实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法
植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法)
Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、目的掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。
二、原理糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。
其反应式如下：显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。
本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。
蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。
三、材料、仪器设备及试剂1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。
2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。
3.试剂及配制：蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。
该试剂不能久贮，宜用前配制。
100μg·ml－1蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入100ml容量瓶中定容至刻度。
四、实验步骤1.蔗糖标准曲线制作1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液加入表中试剂后，向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。
2.样品提取称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取20min，冷却后过滤入100ml容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。
3.糖含量测定吸取待测液0.2ml（含糖量30～80μg）,加入试管中，再加蒸馏水2.3ml，摇匀。
随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。
可溶性糖含量的测定蒽酮法心得体会
可溶性糖含量的测定蒽酮法心得体会在进行可溶性糖含量测定时，蒽酮法是一种常用的分析方法。
通过该方法，我们可以准确地测定样品中的可溶性糖含量。
进行样品的制备非常重要。
我们需要将样品完全溶解在适当的溶剂中，以确保蒽酮法能够准确地测定可溶性糖的含量。
避免在样品制备过程中引入任何可能干扰测定结果的物质。
蒽酮法的操作相对简单，但仍需要严格控制实验条件。
在进行分析时，我们应遵循标准操作程序，确保测定结果的准确性和可重复性。
此外，正确选择蒽酮试剂的浓度和使用适当的仪器设备也是关键。
在进行测定过程中，注意对实验环境的控制也是十分重要的。
避免有害物质的污染以及其他外界因素对实验结果的干扰，可以提高测定结果的可靠性。
对于蒽酮法测定结果的解读，我们需要结合样品的特性和实际需求进行分析。
根据测定结果，我们可以评估样品的可溶性糖含量，并据此进行后续的数据处理和实验设计。
通过蒽酮法测定可溶性糖含量是一项重要的实验技术。
在实验过程中，我们应严格控制实验条件、合理选择试剂和仪器，并对实验结果进行准确解读。
这将有助于我们更好地理解样品中的可溶性糖含量，并为后续研究提供有价值的参考数据。
可溶性糖的测定（蒽酮比色法）
可溶性糖的测定——蒽酮比色法原理：可溶性糖与浓硫酸反应生成羟甲基糠醛，其与蒽酮生黄绿或蓝绿的糠醛衍生物，该物质在630nm(620)处有最大吸收峰，其浓度与可溶性糖的含量成正比。
试验用品：电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、1mL，2mL，5mL 移液管各一支、容量瓶（根据需稀释倍数选择25或50mL）、10mL 刻度试管或离心管、试管架（别用胶的）、指型管（大一点的便于震荡混匀液体）、漏斗、滤纸、洗瓶试验药品：蒽酮、乙酸乙酯、分析纯蔗糖、浓硫酸（优级纯或分析纯）、蒸馏水试验样品：玉米叶（干样）标液及标曲配制：蒽酮-乙酸乙酯试剂：称取分析纯蒽酮1g溶于50mL乙酸乙酯中，贮于棕色瓶，至于黑暗中保存，如有结晶析出可加热溶解。
1%蔗糖标准液：精确称取1.000g分析纯蔗糖加少量蒸馏水溶解后转入100mL容量瓶中，加0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度线；100mg/L蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL，加入100mL容量瓶，加水至刻度线。
