密码了•上游的6-8个核苷酸序列(5’ UAAGGAGG 3’),它通过识别大肠杆菌核糖体小亚基中的16S rRNA 3’端区域3’ AUUCCUCC 5’并与之专一性结合,将mRNA定位于核糖体上,从而启动翻译。

6.包涵体:胞内高效表达时,工程菌因大景合成异源蛋白质所形成的水不溶性积聚物。

7.复合转座子:是由两个重复序列夹着一个或多个结构基因如某些抗药性基因和其它基因组成。

存在于R因子及其它质粒中。

复合转座子两端的组件由IS和类IS组成。

8.菌落原位杂交:是将菌落或噬菌斑转到固相膜上,原位裂解细胞后使核酸固定在膜上,然后与探针杂交。

用标记的核酸探针,经放射自显影或非放射检测体系,在组织细胞间期染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。

9.RACE:是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术,是以mRNA 为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3, 或5,端之间未知序列的方法。

10.连续式发酵:即在连续发酵反应器中,细胞的总数和培养液总体积同时维持恒定,前提是由培养液流出所造成的细胞损失正好为细菌分裂所产生的新细胞弥补。

基因工程期末考试试题及答案

基因工程期末考试试题及答案

基因工程期末考试试题及答案一、选择题1. 基因工程是指:A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然淘汰答案:B2. 下列哪项不是基因工程常用的工具酶?A. 限制性内切酶B. DNA连接酶C. 反转录酶D. 聚合酶链反应酶答案:C3. 基因枪技术主要用于:A. 植物基因转化B. 动物基因转化C. 微生物基因转化D. 病毒基因转化答案:A二、填空题1. 基因工程中,常用的载体有________、________和________。

答案:质粒、病毒、人工染色体2. 基因工程中,________是基因表达的调控元件。

答案:启动子三、简答题1. 请简述基因工程的基本步骤。

答案:基因工程的基本步骤包括:目标基因的获取、目标基因与载体的连接、转化宿主细胞、筛选含有重组DNA的宿主细胞、目的基因的表达和检测。

2. 基因工程在医学领域的应用有哪些?答案:基因工程在医学领域的应用包括:生产重组蛋白质药物、基因治疗、疾病诊断、疫苗开发等。

四、论述题1. 论述基因工程对农业生产的影响。

答案:基因工程对农业生产的影响主要体现在以下几个方面:提高作物的抗病虫能力、增强作物的抗逆性、改善作物的营养价值、提高作物的产量和质量、促进农业可持续发展。

2. 基因工程在环境保护中的应用。

答案:基因工程在环境保护中的应用主要包括:开发生物修复技术,用于污染土壤和水体的净化;利用基因工程改造微生物,用于处理工业废水和废气;通过基因工程改良植物,用于重金属污染土壤的修复等。

