精子运动对体外受精率_妊娠率的影响
不同禁欲时间对体外受精-胚胎移植结局的影响
【 要 】 目的 摘 探 讨 不 同禁 欲 时 间对 体 外 受精 一 胎 移 植 （ＶＦ Ｅ ） 局 的 影 响 ， 辅 助 生 殖技 术 提 供 基 础 数 胚 Ｉ —Ｔ 结 为
据 。方 法 ５ ５例 男性 的 精 液 根 据 取 卵 日的 禁 欲 时 间 随机 分 成 Ａ、 Ｃ、 组 。记 录和 分析 使 用各 组 别 的精 子 进 行 ３ Ｂ、 Ｄ ４
ｃ ｍｅ ｏ ＶＦ ＥＴ ｕ ｅ ｈ ｐ ｒ ｆｏ ｔ ｅ ｆ ｕ ｉ ｅ ｅ ｔ ｇ ｏ ｐ ｗａ ｅ ｏ ｄ ｄ ａ ｄ ａ ａ ｙ ｅ ．Ｒｅｕ ｔ Ｔｈ ａ ｅ ｆ ｏ ｆ Ｉ ＿ ｓ ｄ ｔ ｅ ｓ ｅ ｍ ｒ ｍ ｈ ｏ ｒ ｄｆ ｒ ｎ ｒ ｕ ｓ ｒ ｃ ｒ ｅ ｎ ｎ ｌ ｚ ｄ ｆ ｓｌ ｓ ｅ ｃ ｓ ｓｏ
检验 医学与临床 ２ １ ０ ２年 ７月第 ９卷 第 １ ３期
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１ ３ ・ ５８
论 著 ・
不 同禁 欲 时 间对 体 外 受精一 胎 移 植 结局 的 影 响 胚
翟丹梅 ， 李柳铭 ， 爱平 ， 覃 江 莉 ， 袁 华 ， 玉甫 ， 靳 黄世扬 ， 陆 丹 ， 曾义真 ， 李慕 军（ 西 医科 大 学 广
和 卵裂 率 两 两 比较 差 异 无 统 计 学意 义 ； 优 质 胚 胎 率 显 著 高 于 Ａ、 Ｄ 组 ， Ｃ组 Ｂ、 差异 有 统计 学 意 义 （ ＜ Ｏ ０ ） Ｐ ．５ 。种 植 率
各 组 间 二 者 比 较 除 Ｂ组 显 著 高 于 Ｃ组 外 其 余 各 组 间差 异 无 统 计 学 意 义 ； 临床 妊 娠 率各 组 间 两 两 比较 ， 异 均 有 统 差 计学意义（ Ｐ＜ｏ ０ ） 临 床 妊 娠 中流 产 率 各 组 间两 两 比较 ， 异 无 统 计 学意 义 （ ．５。 差 Ｐ＞ ０ ０ ） 异 位 妊 娠 率 各 组 间 两 两 ．５； 比 较 Ｃ组 显 著 高 于 Ａ、 Ｄ 组 ， 异 有 统 计 学 意 义 （ ＜ Ｏ ０ ） Ｂ、 差 Ｐ ． ５ 外其 余 各 组 间 没有 统计 学 意 义 。 结 论 禁欲 时 间 长 短 不 影 响 体 外 受 精后 的 受 精 率 和 卵裂 率 ， 禁欲 ６ ７ｄ的 男性 精 液 经 密度 梯 度 离心 处理 用 于 Ｉ － Ｔ 后 其 种植 率 和 临 ～ ＶＦＥ 床 妊 娠 率 较 其 他 禁 欲 时 间 低 ， 原 因有 待 进 一 步探 讨 。 其 【 键 词 】 禁 欲 时 间 ； 体 外 受精 一 胎 移 植 ； 精 液 参 数 ； 结局 关 胚
精子形态学的分析
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8
临床意义
• 2. 精液中凝聚精子增多，提醒生殖道传染 病或免疫功能异常。
➢ 当两个百分率间的差异大于可接受差 异，放弃第一次的两个值并重新评估。（不 要计数第三个样本，取３个值的平均值，或 者取３个值中最相近的两个值的平均值。）
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正常精子形态的评估
表2-1 重复计数200个精子（共计数400个精子）正 常形态百分率的平均值及两次百分率之间的可接受差 异
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• 缺乏客观性
