植物体内可溶性糖含量的测定
蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量
实验九蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量一、实验目的掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
酸可使糖类（如已糖基，戊醛糖及已糖醛酸）脱水生成糠醛，生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大光吸收值。
在10~100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
而对于上述特定的糖类物质，反映较稳定。
多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应，因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。
这一种方法具有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右时就能侧进行测定，所以可作为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器，试剂和材料1、仪器（1）分光光度计； (6)漏斗，漏斗架个6个（2）电子天平；（7）容量瓶：50ml2个；（3）三角瓶：50ml2个（8）移液管；（4）刻度具塞试管；10ml13支；（9）水浴锅。
（5）试管架，试管夹各2个；2、试剂（1）葡萄糖标准液：100ug/ml；（2）浓硫酸；（2）蒽酮试剂：0.2g蒽酮，溶于100ml浓流酸中，现当日配制使用。
3、材料小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织（红薯）。
四、操作步骤1、葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液；管号 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液/mL 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 蒸馏水/mL 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.7 0.8 葡萄糖含量/ug 0 10 20 30 40 50 60 在每支试管中，加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸入冰水浴中冷却。
各加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。
费林试剂测定植物可溶性糖的含量
费林试剂测定植物可溶性糖的含量可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖，是植物品质的重要构成性状之一，果实中可溶性糖与酸的含量及其配比是影响风味品质的重要因素。
对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。
因此，可溶性糖的定量研究对果实的品质具有重要意义。
一、试材及用具1．试材新鲜或冷冻的植物材料2．仪器及试剂高速组织捣碎机、电热恒温水浴锅、1000W调温电炉以及200mL、250mL 容量瓶、250mL锥形瓶及50mL碱式滴定管等玻璃仪器；试剂主要包括费林试剂及亚甲基蓝溶液等。
二、原理在加热条件下，用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时，将费林试剂中的二价铜还原为一价铜，以亚甲基蓝为指示剂，稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。
通过实验，学习并掌握用费林试剂滴定法测定可溶性糖的原理和方法。
三、方法步骤（一）试剂配制1．费林试剂甲：称取硫酸铜（CuSO4•5H2O，分析纯）34.6g溶于水中，稀释至500mL，过滤，贮于棕色瓶内。
2．费林试剂乙：称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠（KNaC4O6H4•4H2O，分析纯）138g 溶于水中，稀释至500mL，用石棉垫漏斗抽滤。
3．转化糖标准溶液：称取9.5g蔗糖（分析纯）用水溶解后转入1000mL容量瓶中，加入6mol/L HCl（分析纯）10mL，加水至100mL。
在20～25℃下放置三天或在25℃保温24h，然后用水定容（此为酸化的1%转化糖液，可保存3～4个月）。
测定时，取1%转化糖液25.00mL 放入250mL容量瓶中，加入甲基红指示剂一滴，用1mol/L NaOH溶液中和后用水定容，即为1mg/mL转化糖标准溶液。
4．亚甲基蓝溶液：称取0.5g亚甲基蓝（分析纯）溶于10mL水中。
5．乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌[Zn(OAC)2•2H2O，分析纯]溶于水中，加冰乙酸3mL 稀释至100mL。
植物组织中可溶性糖含量的测定
植物组织中可溶性糖含量的测定九植物组织中可溶性糖含量的测定⼀．实验⽬的学习可溶性糖测定的蒽酮⽐⾊法⼆．实验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发⽣相应的变化，碳⽔化合物的代谢也不例外其含量也随之发⽣变化。
了解可溶性糖含量的变化，在⽣理上和实践上都有重要的意义。
本实验采⽤蒽酮⽐⾊法测定可溶性糖的含量。
糖在硫酸的作⽤下⽣成糠醛，糠醛再与蒽酮作⽤，形成⼀种绿⾊的络合物.在低浓度时，625nm 的OD值与糖含量成正相关。
该实验⽅法简便，但没有专⼀性，对于绝⼤部分的碳⽔化合物都能与蒽酮反应，产⽣颜⾊。
三．实验⽤品721型分光光度计分析天平研钵恒温⽔浴锅烧杯刻度试管⼤试管活性炭移液管漏⽃酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘⾄恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200µg的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。
稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（⽐重1.84）稀释成1000mL ⽽成。
四．实验步骤1.可溶性糖的提取称取0.5g的新鲜植物（青菜）叶⽚，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒⼊离⼼管内，置于80℃⽔浴中不断搅拌30min，离⼼10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。
在上清液中加0.5g活性炭，80℃⽔浴脱⾊30min,定容⾄10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。