五、案例分析题1. 某公司利用基因工程技术成功开发了一种抗虫棉,该抗虫棉能够减少农药的使用,降低农业生产成本。

请分析该技术可能带来的社会、经济和环境效益。

答案:该技术可能带来的社会效益包括提高农民的生活质量,减少因农药使用带来的健康风险。

经济效益包括降低农药成本,提高作物产量,增加农民收入。

环境效益包括减少农药对环境的污染,保护生态平衡,促进农业的可持续发展。

高中生物选修三专题一基因工程测试题和答案

高中生物选修三专题一基因工程测试题和答案

生物选修三第一章周测出题人:植秀燊一、单项选择题(本部分共24个小题,每小题2分,共48分。

每小题只有一项选项符合题意)1.在基因工程中,科学家所用的“剪刀”、“针线”和“运载体”分别是指( )A、大肠杆菌病毒、质粒、DNA连接酶B、噬菌体、质粒、DNA连接酶C、DNA限制酶、RNA连接酶、质粒D、DNA限制酶、DNA连接酶、质粒2.基因工程的实质是()A、基因重组B、基因突变C、产生新的蛋白质D、产生新的基因3.下列关于限制酶的说法不正确的是( )A.限制酶存在于各种生物中,尤其在微生物细胞中分布最多B.不同的限制酶识别不同的核苷酸序列C.限制酶能识别不同的核苷酸序列,体现了酶的专一性D.限制酶的作用只是用来提取目的基因4.转基因动物基因时的受体细胞是( )A、受精卵B、精细胞C、卵细胞D、体细胞5.运用现代生物技术的育种方法,将抗菜青虫的Bt基因转移到优质油菜中,培育出转基因抗虫的油菜品种,这一品种在生长过程中能产生特异的杀虫蛋白质,对菜青虫有显著抗性,能大大减轻菜青虫对油菜的危害,提高油菜产量,减少农药使用,据以上信息,下列叙述正确的是( )A、Bt基因的化学成分是蛋白质B、Bt基因中有菜青虫的遗传物质C、转基因抗虫油菜能产生杀虫蛋白是由于具有Bt基因D、转基因抗虫油菜产生的杀虫蛋白是无机物6.水母发光蛋白由236个氨基酸构成,其中Asp、Gly、Ser构成发光环,现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记,在转基因技术中,这种蛋白质的作用是( )A、促使目的基因导入宿主细胞中B、促使目的基因在宿主细胞中复制C、使目的基因容易被检测出来D、使目的基因容易成功表达7.下列与基因工程无关的是( )A、培养利用“工程菌”生产胰岛素B、基因治疗C、蛋白质工程D、杂交育种8.上海医学遗传研究所成功培育出第一头携带白蛋白的转基因牛,他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法,使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍,转基因动物是指()A.提供基因的动物B.基因组中增加外源基因的动物C.能产生白蛋白的动物D.能表达基因信息的动物9.治疗白化病、苯丙酮尿症等人类遗传疾病的根本途径是()A、口服化学药物B、注射化学药物C、利用辐射或药物诱发致病基因突变D、采取基因疗法替换致病基因10.当前医学上,蛋白质工程药物正逐步取代第一代基因工程多肽蛋白质类替代治疗剂,则基因工程药物与蛋白质工程药物的区别是()A、都与天然产物完全相同B、都与天然产物不相同C、基因工程药物与天然产物完全相同,蛋白质工程药物与天然产物不相同D、基因工程药物与天然产物不相同,蛋白质工程药物与天然产物完全相同11.有关基因工程的成果及应用的说法不正确的是()①、用基因工程方法培育的抗虫植物和能抗病毒的植物②、基因工程在畜牧业上应用的主要目的是培育体型巨大、品质优良的动物③、任何一种假单孢杆菌都能分解四种石油成分,所以假单孢杆菌是“超级菌”④、基因工程在农业上的应用主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗逆性的农作物A.①②B.③④C.②③D.②④12.下图所示限制酶切割基因分子的过程,从图中可知,该限制酶能识别的碱基序列和切点是( )A.CTTAAG,切点在C和T之间 B.CTTAAG,切点在G和A之间C.GAATTC,切点在G和A之间 D.GAATTC,切点在C和T之间13.科学家通过基因工程的方法,能使马铃薯块茎含有人奶蛋白。

基因工程考研试题及答案

基因工程考研试题及答案

基因工程考研试题及答案试题:基因工程的基本原理和应用一、选择题(每题2分,共10分)1. 基因工程中常用的运载体是以下哪一项?A. 质粒B. 病毒C. 染色体D. 线粒体答案:A2. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 基因的随机插入D. 转化宿主细胞答案:C3. 在基因工程中,用于连接目的基因和运载体的酶是:A. 限制性内切酶B. DNA连接酶C. 反转录酶D. 聚合酶答案:B4. 基因工程在农业上的应用不包括以下哪项?A. 转基因作物B. 基因治疗C. 抗病抗虫植物D. 改良作物品质答案:B5. 以下哪个不是基因工程的潜在风险?A. 基因污染B. 生物安全C. 伦理问题D. 增加作物产量答案:D二、填空题(每空2分,共10分)6. 基因工程中,________是用来将目的基因插入到运载体中的酶。