标曲：项目管号0 1 2 3 4 5各管中蔗糖含量（ug) 0 20 40 60 80 100 100mg/L蔗糖液（ml）0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蒽酮乙酸乙酯试剂（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸（ml） 5 5 5 5 5 5 吸光度A630样品测定：称取0.05g样品于干燥的10mL刻度试管中，加蒸馏水10mL后放入水浴锅内沸水浴30min，再过滤到50mL容量瓶内混匀。
取干燥的指型管分别加入1.5mL蒸馏水、0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂、0.5mL样品溶液和5mL浓硫酸快速震荡摇匀后冷至室温比色（摇匀后反应10min左右可放入冷水中冷却）。
结果计算：可溶性糖含量=Mx×V×D×100V1×W×103Mx：标准溶液查得的糖含量（ug）V ：样品总体积（mL）V1：测定时的取用体积（mL）D ：稀释倍数（mg）103：样品重量单位由mg换算成ug的倍数。
可溶性糖含量测定简易程序(修改)
可溶性糖含量测定简易程序一、反应液的配制方法1、药品：蒽酮（AR）、浓硫酸（AR）、95%乙醇、蒸馏水2、配制方法：1）反应液A：准确称取0.4g蒽酮置于烧杯（烧杯必须是干燥的，烧杯的体积应大于反应液体积），后加入200ml浓硫酸，并用玻璃棒搅动硫酸，以使蒽酮完全溶解（搅动时玻璃棒不能碰撞烧杯壁，以防止烧杯破裂，硫酸外溢）；2）反应液B：准确量取15ml乙醇置于烧杯（500ml），后加入60ml蒸馏水，并用玻璃棒搅动，以混匀溶液；3）反应液C：将反应液A通过玻璃棒导流缓慢加入盛有反应液B的烧杯中，整个过程须在冰浴中进行（反应液A只能往反应液B中倒，倒反应液A时，一定要用玻璃棒导流，且缓慢而匀速，勿直接倒入，以防止反应液飞溅）。
4）若要配量大的反应液时，反应液A和反应液B所称（量）取的对应药品要同倍数增加。
二、样品测定程序1、将实验所需的玻璃器皿洗干净，并用蒸馏水冲洗，干燥；2、测定前，样品须在80℃烘箱中烘干24小时，以确保样品干燥；3、准确称取0.2±0.002g样品，置于100ml三角瓶中，每个样品3份（每个三角瓶须编号）；4、在盛有样品的每个三角瓶中准确加入50ml蒸馏水，后用保鲜膜封口，以防止提取液在煮沸时过度蒸发；5、将三角瓶放到水浴锅中，煮40min（三角瓶中的蒸馏水开始沸腾时记时）；6、煮沸后，待三角瓶中的提取液冷却至室温后，提取液经过滤定容至50ml容量瓶中（容量瓶须编号），定容时用蒸馏水冲洗三角瓶3次（每次加少量蒸馏水冲洗），定容后应颠倒容量瓶数次，使提取液混合均匀，若暂时不测定放4℃冰箱中保存；7、吸取0.25ml提取液加到20ml的试管中，再加入0.75ml蒸馏水，后加入5ml反应液C，并振荡试管，使反应液混合均匀；8、将试管放到水浴锅中沸水浴1min，后冷却至室温；9、将试管中的反应液倒入比色杯中，在620nm处比色，记OD值。
实验植物组织中可溶性糖含量的测定蒽酮比色法
实验七植物体内可溶性糖含量的测定蒽酮法一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质;不同载培条件,不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量;因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定,可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低;蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法,在强酸性条件下,蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸还原性和非还原性作用生成蓝绿色的糖醛衍生物,其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比;蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应,但显现的颜色不同;当存在含有较多色氨酸的蛋白质时,反应不稳定,呈现红色;上述特定的糖类物质,反应较稳定;该法特点：灵敏度高,测定量少,快速方便;三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱；20ml具塞刻度试管3支漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂1200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg,蒸馏水溶解,定容至500ml;2蒽酮试剂：1g蒽酮,用乙酸乙酯溶解,定容至50ml,棕色瓶避光处贮藏；3浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管,编号,按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液;在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂,再缓慢地加入5ml浓H2SO4,摇匀后,打开试管塞,置沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却至室温,在620nm波长下比色,测各管溶液的光密度值OD,以标准葡萄2.