国家那西肽标准品的研制与建立_张秀英
一种抗新型冠状病毒灭活血浆的制备及质量标准的建立
•新型冠状病毒专题•一种抗新型冠状病毒灭活血浆的制备及质量标准的建立胡勇，余鼎2何彦林2段凯3杨汇川4侯继锋5梁洪2彭[周志军1林连珍1吴晓1喻剑虹1韩初1梁小龙1邢延涛1刘莹1郑宵蓓1卢奎林6吴强6江砚芳6丁亚凌6李伟6张勇6朱晨1邓志军1陈克金1詹骞1李陶敬2王泽鋈3孟胜利3卢佳3杨晓明4李策生1付道兴21国药集团武汉血液制品有限公司科研开发部430207; 2北京天坛生物制品股份有限公司研发中心100024; 3武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究二室430207; 4中国生物技术股份有限公司科研管理部，北京100029; 5中国食品药品检定研究院血液制品室，北京102629; 6成都蓉生药业有限责任公司科研开发部610041胡勇和余鼎对本文有同等贡献通信作者：杨晓明，E m a il:yangxiaom ing@;李策生，E m ail:licesheng@;付道兴，E m ail:fudaoxing@sin o p h arm.co m【摘要】目的建立一种以新型冠状病毒肺炎（COVIEM9)康复者恢复期血浆为原料制备抗新型冠状病毒(2019 novel coronavirus，2019-nCoV)灭活血裝的工艺及其质量标准。
方法采集2020年1一3月期间中国武汉441人份C()VII>19康复者捐献的恢复期血浆，开展2019-nCoV、H IV和梅毒螺旋体等病原体的筛查，进行亚甲蓝光照灭活，并通过检测蛋白含量、抗2019-nCoV抗体、凝血因子1活性等，判断亚甲蓝光照灭活对血浆的影响并建立质量标准。
结果亚甲蓝光照灭活前后灭活血浆的蛋白含量没有发生明显变化，血浆的凝血因子《含量>().50 IU/ml，抗体滴度未出现明显下降，各项检测结果均符合质量要求。
结论确立了以C()VII>19康复者恢复期血浆制备抗2U19-nCoV灭活血浆的关键质量控制及工艺参数。
【关键词】新型冠状病毒肺炎；新型冠状病毒；亚甲蓝；病毒灭活基金项目：国家科技部重点专项(2()2()YFC()841800)【中图分类号】R563.1 DOI： 10. 3760/311962-20201018-00098Preparation and establishment of quality standard for an anti-2019 novel coronavirus inactivated plasmaHu Yong' , Yu Ding2 , He YanLin2 , Duan K ai3, Yang Huichuan4, H o u jife n g、Liang Hong2 ,Zhou Zhijun1 , Lin Lianzhen 1 , Wu Xiao1, Yu ] ianhong，Han Ren1 , Liang Xiao l ong1 ,Xing Yantao1, Liu Ying1, Zhe?7^ Xiaobei1, Lu Kuilin6，Wu Qiang6, Jiang Yanfcmg6,Ding Yaling6 , Li Wei6 , Zhang Yong6 , Zhu Chen ' , Deng Zhijun 1 , Chen Kejin 1 , Zhan Qian2,Li Taojing2 , Wang Zejun}, Meng Shengli3, Lu Jia3 , Yang Xiaoming4, Li Cesheng1, Fu Dauxiji^2'Research and Development Department >,Sinopharm Wuhan Plasma-derived Biotherapies Co., Ltd.,Wuhun 430207，China; 2Research and Development Center，Beijing Tiaritcm Biological Products Co.，Ltd.，Beijing 100024，China; 3Laboratory 2 o f Viral Vaccine Research，Wuhan Institute o f BiologicalProducts Co.，Ltd.-, Wuhan 430207 ^China; 4 Research and Development Management Department ^China National Biotec Group Co.^ Ltd.-, Beijing 100029, China；^Blood Product Department ^National Institutes For Food and Drug Controls Beijing 102629, China；h Research and DevelopmentDepartment，Chengdu Rongsheng Pharmaceuticals Co.，Ltd.