答案:限制性内切酶7. 基因工程可以用于生产________,这是一种通过生物合成的具有特定功能的蛋白质。

答案:生物制品8. 基因治疗是一种将________导入到患者体内以治疗遗传性疾病的方法。

答案:正常基因9. 基因工程在环境保护方面的应用包括________和________。

答案:生物修复;污染监测10. 基因工程中,________技术可以用于检测特定基因的存在。

答案:PCR(聚合酶链反应)三、简答题(每题10分,共20分)11. 简述基因工程在医学领域的应用。

答案:基因工程在医学领域的应用主要包括:- 生产重组药物,如胰岛素、生长激素、干扰素等。

- 基因治疗,通过替换、修复或调控致病基因来治疗遗传性疾病。

- 生产疫苗,利用基因工程技术生产的疫苗可以更安全、高效。

- 基因诊断,通过检测特定基因或基因变异来诊断疾病。

12. 阐述基因工程中的限制性内切酶的作用及其重要性。

答案:限制性内切酶在基因工程中的作用是识别特定的DNA序列并在这些序列处切割DNA,产生特定的粘性末端。

基因工程试题及答案解析

基因工程试题及答案解析

基因工程试题及答案解析一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶是:A. 蛋白酶B. DNA聚合酶C. 核糖核酸酶D. 限制性核酸内切酶答案:D2. 基因工程中,用于将目的基因导入植物细胞的方法是:A. 电穿孔法B. 显微注射法C. 农杆菌转化法D. 脂质体介导法答案:C3. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 目的基因的扩增D. 目的基因的检测与鉴定答案:C二、填空题1. 基因工程中,常用的运载体有____、____和____。

答案:质粒、噬菌体、动植物病毒2. 基因工程中,常用的筛选标记基因有____、____和____。

答案:抗性基因、荧光蛋白基因、酶基因三、简答题1. 简述基因工程的应用领域。

答案:基因工程的应用领域包括农业、医学、工业、环境保护等。

在农业中,基因工程可以用于培育抗病、抗虫、抗旱等性状的作物;在医学领域,基因工程可以用于生产重组蛋白药物、基因治疗等;在工业上,基因工程可以用于生产酶、疫苗等;在环境保护方面,基因工程可以用于生物修复、污染物降解等。

2. 基因工程中,如何确保目的基因在宿主细胞中正确表达?答案:确保目的基因在宿主细胞中正确表达需要考虑以下几个方面:首先,目的基因需要有合适的启动子和终止子,以确保其在宿主细胞中得到正确转录和终止;其次,需要考虑目的基因的密码子偏好性,以确保其在宿主细胞中能被高效翻译;再次,需要考虑目的基因的稳定性,避免其在宿主细胞中被降解;最后,还需要考虑目的基因产物的后翻译修饰和定位。

四、论述题1. 论述基因工程在医学领域的应用及其可能带来的伦理问题。

答案:基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断和基因疫苗等。

重组蛋白药物可以用于治疗糖尿病、侏儒症等疾病;基因治疗可以用于治疗遗传性疾病;疾病诊断可以通过基因检测来实现;基因疫苗可以用于预防某些遗传性疾病。

然而,基因工程的应用也带来了伦理问题,如基因隐私权、基因歧视、基因治疗的安全性和有效性等。

基因工程试题与答案

基因工程试题与答案

基因工程试题与答案1、转基因动物的安全性问题正面观点:(1)转基因工程是不可阻挡的. 基因工程将影响当代重大的环境问题:人口过剩/污染/生物多样性急剧减退等等. 保护土壤/水/能源成为发展可持续农业的目标。