样品中可溶性糖的提取称取1克白菜叶,剪碎,置于研钵中,加入少量蒸馏水,研磨成匀浆,然后转入20ml刻度试管中,用10ml蒸馏水分次洗涤研钵,洗液一并转入刻度试管中;置沸水浴中加盖煮沸10分钟,冷却后过滤,滤液收集于100ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀备用;3.糖含量测定用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中,加1ml水和0.5ml蒽酮试剂;再缓慢加入5ml浓H2SO4注意：浓硫酸遇水会产生大量的热,盖上试管塞后,轻轻摇匀,再置沸水浴中10分钟比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合,并一同于沸水浴保温10分钟;冷却至室温后,在波长620nm下比色,记录光密度值;查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量μg;五、结果计算样品含糖量g/100g鲜重=查表所得糖含量μg×稀释倍数×100/样品重g×106六、注意事项1加浓H2SO4时应缓慢加入,以免产生大量热量而爆沸,灼伤皮肤,如出现上述情况,应迅速用自来水冲洗;2水浴加热时应打开试管塞;七、思考题本法多用于测定什么样品。
蒽酮法测定可溶性糖方法[仅供参考]
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蒽酮法测定可溶性糖方法（一) 实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。
（二）材料、仪器设备及设计1 材料12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。
2 仪器设备分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。
3 试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。
（2）100 ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml 浓硫酸，定容至刻度线。
100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。
（3）浓硫酸（比重1.84）（三）实验步骤1．标准曲线的制作：按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
管号试剂0 1，2 3,4 5,6 7,8 9,10100µg.1-1蔗糖0 0.2 0.4 0.6 0.8 1/ml水/ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 蔗糖量/µg 0 20 40 60 80 1002．取样取不同种源砂生槐幼苗，用蒸馏水冲洗干净，随后用吸水纸吸干水分。
将叶片切下，用锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。
取完后将样品放入-80℃冰箱中保存。
无花果可溶性糖含量测定
无花果可溶性糖含量测定作者：苏云婷潘世会来源：《食品安全导刊》2024年第05期摘要：為了建立一个可靠且高效的测定方法，专门用于测量不同成熟度无花果中的可溶性糖含量，深入探索并精确改进蒽酮-硫酸比色法。
根据研究目的，针对性优化了显色时间、蔗糖标准液浓度与冷却比色时间，建立了可用于无花果果实可溶性糖含量测定的蒽酮-硫酸比色法。
实验结果显示，最佳显色时间为10 min，最佳蔗糖标准溶液浓度为100 μg·mL-1，最佳冷却比色时间为20 min。
回归方程y=0.005x+0.153 4（R2=0.998 2）。
通过检测不同成熟度的无花果，发现糖度变化趋势与可溶性糖含量变化趋势一致，可溶性糖含量可作为无花果产品质量控制指标。
