血糖测定-邻甲苯胺
血清葡萄糖浓度的测定
2. 葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)
葡萄糖氧化酶GOD (glucose oxidase) 将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧 化氢。过氧化物酶POD (peroxidase)将过氧化氢分解为水和氧，并将无色的4氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物(Trinder反应)，其红色深 浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。
• 空腹血糖损害IFG (impaired fasting glucose) 和糖耐量减退IGT (impaired
glucose tolerance) 是正常向糖尿病的过渡状态，这部分人虽然现在还不是糖尿
病， 但是将来发生2型糖尿病的危险性非常高，可以说是糖尿病的后备军。据
有关研究报道，每年5-8%的 IGT者将发展成为2型糖尿病。
人体对糖的耐受现象 OGTT为口服葡萄糖负荷试验，可了解人体进食葡萄糖后的血
糖调节能力，早期发现糖代谢异常，早期诊断糖尿病，是一种简
单、快捷的诊断方法。 OGTT重复性差，操作繁琐，并非必需的糖尿病诊断方法，因 此不推荐临床常规应用。
方法：试验前三天，受试者每日食物中糖含量不应低于150 g，且维持正常活 动。影响试验的药物应在三天前停用，受试前应空腹10-16 h。空腹取血后，5 分钟内饮入250 mL含75 g无水葡萄糖的糖水(妊娠妇女用量为100 g，儿童按1.75
实验步骤
B S T
工作液 dH2O
葡萄糖标准液 血清
1.00 mL 10 uL
-
1.0 mL 10 uL -
1.0 mL 10 uL
混匀， 37C， 15 mins dH2O 0.50 mL 0.50 mL 0.50 mL 混匀，以B管调零，在510nm波长处读取S管和T管的吸光度. 计算:
生化实验血糖的测定
注意事项
正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液 应占比色皿的2/3。
血糖测定应在取血后2小时内完成，放置太久，血 糖易分解，故使含量降低。
酶酚混合液一般现用现配。
补充实验
测2-3名同学早餐后和空腹血糖的 水平，并比较二者之间的区别。
使用怡成JPS-5型血糖仪。
小结
1、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法 测定血糖的原理。
葡萄糖氧化酶法4氨基安替吡啉苯酚葡萄糖酸h葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶godgod红色醌式物质过氧化物酶过氧化物酶podpodtrindertrinder反应反应505nm光吸收法测定光吸收法测定相对血糖浓度相对血糖浓度分光光度技术分光光度技术电泳技术电泳技术层析技术层析技术离心技术离心技术生物化学的四大研究技术
评价
结果较可靠、但邻-甲苯胺须蒸馏后使用，有毒性。
空腹正常血糖参考值
3.9~6.1mmol/L或70-110mg/dL
葡萄糖氧化酶法：该法特异性高，反应条件温和，能 反映血中葡萄糖的真实含量，且已推广出试剂盒， 广泛应用与临床。
Folin-Wu法：该法对葡萄糖无特异性，一切还原物质 均可产生同样的反应。虽血液中葡萄糖为主要还原 物质，但仍存在其他非糖还原物质，故该法其参考 值较其他方法略高。
2、分光光度计的正确使用。 3、实验操作中存在的问题。
其他常用血糖测定方法介绍
葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法 Folin-Wu法 邻-甲苯胺法
Folin-Wu法
原理 葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使 Cu2+还原成 Cu+ ，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过 比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量。