(2) 转基因食品的功效: 改良植物的食用品质;增加果蔬贮藏、保鲜性能;生产特殊食品——食品疫苗。

(3)迄今为止并没有发现转基因食品危害人体健康和环境的确切证据。

如果转基因生物技术得不到社会支持,这一研究将被扼杀。

反面观点:转基因的潜在危害:转基因动植物安全性评价主要集中在环境安全性,食品安全性以及对人动物健康的影响三方面。

环境安全性分析包括:(1)生存竞争性:转基因植物在生存竞争方面具有的优势可能导致生物多样性的减少,影响了生物多样性;(2)生殖隔离距离:基因不可控制的水平转移的可能性;与近缘野生种的可交配性:外源基因是否会漂流扩散至亲缘野生种中,从而破坏自然生态平衡;(3)对非靶生物的影响:转基因植物花粉通过风,雨,鸟,昆虫,真菌,细菌以至整个生物链传播使外源基因逃逸,从而造成基因污染。

(4)病毒发生异缘重组或异缘包装的可能性:自然界中存在着植物病毒之间的异缘重组。

(5)对农业和生态环境的影响,生态平衡. 如产生超级杂草的可能性;种植抗虫转基因作物后可能使害虫产生免疫并遗传、从而产生更加难以消灭的“超级害虫”;食品安全性:(1)转基因毒性. 如英国发现转基因马铃薯会减弱老鼠免疫系统功能,美国发现转基因玉米会危害蝴蝶幼虫及其相关生态环境;(2)人的毒理反应或过敏反应. 大肠杆菌细胞膜间隙中含有大量的内毒素,痕量的内毒素即可导致人体热原反应。

(3)实质等同性的原则,即某一种生物技术产品或其成分能够与市场上现有的对应产品进行比较。

如果一种转基因产品能够与现存的一种产品进行比较,并且发现具有实质同等性,便能用现产品安全性同种方法对待它。

转基因植物所引入的蛋白对人体可能是异性蛋白质,在部分人中可能发生食物过敏,特别是幼儿和某些过敏体质的人。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

作业一:一、名词解释:1、基因:是遗传的物质基础,是DNA(脱氧核糖核酸)分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称,是具有遗传效应的DNA分子片段。

2、基因组该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子3、操纵子:原核生物的几个功能相关的结构基因往往排列在一起,转录生成一个mRNA,然后分别翻译成几种不同的蛋白质。

这些蛋白可能是催化某一代谢过程的酶,或共同完成某种功能。

这些结构基因与其上游的启动子,操纵基因共同构成转录单位,称操纵子。

4、启动子:是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件,包括至少一个转录起始点。

在真核基因中增强子和启动子常交错覆盖或连续。

有时,将结构密切联系而无法区分的启动子、增强子样结构统称启动子。

5、增强子:是一种能够提高转录效率的顺式调控元件,最早是在SV40病毒中发现的长约200bp的一段DNA,可使旁侧的基因转录提高100倍,其后在多种真核生物,甚至在原核生物中都发现了增强子。

增强子通常占100~200bp长度,也和启动子一样由若干组件构成,基本核心组件常为8~12bp,可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。

6、基因表达:是指细胞在生命过程中,把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译,转变成具有生物活性的蛋白质分子。

二、简答题1、说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。

答:限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株名的各一个首字母,再加上序号. 基本原则: 3-4个字母组成,方式是:属名+种名+株名+序号; 首字母: 取属名的第一个字母,且斜体大写;第二字母: 取种名的第一个字母,斜体小写;第三字母: (1)取种名的第二个字母,斜体小写;(2)若种名有词头,且已命名过限制酶,则取词头后的第一字母代替.第四字母: 若有株名,株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而定,但用正体. 顺序号: 若在同一菌株中分离了几种限制酶,则按先后顺序冠以I,Ⅱ,Ⅲ,…等,用正体.2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性?受哪些因素影向?答:Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性,但是这种特异性受特定条件的限制,即在一定环境条件下表现出来的特异性。

