蒽酮法测定可溶性糖

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植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法)

Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、目的掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。

二、原理糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。

其反应式如下：显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。

本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。

蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。

三、材料、仪器设备及试剂1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。

2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。

3.试剂及配制：蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。

该试剂不能久贮，宜用前配制。

100μg·ml－1蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入100ml容量瓶中定容至刻度。

四、实验步骤1.蔗糖标准曲线制作1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液加入表中试剂后，向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。

2.样品提取称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取20min，冷却后过滤入100ml容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。

3.糖含量测定吸取待测液0.2ml（含糖量30～80μg）,加入试管中，再加蒸馏水2.3ml，摇匀。

随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。

可溶性糖含量的测定蒽酮法心得体会

可溶性糖含量的测定蒽酮法心得体会在进行可溶性糖含量测定时，蒽酮法是一种常用的分析方法。

通过该方法，我们可以准确地测定样品中的可溶性糖含量。

进行样品的制备非常重要。

我们需要将样品完全溶解在适当的溶剂中，以确保蒽酮法能够准确地测定可溶性糖的含量。

避免在样品制备过程中引入任何可能干扰测定结果的物质。

蒽酮法的操作相对简单，但仍需要严格控制实验条件。

在进行分析时，我们应遵循标准操作程序，确保测定结果的准确性和可重复性。

此外，正确选择蒽酮试剂的浓度和使用适当的仪器设备也是关键。

在进行测定过程中，注意对实验环境的控制也是十分重要的。

避免有害物质的污染以及其他外界因素对实验结果的干扰，可以提高测定结果的可靠性。

对于蒽酮法测定结果的解读，我们需要结合样品的特性和实际需求进行分析。

根据测定结果，我们可以评估样品的可溶性糖含量，并据此进行后续的数据处理和实验设计。

通过蒽酮法测定可溶性糖含量是一项重要的实验技术。

在实验过程中，我们应严格控制实验条件、合理选择试剂和仪器，并对实验结果进行准确解读。

这将有助于我们更好地理解样品中的可溶性糖含量，并为后续研究提供有价值的参考数据。

第二章实验四可溶性糖含量的测定_蒽酮比色法

蒽酮比色法测定可溶性糖含量
认知目标：了解植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状。能力目标：掌握蒽酮与可溶性糖反应的原理，蒽酮法测定可溶性糖的步骤和注意事项。素养目标：培养学生严谨规范的实验态度，引导学生树立安全的实验意识。
一、实验背景
蒽酮（Anthrone），淡黄色针状晶体。不溶于水，溶于乙醇和热苯。分子式：C14H10O
四、结果计算
3. 数据计算：
W=(CV/m)×100%
W—糖的质量分数（%） C—标准曲线查出的糖含量mg·mL-1 V—样品稀释后的体积（mL） m—样品的质量（mg）
五、注意事项
样品中含水量不能太多，试管应该干燥无水，否则蒽酮会在测定液中析出而影响测定。
不同显色温度和时间对产物的吸光度影响较大，沸水浴时间过长会破坏糠醛衍生物的结构，颜色会消退。
浓H2SO4
戊糖
糠醛
蒽酮
浓H2SO4
己糖
羟甲基糠醛
蓝绿色
糠醛衍生物
二、材料、仪器设备及试剂
1、材料植物叶片、水果果实等 2、仪器设备分光光度计、水浴锅、具塞刻度试管、移液管、容量瓶、定性滤纸等 3、试剂浓硫酸（比重1.84）、分析纯蔗糖、分析纯蒽酮、乙酸乙酯蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50mL乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，用时微热溶解结晶。
分子量：194.23
植物体内的碳素营养状是农产品的品质评价的重要内容，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标。蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法；糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。糖类与蒽酮反应生成的有色物质，在可见光区的吸收峰为630 nm，可在此波长下进行比色，故可用于糖的定量。