• 判读差异
• 执行外部质量控制差
WHO-5手册推荐了简单区别精子形态正
常或异常的分类方法---记录异常形态精子
的异常部位。只有采用WHO-5严格标准，所
给出的参考限才有意义。
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正常形态精子
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正常精子形态学
• 精子头外形上应该是光滑、轮廓 规则，大体上呈椭圆形。顶体区可清 晰分辨，占头部的40~70%。顶体区没 有大空泡，并且不超过2个小空泡， 空泡大小不超过头部的20%。顶体后 区不含任何空泡。
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正常精子形态的评估
➢ 最好在另一张重复涂片上，但是也可选 择同一张涂片，重复评估至少200个精子，以 达到可接受的低抽样误差。只评估具有头部 和尾部的完整精子。
➢
仅评估具有头部和尾部的完整精子，
不计数未成熟的生殖细胞（圆细胞）。
Байду номын сангаас
不同受精方式对获卵数较少患者妊娠结局的影响
・
论
著 ・
不 同 受 方 式 对 获 卵 数 精 较 少 患 者 妊 娠 结 局 的 影 响
吴 昕 ， 艳 ， 罗 刘春 莲 ， 胡 蓉 ， 万红 景
［ 摘要 ］ 目的 比较获卵数少的患者采用不同受 精方式对其妊娠结 局的影响。方法 回顾性 分析 １７个周 ２
期 获 卵 数 少 于 ６个 的患 者 ， 用 体 外 受 精 （Ｖ ） 卵胞 浆 内 单 精 子 显 微 注 射 术 （Ｃ Ｉ ， 采 ＩＦ 或 ＩＳ） 比较 两 组 受 精 率 、 精 受 精 多
ｒｔ Ｐ＜００ ） Ｉ Ｓ ｏｐｏ ｍ ｎｃｉｃｌ ａｅｔ ｐｒ ｂｅｅ ｂｙｓ ｎ ｃｕ ｕａｖ ｔｌ ｒｇａｃ ｔ ｗ ｒ ｉ ｅ ａ ａ ａ ｅ（ ．５ ； ｎＩ Ｉ ｕ ｆ ｅ ｅ ｒｉ ｔ ｎｓ ｏｔ ｌ ｍ ｒｏ ｄａｃｍ ｌ ｉ ｔ ａ ｐｅｎｎｙｒ ｅ ｅ ｈｇ ｒｈｎｔ ｔ Ｃ ｇ ｒ ｓ ｔａｐ ｉ ａ ａ ｔｅｏ ａ ｅ ｈ ｔ ｈ ｉ ｏｐＩ Ｆ （ ０ ０ ） ｎ ｍ ｒ ａｓ ｒ ａｃｌｔ ｎｒ ｅｗ ｓ ｏ ｅ Ｐ＜ ．５ ．Ｔ ｏｇ ｅｆｒｌｙｒ ｅ ｈ ｕｌｙｅ ｂ ｏ ｎｇ ｕ ｒ Ｖ Ｐ＜ ．５ ，ａｄｅ ｂｙ ｔ ｎｆ ｎｅ ａｏ ｔ ａ ｗ ｒ（ ０ ０ ） ｈｕｈｔ ｔｉ ａ ，ｔ ｑａ ｔ ｍ ｒ ｓ ｏ ｒ ｅｃ ｌｉ ａ ｌ ｈ ｅ ｉｔ ｔ ｅ ｉ ｙ ｒｔ ａｄｐｅｎ ｎｙ ａ ｅ ｉ ｅ ｔａ Ｆｇ ｕ ｓ ｉｈｄｎ ｔｉｉａｓ ｎｆａｃ Ｐ＞ ．５ ． ｏ ｃ ｓ ｎ ＩＳ ｎｉｐｏｅ ｅ ｉ ａ ｎ ｒｇａｃ ｔ ｗ ｒ ｈ ｈｒｈｎＩ ｏｐ ，ｔ ａ ｏ ａ ｓｃｌ ｉ ｉｃｎｅ（ ０ ０ ）Ｃ ｎ ｌ ｉ Ｃ Ｉ ａ ｒｖ ｒｌ ｅ ｒｅ ｅ ｇ Ｖ ｒ ｓ ｔｔ ｇ ｉ ｕｏ ｃ ｍ ｆｔ —
精子DNA损伤对妊娠结局的影响及临床意义
【 摘要 】 目 ： 讨精子Ｄ Ａ 的 探 Ｎ 损伤对妊娠结 局的影响 以及Ｄ Ｉ Ｆ 值与官腔 内人工授精（ ｎ ｒｕ ｅ ｉｅ １ｓ ｍ ｎ ｔｏ ， Ｕ ） １ｔ ａｔ ｒ ｎ ｅ ｉａ ｉｎ Ｉ Ｉ妊娠率的关系。 法： ｎ 方 对 １６ 对不孕夫妇行Ｉ Ｉ ８ Ｕ 治疗， 采用精子染色质结构分析 法（ Ｃ Ａ ） Ｓ Ｓ 法 检测精子Ｄ Ａ Ｎ 碎片指数（ Ｆ ， Ｄ Ｉ）观察Ｄ Ｉ Ｆ 值与Ｉ Ｉ Ｕ 妊娠率的关系 结果 ： 妊娠组患者