邻-甲苯胺法：该法涉及强酸、加热等反应条件，不 便于大规模检测，且使用的试剂具有毒性，临床和 科研上已很少采用。
临床常用生化检测(诊断学)
退 饮水过多
第五节 心肌酶和心肌蛋白检测
心肌酶和心肌蛋白对急性心肌堵塞的诊断特殊重要。 ① 心肌酶：心肌内含有多种酶，留神肌损伤时，它可释放 入血，使血内相应酶活性增高 ② 心肌蛋白：重要的有肌钙蛋白T、肌钙蛋白I和肌红蛋白等
【临床意义】
• HDL↑
– 防止动脉粥样硬化，与冠心病发病呈负相关 – 慢性肝炎、肝硬化等
• HDL↓
– 动脉粥样硬化 – 糖尿病、肾病综合征等
【评价】影响血浆HDL-C水平的因素主要有： ①年龄和性别 ②种族 ③饮食 ④肥胖 ⑤饮酒与吸烟 ⑥运动 ⑦药物 ⑧疾病
低密度脂蛋白 (low density lipoprotein, LDL)
脂蛋白(a) [lipoprotein(a), LP(a)]
• 有促CHO沉积作用 • 与纤溶酶原有同源性 • 受性别、饮食、环境影响小 • 动脉粥样硬化和血栓形成的独立危急因子
【参考值】 0-300mg/L
【临床意义】
• LP(a)↑ • 早期识别动脉粥样硬化的危急性 • 与冠心病、中风、PTCA术后再狭窄亲密相关 • 1型糖尿病、肾脏疾病、炎症、手术等 • LP(a)↓ • 病理性减低 肝脏疾病〔慢性肝炎除外〕
临床较少见 病因 水丧失过多：出汗过多、烧伤、长期腹泻、呕吐、
糖尿病 水分摄入缺乏：昏迷，进食困难等。 内分泌疾病：肾上腺皮质功能亢进症、醛固酮增多
症、肾小管排钾保钠 钠摄入过多：高钠血症使细胞外液渗透压上升，细
2、低钠血症〔Hyponatremia〕 ： 血清Na+< 135mmol/L
丧失过多 肾性缘由：渗透性利尿、慢性肾功衰多尿期等 非肾性缘由：如呕吐、腹泻、胃肠引流、大量出
葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法) 产品说明书
葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine法)产品编号 产品名称包装 S0201S 葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法) 200次 S0201M葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法)1000次产品简介：葡萄糖检测试剂盒(O-toluidine 法) (Glucose Assay Kit with O-toluidine)是一种基于葡萄糖与邻甲苯胺的显色反应，通过比色法超高灵敏度、超宽线性范围检测血清、血浆、尿液、细胞或组织裂解液、饮料等溶液中葡萄糖含量的试剂盒。
本试剂盒灵敏度高、线性范围极宽、使用便捷。
本试剂盒对于在5-10,000mg/dl (相当于约0.28-550mM)范围的葡萄糖内有良好线性，并且具有操作便捷、显色稳定、无需煮沸、成本低、适合高通量检测等优点。
本试剂盒检测下限可以达到5mg/dl (20µl 样品)，相当于50ng/ml 或278µM ；检测上限可以达到2000mg/dl (5µl 样品)或10,000mg/dl (1µl 样品)，相当于20mg/ml (约111mM)或100mg/ml (约555mM)。
本试剂盒既可以轻松检测正常血样中的葡萄糖浓度，也可以检测高血糖血样品。
市售常见血糖仪的葡萄糖浓度检测范围约为1-30mM ，相当于约20-600mg/dl ，在检测一些过高血糖或过低血糖样品时会存在困难，而本试剂盒提供了5-10,000mg/dl (相当于约0.28-550mM)极宽的葡萄糖浓度检测范围。
本试剂盒所需样品体积小。
本试剂盒推荐的样品用量为5-20µl ，也可以使用如1-2µl 或更小体积的样品。
本试剂盒特异性好。
与常用的葡萄糖氧化酶-过氧化酶偶联(GOD-POD)法相比，由于邻甲苯胺试剂只与醛糖显色，且不受其它还原性物质的影响，本试剂盒非常适合血清、尿液等溶液中葡萄糖浓度的检测。
葡萄糖(glucose)，也被称为dextrose 或grape sugar ，被认为是自然界中分布最广且最为重要的一种单糖。
血糖测定方法研究进展
血糖测定方法研究进展关键词血糖测定方法研究进展据世界卫生组织估计，全世界目前有超过1.5亿糖尿病病人，我国糖尿病病人人数已超过5000万，是世界上糖尿病人数最多的国家之一。