关键词：无花果；可溶性糖；蒽酮-硫酸比色法Method for Determination of Soluble Sugar Content in FigSU Yunting1， PAN Shihui2*（1. Weihai Vocational College， Weihai 264200， China; 2. Shandong University， Weihai 264209， China）Abstract： In order to establish a reliable and efficient assay specifically for measuring the soluble sugar content in figs of different ripenesses， the anthone-sulfate colorimetric method was explored in depth and precisely improved. According to the purpose of the study， the color development time， the concentration of sucrose standard solution and the cooling colorimetric time were optimized， and an anthone-sulfate colorimetric method was established for the determination of soluble sugar content in fig fruit. The experimental results showed that the optimal color development time was 10 min， the optimal concentration of sucrose standard solution was 100μg·mL-1， and the optimal cooling colorimetric time was 20 min. The regression equationy=0.005x+0.153 4 （R2=0.998 2）. By detecting figs with different ripeness， it was found that the change trend of sugar content was consistent with the change trend of soluble sugar content， and the soluble sugar content could be used as a quality control index for fig products.Keywords： fig; soluble sugar; anthrone-sulfuric acid colorimetry可溶性糖在水果和蔬菜中的重要性是显而易见的，主要由单糖和寡糖组成。
实验植物组织中可溶性糖含量的测定
实验方案一、实验目的通过实验，掌握测定萝卜品质的方法（一）萝卜外部形态的测定1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸2、实验方法．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
上述特定的糖类物质，反应较稳定。
该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。
三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。
（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡2.称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。
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实验十二胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响
血糖是指血液中糖，由于正常人血液中糖主要是葡萄糖，所以一般认为，血糖是指血液中的葡萄糖。
正常人空腹血糖浓度为4.4～6.7mmol/L（80～
120mg/100ml）。
血糖是糖在体内的运输形式。
全身各组织都从血液中摄取葡萄糖以氧化供能，特别是脑、肾、红细胞、视网膜等组织合成糖原能力极低，几乎没有糖原贮存，必须不断由血液供应葡萄糖。
当血糖下降到一定程度时，就会严重妨碍脑等组织的能量代射，从而影响它们的功能。
所以维持血糖浓度的相对恒定有着重要的临床意义。
血糖浓度的调节
血糖浓度能维持相对恒定是由于机体内存在一整套高效率的调节机制，精细地控制着血糖的来源与去路，使之达到动态平衡。
神经系统的调节作用
神经系统对血糖浓度的调节作用主要通过下丘脑和自主神经系统对所控制激素的分泌，后者再通过影响血糖来源与去路关键酶的活性来实现。
神经系统的调节最终通过细胞水平的调节来达到目的。