，Chengdu 610041，ChinaHu Yong and Yu Ding have contributed equally to the articleCorresponding authors ••Yang Xiaoming ^Email：yafigxiaoming @ sitiophann. com；Li Cesheng * Email-. ***********************；FuDaoxing, Email：fudaoxing@ 【Abstract】Objective To explore the production and quality standard of an inactivated plasma of anti-2019 novel coronavirus (2019-nCoV) prepared from convalescent plasma of COVID-19 patients. Methods Four hundred and forty-one convalescent samples were collected from COVID-19 patients in Wuhan, China from January to March 2020, and screened for pathogens including 2019-nCoV, HIV, Treponema pallidum and so on. Qualified plasma samples were inactivated by methylene blue light. By carrying out protein content of plasma, anti-2019-nCoV antibody, coagulation factor \1 activity and other testvS, the effect of methylene blue light inactivation on plasma was determined and the quality standard was established. Results Protein content of inactivated plasma did not change significantly before and after methylene blue irradiation inactivation, Coagulation facctor V H activity was X). 50 IU/ml. Antibody titer did not show a significant decrease. All test results met the quality requirements. Conclusion The key quality control and process parameters of anti-2019-nCoV inactivated plasma prepared from the plavsma of COVIEH 9 convalescent patients are established.【Key words】GOVIEH% 201() novel coronavirus; Methylene blue; Virus inactivationFund program：Key Project of the Ministry of Science and Technology of China (2020YFC084180) DOI：10. 3760/cma. j. cn311962-20201018-00098新型冠状病毒肺炎(C0V I I>1y)是由新型冠状病 毒(2019 n o v e l c o r o n a v i r u s，2019-nCoV)感染引起的急 性传染性疾病w。
三碘甲腺原氨酸(T3)第三次免疫测定用国家标准品的建立
三碘甲腺原氨酸(T3)第三次免疫测定用国家标准品的建立于婷;曲守方;孙楠;刘艳;王玉梅;黄杰;黄颖【期刊名称】《放射免疫学杂志》【年(卷),期】2013(26)6【摘要】目的:建立三碘甲腺原氨酸(T3)第三次定量免疫测定用国家标准品.方法和结果:精确称取高纯T3原料,用含0.5%BSA的0.02M PBS缓冲液配制成100ng/ml溶液,经无菌过滤处理后,分装、冻干制成候选品.以T3第二次国家标准品(150550-0004)为对照品,经协作标定,候选品中T3免疫活性为50ng/支.结论:候选品各项指标均符合要求,可作为T3第三次免疫测定用国家标准品使用.本标准品的建立,为T3免疫测定用试剂盒的标准化提供定量基础.【总页数】4页(P769-772)【作者】于婷;曲守方;孙楠;刘艳;王玉梅;黄杰;黄颖【作者单位】中国食品药品检定研究院,100050;中国食品药品检定研究院,100050;中国食品药品检定研究院,100050;中国食品药品检定研究院,100050;中国食品药品检定研究院,100050;中国食品药品检定研究院,100050;中国食品药品检定研究院,100050【正文语种】中文【相关文献】1.人绒毛膜促性腺激素第三次免疫测定用国家标准品候选品的建立 [J], 于婷;黄杰;曲守方;黄颖2.人胎盘泌乳素免疫测定用国家标准品的研制 [J], 沈洪征;黄颖;焦岩;徐立根3.人胎盘泌乳素免疫测定用国家标准品的研制 [J], 沈洪征;黄颖;焦岩;徐立根4.甲状腺素(T4)第三次免疫测定用国家标准品的建立 [J], 于婷;黄杰;曲守方;孙楠;刘艳;王玉梅;黄颖5.甲胎蛋白免疫测定用国家标准品的建立 [J], 孙彬裕; 曲守方; 于婷; 孙楠; 孙晶; 胡泽斌; 黄杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
吴茱萸汤最终申请书