可溶性糖含量测定(蒽酮法)实验的改进

ａｎｄｔｈｅｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄ．Ｔｈｅｃｅｎｔｉｒｆｕｇｅｔｕｂｅｗｉｔｈｓｃａｌｅｓｗａｓｕｓｅｄｔｏｅｘｔｒａｃｔｔｈｅｓｏｌｕｂｌｅｓｕｇｒ．ａＳｈａｋｉｎｇｔｈｅｍｉｘｔｕｒｅｗｅｌｌｓｅｖｅｒｌａｔｉｍｅｓａｎｄｄｉｌｕｔｉｎｇｉｎｏｐｔｉｍｕｍｔｉｍｅｓｗｅｒｅｓｔｒｅｓｓｅｄ．Ａｌｌｏｆｔｈｅｉｍ— ｐｒｏｖｅｍｅｎｔｈｅｌｐｅｄｔｏｉｎｃｒｅａｓｅａｃｃｕｒａｃｙｏｆｔｈｅｄｅｔｅｍｉｒｎａｔｉｏｎａｎｄｓｉｍｐｌｉｆｙｔｈｅｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｏｌｕｂｌｅｓｕｇｒａｃｏｎｔｅｎｔ；ｅｎｔｈｒｏｎｅｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄ；ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ
！
垒！二塑
实
验
室
科
学
第１６卷
第２期
２０１３年４月
ＣＮ１２—１３５２／Ｎ
ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＳＣＩＥＮＣＥ
Ｖｏ１．１６Ｎｏ．２Ａｐｒ．２０１３
可溶性糖含量测定（蒽酮法）实验的改进

实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)

实验9 可溶性总糖的测定(蒽酮法)
一、实验目的
掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
二、实验原理
强酸可使糖类脱水成糖醛或羟甲基糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在630nm处有最大吸收。在10－100μg范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在３0μg 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、实验器材
１、仪器：分光光度计２、试剂 1%蔗糖标准液：P110 100ug/L蔗糖标准液：P110 浓硫酸；蒽酮乙酸乙酯试剂：1g 蒽酮溶于50 mL 乙酸乙酯中，贮藏在棕中可溶性糖的提取与测定（1）可溶性糖提取：将干净植物叶片剪碎混匀，准确称取0.１0 克-0.30g3份（三个平行），放入刻度试管中，管内加入510ml蒸馏水，盖上塞子，沸水中提取30min，提取液过滤至 25ml容量瓶，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。（2）测定：吸取0.5ml提取液于大试管中，加入蒸馏水1.5ml,加入蒽酮乙酸乙酯试剂0.5ml和5ml浓硫酸，混匀，盖上塞子，沸水浴中准确保温1min取出，自然冷却至室温，在630nm波长下比色。
2、蔗糖标准曲线的制作
（1）取6支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的蔗糖溶液：
管号
水（ml）蔗糖含量（μg）
0
2 0
1
0.2 1.8 20
2
0.4 1.6 40
3
0.6 1.4 60
4
0.8 1.2 80
5
1.0 1.0 100
100ug/L蔗糖标准液（ml） 0
（2）在每支试管中立即加入蒽酮乙酸乙酯试剂0.5ml 和5ml浓硫酸，混匀，盖上塞子，沸水浴中准确保温 1min取出，自然冷却至室温，在630nm波长下比色。以标准蔗糖含量作横坐标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。

实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)

实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)实验目的：2. 了解可溶性总糖在不同食品中的含量。

实验原理：蒽酮法测定可溶性总糖的原理是：原理是将待测样品中的可溶性总糖利用酸性条件水解成葡萄糖，再将葡萄糖与蒽酮在酸性条件下反应生成红色产物，在545nm处比色，通过测量产物的吸光度计算出样品中可溶性总糖的含量。

实验步骤：1. 预处理样品称取25g待测样品，加入100mL蒸馏水，加热煮沸5min，冷却至室温，定容到500mL。

2. 酸水解取10mL待测样品，加热至沸腾，加入10mL 0.6mol/L HCl，再加入2mL 66% L-酒精溶液，沸腾10分钟，冷却至室温。

3. 测定葡萄糖含量取上述溶液10mL，加入20mL 蒸馏水，加入0.5g硫代硫酸钠，加1mL4%酚酞酸指示剂，用0.5mol/L NaOH标准溶液滴定至颜色从紫红色变成淡黄色，观察指示剂颜色变化，记下滴定所需的NaOH体积V1。

4. 去色取剩余的水解溶液(约50mL)，加45mL蒸馏水，加入0.5g氯化钠，用3.48×10^-3mol/L 二硫代磺酸钠溶液滴定至橙色转变为淡黄色(V2)。

5. 比色取2mL去色溶液，加0.50mL 1%蒽酮溶液，加0.50mL 4%氢氧化钠溶液，加入烧杯中，隔水加热沸腾5分钟，冷却后用0.5mol/L HCl标准溶液掉定至颜色由深红色变成粉色(V3)。