《 求医问 》 药 下半月刊 Ｓ ｅ ｅｋＭｅ ｉ ｌ ｎ ｋＴ ｅ ｄｃ ｅ ０ ２ ｄｃ Ａ ｄＡｓ ｈ Ｍｅ ｉ ｎ ２ １ 年第 １ ａ ｉ ０卷 第 ６ 期
５ ９
精子 ＤＮ Ａ损伤对 妊娠 结局 的影 响及 临床 义 意
张 鑫 ： 昌军 张 罗清炳 董毅 飞 ； 鸿毅 陈 娟 徐
１ 研 究方 法 ． ２
著 陡差异（＜００ ）提示精子Ｄ ｐ ．５ ， ＮＡ损伤与妊娠结局具有相 关性 如表１ （ ） ２２ ＤＦ值与Ｉ ・ ． Ｉ ｕＩ 晦床妊娠 率的关系 根据 Ｄ ｌ 将１６ Ｆ值 ８对患者夫妇 分为两组：
Ａ组（ Ｉ ５ ，组 （Ｆ ＞２％）两组 患者临床妊娠 率结果 见表２从表中 ＤＦ ≤２％）Ｂ Ｄ Ｉ ５ 。 。
意 “研究显示 ， 。 精子ＤＮ Ａ损伤对体内受精与体外人工受精均有影响， 容 易导致不育 、 流产等不良后果【 提示精子ＤＮＡ损伤与妊娠结局具有一定 ２ ］ ，
的相 关性 。 ｕ ａＣＥ 究指 出 ， Ｄ ｒｎ 研 检测精 子Ｄ ＮＡ碎 片指数 （ Ｉ水平能 够预 ＤＦ）
用（ ｘ±ｓ ） 表示， 组间均数采用配对ｔ 检验分析， 计数资料用率表示， 采用 ’ 检 、 验 ， ＜ｏ０ 表示差异具有统计学意义。 Ｐ Ａ， 辅助生殖技术（ ＲＴ） Ａ 得到了广泛 的应用， 如人工授精 （ ）体外受精（ Ｆ 和胞浆内单精子注射（Ｃ １。 Ｉ 、 ＵＩ Ｉ ） Ｖ ＩＳ ）同
WHO精液检查第五版
2
HCV hepatitis C virus 丙肝病毒 HIV human immunodefciency virus 人免疫缺陷病毒 HOP hamster oocyte penetration 仓鼠卵穿透 HOS hypo-osmotic swelling 低渗肿胀试验 HPF high power field 高倍视野 HRP horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 HSA human serum albuminxiv 人血清白蛋白 IV HTF human tubal fuid 人输卵管液 IB immunobead 免疫珠 IBT immunobead test 免疫珠试验 ICSI intracytoplasmic sperm injection 胞浆内精子注射 Ig immunoglobulin 免疫球蛋白 IM immotility 不动 IQC internal quality control 内质量控制 IU international unit 国际单位 IUI intrauterine insemination 宫腔内人工授精 IVF in vitro fertilization 体外受精 KRM Krebs-Ringer Medium Krebs-Ringer 培养液 LIN linearity 线性 LLQ lower limit of quantifcation 定量下限 LPF low power field 低倍视野 MAD mean angular displacement 平均角位移 MAI multiple anomalies index 复合异常指数 MAR mixed antiglobulin reaction 混合抗球蛋白反应 NA numerical aperture 数值孔径 NP non-progressive (motility) 非前向的（活力） PBS