2.显⾊及⽐⾊吸取上述糖提取液1mL，放⼊⼀⼲洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸⽔浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进⾏测定，波长为625nm，测得吸光度。
从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再⾏计算样品中含糖百分数。
3.绘制标准曲线取标准葡萄糖溶液将其稀释成⼀系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80µg。
植物可溶性糖含量的测定
植物可溶性糖含量的测定可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的果树作物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。
对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。
因此，可溶性糖的定量讨论对果树的品质育种具有重要意义。
一、试材及用具1．试材新奇或冷冻的植物材料2．仪器及试剂高速组织捣碎机、电热恒温水浴锅、1000W调温电炉以及200mL、250mL容量瓶、250mL锥形瓶及50mL碱式滴定管等玻璃仪器；试剂主要包括费林试剂及亚甲基蓝溶液等。
二、原理本试验的主要原理：在加热条件下，用还原糖溶液滴定肯定量的费林试剂时，将费林试剂中的二价铜还原为一价铜，以亚甲基蓝为指示剂，稍过量的还原糖马上使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。
通过试验，学习并把握用费林试剂滴定法测定可溶性糖的原理和方法。
三、方法步骤（一）试剂配制1．费林试剂甲：称取硫酸铜（CuSO45H2O，分析纯）34.6g溶于水中，稀释至500mL，过滤，贮于棕色瓶内。
2．费林试剂乙：称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠（KNaC4O6H44H2O，分析纯）138g溶于水中，稀释至500mL，用石棉垫漏斗抽滤。
3．转化糖标准溶液：称取9.5g蔗糖（分析纯）用水溶解后转入1000mL容量瓶中，加入6mol/L HCl（分析纯）10mL，加水至100mL。
在20～25℃下放置三天或在25℃保温24h，然后用水定容（此为酸化的1%转化糖液，可保存3～4个月）。
测定时，取1%转化糖液25.00mL放入250mL容量瓶中，加入甲基红指示剂一滴，用1mol/L NaOH溶液中和后用水定容，即为1mg/mL转化糖标准溶液。
4．亚甲基蓝溶液：称取0.5g亚甲基蓝（分析纯）溶于10mL水中。
5．乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌[Zn(OAC)22H2O，分析纯]溶于水中，加冰乙酸3mL稀释至100mL。
植物可溶性糖的测定
植物组织可溶性总糖的测定2015-8-16一、目的：测定植物组织中总糖（可溶性碳水化合物），用以研究体内能量储藏和渗透物质积累情况，检测范围为10-100ug/ml。
因淀粉在超过45度可能糊化水解，如果已知样品含淀粉较多，应考虑70%乙醇提取或冷水提取（不包括淀粉）或1:4盐酸水解（包括淀粉）。
二、样品前处理：鲜样要称重后105度烘干，称干重，计算含水量，粉碎。
三、可溶性总糖的提取：干样测定完含水量后，称取样品0.25g，或鲜样2.50g，放入250ml 消煮管中，加水100ml，调整消煮炉温度约150-160度，煮沸30分钟，冷却，加水定容，取上清液过滤，滤液或离心上清液以水稀释适当倍数（5-10倍左右）待测。
注：西红柿总糖：取1ml匀浆，用水稀释1000倍，取2ml测定。
四、测定4.5.1试剂配制：4.5.1.1 80%硫酸：200ml水加入到1000ml烧杯中，在搅拌和水冷条件下，缓慢加入800ml浓硫酸，冷却备用。
4.5.1.2 蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到1000ml 80%（V/V）硫酸中，搅拌均匀，冷却后备用。
蒽酮试剂当日配制使用。
4.5.1.3 100μg/ml 葡萄糖标准液制作：称取0.0100g无水葡萄糖（分子量180.16）或者1水葡萄糖（分子量198.18）0.0110g溶于水中，加0.5ml浓硫酸，定容100ml。
4.5.2标准曲线浓度μg/ml(ppm) 0 20 40 60 80 100 样品ml葡萄糖标准液（ml） 0 0.4 0.8 1.2 1.6 22 水 2 1.6 1.2 0.8 0.4 0蒽酮试剂ml 84.5.3 总糖测定：取2ml提取液于试管中，在冷水浴中加8ml蒽酮试剂，沸水浴5分钟，取出迅速冷却，于625nm测定含糖量。
同时取上表标准液2ml加8ml蒽酮同样测定。
如果含糖量太低，可适当减低稀释倍数，如果糖含量太，可适当增加稀释倍数。
此方法适于含糖量1-10%样品的测定，如果超过此含量，需稀释后测定，低于此含量，需增加称量样品。
实验植物组织中可溶性糖含量的测定
实验方案一、实验目的通过实验，掌握测定萝卜品质的方法（一）萝卜外部形态的测定1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸2、实验方法．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
上述特定的糖类物质，反应较稳定。
该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。
三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。
（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡2.称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。
植物体内可溶性糖含量的测定
植物体内可溶性糖含量的测定——蒽酮法一、实验目的1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理2.掌握分光光度计的使用二、实验背景糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
三、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮(C14HoO)缩合成蓝色化合物。
溶液含博量在每mL 150 pg以内，与蔥酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用,样品不必经过水解。
四、材料、仪器及试剂1.材料：苹果2.仪器：分光光度计恒温水箱试管漏斗容量瓶试管架研钵刀片3.试剂：蒽酮试剂(称取100 mg蒽酮溶于100 mL 98%硫酸溶液(A.R)中）葡萄糖标准溶液(100 μg)/mL(精确称取100 mg干燥葡萄糖,用蒸馏水定容至1000 mL）。
样品溶液（可自选待测物制成样品溶液。
eg：称取0.1g苹果剪碎置于研钵中加入少量蒸馏水研磨成匀浆然后转入20ml刻度试管中用10ml蒸馏水分次洗涤研钵洗液一并转入刻度试管中。
