可溶性糖的测定方法
样品中可溶性糖的测定
样品中可溶性糖的测定一、目的通过对样品中可溶性糖的测定，初步掌握利用紫外-可见分光光度计进行定量的测定方法和仪器使用技术。
二、原理可溶性糖的测定方法有很多，本实验采用蒽酮比色法。
在强酸条件下，蒽酮与可溶性糖（包括还原性糖和非还原性糖）作用生成蓝绿色糖醛衍生物，该蓝绿色颜色深浅与含糖量成正比，可在625nm下进行比色测定。
三、仪器用具和试剂仪器用具：分光光度计、试管、移液管、离心机等。
试剂：蒽酮：100mg蒽酮溶于50ml浓H2S04（化学纯）中，当天配制当天使用。
蔗糖标准液（1mg/ml已配制好）：精确称取0.1000g蔗糖（分析纯），在小烧杯中加水溶解，定容至100ml，加2-3滴浓H2S04，该溶液可长期保存。
四、测定方法1．样品处理方法：将水样放入离心管中，10，000rpm离心2min后，准确吸取1ml作为待测样品，每个样品重复一次。
若是植物样品，则取干粉末样品0.05~0.1g左右, 放入塑料小试管中，加6-8ml蒸馏水，在沸水浴中煮沸20分钟，取出冷却，3500转/分离心10分钟，取上清，重复提取2次，收集上清，用蒸馏水定容至50 ml，作为待测样品，每个样品重复一次。
2．标准曲线的配制：准确吸取1mg/ml的蔗糖标准液5ml，加水定容量50ml，得到浓度为0.1mg/ml蔗糖同时取待测液1.0ml，加蒽酮4.0ml，在40℃水浴中显色10-15分钟。
（注：各管在加入蒽酮试剂时要迅速，加完后用力振荡1-2分钟。
）3.1 Cary分光光度计：打开分光光度计，机器预热5-10分钟：打开计算机，双击Carywin进入Cary软件包主菜单；双击Concentration图标，进入操作界面，单击Setup进行参数设置:仪器参数：分析波长：625nm; 狭缝：2.0nm; 丫轴读值：Abs标准曲线参数：浓度单位：mg/ml；个数：6; 浓度值：将计算所得值填入;待测样品参数：个数：20（多设，预防不够）设置完毕，单击OK，退出Setup，当右侧出现红色625nm，则表明仪器已准备好。
(整理)可溶性糖测定.
引言可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的植物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。
对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。
因此，可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。
而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中，是人体热量的最最主要来源，具有较高的营养价值。
本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法，及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。
1 蒽酮比色法1.1 原理糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物，颜色的深浅与糖含量有关。
在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。
由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。
1.2 仪器与材料1.2.1实验仪器分光光度计，电炉，铝锅，电子天平，20ml刻度试管，刻度吸管5ml 1支、1ml 2支，漏斗。
1.2.2实验试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。
（2）浓硫酸（比重1.84）。
1.2.3实验材料植物叶片。
1.3 实验方法1.3.1标准曲线的制作取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。
然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。
然后以空白为参比，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
可溶性糖测定
可溶性糖测定1、费林试剂甲称取硫酸铜（CuSO4·5H2O，分析纯）34.6 g溶于水中，稀释至1000ml，过滤，贮于棕色瓶内。