phosphate-buffered saline 磷酸缓冲盐溶液 PDCA plan, do, check, act PMA phorbol 12-myristate 13-acetate (12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐 PMSG pregnant mare serum gonadotrophin 孕马血清 PNPG p-nitrophenol glucopyranoside 对硝基苯酚吡喃葡萄糖苷 PR progressive (motility) 前向的（活力） PSA Pisum sativum agglutinin 碗豆凝集素 QA quality assurance 质量保险 QC quality control 质量控制 RCF relative centrifugal force 相对离心力 RI refractive index 屈光指数 RNA ribonucleic acid 核糖核酸 ROS reactive oxygen species 活性氧类物质 rpm revolutions per minute 每分钟转速 SD standard deviation 标准差 SDI sperm deformity index 精子畸形指数 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 SE standard error 标准误
人工授精及继用体外受精-胚胎移植助孕临床结局分析
３ ８ ４ 例 临床资料 。结果 ： 接受 Ａ Ｉ Ｈ患者 临床妊娠率 １ ３ ． ８ ８ ％（ ２ ３ ０ ／ １ ６ ５ ７ ） ， 年龄 、 单侧或 双侧输 卵管通畅 及助孕 周期各 组间妊娠率无差异 （ Ｐ＞ ０ ． ０ ５ ） ， 继发不孕 妊娠 率高于原发不 孕 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 注入 精子数 量 （ １ Ｏ～ ２ Ｏ ） ｘ １ ０ 组妊娠 率最
Ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ａ ｕ ｔ ｈ ｏ ｒ ：Ｓ ｕ Ｙ ｉ ｎ ｇ ｃ ｈ ｕ ｎ，Ｅｍａ ｉ ｌ ：ｓ ｕ ｙ ｉ ｎ ｇ ｃ ｈ ｕ ｎ ｌ ＠１ ２ ６ ． ｃ ｏ ｎ ｒ
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｉ ｔ ｖ ｅ ： Ｔ ｏ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｔ ｈ ｅ ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｐ ｒ ｅ ｇ ｎ ａ ｎ ｃ ｙ ｏ ｆ ａ ｒ ｔ ｉ ｉ ｆ ｃ ｉ ｌ ａ ｉ ｎ ｓ ｅ ｍ ｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗ ｉ ｔ ｈ ｈ ｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄ ｓ ｐ ｅ ｒ ｍ（ Ａ Ｉ Ｈ —Ｉ Ｕ Ｉ ） ，ａ ｎｄ ｔ ｈ ｅ
陈 帆 苏迎春 孙 莹璞 郭 艺红
郑州大学第一 附属 医院生殖医学 中心 （４ ５
要 目的 ： 分析官腔 内人工授精 （ Ｉ Ｕ Ｉ ） 助孕及继 用体外受 精 一胚 胎移植 （ Ｉ Ｖ Ｆ—Ｅ Ｔ） 助孕 的临床结局 。方法 ： 回顾