条件的改变,限制酶的特异性就会松动,识别的序列和切割都有一些改变,改变后的活性通常称第二活性,而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示,因此第二活性又称为星号活性。

概括起来,诱发星活性的因素有如下几种:(1)高甘油含量(>5%, v/v);(2)限制性内切核酸酶用量过高(>100U/ugDNA);(3)低离子强度(<25 mmol/L);(4)高pH(8.0以上);(5)含有有机溶剂,如DMSO,乙醇等;(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+,Cu2+,C02+,Zn2+等)。

3、影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些?答:(1)DNA的纯度(2)DNA甲基化的程度(3)酶切消化反应的温度(4)DNA的分子结构(5)核酸内切限制酶的缓冲液4、什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?答:Klenow酶是1974年Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I,得到两个片段,其中大片段的分子量为75kDa,它具有5'-3'聚合酶和3'-5'外切核酸酶的活性,小片段具有5'-3'外切核酸酶活性。

由于大片段失去了DNA聚合酶I中会降解5'引物的5'-3'外切核酸酶的活性,所以在基因工程中更有用。

Klenow酶主要有下列用途:(1)修复反应,制备平末端可用Klenow酶修复限制性内切核酸酶或其他方法产生的5'或3'突出末端,制备平末端,这样可以使原来具有不相容的黏性末端的DNA片段通过平末端重组。

如在反应系统中加入放射性同位素标记的脱氧核苷酸,用这种末端填补的方法可以制备3'末端标记的探针。

用Klenow酶修复5'突出末端的反应主要是利用了Klenow酶的DNA聚合酶活性,是填补反应;而修复3'突出末端则是用Klenow酶的3'-5'外切核酸酶的活性,是切割反应。

用Klenow酶的切割反应来修复3'突出末端是不理想的,改用T4DNA聚合酶或其他的酶是更好的选择。

(2) 标记DNA3'突出末端(protruding end)该反应分两步进行:先用3'-5'的外切核酸酶活性除去3'突出末端,产生3'隐含末端,然后在高浓度的标记底物( -32p-dNTP)存在下,使降解(3'-5')作用与聚合(5'-3')作用达到平衡。

这种反应也叫交换或取代反应(exchange/replacement reaction)。

不过这一反应用T4DNA聚合酶的效果更好,因它的3'-5'外切核酸酶活性较强。

(3)其他的一些用途:包括用双脱氧末端终止法进行DNA序列分析、用于cDNA第二链的合成、在定点突变中用于合成第二链、用引物延伸法(primer extension)制备单链DNA探针等。

5、细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同?在基因工程中有什么用途?答:主要差别是:CIP68°C时失活,而BAP68°C稳定,且耐酚抽提。

应用:(1)dsDNA的5'端脱磷酸,防止DNA的自身连接。

但是用CIP处理后,最好将CIP除去后,再进行连接反应。

(2)DNA和RNA脱磷酸,然后用于多核苷酸激酶进行末端标记。

三、论述题1、如果知道某一基因的功能及其相应的蛋白质的氨基酸序列组成,可以通过何种方法克隆该基因?答:可以通过合成核苷酸探针或设计简并PCR引物从cDNA文库或基因组文库中筛选。

或者利用相应的抗体从cDNA表达文库中筛选相应的克隆。

作业二:一、名词解释:1、基因工程:在体外将外源基因进行切割并与一定的载体连接,构成重组DNA分子并导入相应受体细胞,使外源基因在受体细胞中进行复制、表达,使目的基因大量扩增或得到相应基因的表达产物或进行定向改造生物性状。

简单概括,就是将外源目的基因与载体重组后再进入宿主细胞的过程。

2、载体:能载带微量物质共同参与某种化学或物理过程的常量物质,在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。

