蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量
植物组织中可溶性糖含量的测定
九植物组织中可溶性糖含量的测定一．实验目的学习可溶性糖测定的蒽酮比色法二．实验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。
了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。
本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。
糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm 的OD值与糖含量成正相关。
该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。
三．实验用品721型分光光度计分析天平研钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。
稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。
四．实验步骤1.可溶性糖的提取称取0.5g的新鲜植物（青菜）叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。
在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。
2.显色及比色吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。
从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。
3.绘制标准曲线取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80μg。
按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。
植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法)
Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、目的掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。
二、原理糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。
其反应式如下：显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。
本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。
蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。
三、材料、仪器设备及试剂1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。
2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。
3.试剂及配制：蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。
该试剂不能久贮，宜用前配制。
100μg·ml－1蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入100ml容量瓶中定容至刻度。
四、实验步骤1.蔗糖标准曲线制作1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液加入表中试剂后，向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。
2.样品提取称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取20min，冷却后过滤入100ml容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。
3.糖含量测定吸取待测液0.2ml（含糖量30～80μg）,加入试管中，再加蒸馏水2.3ml，摇匀。
随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。
植物组织中可溶性糖含量的测定
植物组织中可溶性糖含量的测定九植物组织中可溶性糖含量的测定⼀．实验⽬的学习可溶性糖测定的蒽酮⽐⾊法⼆．实验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发⽣相应的变化，碳⽔化合物的代谢也不例外其含量也随之发⽣变化。
了解可溶性糖含量的变化，在⽣理上和实践上都有重要的意义。
本实验采⽤蒽酮⽐⾊法测定可溶性糖的含量。
糖在硫酸的作⽤下⽣成糠醛，糠醛再与蒽酮作⽤，形成⼀种绿⾊的络合物.在低浓度时，625nm 的OD值与糖含量成正相关。
该实验⽅法简便，但没有专⼀性，对于绝⼤部分的碳⽔化合物都能与蒽酮反应，产⽣颜⾊。
三．实验⽤品721型分光光度计分析天平研钵恒温⽔浴锅烧杯刻度试管⼤试管活性炭移液管漏⽃酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘⾄恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200µg的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。
稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（⽐重1.84）稀释成1000mL ⽽成。
四．实验步骤1.可溶性糖的提取称取0.5g的新鲜植物（青菜）叶⽚，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒⼊离⼼管内，置于80℃⽔浴中不断搅拌30min，离⼼10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。
在上清液中加0.5g活性炭，80℃⽔浴脱⾊30min,定容⾄10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。
2.显⾊及⽐⾊吸取上述糖提取液1mL，放⼊⼀⼲洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸⽔浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进⾏测定，波长为625nm，测得吸光度。
从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再⾏计算样品中含糖百分数。
3.绘制标准曲线取标准葡萄糖溶液将其稀释成⼀系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80µg。
第二章实验四可溶性糖含量的测定_蒽酮比色法
认知目标：了解植物体内的碳素营养状况以及农产品 的品质性状。 能力目标：掌握蒽酮与可溶性糖反应的原理，蒽酮法 测定可溶性糖的步骤和注意事项。 素养目标：培养学生严谨规范的实验态度，引导学生 树立安全的实验意识。