性分析本 中心接受 夫精 人工授精 （ Ａ Ｉ Ｈ） 助孕 １ ０ ３ ８例 患者（ 年龄 ＜ ４ ０岁 ） 的１ ６ ５ ７周期资料 以及继 用 Ｉ Ｖ Ｆ—Ｅ Ｔ助孕 的
１ ９ ２
中国计划 生育学杂志 ２ ０ １ ３ 年３ 月 第２ １ 卷第３ 期
Ｃ ｈ ｉ
精索静脉曲张对精子DNA碎片和体外受精结局的影响
摘要： 目的 探讨精索静脉 曲张（ Ｃ 对精子 Ｄ Ａ碎 片、 Ｖ ） Ｎ 活力 、 形态 和体外 受精 （Ｖ ） ＩＦ 结局 的影响 。方 法 采
用染色质扩散实 验（ Ｃ ） １３例 Ｖ ＳＤ 对 ０ Ｃ所致男 性不育患者和 ３ ７例正常生育男性进行精子 Ｄ Ａ碎片率 （ Ｆ ） Ｎ Ｄ Ｉ检测 ；
山东 医药 ２ １ ０ １年第 —１￣— ４ ５ ４
精 索 静 脉 曲张对 精 子 Ｄ Ａ碎 片 和体 外 受 精 Ｎ 结 局 的影 响
崔 险峰 ， －丁 一 攀 张云 山 邢 俊平 孙 ， ， 。 光
（ １天 津 医科 大学 第二 附属 医院 ， 天津 ３００ ２天 津市 中心妇 产科 医院 ； ０ １０； ３西安 交通 大学 第一 附属 医院 ）
中图分类号 ： ６ ８ Ｒ９ 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ：０ ２２ ６ ２ １ ）４０ １ －３ １０ —６ Ｘ（０ １ ４ － ７０ ０
Ｓｐ ｒ ＤＮＡ ｒ ｇ ｎａ ｉｎ ａ ｄ ｏ ｔｏ ｎ ｖｔｏ ｆ ｒｌ ａ ｉｎ ｉ ｅ ｔ ａ ｉｏ ｅｅ ｅ ｍ ｆ ｍｅ ｔｔ ｎ ｕｃ ｍｅ ｉ ｉ ｅ ｔｉ ｔ ｎ ｍ ｎｗｉ ｖ ｒ ｃ ｌ ａ ｏ ｒ ｉｚ ｏ ｈ ｃ
ｔｎ ｉ ．Ｍ ｅｈ ｄ Ｔ ｅ ｓ ｅｍ ｈ ｏ ｔ ｉｐ ｒ ｉｎ ｔｓ ｓｅ ｌ ｙ ｄ ｔ ｅｅ ｔ ｈ ｐ ｒ Ｄ ｏ ｔｏ ｓ ｈ ｐ ｒ ｃ ｒ ｍａ ｉ ｄ ｓ ｅ ｓｏ ｅ ｔ ｎ ｗａ ｍｐ ｏ ｅ ｄ ｔ ｃ ｅ ｓ ｅ ｍ ＮＡ ａ ｍｅ ｔ ｔ ｎ ｉ ０ ｎｅ ｔ ｅ ｏ ｔ ｆ ｇ ｎ ａｉ ｎ １ ３ ｉ ｆｒｉ ｒ ｏ ｌ ｍｅ ｔ ａ ｉｏ ｅｅ ａ ｄ３ ｅ ｌ ｙ ｆ ｒ ｌ ｌ．Ａｔ ｈ ａ ｉ ｎ ｗｉ ｖ ｒ ｃ ｌ ｎ ７ ｈ ａ ｔ ｅｔ ｅｍａｅ ｈ ｃ ｈ ｉ ｅ ｓ ｍｅｔ ｔ ｍｅ， ｈ ｌｓ ｉａ ｅ ｎ ｐ ｒ ｍｅｅ ｓｉ ｃｕ ｉ ｇ ｓ ｅ ｏ ｃ ｎ ｔ ｅ ｃａ ｓ ｌ ｍｅ ａ ａ ｔｒ ｎ ｌ ｄｎ ｐ ｒ ｃ ｎ ｅ — ｃ ｓ ｍ ｔａｉｎ，ｐ ｏ ｒ ｓ ｉｅ ｍｏｉ ｔ ｎ ｐ ｒ ｒ ｏｏ ｙ ｗ ｒ ｖ ｌ ａｅ ． Ｆ ｒｈ ｒ ｏ ｅ ｕ ｃ ｍｅ ｏ ｎ ｖｔｏ ｆｒｉ ｚ ｔ ｎ ｉ ｎ ｒｔ ｏ ｒ ｇ ｅ ｓｖ ｔ ｉ ａ ｄ ｓ ｅ ｌｙ ｍ ｍｏｐｈ ｌｇ ｅ ｅ ｅ ａｕ ｔｄ ｕ ｅ ｔ ｍ ｒ ，ｏ ｔｏ ｆｉ ｉ ｅ ｌ ａｉ ｎ ｍｅ ｒ ｔ ｉ ｏ
辅助生殖技术及护理(人工授精)
人工授精的临床妊娠率
• 仍取决于患者和丈夫的年龄，病因，不孕年限， 精子的质量等。 • 对于精液质量较好的因性交时精液未能接触宫颈 的人工授精，多次累计妊娠率可高达80%以上， 而精子质量差或因宫颈因素行人工授精者妊娠率 偏低，多数为10-20%/周期。
影响人工授精成功率的因素
• 年龄 妇女的生殖能力随年龄的增长而逐渐下降，尤其 是在35岁以后卵巢功能有下降趋势。 • 卵巢年龄 卵巢年龄和其生物学年龄可以不一致，很多因素 会造成卵巢功能提早衰退而影响卵泡发育和排卵， 促排卵治疗卵巢的反应与卵巢年龄有关，成熟卵 泡个数与妊娠成功率密切相关。