三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。

3、转化:指将质粒或其他外源DNA导入处于感受态的宿主菌,并使其获得新的表型的过程。

4、感染:利用噬菌体将外源DNA导入宿主细胞的方法。

5、转导:由噬菌体将一个细胞的基因传递给另一细胞的过程。

它是细菌之间传递遗传物质的方式之一。

其具体含义是指一个细胞的DNA或RNA通过病毒载体的感染转移到另一个细胞中。

6、转染:指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。

常用的方法有电穿孔法,磷酸钙共沉淀法,脂质体融合法等。

二、简答题1、YAC载体具有什么样的功能性DNA序列?为什么在克隆大片段时,YAC具有优越性?答:YAC带有天然染色体所有的功能元件,包括一个着丝粒,一个DNA 复制起点,两个端粒。

YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA,这是质粒和黏粒办不到的。

大片段的插入更有可能包含完整的基因,在染色体步移中每次允许更大的步移距离,同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。

2、列举质粒载体必须具备的4个基本特性。

答: (1)独立复制; (2)有选择标记; (3)有独特的酶切位点;(4)能转化但不扩散。

3、PCR的基本原理是什么?用PCR扩增某一基因,必须预先得到什么样的信息?答:)DNA半保留复制的原理,在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。

(2)至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。

4、cDNA克隆与基因组克隆有何不同?答:基因组克隆包含所有不在cDNA中出现的内含子。

5、怎样将一个平末端DNA片段插入到EcoR I限制位点中去?答:化学合成一些长为10bp含有EcoRI识别位点的短的DNA片段,然后与待克隆片段两端连接起来,如果用EcoRI切割这种连接片段,就会产生EcoRI的单链末端。

这种片段就可以插入到任何EcoRI的限制性内切酶位点中。

三、论述题什么是Western印迹?它与Southern印迹有什么不同答: Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上,然后用特异性的抗体进行检测。

它与Southern的不同在于探针的性质不同,在Western印迹中使用的探针是抗体(蛋白质)。

作业三:一、名词解释1、DNA变性:DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。

变性时维持双螺旋稳定性的氢键断裂,碱基间的堆积力遭到破坏,但不涉及到其一级结构的改变。

2、DNA复性:变性DNA 在适当条件下,二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象,它是变性的一种逆转过程。

3、退火:指模板双链DNA经热变性,螺旋解开成单链后,通过缓慢冷却到55℃左右,使引物(即具有互补碱基的RNA片段)与该模板DNA 单链重新配对,形成新的双链分子的过程。

4、DNA芯片:是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面,然后与标记的样品杂交,通过对杂交信号的检测分析,即可获得样品的遗传信息。

由于常用计算机硅芯片作为固相支持物,所以称为DNA芯片。

5、错义突变:碱基替换的结果引起氨基酸顺序的变化。

6、基因诊断:又称DNA诊断或分子诊断,通过分子生物学和分子遗传学的技术,直接检测出分子结构水平和表达水平是否异常,从而对疾病做出判断。

二、简答题1、什么是蓝白斑筛选法?答:这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。

主要是在λ载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌β—半乳糖苷酶的基因片段,携带有lac基因片段的λ载体转入lac的宿主菌后,在含有5—溴—4—氯—3—引哚—β—D—半乳糖苷(X-gal)平板上形成浅蓝色的噬菌斑。

外源基因插人lac(或lac基因部分被取代)后,重组的噬菌体将丧失分解X-gal的能力,转入lac-宿主菌后,在含有5—溴—4—氯—3—引哚— —D—半乳糖苷 (X-gal)平板上形成白色的噬菌斑,非重组的噬菌体则为蓝色噬菌斑。

2、什么是基因文库?用重组DNA技术将某种生物细胞的总DNA 或染色体DNA的所有片断随机地连接到基因载体上,然后转移到适当的宿主细胞中,通过细胞增殖而构成各个片段的无性繁殖系(克隆),在制备的克隆数目多到可以把某种生物的全部基因都包含在内的情况下,这一组克隆的总体就被称为某种生物的基因文库。

相关文档
最新文档