一、实验背景
蒽酮（Anthrone），淡黄 色针状晶体。不溶于水， 溶于乙醇和热苯。 分子式：C14H10O
四、结果计算
3. 数据计算：
W=(CV/m)×100%
W—糖的质量分数（%） C—标准曲线查出的糖含量mg·mL-1 V—样品稀释后的体积（mL） m—样品的质量（mg）
五、注意事项
样品中含水量不能太多，试管应该干燥无水， 否则蒽酮会在测定液中析出而影响测定。
不同显色温度和时间对产物的吸光度影响较 大，沸水浴时间过长会破坏糠醛衍生物的结 构，颜色会消退。
浓H2SO4
戊糖
糠醛
蒽酮
浓H2SO4
己糖
羟甲基糠醛
蓝绿色
糠醛衍生物
二、材料、仪器设备及试剂
1、材料 植物叶片、水果果实等 2、仪器设备 分光光度计、水浴锅、具塞刻度试管、移液管、容量瓶、 定性滤纸等 3、试剂 浓硫酸（比重1.84）、分析纯蔗糖、分析纯蒽酮、乙酸 乙酯 蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50mL乙酸乙 酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，用时微热 溶解结晶。
分子量：194.23
植物体内的碳素营养状是农产品的品质评价的重要 内容，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标。蒽 酮比色法是一个快速而简便的定糖方法；糖在浓硫酸 作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲 基糖醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物，在一定 范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。糖类与蒽酮 反应生成的有色物质，在可见光区的吸收峰为630 nm， 可在此波长下进行比色，故可用于糖的定量。
蒽酮法测定苹果中可溶性糖含量论文
蒽酮法测定苹果中可溶性糖含量班级：08生物科学2班学号：282010211 姓名：杨亮亮摘要：采用蒽酮比色法测定苹果中的可溶性总糖含量果实中可溶性糖的含量( 干样品中百分比)分别为31.％实验表明:苹果中可溶性糖的含量比较丰富有很大的利用价值。
关键词：苹果；总糖；含量苹果作为营养物质主要是可溶性糖和淀粉它们的作用主要有：有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。
由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。
一、试剂与仪器设备葡萄糖标准溶液（ 100 μg/mL 蒽酮试剂、分光光度计，分析天平，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管,剪刀，玻棒水浴锅，漏斗，滤纸。
二、实验材料成熟的苹果去除果皮，称取剪碎混匀的新鲜样品 0.5 ～ 1.0 g备用。
三、实验方法1. 样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品 0.5 ～ 1.0 g （或干样粉末 5 ～ 100 mg ），放入大试管中，加入 15 mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸 20 min ，取出冷却，过滤入 100 mL 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。
2. 标准曲线制作取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按表 24-1 加入各试剂。
表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（μg ）为横坐标绘制标准曲线。
3 ．样品测定取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL ，同以上操作显色测定光密度。
重复 3 次。
四、结果计算溶性糖含量（％）＝从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀释倍数/[测定用样品液的体积(ml)×样品重量(g)×106]×100式中： C ——从标准曲线查得葡萄糖量，μg 。
植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定
植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定摘要：目的通过标准曲线的绘制，测定白菜、芹菜、菠菜中可溶性蛋白和可溶性糖的含量，了解可溶性糖和可溶性蛋白的测定方法。
方法分别用蒽酮法和考马斯亮蓝染色法来测定植物体内可溶性糖和可溶性蛋白的含量。
结论关键词：白菜；芹菜；菠菜；可溶性蛋白含量；可溶性糖含量；蒽酮法；考马斯亮蓝染色法1 引言植物体内的可溶性糖和可溶性蛋白含量是重要的生理生化指标。
在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。
它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。
由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。
可溶性蛋白是植物体内氮素存在的主要形式，其含量的多少与植物的代谢和衰老有密切的关系，同时它与植物体维持渗透压抗脱水也有很大关系。
白菜是十字花科芸薹属叶用蔬菜，味道鲜美可口，营养丰富，素有“菜中之王”的美称，为广大群众所喜爱。
芹菜属伞形科植物，富含蛋白质、碳水化合物、胡萝卜素、B族维生素、钙、磷、铁、钠等，同时，具有有平肝清热，祛风利湿，清肠利便、润肺止咳、降低血压、健脑镇静的功效。
菠菜藜科一年生草本植物，菠菜含有丰富的维他命A、维他命C及矿物质，它对各种贫血症和糖尿病、肺结核、高血压、风火赤眼等诸多疾病可起辅助治疗作用。
2 材料与方法2.1 植物体内可溶性糖含量的测定2.1.1材料新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片（剪碎后各取0.5—1.0g）2.1.2试剂葡萄糖标准溶液（200ug/ml)、蒽酮试剂2.1.3仪器设备分光光度计；分析天平；恒温水浴；试管；三角瓶；移液管；剪刀；玻璃棒；滤纸；研钵2.1.4测定方法样品中可溶性糖的提取：称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ～1.0 g （或干样粉5～100 mg ），放入大试管中，加入15 ml 蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min，取出冷却，过滤入100 ml 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。
植物水溶性总糖的提取和含量测定蒽酮比色法
实验六植物水溶性总糖的提取和含量测定——蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