• 不育夫妇经过各种治疗仍未生育，并且目 前尚无治疗方法的情况下，为了使女方怀 孕，就不得不依靠其他方法来达到这个目 的。这些方法统称为辅助生殖技术。 • 现行的辅助生殖技术包括人工授精、体外 受精（试管婴儿）等技术。
辅助生殖技术(ART)
•
是指在体外对配子和胚胎采用显微操作技术， 帮助不孕夫妇受孕的一组方法，包括人工受精 (IUI)、体外受精-胚胎移植(IVF-ET)、卵细胞浆内 单精子注射(ICSI)及其他衍生技术等。
• 3、生殖道畸形及心理因素导致性交不能等不育。 • 4、排卵障碍（如PCOS)、子宫内膜异位症经单纯药物处理不 受孕。 • 5、不明原因不孕。 • 6、免疫性不孕。
接受人工授精所要具备的基本条件
女方基本条件 • 输卵管通畅：人工授精前通过腹腔镜检查，子宫 输卵管造影或子宫输卵管通液检查来诊断，至少 一侧输卵管通畅。 • 子宫发育正常或虽有异常但不影响人工授精的操 作和胎儿发育。 • 卵巢功能正常：激素测定正常，自然周期或促排 卵药物治疗后B超监测发现有直径大于18mm的 卵泡。
促排卵周期人工授精
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citoninreceptormRNAexpressionbycalcitoninduringhumanosteoclast-likecelldifferentia2tion.JClinInvest1995;95:167.31WalkerDGControlofboneresorptionbyhematopoietictissue.Theinductionandreversalofcongenitalosteopetrosisinmicethroughuseofboneandsplenictransplants.JExpMed1995;142:651.41LeeMY,EyreDR,OsborneWRIsolationofamurineosteoclastcolony-stimulatingfactor.ProcNatlaAcadSciUSA1991;88:8500.51NilssonSK,LieschkeGJ,Garcia-WijnenCC,WilliamsB,TzelepisD,HodgsonG,GrailD,DunnAR,BertoncelloIGranulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactorisnotre2sponsibleforthecorrectionofhematopoieticde2ficienciesinthematuringopopmouse.Blood1995;86:66.61OurslerMJOsteoclastsynthesis,secretionand
activationoflatenttransforminggrowthfactorbeta.JBoneMinerRes1994;9:443.71GrigoriadisAE,WangZQ,CecchiniMG,Hofstet2
terW,FelixR,FleischHA,WagnerEFc-Fos:akeyregulatorofosteoclast-macrophagelineagedeterminationandboneremodeling.Science1994;266:443.
