常用饲用酶制剂检测方法介绍(业界精制)
食品中酶活性的测定方法与作用评价
食品中酶活性的测定方法与作用评价食品中的酶活性是指食品中含有的酶的活性水平。
酶是一种能够加速化学反应速率的蛋白质分子，它们在生物体内起着至关重要的作用。
在食品中，酶的活性对于食品的品质、储存和加工都有着深远的影响。
因此，准确测定食品中的酶活性，并评价其对食品的作用，对于食品工业及消费者来说都具有重要意义。
目前，常见的测定食品中酶活性的方法主要有两种，分别是酶动力学法和酶质谱分析法。
酶动力学法通过测定酶催化反应速率的变化来间接测定酶的活性。
首先，确定反应所需的底物和酶的适宜浓度，然后通过改变反应体系中底物或酶的浓度，观察反应速率的变化。
利用这种方法，可以推算出酶的催化反应速率常数和底物的最大转化速率。
最常用的是Michaelis-Menten动力学方程和Lineweaver-Burk双倒数图法。
酶动力学法可以测定食品中多种酶的活性，并通过调整酶活性来改善食品的加工性和品质。
酶质谱分析法则是通过质谱仪的技术手段直接测定酶的活性。
质谱仪是一种能够测定物质分子质量的仪器，通过将食品样品中的酶分子离子化，并根据其质量比例进行分离和测定。
这种方法具有高灵敏度和高分辨率的特点，可以在食品中快速、准确地确定酶的活性水平，但由于设备复杂和价格昂贵，应用较为有限。
无论使用何种方法进行酶活性的测定，评价酶在食品中的作用都是至关重要的。
首先，酶活性的测定可以评价食品的新鲜度。
以水果为例，水果中的酶在成熟过程中发挥着重要的作用。
通过测定水果中的酶活性，可以了解水果的成熟程度和品质。
当果实成熟时，酶的活性会降低，从而导致果肉变软、变甜。
相反，当果实过度成熟或腐烂时，酶活性将会增加，导致果肉褐变和气味恶化。
因此，通过监测酶活性可以及时评估水果的新鲜度，对于确定最佳食用时机具有重要意义。
其次，酶活性的测定可以评价食品的加工品质。
食品加工过程中，酶常常被用于提高食品的口感和质感。
以面包为例，加入面团中的面包酵母能够产生酶来催化面团中的淀粉转化为糖，从而使面包更加松软和香甜。
猪群饲养中的饲料质量检测方法
猪群饲养中的饲料质量检测方法引言：猪群的饲料质量对于猪的生长和健康起着至关重要的作用。
因此，为了保证猪的生长和养殖效益，合理的饲料质量检测方法至关重要。
本文将介绍几种常用的猪群饲养中的饲料质量检测方法。
一、理化指标检测理化指标检测是目前最常见的一种饲料质量检测方法之一。
通过对饲料样品的理化指标进行检测，可以直观地了解饲料的营养成分、含水量、微量元素等情况，从而判断饲料的品质。
1. 水分含量检测水分含量是饲料中最基本的理化指标之一，也是了解饲料中水分状况的重要指标。
常用的水分含量检测方法有烘箱法、光波法、滴定法等。
其中，烘箱法是最常用的水分含量检测方法之一，通过将饲料样品放入烘箱中加热，待样品中的水分蒸发殆尽后，称取样品的质量差值来计算水分含量。
2. 粗蛋白含量检测粗蛋白是饲料中重要的营养成分之一，对于猪的生长发育具有重要意义。
粗蛋白含量的检测方法有凯杰氏蛋白测定仪法、乳酸消解法等。
其中，凯杰氏蛋白测定仪法是最常用的粗蛋白含量检测方法之一，通过将饲料样品与一定的试剂混合反应，然后利用光度计检测反应液的吸收值，进而计算出粗蛋白的含量。
3. 钙、磷含量检测钙和磷是猪生长过程中必不可少的微量元素，对于猪的骨骼生长和牙齿健康起着重要作用。