并且以每年150万-200万的新增病人数迅猛上升，糖尿病已成为发达国家中继心血管病和肿瘤之后的第三大非传染性疾病，因此，积极防治糖尿病显得十分重要。
从19世纪后期人们了解到血糖的浓度与糖尿病的关系以后，建立了血糖测定的方法。
并不断的改进与发展。
正是血糖测定方法的建立、改进和发展，使得人们对糖尿病的诊断有了明确的指标。
血糖测定的方法的应用也越来越广泛、越来越便捷。
随着人们对血糖水平与并发症之间的联系的深刻认识，从而产生了控制血糖的强化治疗方案，正是血糖测定的方法的建立、改进和发展才使得血糖监测成为现实，为控制血糖的强化治疗方案提供保证。
正是血糖测定的方法的建立、改进和发展才使得糖尿病的诊治更精确、前景更美好。
下面就其发展作一概述：1 实验室静脉血浆或血清葡萄糖测定1.1 斑氏法1908年斑氏(Benidict)首先建立了血糖测定方法，即斑氏法。
1.2 福林-吴氏法Folin-Wu) 通过不断的改进及发展1920年出现了最有代表性的福林-吴氏法Folin-Wu)这是血糖测定的经典方法，连续沿用了近五十年，但该方法最大的缺点是测出的结果比血液葡萄糖的真实值偏高10%-15%。
1.3 邻甲苯胺法1959年由Dultman提出该方法比福林-吴氏法Folin-Wu)的特异性还高，测定结果更准确。
但该方法中使用的试剂邻甲苯胺有毒，冰醋酸有较强的刺激气味，对人和仪器都有影响并不能在自动生化仪上使用。
1.4 葡萄糖氧化酶血糖测定方法该方法20世纪70年代由国外开始使用。
80年代初国内开始使用，随后在全国广泛推广。
该方法具有专一性强，特异性高，操作方便，结果准确，能在自动生化仪上使用的优点。
被作为国际公认的诊断糖尿病的唯一的测定方法。
该方法采取从体内抽取静脉血，属于有创测定，成为该法的缺点，不仅给病人带来一定的痛苦还会增加伤口局部感染甚至传染上其它疾病的机会，给病人增加了额外的心理负担。
血糖测定
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［血糖］后-［血糖］前
2、注射肾上腺素后血糖浓度增高率=-------------［血糖］前 ×100%
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四、注意事项
1、每人做1份（4支试管：正、肾、标、 空）
2、本实验加入血清样品为0.02毫升，注 意沾在试管壁的样品用酶酚混和试剂冲下， 并充分混匀。 3、移液器使用的注意事项
（4）、生长素
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其中肾上腺素是强有力的升高血糖的 激素。肾上腺素的作用机制是通过肝、肌 肉的细胞膜受体，CAMP、Pr激酶级联激活 磷酸化酶，加速糖原分解（主要在应激状 态下发挥调节作用）。
2、降低血糖的激素：胰岛素（体内唯一）
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六、本实验原理
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葡萄糖氧化酶（glucoe oxidase GOD） 利用氧和水将血清中葡萄糖氧化为葡萄糖酸， 并释放过氧化氢。过氧化物酶（peroxidase POD）在色原性氧受体存在时将过氧化氢分 解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替 比林和酚去氢缩合为红色醌类的衍生物，即 Trinder反应。 红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量 成正比。
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尿糖的测定（班氏试剂法）
尿糖是指尿中的葡萄糖。正常情况下尿液中 无糖，原尿由肾小球滤过，由肾小管重吸收。当 血糖浓度持续升高，超过肾小管重吸收的能力 （超过了肾糖阈），出现糖尿。 本实验是根据G的还原性设计的。G分子中含 有半缩醛羟基，在热碱性溶液中可将硫酸铜(二 价)Cu还原为氧化亚铜(一价Cu)，生成砖红色沉淀。 其颜色随还原性物质的多少而不同。此法属于半 定量检查，肉眼观察结果，初略判断相当于G的 含量。详见讲义表格。