精子运动对体外受精率、妊娠率的影响李丽莎 孙昭3成都市妇产科医院成都生殖与不孕研究所 成都610015
3四川大学基础医学与法医学院组织学与胚胎学教研室 成都610041
在体外受精—胚胎移植技术(InVitroFertilization-EmbryoTransfer简称IVF-ET)中,过去单纯考虑或更多的考虑卵子质量,是因为得到卵子比较困难,超排卵花费较高;胚胎学方面也较多地强调卵子在胚胎发育中占有的作用,所以人们常常忽视精子质量特别是其运动能力对发育的影响,越来越多的事实说明,精子对IVF-ET的成功率同样起到至关重要的作用。而在20世纪90年代产生的计算机辅助分析精子(ComputerAssistedSpermAnalysisCASA)技术则能比较准确地反映精子的运动特性。1 精子的产生、成熟、获能与受精精子由睾丸曲细精管的生精上皮产生。生精上皮由生精细胞和支持细胞(sertolicell)
组成,生精细胞包括精原细胞、初级精母
细胞、次级精母细胞和精子细胞。生精细胞越近管腔越趋成熟,最后经变成态为精子。此时的精子尚无受精能力,也无运动能力。在曲细精管内产生的精子被运送到附睾停留一段时间,达到生理成熟,此间由附睾上皮分泌一种糖蛋白叫前向运动蛋白,与精子表面的运动蛋白受体结合,使精子产生前向运动〔1〕,同
时,附睾头部分泌酸性糖蛋白与精子结合并定位与顶体及尾部,与精子将来在受精时附着于透明带上有重要作用。受精早期包括精子获能、精卵识别(或粘着)、顶体反应。精卵质膜融合受糖类调节,输卵管特异糖蛋白(COGP)对精子获能起直接作用,蛋白多糖
和氨基葡聚糖均可诱发精子获能〔2〕。精子表面的甘露糖配体的受体是其受精能力的分子标记物〔3〕,精子表面的去能因子可抑制它的
83
四川解剖学杂志 2002年第10卷第1期受精能力,去能因子包括放射冠穿透酶和顶体蛋白酶的抑制剂。目前研究认为〔4〕与去能因子相拮抗的物质为获能因子,来源于子宫内膜和输卵管的分泌物,可能是受激素支配的高浓度的离子、Β-淀粉酶、受分泌物激活的唾液酸苷酶和上面提到的蛋白多糖和氨基葡聚糖。有人认为〔5〕卵泡液也具有使精子获能的能力,卵泡越趋成熟则作用越强,还认为卵泡细胞分泌的氨基多糖也具有使精子获能的作用〔5〕。获能后的精子随即发生顶体反应,袁玉英等〔6〕用金黄地鼠做实验发现卵丘细胞及其胞外基质对精子获能、顶体反应起作用,诱发顶体反应,增强精子的受精能力。顶体反应时精子质膜与顶体外膜发生间断融合,出现许多小孔,顶体酶释放,分解放射冠,穿过透明带到达卵周隙,精子头的细胞膜与卵细胞膜融合,核和胞浆进入卵内,卵子迅速完成第二次成熟分裂,产生雌、雄原核——双原核,两个原核在中间靠拢,核膜消失,形成二倍体合子,进行新个体的第一次细胞分裂即第一次卵裂。2 人精子体外获能与体外受精精子在体外培养基中孵育一段时间后,和在女性生殖道内一样可以获能并具有受精能力。进入女性生殖道内的精子在阴道内可存活2.5小时,在宫颈、宫腔及输卵管可存活24或48小时,甚至72-96小时,它的存活与寿命受多种因素的影响,与精液质量、渗透压、个体差异有关,也与女方因素如激素水平、排卵期局部(输卵管、卵泡液等)条件有关〔7〕,还可能与顶体反应等获能状态有关〔8〕。精子在获能过程中除发生顶体反应和高活化外,还有一系列复杂的生理、生化、形态和功能等多方面的变化,也伴随着活精子密度、质量(运动性、活动性)和功能等多方面的变化。其结果直接关系到受精的能力和受精的潜能的大小。因此,对获能过程中精子活动和运动能力的了解则有着重要意义。测出一份精液标本中所存在的一群速度快、定向性好与受精密切相关的“快速运动群体”是至关重要的,因为精液中只有该群体(4.15%)才是完成受精精子的候选者所在〔8〕。人精子体外获能已在“试管婴儿”技术诞生前就产生,过去常用于宫腔内人工授精(IntrauterineInsem2
ination)技术,它针对男方精液存在抗精子抗
体(AsAb)或液化时间不正常等而采用体外
精液洗涤技术,去除抗精子抗体,增强精子的活力后再注入受术者宫腔内达到使其怀孕的目的,这一技术实际是将精液中很少的“快速运动群体”数量提高,同时也提高它们的运动速度。随着IVF-ET技术的发展,对精子体外获能技术的要求也提高了,并有了深入的研究,有人认为梯度离心法可以获得形态好、运动速度快的精子〔9〕,也有人认为上游法