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5) 总黄酮测定新方法的探索和建立； 6) 总皂苷测定新方法的探索和建立； 7) 总生物碱测定新方法的探索和建立； 8) 总酚测定新方法的探索和建立； 9) 有毒（有效）成分限量标准建立的原则研究。
3、目标与任务需求分析
复方成分的复杂性、作用的多位性、配伍的巧妙性致使中药复方的质量控制和评 价不能简单地用一个或两个指标来评价，也不能鱼目混珠地用无数的指标来评价，因 为从药物经济学的角度这样做是很不合理的，也是无法实施的。那么，如何来实现中 药复方质量的质量控制呢？我们对现有技术进行一下简要的分析： （1）君药主成分测定法 目前的中药复方新药中，原则上是要针对君药的主成分进行含量测定，加上 80％ 的组成药味的鉴别来实现。如果君药没有明确的主成分，可以选择臣药等进行。众所 周知，该法存在很多的问题，不能实现中药复方的质量控制，更无法保证成药的质量 和疗效。 （2）多成分同步测定法 目前学术界认可利用“多成分”指标来实现中药的质量控制，并完成了很多的论 文来阐述 “多成分同步测定” ， 以便于实现对中药全方位质量的控制； 这个提议是好的、 也是正确的！存在问题：I、多成分测定必须要求有足够量的、可商业化提供的对照品， 而对照品的严重匮乏限制了该方法应用于中药质量的实际质量控制上；II、多成分测定 在实际的科研、开发、生产、市场监督中的测试成本高，如银杏目前的标准，测试一 个样品的成本在万元以上，难以真正实现质量的保证。 （3）指纹图谱法 该方法由于存在太多的模糊性，加上不同品种（基源是多品种者）、 产地、采收季 节、采收加工方法、炮制、生产工艺（提取、浓缩、精制、干燥、成型）、 运输、贮藏 等一系列环节对质量的影响，致使该法在固体制剂中应用受到限制。目前，也仅限于 部分中药注射液的质量控制中。解决办法：要使该法具有更广泛的应用，必须改变中 药复方现有的生产模式（变药材投料为中药中间体或成为标准提取物投料）来实现， 这样可以把质量不稳定、不可控的中药材变成质量相对可控、相对稳定的为特定复方
奶牛乳腺上皮细胞系的建立
左右时，少量成纤维细胞开始从组织块周围出现，10d 左右时乳腺上皮细胞开始从组织块周 围生长，单层细胞融合至培养底壁的 90%左右，吸出原有培养液，根据上皮细胞与成纤维 细胞对胰蛋白酶消化敏感性不同，在混合生长的原代或传代细胞培养物中，经过 0.25%胰蛋 白酶的 D-Hanks 液，37℃消化，在倒置显微镜下观察，待成纤维细胞细胞质回缩，细胞间 隙增大，脱离瓶壁时，加培养液终止消化，将酶液倾出，离心后得到的大部分是成纤维细胞。 3~5 次选择传代，弃掉组织块，可得到纯化的乳腺上皮细胞。
奶牛乳腺上皮细胞系的建立
陈建晖，佟慧丽，高学军﹡，李庆章
东北农业大学动物医学院，哈尔滨（150030）
E-mail：chenjianhui_2005@
摘 要：奶牛乳腺上皮细胞系的建立可为转基因动物生产、提高泌乳量提供良好的动物体外 模型。本研究采用组织块接种法，成功地培养了奶牛乳腺上皮细胞。通过对细胞接种存活率、 群体倍增时间、生长曲线、形态学等生物学性状的检测，建立并鉴定了正常培养的奶牛乳腺 上皮细胞系，细胞传至 20 代以上时仍保持旺盛的增殖活力。此外，本研究探讨了胰岛素、 催乳素及孕酮对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白和乳糖分泌能力的影响。 关键词：奶牛；乳腺上皮细胞；细胞系 中图分类号：Q2
检测样品的处理和酪蛋白的一样，HPLC 的检测条件：紫外检测波长，195nm；流动相， 5%的乙腈，流速，恒流 0.6ml/min；进样体积，10µl，其他操作同酪蛋白一样。分别以浓度 为 1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml 的乳糖标准品进行 HPLC，以乳糖浓度 为横坐标，峰面积为纵坐标作乳糖标准曲线。细胞样品与乳糖标准品采用完全相同的 HPLC 检测条件。
食品中那非类物质的测定BJS201805
食品中那非类物质的测定（BJS 201805）1 范围本标准规定了食品（含保健食品）基质中90种那非类物质的超高效液相色谱-串联质谱测定方法。
标准中方法一超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法，适用于饮料、果冻、蛋白粉、牡蛎粉、饼干、糖果、酒类及咖啡等食品（含与上述基质相同的保健食品及片剂、胶囊、软胶囊等剂型）中90种那非类物质的定性和定量测定。
标准中方法二超高效液相色谱-串联高分辨质谱法，适用于饮料、果冻、蛋白粉、牡蛎粉、饼干、糖果、酒类及咖啡等食品（含与上述基质相同的保健食品及片剂、胶囊、软胶囊等剂型）中90种那非类物质的筛查和定性确证。
方法一超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法2原理试样经甲醇超声提取，过滤后，滤液供超高效液相色谱—三重四极杆串联质谱仪测定，外标法定量。
3试剂和材料注：水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1 甲醇（CH3OH）：质谱级。
3.1.2 甲酸（HCOOH）：质谱级。
3.1.3 乙酸乙酯（C4H8O2）：分析纯。
3.1.4 盐酸（HCl）：分析纯。