糖尿病实验室检查
糖尿病实验室检查一、血液检查1、血糖正常值：空腹血糖为3.9～6.1mmol/L;餐后2小时血糖为5.0～7.8mmol/L。
血糖测定在糖尿病的诊断和病情监控方面有着重要的价值，血糖水平是判断糖尿病的唯一标准。
血样标本不同，测定方法不同，血糖的正常值也不同，应注意鉴别。
1)血标本采集血标本来源分静脉血、动脉血和毛细血管，又可分为空腹及餐后（葡萄糖负荷后）血。
无论空腹血和餐后血，在我国血糖测定主要以静脉血为主，毛细血管末梢血为辅，而动脉血应用较少。
耳血、趾血或手指血是微血管血，接近于动脉血，清晨空腹的微血管全血血糖数值基本上与静脉血的血糖相符，口服葡萄糖2小时后的微血管全血血糖比静脉全血血糖值高1.03mmol/L甚至更高，因此尽可能采用静脉血。
静脉血又分为全血、血浆及血清，血浆和血清血糖比全血血糖能更好地反映细胞外液的葡萄糖含量，因为全血含有红细胞，红细胞内含水比血浆少，而葡萄糖是溶于水的，全血内红细胞的葡萄糖被利用，因此全血血糖比血浆血糖值低15％左右，现多采用血浆测定血糖，不少医院采用静脉血清，其测定值与血浆相当。
毛细血管末梢血测定值一般不可用于糖尿病的诊断，但可用于人群糖尿病普查，筛选及患者自我监测，目前发达国家普遍采用血糖仪测定毛细血管血糖，在我国已经开始推广应用，这种仪器体积小、便于携带、快速，较为准确，缺点是试纸条价格贵、保存期短，一般毛细血管血糖值比静脉血浆血糖值低。
血标本采集后应立即测定血糖，若不能及时测定应分离血浆（或血清）冷冻保存。
一般室温下血标本中的血糖以每小时0.4mmol/L的速度氧化降解，于4℃时每小时降解0.11mmol/L，在夏季气温很高时血糖降解更快，医生和患者在分析血糖结果时要考虑这些因素。
2）血糖测定方法从测定原理上讲血糖测定有两类化学反应法，包括3种方法：①葡萄糖氧化酶法：利用葡萄糖与葡萄糖氧化酶之间的化学反应来测定葡萄糖浓度，该方法测定的糖为葡萄糖，不与其它糖发生反应，因此准确、可靠，目前国内已较广泛推广应用。
生化实验试题参考
生化实验试题参考生物化学实验二、填空题：1. 测定蛋白质含量的方法有(双缩脲法)， (紫外吸收法)，( Folin-酚试剂法（或Lowry法） )和（考马斯亮蓝G-250染色法）。
2. CAT能把H2O2分解为H2O和O2，其活性大小以（以一定时间内分解的H2O2量）来表示，当CAT与H2O2反应结束，再用（碘量法）测定未分解的H2O2。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以（聚丙烯酰胺凝胶）作为载体的一种区带电泳，这种凝胶是由（Acr）和交联剂（Bis）在催化剂作用下聚合而成。
化学聚合法一般用来制备（分离）胶，其自由基的引发剂是（Ap），催化剂是（TEMED）；光聚合法适于制备大孔径的（浓缩）胶，催化剂是（核黄素）。
4.层析技术按分离过程所主要依据的物理化学性质进行分类，可分成以下几种：（吸附层析），（分配层析），（离子交换层析），（凝胶层析）和（亲和层析）。
5. 使用离心机离心样品前，必须使离心管（等重）且对称放入离心机。
6. 米氏常数可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，表示E对S 的亲合力愈（大），Km愈大，表示E对S的亲合力愈（小）。
7. 分光光度计在使用之前必须预热，注意预热及样品槽空时必须__（打开）____（打开、合上）样品池翻盖。
8. CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的（抗逆性）密切相关。
9. 纸层析实验中，____________形成固定相，____________流动相。
10. 聚丙烯酰胺凝胶是是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成的，在具有自由基团体系时，两者就聚合。
引发产生自由基的方法有两种：（化学法）和（光聚合法）。
11. 层析技术按按固定相的使用形式进行分类，可分成以下几种：（柱层析），（纸层析），（薄层层析）和（薄膜层析）。
参考答案：生物化学实验一、名词解释：1、电泳：指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。