钙、磷含量的检测方法有酸溶剂法、石蜡法等。
其中，酸溶剂法是最常用的检测方法之一，通过将饲料样品与硫酸、盐酸等试剂混合反应，然后通过滴定法测定酸溶液的酸度，然后根据一定的计算公式来计算钙、磷的含量。
二、显微镜检测显微镜检测是一种常用的饲料质量检测方法之一。
通过观察饲料样品的显微结构，可以了解饲料的纤维含量、颗粒度等情况，从而判断饲料的质量。
1. 纤维含量检测纤维是饲料中的一种重要成分，对于猪的消化吸收起着重要作用。
纤维含量的检测方法有酸洗法、酶解法等。
其中，酶解法是最常用的纤维含量检测方法之一，通过利用化学方法将饲料样品中的纤维分解成可溶性和不可溶性纤维，然后通过一系列的过滤、洗涤等步骤，最后用显微镜观察并计算纤维含量。
酶制剂发酵产品检验—糖化酶糖化酶活力测定
糖化酶在工业生产中的应用
糖化酶是淀粉糖化发酵生产酒精和葡萄糖浆的主要 酶类。特别是酿酒酵母利用淀粉原料发酵时，淀粉 液化后的糖化作用是必不可少的工序，因为大多数 酿酒酵母只能利用可发酵的糖进行酒精发酵。
糖化酶不仅用于酒类、酒精生产和葡萄糖浆的制取， 还广泛地用于抗生素、氨基酸、有机酸的生产。糖 化酶是我国产量最大、应用最广的酶制剂之一。
作用生成I2:
NaIO3 +5NaI +6H2SO4=3I2 +6Na2SO4+3H2O
5.析出的I2 可用标准Na2S2O3 溶 液滴定之:
注释
在这一系列的反应中，1mol葡萄糖与1mol NaIO作用，而1molI2产生1molNaIO，因此， 1mol葡萄糖与1molI2 相当。只要得出对照 组和实验组所消耗的硫代硫酸钠体积，两者 相减就可以得出与葡萄糖反应的那部分次碘 酸钠的量，从而可以确定酶解生成的葡萄糖 的量，从而计算出酶活。
1.2
2、糖化酶活力测定
❖ 将糖化酶粉剂或浓缩液稀释至20~40单位/毫升，制成酶制备； ❖ 取甲、乙两比色管（50毫升），分别加入2%可溶性淀粉溶液
25ml和0.1M醋酸-醋酸钠缓冲溶液5ml，摇匀，放入40℃士 0.2℃的恒温水浴锅中水浴5-10分钟；在甲管中加酶制备液 2ml,摇匀，并记录时间，反应10分钟后,立即加入20% NaOH溶 液0.2毫升,摇匀；将两管取出冷却,并于乙管中补加入酶制备 液2毫升(作为空白对照) ； ❖ 取上述反应液2毫升放于盛有2毫升3,5一二硝基水杨酸的25毫 升比色管 中,按工作曲线的步骤以乙管为空白测其吸光度。 由吸光度值从工作曲线上查得葡萄糖的毫克数,再按下面的公 式计算酶活力单位。
本试验测定糖化酶活力采用次碘酸钠法。糖化酶 以可溶性淀粉为底物在一定条件下（pH范围是4～6, 温度范围是40～60℃）进行反应，生成的葡萄糖用 次碘酸钠法定量测定。以单位时间内分解α–１， ４糖苷键生成葡萄糖所需的酶量为酶的活力单位。
饲料中植酸酶活性检测方法的比较与研究
饲料中植酸酶活性检测方法的比较与研究植酸酶是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶。
植酸酶具有特殊的空间结构，能够依次分离植酸分子中的磷，将植酸（盐）降解为肌醇和无机磷，同时释放出与植酸（盐）结合的其它营养物质。
由于植酸酶可将底物植酸钠水解，生成正磷酸和肌醇衍生物，并在酸性溶液中与钒钼酸铵生成黄色的复合物，因此，在波长 415 nm 下进行比色，可测定植酸酶活性。
目前已形成国标GB/T 18634—2009《饲用植酸酶活性的测定分光光度法》。