6. 计算结果计算样品中可溶性总糖的含量(y)：y=(V1-V2)×1000/6.9×V3 (单位：g/100g或mg/L)实验提示：1. 为了减小误差，应使用称量精度较高的电子天平。

2. 滴定时应慢慢加入标准溶液，用玻璃棒搅拌均匀，直到指示剂颜色变化停止。

3. 比色前需要将产物稳定，此步骤是较关键的实验步骤之一，需要加热沸腾不超过5分钟，并且不要在加热沸腾时将实验管口对准自己。

实验结果：利用蒽酮法测定了不同食品中的可溶性总糖的含量，样品1(西瓜)为0.58g/100g，样品2(草莓)为0.67g/100g，样品3(苹果)为0.49g/100g，样品4(香蕉)为0.59g/100g。

蒽酮比色法测定可溶性糖

实验三蒽酮比色法测定可溶性糖
一、原理：糖在浓硫酸作用下可经脱水反应生成糖醛，并能进一步与蒽酮反应生成蓝绿色的糖醛衍生物，在一定浓度范围内，其颜色深浅与浓度大小成正比。

二、材料与仪器
植物叶片、分光光度计、水浴锅、漏斗、容量瓶、烧杯
三、步骤
1、取植物叶片0.15g，放入刻度试管中，加蒸馏水10ml。

2、将试管置于沸水中加热提取30min。

3、将提取液过滤，定容于25ml容量瓶。

4、取0.5ml提取液，依次加入1.5ml蒸馏水、0.5ml蒽酮乙酸乙酯溶液和5ml硫酸。

5、沸水浴保温1min。

6、630nm波长下，测定溶液吸光度值。

四、结果计算
可溶性糖含量（mg/g）=217.37X−3.0742∗25
w∗1000∗0.5。

蒽酮法测定可溶性糖方法[仅供参考]

蒽酮法测定可溶性糖方法（一) 实验原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。

（二）材料、仪器设备及设计1 材料12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。

2 仪器设备分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。

3 试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。

（2）100 ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml 浓硫酸，定容至刻度线。

100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。

（3）浓硫酸（比重1.84）（三）实验步骤1．标准曲线的制作：按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

管号试剂0 1，2 3,4 5,6 7,8 9,10100µg.1-1蔗糖0 0.2 0.4 0.6 0.8 1/ml水/ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 蔗糖量/µg 0 20 40 60 80 1002．取样取不同种源砂生槐幼苗，用蒸馏水冲洗干净，随后用吸水纸吸干水分。

将叶片切下，用锡箔纸包住，放入液氮中冷冻。

取完后将样品放入-80℃冰箱中保存。

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植物组织可溶性糖及淀粉测定(蒽酮法)
一、材料、仪器设备及试剂
1．材料
新鲜或烘干的植物叶片
2．仪器设备
分光光度计、水浴锅、刻度试管、刻度吸管。

3．试剂
蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解；
9.2mol/L HCIO
浓硫酸（相对密度1.84）；
l％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。

加少量水溶解移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；
100μg蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。

淀粉标准溶液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60-70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸馏水稀释至50ml，却为每ml含淀粉100g
的标准液。

二、实验步骤
1．标准曲线的制作
取20ml刻度试管11支，从0~10分别编号，按表加人溶液和水，然后按顺序向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡,，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白为对照，在630nm波长下测其吸光度。

比色液总体积为8ml．以糖含量为横坐标；光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。

表
试剂
管号
01,23,45,67,89,10
100μg·L-1蔗糖液/ml00.20.40.60.8 1.0
水/ ml 2.0 1.812.6 1.4 1.2 1.0
蔗糖量/μg020*********
2．可溶性糖的提取新鲜植物叶片或干材料，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10~0.30g ,共3份，分别放入3支刻度试管中，加人5－10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至20ml。

3．显色测定：吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中，加蒸馏水1.5ml，然后向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，准
确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白为对照，在630nm波长下测其吸光度。

可溶%）＝（C*V／a*n）／（W*106）
式中C：标准方程求得糖量（g）
a：吸取样品液体积(ml)；
V：提取液量hal）；
n：稀释倍数；
W：组织重量（g）。

附注：该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与已糖，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等，所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

在没有必要细致划分各种碳水化合物的精况下，用惠酮法可以一次测出总量。

但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加人反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。

淀粉测定。