下丘脑一方面通过内脏神经作用于肾上腺髓质，刺激肾上腺素的分泌；另
一方面也作用于胰岛α-细胞，使其分泌胰高血糖素；同时还可以直接作用于肝。
三方面共同作用的结果是使肝细胞的磷酸化酶活化，使糖原分解加速；糖异生关键酶的活性增加，糖异生作用增加，从而使血糖浓度升高。
下丘脑还可通过兴奋迷走神经，使胰腺β-细胞分泌胰岛素，同时还可直接作用于肝，使肝细胞内糖原合成酶活化，促进肝糖原的合成；此外还抑制糖异生途径，促进糖的氧化和转化，总体上使血糖的去路增加，来源减少，最终达到使血糖浓度降低的目的。
激素
使血糖浓度降低的激素 :胰岛素
使血糖浓度升高的激素:胰高血糖素、肾上腺素、肾上腺皮质激素、生长素、甲状腺素
它们对血糖的调节主要是通过对糖代谢各主要途径的影响来实现的。
在激素发挥调节血糖浓度的作用中，最重要的是胰岛素和胰高血糖素。
肾上腺素在应激时发挥作用，而肾上腺皮质激素、生长激素、甲状腺素等都可影响血糖水平，但在生理性调节中仅居次要地位。
胰岛素
使肌肉和脂肪组织细胞膜对葡萄糖的通透性增加，利于血糖进入这些组织进行代谢。
诱导葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的合成，加速细胞内葡萄糖的分解利用。
通过使细胞内cAMP含量减少，激活糖原合成酶和丙酮酸脱氢酶系，抑制磷酸化酶和糖异生关键酶等，使糖原合成增加，糖的氧化利用、糖转变为脂肪的反应增加，血糖去路增快；使糖原分解和糖异生减少或受抑制，使血糖来源减少，最终使血糖浓度降低。
胰高血糖素
主要通过提高靶细胞内cAMP含量达到调节血糖浓度的目的。
细胞内的cAMP 可激活依赖cAMP的蛋白激酶，后者通过酶蛋白的共价修饰改变细胞内酶的活性，即激活糖原分解和糖异生的关键酶，抑制糖原合成和糖氧化的关键酶，使血糖升高。
肾上腺素
通过cAMP激活肝中糖原磷酸化酶使糖原分解，还有诱导肝中磷酸烯醇式丙酮酸激酶及果糖二磷酸酶的合成促进糖异生作用，使氨基酸转化成葡萄糖，从而使血糖上升。
实验目的
1.掌握各种激素（胰岛素和肾上腺素）对血糖的调节作用。
2.掌握血糖的定义、正常值及其测定的原理。
基本原理
葡萄糖在有机酸溶液中能与某些芳香胺类化合物如苯胺、联苯胺、邻甲苯胺等起缩合反应，生成希夫氏（Schiff)碱式有色衍生物，再通过分光光度计比色测定得到葡萄糖浓度。
本实验用的是邻甲苯胺法。
邻甲苯胺不与非还原性糖物质显色，而与已醛糖显色。
葡萄糖的醛基在热醋酸溶液中与邻甲苯胺的氨基互相缩合成兰绿色的希夫氏碱，该兰绿色在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。
此法测得正常人的空腹血糖值为70-100mg/100ml,兔约为130mg/100ml左右。
操作
1．动物准备及空腹采血
取试管4支，编号(1)、(2)、(3)、(4)，分别加入肝素抗凝剂0.0lml。
取空腹16小时以上的家兔两只，分别编号1和2，称体重并记录。
用耳静脉采血法：先剪去兔耳静脉处的毛，再用二甲苯擦拭兔耳部静脉，使其充血，在其周围抹上凡士林(防止污染、润滑），用刀片轻轻挑破边缘耳静脉，放血入含抗凝剂的试管（1）和（2），约需2-3ml，边滴边摇，以防凝固。
取血完毕，用干棉球压迫血管止血 .
2.注射激素并再采血。
l号兔臀部皮下注射胰岛素，剂量按4单位／kg计算，一小时后于心脏取血入抗凝管（3），测定血糖。
将2号兔臀部皮下注射0.1%肾上腺素液，剂量为每公斤体重0.4ml，观察兔子情况。
30min后，心脏取血入抗凝管（4）中。
心脏采血法：将10ml注射器用肝素抗凝剂淋洗（肝素化）后，置家兔于仰卧位，固定四肢，在左侧胸壁3－4肋间，用左手食指摸到心搏最明显处（颈静
脉切迹与胸骨剑突中点旁）垂直进针（不可左右前后摆动针头），深度约3cm ，当有落空感时，可感觉到针尖随心搏而动，固定针头，采血8ml 左右，放入抗凝管中。
3.测定注射前后的血糖
将收集的4管血液离心10分钟(每分钟2500转)，取上层血浆，分别制成胰前(1)、胰后(3)、肾前(2)、肾后(4)4管标本。
取6支干燥试管，编号并按表操作。
混匀各管，置沸水浴中加热15分钟，冷却，用波长630nm 进行分光测定，读取吸光度值，按下式计算葡萄糖含量。
葡萄糖mg/100ml 血浆=
注意事项
1.离心机的使用
⑴.离心前一定要配平（位置配平和重量配平）。
⑵.使用时离心机的盖子一定要盖紧，以免发生意外。
⑶.要等离心机完全静止后才能打开盖子。
2.微量移液器的使用
3.取血时的注意事项
⑴.注射器、刀片的使用。
⑵.注射器在取血前要肝素化。
⑶.心脏取血时要注意进针的位置和深度。
⑷.注意不要将空气注入动物体内。
⑸血液放入试管中时要先将注射器的针头取下，以防溶血。
4.邻甲苯胺具有毒性和腐蚀性，操作时要注意。
临床意义
1.血糖升高：病理性主要见于糖尿病，其他内分泌疾病如肾上腺皮质机能亢进，垂体前叶机能亢进等。
2.血糖降低：病理性如胰岛细胞瘤、胰岛素分泌过多，过量胰岛素治疗，肾上腺皮质功能减退等。
测定管吸光度 标准管吸光度 ×100。