但是，饲料中植酸酶活性的测定却存在以下问题：①由于植酸酶在饲料中的添加量较低，现有方法不能将饲料中的植酸酶完全浸提出来；②饲料中存在大量物质可在酸性条件下与钒钼酸铵发生显色反应，干扰 415 nm 波长下的比色反应，从而影响酶活测定。
本实验旨在研究现有饲料中植酸酶测定方法的优势与缺陷，并寻找有效的检测途径。
1 材料与方法1.1 主要试剂与仪器1.1.1 仪器分析天平；恒温水浴锅；分光光度计；磁力搅拌器；涡流式混合器；酸度计；离心机：转速为4 000 r/min以上；超声波溶解器；回旋式振荡器；透析袋（截留分子量 1 万、10 万和 30~100 万）；超滤离心柱（YM-30，密理博公司生产）。
1.1.2 试剂植酸酶：市售商品，酶活 5 000 U/g，酶活定义参照GB-T 18634—2009。
饲料：市售商品蛋鸡料，原配方中不含植酸酶。
磷酸二氢钾（KH2PO4）基准物。
乙酸缓冲液（1），c (CH3COONa) =0.25 mol/l：称取20.52 g 无水乙酸钠于 1 000 ml 烧杯中，加入 900 ml水搅拌溶解，用冰乙酸调节pH 值至（5.50±0.01），再转移至 1 000 ml 容量瓶中，并用蒸馏水定容至刻度；室温下存放 2 个月内有效。
乙酸缓冲液（2），c(CHCOONa) =0.25 mol/l：称取20.52 g 无水乙酸钠，0.5 g 曲拉通 X-100 （Triton X- 100），0.5 g 牛血清白蛋白（BSA）于 1 000 ml 烧杯中，加入900 ml 水搅拌溶解，用冰乙酸调节 pH 值至（5.50±0.01），再转移至 1 000 ml 容量瓶中，并用蒸馏水定容至刻度；室温下存放 2 个月内有效。
关于饲用酶制剂活性测定影响因素的分析
态 。这些都 直接影 响 酶和底物 的亲和 力 ， 响酶解反 影
应速度 （ 王静， ０ ； ２ ３ 李险峰， ０ ） 据 文献报道 ， 多酶 ０ ２ Ｏ。 ０ 很 的最 适酶解 ｏ Ｈ值 都在 ３ ～ ． 间 （ Ａ Ａ Ｒ ， ．６ ０ ０之 Ｎ Ｋ ＭＵ Ａ Ｔ
汪勇、 李富伟 ， 单位及通讯地址 同第一作者。
酶、 纤维素 酶 、 一 Ｂ 葡聚糖酶 活性的测定 方法 。另外 ， 许 呈水平 状态 ： ４ 、５ ５ 在 ０ ４ 、０℃条件 下 ． 相对酶 活分 别 其 为 ５ ％ 、０ 、０ 而 当温度 大于 ５ ６ ７ ％ ８ ％． ８℃以上时 相对 酶
多企事业单 位也制定 了其它酶 制剂活性 的测定方 法 。
用酶 制剂 活性 单位 定义 中对 影 响酶 活 大小 的主 要 条 个方 面 ：①过 酸或过 碱可 以使酶 的空 问结构 破坏 ， 引
也 件进行 了规定 ， 中包 括温度 、Ｈ值 、 其 ｐ 时间 和底物 ， 这 起酶 构象 的改变 ， 影 响酶活性部 位催化 基 团和结 合
些都是 酶活性测 定系统 中最重 要 的因素 ， 酶促反 应 基 团的解离状态 ， 对 使酶活性 丧失 ； 当 ｐ ② Ｈ值改变不是
加快 ； 另一方 面 由于随着 温度 的升高将使 酶 的稳定性
下降， 分酶蛋 白分子逐 渐变性 而失 去活性． 部 引起 酶反 反应 的“ 适温度 ” 对 于不 同的酶制 剂在不 同的情 况 最 。 下最 适温度 有一定 的差别 。研究木 聚糖 酶时发 现 ， 在 ３ ～ ０℃条件 下酶活 较稳定 ， ０４ ５ ０℃后 随着 温度 的升高，