(swimming-up)能获得顶体完好的精
子〔10〕。过去认为〔11〕在洗涤液中加入白蛋白即能受精,现在的观点是〔12〕精子的体外获能还与洗涤液的改变以及在其中加入精子代谢需要的能量物质,如丙酮酸钠(NaPyruvate)
、
葡萄糖(Glucose)
,从而使其获得更强的运动
能力。张树成等〔13〕研究了体外获能中精子运动的变化和丧失运动能力的时间。他认为用普通培养基比高渗培养基更利于精子获能,
无论是获能开始时活力和速度提高的程度,
还是48小时中的降低程度,均是普通培养基好于高渗培养基,随获能时间的延长这种差别越来越大。他还观察到获能开始时活力的提高程度大,但获能48小时中其降低程度也快,并且随获能时间的延长活力降低程度越来越快,同时这种降低是前向运动能力的减弱或丧失,是高活力和良好活力精子首先减少,而其活动性不会丧失,即精子活动和运动能力先是活力降低,再是速度降低。因此,一93
四川解剖学杂志 2002年第10卷第1期般认为体外获能后6小时精子活力较好〔14〕。他还研究了精子获能后48小时中活率与运动指数的变化同体外受精能力的关系,报告了不同获能时间以及不同活力精子的不同受精率,说明了它们的相关性,表明精子穿过放射冠、透明带进入卵内完成受精过程,要求精子有良好的运动能力。精子活动时,在运动能力的分析指标中,优秀快速前向运动的高活力指标是介于100Λms-60Λms的精子数目和这些精子的速度(v)是评价精子获能、寿命、存活最有用的参数,成功的受精其精子受精潜能在很大程度上不仅靠精子的数目、形态,更靠精子的运动速度即动力学特征〔15〕(thecharacteristicsofkinetics)。3 精液分析和精子动力学分析过去通常根据WHO的标准〔16〕用人工分析,其结果主观性强,缺乏准确性,重复性差。Jequier和Ukomber〔17〕的研究表明26位观察者对同一份精液标本中活动精子的百分率的评价结果低者是30%,高者为80%,相差很大。比较精确地分析精液和精子运动从而达到对男性生育力的正确评估。黄宇烽等〔18〕对中国男性精液常规及运动轨迹做了一个分析,正常育龄的男性平均精子密度66.35±20.09×10ml,精子直线运动、锯齿型运动的平均速度为26.24±0.48Λms;不育男性则是23.32±0.42Λms,有显著差异。Makler〔19〕发明了一种计算盘,采用相差显微镜经多次曝光来对精子运动轨迹进行分析;国内徐进平等〔20〕通过Makler计算盘测定精液,报告了我国正常男性在春夏秋冬季的精子平均运动速度正常值分别是24.60±2.10Λms、30.90±3.0Λms、31.20±2.70Λms、23.50±2.20Λms;通过这种方法了解到冬春与夏秋季节对精子运动轨迹有明显影响;春季与冬季,夏季与秋季精子运动速度无显著差异;生育年龄、禁欲时间对精子运动无影响,表明男性生育旺盛时期(21-48岁)睾丸功能相对稳定,人类生殖无季节变化。后来接着产生了一种对精子无损伤,更准确地分析精子活力的方法,激光散射配计算机来测量精子的运动情况的技术〔21〕。但目前计算机辅助分析精子(ComputerAssistedSemen
AnalysisCASA)技术
〔22〕〔23〕是更为优越性,
它的运动参数:曲线运动速度VCL;直线运动速度VSL;平均路径速度VAP;直线性LIN;前向性STR;摆动性WOB;鞭打频率BCF;平均移动角度MAD;精子侧摆幅度ALH以及VAP>0的精子密度,均可反映精子的状况。其中VCL、VSL、VAP、LIN参数与受精能力相关〔24〕〔25〕,吴立君等〔26〕在研究人、家兔、大鼠和小鼠附睾精子运动能力的分析,人附睾体部与尾部的精子的VCL、VSL、VAP、LIN、STR比头部的都有显著增加,其尾部的精子在运动速度和直线性方面的增加最显著,表现出运动能力的增强而这些参数值的增加,这也充分说明了它们之间的相关性。精子的运动包括两方面的内容,即精子运动的速度和精子运动的方式(直线性),不同动物精子在各自附睾成熟过程中,其运动能力即以上这两方面的参数发展不平行,如家兔,从附睾头部到体部主要增加的是直线性(STR、LIN);大鼠的附睾尾部精子运动速度