3.2 试剂配制3.2.1 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL用水稀释至1000mL，用滤膜（4.3）过滤后备用。
3.2.2 盐酸甲醇溶液（1+99）：取盐酸1mL用甲醇稀释至100mL。
3.2.3 甲醇水溶液（1+1）：将甲醇与水等体积混合。
3.3 标准品西地那非等90种物质标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。
3.4 标准溶液配制3.4.1标准储备液（200 μg/mL）：分别精密称取Lodenafil carbonate（46罗地那非碳酸酯）、Sildenafil—1—dimer impurity（63西地那非二聚体杂质）、Vardenafil dimer（69伐地那非二聚体）标准品（3.3）各10mg，用盐酸甲醇溶液（1+99）溶解并稀释至50mL，摇匀；分别精密称取其余87种标准品（3.3）各10 mg，用甲醇溶解并稀释至50mL，摇匀，制成浓度为200 μg/mL标准储备液。
生物制品表征之HPLC肽图分析
生物制品表征之HPLC肽图分析随着现代医药工业的进展，肽图分析已成为生物制品表征过程中的关键步骤和质量控制的重要手段。
肽图检测法利用特定的化学试剂或酶将蛋白质特异性地降解为肽段，然后通过可靠的方法进行分离和鉴定，并与经同一方法处理的对照品进行比较和结果判定。
根据所选用的检测仪器不同，肽图分析可分为基于高效液相色谱法的HPLC肽图分析和基于质谱法的HPLC质量肽图分析。
北京百泰派克生物科技有限公司BTP通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立七大检测平台。
BTP基于高效液相色谱仪和液质联用仪，建立了HPLC肽图和HPLC质量肽图分析平台，并通过CNAS实验室认可。
我们可以为您提供直接的HPLC肽图和HPLC质量肽图分析服务，并提供包括方法学建立、验证和转让的完整服务。
一、基于反相高效液相色谱法的HPLC肽图分析。
反相高效液相色谱（RP-HPLC）法是一种分辨率高、检测灵敏度好的分析方法，可提供丰富的蛋白质和肽段信息，是蛋白质和肽段分析与表征的标准方法。
HPLC肽图分析通常用于常规鉴别试验。
在该分析中，肽段经过色谱柱分离后，使用UV检测器在波长范围200-230nm（通常为214nm）记录色谱图。
通过将供试品溶液的色谱图与对照品进行比较，最终可以用于产品放行实验中的鉴别试验，评估批间一致性和生产用细胞基质表达的稳定性。
HPLC肽图分析的常规实验步骤包括供试品的预处理、蛋白质特异性裂解、肽段的分离和检测，以及结果的分析和判定。
实验仪器：高效液相色谱（紫外检测器）（2695/2996）。
实验结果展示：蛋白酶解后的样品经过高效液相色谱的分离，紫外检测器采集数据，得到肽图结果，色谱图如下：图1 参比品的色谱图。
图2 样品的色谱图。
根据上述色谱图分析结果，可以发现样品中的肽图峰形和出峰时间与参考样品基本一致。
方法学验证内容展示：二、基于质谱法的HPLC质量肽图分析。
HPLC质量肽图分析利用高效液相色谱串联高分辨质谱（LC-MS/MS）平台进行检测。
Anti-TgAb和Anti-TpoAb测定用国家标准品的建立
Anti-TgAb和Anti-TpoAb测定用国家标准品的建立黄颖;于婷;沈洪征【期刊名称】《放射免疫学杂志》【年(卷),期】2007(020)004【摘要】目的:为规范国产Anti-TgAb 和Anti-TpoAb定量测定试剂盒,本实验室研制并建立了Anti-TgAb 和Anti-TpoAb免疫测定用国家标准品.方法和结果:选择经临床检测Anti-TgAb、Anti-TpoAb高值血清,经离心、过滤等处理后,分装、冻干制成标准品候选品.以WHO Anti-TgAb 1st IRP (65/093)为对照品,经协作标定,候选品中Anti-TgAb免疫活性均值为3691IU/支,以WHO Anti-TpoAb RS (66/387)为对照品,经协作标定,候选品中Anti-TpoAb免疫活性均值为434IU/支.结论:本标准品中Anti-TgAb免疫活性定义为4000IU/支,Anti-TpoAb免疫活性定义为430IU/支.本标准品的建立,为国产Anti-TgAb 和Anti-TpoAb试剂盒提供了定量依据,本文还对目前国内常用的几种进口Anti-TgAb 和Anti-TpoAb定量免疫分析试剂盒进行了比较分析,供临床和检验医生参考.【总页数】4页(P352-355)【作者】黄颖;于婷;沈洪征【作者单位】中国药品生物制品检定所,100050;中国药品生物制品检定所,100050;中国药品生物制品检定所,100050【正文语种】中文【中图分类】R4【相关文献】1.人绒毛膜促性腺激素第三次免疫测定用国家标准品候选品的建立 [J], 于婷;黄杰;曲守方;黄颖2.甲状腺素(T4)第三次免疫测定用国家标准品的建立 [J], 于婷;黄杰;曲守方;孙楠;刘艳;王玉梅;黄颖3.三碘甲腺原氨酸(T3)第三次免疫测定用国家标准品的建立 [J], 于婷;曲守方;孙楠;刘艳;王玉梅;黄杰;黄颖4.化学发光免疫与放射免疫测定法测定血清Anti-TgAb和Anti-TpoAb的比较[J], 宋爱羚;郭芝生;孙梅励;连小兰;白耀5.甲胎蛋白免疫测定用国家标准品的建立 [J], 孙彬裕; 曲守方; 于婷; 孙楠; 孙晶; 胡泽斌; 黄杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。