收稿 日期 ： ０ ７ １ － ７ ２ ０ — １ ２
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汤海鸥等： 关于饲用酶制剂活性测定影响遏盘 １９ ）研 究不 同 ｐ ９７ 。 Ｈ值 对嗜热 毛壳 菌木聚糖 酶活性 的
饲用木聚糖酶、β—葡聚糖酶活力测定方法的调研
前 言
饲 用 酶 制 剂 在 畜 牧业 上 的广 泛 应 用 使 酶 质
量 的度量 问题 显得 格 外 重要 。酶 活 的测 定方 法 和 酶活 的定 义 密 切相 关 。 为 了适 应 市 场 的需求 ，酶
件 做 了许 多试 验 。Ｂ ｄｏｄ １９ ） 不 同酶 种在 不 ｅｆｒ（９ １对
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＜ 料 角 ２０ 年 ５ 饲 广 ｝ ２ 第１期 ０
斟 技 钡 野
饲用 木聚糖 酶 、 一葡 聚糖 酶活力 测定 方法昀 调研 １ ３
王在 贵 － 张 宏福 何瑞 国 －
（－ 中国农业科 学院畜牧研究 所 ； 华 中农业 大学动物科技学 院） ｚ
学 者 的认 可 。 ３ 酶 底 物 的选 择 及底 物 浓 度 ．
＜ 料 角 ２０ 年 ５ 饲 广 ｝ ２ 第１期 ０
缓 冲 液 及 其 浓 度 的 选 择 对 反 应 体 系 的 离 子 强
电 ： １ ６ ７ ６ ６１ ４０６１ ４ ２ ５ ３ 话（０ ８ ５ ６ ２ ５ ２ ５ ２６ ４ ６ ０ ）９ ８ ４ ６ ４ ６ １４
传 ：１） １ ４ 真 （０ ２ ２ １ ０ ６７ ０
团
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科 技 钡 野
由表 ２可 知 ，国内外 各单 位对 酶 活 测定 的温 度 一 般 都选 在 ４ ％或 ５ ℃ ， ０ Ｏ 由于动 物 消 化道 的温 度接 近 ４ ℃ ，所 以在 ４ ℃ 条件 下 测 定酶 的 活性 ， ０ ０ 比较 接 近 酶 的生 物学 活 性 。这 一观 点 已得 到许 多
ｐ ５３ ｐ ４ ５ Ｈ ． ，Ｈ ． ｐ ４ ６，Ｈ ． ，Ｈ ． ｐ ４ ８ Ｈ ． ｐ ５ ０ ｐ ７ ２，Ｈ ．
测定方法 的条件都 未统 一 ， 酶活测定方法 的统一存在 一定
酶活测定方法
、酶活测定方法还原法酶与底物在特定的条件下反应,酶可以促使底物释放出还原性的基团。
在此反应体系中添加化学试剂,酶促反应的产物可与该化学试剂发生反应,生成有色物质。
通过在特定的波长下比色,即可求出还原产物的含量,从而计算出酶活力的大小。
色原底物法通过底物与特定的可溶性生色基团物质结合,合成人工底物。
该底物与酶发生反应后,生色基团可被释放出来,用分光光度法即可测定颜色的深浅,在与已知标准酶所做的曲线比较后,即可求出待测酶的活力。
粘度法该法常用于测定纤维素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶的活力。
木聚糖和β-葡聚糖溶液通常情况下可形成极高的粘度,当酶作用于粘性底物时木聚糖和β-葡聚糖会被切割成较小的分子使其粘度大为降低。
基于Poiseuille定律我们知道,只要测定一定条件下溶剂和样品溶液的运动粘度,便可计算特性粘数,并以此来判断酶的活力。