2、同工酶：指催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。
胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响
激素对血糖浓度的影响及血糖浓度的测定刘峡汛11. 武汉科技大学医学院临床1105班湖北武汉430065[摘要]目的：观察家兔注射肾上腺素或胰岛素前后血糖水平的变化方法：采用邻甲苯胺法测血糖浓度。
结果：注射胰岛素的家兔空腹血糖含量为182mg/dL，药后血糖含量为129mg/dL；注射肾上腺素的家兔空腹血糖含量为81mg/dL，药后血糖含量为119mg/dL。
结论：胰岛素会使血糖浓度降低，肾上腺素会使血糖浓度升高。
[关键词]血糖浓度胰岛素肾上腺素引言：正常情况下，血糖浓度在各种因素调解下，维持相对恒定，但现如今糖尿病可谓是医学界的一大顽症，目前并无良药可医，对于此种病当以预防为主。
因此身为医学生，掌握激素对血糖浓度的影响及如何测量血糖浓度显得有为重要。
原理：1.血糖浓度即指血液中的葡萄糖浓度。
血糖水平相当恒定，维持在80—120mg/dL之间。
空腹血糖水平的相对恒定是在神经激素调节下血糖的来路和去路达到动态平衡的结果，其中激素调节站主导地位。
调节血糖的激素有：胰岛素，肾上腺素，胰高血糖素，肾上腺皮质激素，生长素和甲状腺激素。
胰岛素是体内唯一能使血糖降低的激素，其他激素均使血糖升高。
2.葡萄糖在热的冰醋酸溶液中可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩合，生成蓝绿色的西夫氏碱，其色泽的深浅与葡萄糖浓度成正比。
1.材料与方法1.1材料仪器：722型分光光度计试剂：1.正常家兔(实验前预先使其饥饿14—16小时)两只。
称体重，一只为2.55kg，另一只为1.8kg。
2.肾上腺素（1mg/1ml）3.胰岛素（5单位/ml）4.碘酒,消毒酒精5.饱和硼酸溶液：取硼酸6g,溶于100ml蒸馏水中，摇匀，放置过夜后过滤，即可应用。
6.邻甲苯胺试剂：取冰醋酸（AR）940ml,加入硫脲（AR）1.5g，溶解后加入邻甲苯胺60 ml混匀，置棕色瓶中，室温保存。
新配试剂应放置24小时后（待老化）使用。
此试剂腐蚀性极强，应避免与皮肤接触而造成灼伤。
正常人血糖浓度范围
正常人血糖浓度范围文章目录*一、正常人血糖浓度范围*二、测的各个时点的血糖分别代表什么意义*三、什么食物能降血糖正常人血糖浓度范围1、正常人血糖浓度范围血糖正常值是指人空腹的时候血糖值在3.9～6.1毫摩尔/升,血糖值对于治疗疾病和观察疾病都有着指导意义。
空腹全血血糖超过11.1毫摩尔/升是糖尿病。
2、血糖浓度范围的科学判断2.1、糖尿病的诊断主要是通过血糖测定来判断,正常人空腹血糖(FBG)参考值:葡萄糖氧化酶法:3.9~6.1mmol/L邻甲苯胺法:3.9~6.4mmol/L糖尿病患者的空腹血糖参考值:轻度糖尿病:7.0~8.4mmol/L,中度糖尿病:8.4~11.1mmol/L,重度糖尿病:大于11.1mmol/L。
2.2、可以通过口服葡萄糖耐量试验(OGTT)来判断,口服葡萄糖耐量试验:30分钟~1小时,正常值为:7.8~9.0mmol/L,2小时后不大于7.8mmol/L,3小时后应当恢复到空腹血糖水平,即3.9~6.1mmol/L或者3.9~6.4mmol/L,上述各个时段的尿糖试验正常人均为阴性。
3、血糖正常值及临床意义3.1、确诊糖尿病的关键指标:空腹血糖≥7.0mmol/l或餐后血糖≥11.1mmol/l,糖耐量实验2小时血糖≥11.1mmol/l者可以确诊为糖尿病。
3.2、血糖过高或过低都会损伤机体,血糖含量过低时,会引起头昏、心慌、四肢无力等,严重时甚至会导致死亡。
血糖含量过高时,会使葡萄糖从肾脏排出,形成糖尿,造成体内营养物质流失,以及感染等并发症的发生。
测的各个时点的血糖分别代表什么意义1、空腹血糖:主要反映患者自身胰岛B细胞的基础功能以及头天晚上所用药物对整个夜间乃至清晨血糖的控制情况。
空腹血糖是衡量胰岛功能的重要指标,也是诊断糖尿病的指标之一。
对于长期使用降糖药的患者来说,空腹血糖的良好控制具有重要意义。
这里说的空腹血糖是指禁食8～12小时后的血糖,即清晨空腹状态下的血糖。