3.学习分光光度计的使用。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较适合。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电子天平，超声波清洗器，电热恒温水浴锅，抽滤设备，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/mL(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 mL浓H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：甜高粱，甘草四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴沸腾起计时，准确煮沸l0 min，取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品粉碎，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50mL三角瓶中，加沸水25mL，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50mL容量瓶中，定容至刻度，得可溶性糖的提取液。
3.稀释：吸取提取液2mL，置于另一50mL容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀。
4.测定：吸取1 mL已稀释的提取液于试管中，加入4.0 mL蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水替代提取液。
蒽酮比色法测总糖
蒽酮比色法测总糖实验五总糖的测定——蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/ml(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：甜糜秸秆四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品剪碎至2 mm以下，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50 ml三角瓶中，加沸水25 m1，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50 m1容量瓶中，定容至刻度，得提取液。
3.稀释：吸取提取液2 m1，置于另一50 m1容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀。
4.测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代提取液。
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实验九蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量
一、实验目的
掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法
二、实验原理
蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
酸可使糖类（如已糖基，戊醛糖及已糖醛酸）脱水生成糠醛，生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大光吸收值。
在10~100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
而对于上述特定的糖类物质，反映较稳定。
多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应，因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。
这一种方法具有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右时就能侧进行测定，所以可作为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器，试剂和材料
1、仪器
（1）分光光度计； (6)漏斗，漏斗架个6个
（2）电子天平；（7）容量瓶：50ml2个；
（3）三角瓶：50ml2个（8）移液管；
（4）刻度具塞试管；10ml13支；（9）水浴锅。
（5）试管架，试管夹各2个；
2、试剂
（1）葡萄糖标准液：100ug/ml；（2）浓硫酸；
（2）蒽酮试剂：0.2g蒽酮，溶于100ml浓流酸中，现当日配制使用。
3、材料
小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织（红薯）。
四、操作步骤
1、葡萄糖标准曲线的制作
取7支试管，按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液；
管号 1 2 3 4 5 6 7
葡萄糖标准液/mL 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 蒸馏水/mL 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.7 0.8 葡萄糖含量/ug 0 10 20 30 40 50 60 在每支试管中，加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸入冰水浴中冷却。
各加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。
以标准葡萄糖含量（ug）做横坐标，以吸光值作纵坐标，做出标准曲线。
2、植物样品中可溶性糖的提取
将植物材料剪碎至2mm以下，准确称取1g，放入50ml三角瓶中，加沸水25ml，在水浴中加盖煮沸10min，冷却过滤，过滤收集在50ml容量瓶中，定容至刻度。
吸取提取液5ml，置于另一50ml容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀、测定。
3、样品中总糖的提取、水解和测定
准确称取植物鲜样1~2g(或干样0.5g)，加水3ml在研钵中磨成匀浆，转入三角瓶。
用12ml水冲洗研钵2~3次，洗出液转入三角瓶中。
再三角瓶中加入6mol/L HCL 10ml，摇匀后在沸水浴中水解0.5h，冷却后用10% NaOH中和至pH中性。
再用蒸馏水定容至100ml，过滤，取滤液，用蒸馏水稀释1000倍的总糖水解液。
4、测定
吸取已释释的可溶性糖和总糖提取液各1ml（做平行样2份）于试管中，加入4.0ml蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。
比色波长为620nm，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug）。
五、结果处理
查表所得含糖质量（%）稀释倍数
植物样品含糖量（%）=————————————— x100
样品质量（g）x106
注意事项：
（1）该显色反应非常灵敏，溶液切勿混入纸屑及尘埃。
（2）硫酸要用高纯度的。
（3）不同糖类与蒽酮的显色有异，稳定性也不同。
加热比色时间应
严格掌握。
（4）实验使用的强酸注意不要洒在仪器及皮肤上。
六、思考题
1、用水提取糖类有哪些？
2、应用蒽酮法测得的糖包括哪些类型？
3、你知道还有什么方法可以测定糖类？
4、此法是否可用于测定淀粉含量，若能，请设计试验。