高压液相色谱法酶与其底物在特定的条件下充分反应后,在一定的色谱条件下从反应体系中提取溶液进行色谱分析,认真记录保留时间和色谱图,测量各个样的峰高和半峰高,计算出酶促反应生成物的含量,从而换算出酶活力的数值。
免疫学方法常用于酶活性分析的免疫学方法包括:免疫电泳法、免疫凝胶扩散法。
这两种方法都是根据酶与其抗体之间可发生特定的沉淀反应,通过待测酶和标准酶的比较,最终确定酶活力。
免疫学方法检侧度非常灵敏,可检侧出经过极度稀释后样品中的酶蛋白,但其缺点是不同厂家生产的酶产品需要有不同特定的抗体发生反应。
琼脂凝胶扩散法将酶作用的底物与琼脂混合熔融后,倒入培养皿中或载波片上制成琼脂平板。
用打孔器在琼脂平面上打出一个约4-5mm半径的小孔。
在点加酶样并培养24h以后,用染色剂显色或用展开剂展开显出水解区,利用水解直径和酶活力关系测定酶活力。
蛋白酶活力测定法本方法适用于酿造酱油时在制品菌种、成曲的蛋白酶活力测定。
1 福林法1.1 试剂及溶液: 以下试剂都为分析纯1.1.1 福林试剂(Folin试剂):于2000mL磨口回流装置内,加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g,钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g,蒸馏水700mL,85%磷酸50mL,浓盐酸100mL,文火回流10h。
一些酶常用活力测定方法
一些酶常用活力测定方法
• 一、—淀粉酶的活力测定 • —淀粉酶的测定方法很多，活力单位的定义差别 很大。现介绍国内外常用的几种方法。 • 1 、 消色法：这是我国常用的 — 淀粉酶测定方 法。在 pH6.0 ， 60℃条件下，每小时催化 1g 可溶 性淀粉成为糊精的酶量为1个酶活力单位。 • 2、 • 3、MMU法：美国Miles公司采用的方法，以30min 内催化可溶性淀粉生成1mg麦芽糖所需的酶量为1 个酶活力单位（麦芽糖单位；MMU）
酶反应速度和底物浓度的关系
V 反应速度
Vmax
1/2Vmax 混合级反应
零级反应
一级反应
Km
[S] 底物浓度
米氏方程
• v=Vmax[S]/(Km+[S]) • Km为酶反应速度达到最大反应速度一半 时的底物浓度，为酶的特征常数。 • 同一酶对不同底物Km不同。 • Km最小的底物为该酶的最适底物。
切勿反復 凍結-解凍。
酵素失活的原因
• • • • • 可歸類成如下的物理性或化學性原因。 (1) 蛋白質 變性： (2) 酵素 活性區 破壞： (3) 蛋白脢 水解： (4) 酵素 抑制劑：
酶反应速度曲线
产 物 浓 度 斜率＝浓度/时间＝V 时间
酶反应速度可以通过单位时间内，单位体积中底物的减少量 或产物的增加量来表示。
1、一般的连续法
• A 光谱吸收法 • 该法主要指分光光度法和荧光法。分光 光度法是利用反应物和产物在紫外和可 见光部分光吸收不同，选择一适当的浓 度，连续测定读出反应过程中光吸收的 变化。该法适用于一些反应速度较快的 酶。自动记录仪的普遍使用使该法更容 易被人们接受。
• 脱氢酶以NAD+或NADP+或作为辅酶，反应中形成 NADH或NADPH ，340nm处可以观察到光吸收的变 化。 • NAD （ P ） H 在 340nm 处吸收光后发射出 460nm 的 光。因而，需这两个辅因子的任何反应都可用 荧光法测定。