置沸水浴中加盖煮沸10分钟冷却后过滤滤液收集于100ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度摇匀备用。
）四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作：取七支干燥洁净的试管编号后，按下表操作。
编号123456700.100.200.300.400.600.80葡萄糖标准液(100ug/ml)H2O 1.00.900.800.700.600.400.20蒽酮试剂10101010101010每管加人葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，传各管都加人蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置冰浴中迅速冷却。
植物生理学实验
植物生理学实验实验一植物组织中可溶性糖与淀粉的测定植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。
一、苯酚法测定可溶性糖【原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100Mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nM波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定时间在160Min以上。
【仪器与用具】分光光度计；电炉；铝锅；20Ml刻度试管；刻度吸管5Ml 1支，1Ml 2支；记号笔；吸水纸适量。
【试剂】90％苯酚溶液：称取90g苯酚(AR)，加蒸馏水10Ml溶解，在室温下可保存数月；9％苯酚溶液：取3Ml 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30Ml，现配现用；浓硫酸(比重1 84)；1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1 000g。
加少量水溶解，移入100Ml容量瓶中，加入0 5Ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；100μg／L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1Ml加入100Ml容量瓶中，加水定容。
【方法】1.标准曲线的制作取20Ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表1－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1Ml 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5～20s时间加入5Ml浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8Ml，在恒温下放置30Min，显色。
然后以空白为对照，在485nM 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
表1-1各试管加入溶液和水的量管号01~23~45~67~89~10100ug/L蔗糖液（ml）00.20.40.60.81.0水（ml)2.01.81.61.41.21.0蔗糖量（μg）0204060801002 可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0 10～0 30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5～10Ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30Min(提取2次)，提取液过滤入25Ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
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植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）
糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、
蔬菜品质的高低。
一、目的：
糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
二、原理
糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，反应如下：
糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合产生蓝绿色物质，其在可见光区620nm波长处有最大吸收，且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。
此法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定，并具有灵敏度高，简便快捷，适用于微量样品的测定等优点。
三、实验材料、仪器及试剂
1．材料：植物组织叶片
2．仪器：分光光度计恒温水箱20ml具塞刻度试管（3支）漏斗100ml 容量瓶刻度试管试管架剪刀研钵
3．试剂：
（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。
（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；
（3）浓硫酸
四、实验方法
1．葡萄糖标准曲线的制作
取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（O D），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。
2．样品中可溶性糖的提取
称取1克叶片，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。
置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。
3．糖含量测定
用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml蒽酮试剂。
再缓慢加入5ml浓H2SO4（注意：浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇匀，再置沸水浴中10分钟（比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴保温10分钟）。
冷却至室温后，在波长620nm下比色，记录光密度值。
查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量（μg）。
五、结果计算
六、附注
（1）加浓H2SO4时应缓慢加入，以免产生大量热量而爆沸，灼伤皮肤，如出现上述情况，应迅速用自来水冲洗。
（2）水浴加热时应打开试管塞。