2、费林试剂乙称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠（KNaC4O6H4·4H2O，分析纯）173g 溶于水中，稀释至1000ml，用石棉垫漏斗抽滤。
3、亚甲基蓝溶液称取1g亚甲基蓝（分析纯）溶于100ml水中。
4、酚酞指示剂称取酚酞（C20H14O4）1g，溶于95%酒精90ml，再加蒸馏水10ml装入滴瓶内。
5、20—30%NaOH 用粗天平称取NaOH20—30g，溶于100ml蒸馏水中6、葡萄糖标准溶液准确称取2.000g葡萄糖用水溶解后转入1000ml容量瓶中，加入浓HCl（分析纯）0.5ml，加水至1000ml。
即为2mg\ml转化糖标准溶液，可保存3—4个月。
7、费林试剂的标定取费林试剂甲、乙各5ml混合液于100ml三角瓶中，置500W电炉上加热，使其在2min左右沸腾，准确煮沸2min，此时不离开电炉，立即加入0.5%亚甲基蓝指示剂6滴，并继续以每4—5s的滴速滴加标准糖液，直至溶液蓝色褪尽为终点。
用准确滴定标准糖液的毫升数乘以标准糖液浓度（2mg\ml），即得10ml费林试剂所相当的糖的毫克数。
8、样品预处理取待测枣样品适量，去核，切块，60℃恒温箱烘干，磨碎。
称取20g 样品加入160ml水，充分混合为匀浆，双层纱布过滤至烧杯中。
9、还原糖测定用吸管取45ml待测液放入100ml容量瓶中，定溶，摇匀。
取费林试剂甲、乙各5ml加入100ml三角瓶中，加蒸馏水5ml，加热至沸，加2—3滴1%亚甲基蓝指示剂，用待测液滴定至蓝色泡沫全部褪去，呈现红色，记录待测液消耗毫升数。
待测液单糖含量（%）=滴定标准糖液的毫升数×4÷待测液滴定的毫升数10、可溶性总糖测定吸取待测液45ml于100ml容量瓶中，加水20—30ml，再加浓HCl 3ml,在80±2℃水浴加热10min，放入冷水槽中冷却后，加酚酞指示剂2滴，用20—30%NaOH溶液中和，用稀酸和稀碱调节至微红色，用水定溶。
可溶性糖的测定（蒽酮比色法）
可溶性糖的测定——蒽酮比色法原理：可溶性糖与浓硫酸反应生成羟甲基糠醛，其与蒽酮生黄绿或蓝绿的糠醛衍生物，该物质在630nm(620)处有最大吸收峰，其浓度与可溶性糖的含量成正比。
试验用品：电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、1mL，2mL，5mL 移液管各一支、容量瓶（根据需稀释倍数选择25或50mL）、10mL 刻度试管或离心管、试管架（别用胶的）、指型管（大一点的便于震荡混匀液体）、漏斗、滤纸、洗瓶试验药品：蒽酮、乙酸乙酯、分析纯蔗糖、浓硫酸（优级纯或分析纯）、蒸馏水试验样品：玉米叶（干样）标液及标曲配制：蒽酮-乙酸乙酯试剂：称取分析纯蒽酮1g溶于50mL乙酸乙酯中，贮于棕色瓶，至于黑暗中保存，如有结晶析出可加热溶解。
1%蔗糖标准液：精确称取1.000g分析纯蔗糖加少量蒸馏水溶解后转入100mL容量瓶中，加0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度线；100mg/L蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL，加入100mL容量瓶，加水至刻度线。
标曲：项目管号0 1 2 3 4 5各管中蔗糖含量（ug) 0 20 40 60 80 100 100mg/L蔗糖液（ml）0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蒽酮乙酸乙酯试剂（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸（ml） 5 5 5 5 5 5 吸光度A630样品测定：称取0.05g样品于干燥的10mL刻度试管中，加蒸馏水10mL后放入水浴锅内沸水浴30min，再过滤到50mL容量瓶内混匀。
取干燥的指型管分别加入1.5mL蒸馏水、0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂、0.5mL样品溶液和5mL浓硫酸快速震荡摇匀后冷至室温比色（摇匀后反应10min左右可放入冷水中冷却）。
结果计算：可溶性糖含量=Mx×V×D×100V1×W×103Mx：标准溶液查得的糖含量（ug）V ：样品总体积（mL）V1：测定时的取用体积（mL）D ：稀释倍数（mg）103：样品重量单位由mg换算成ug的倍数。
可溶性糖测定方法
可溶性糖测定方法可溶性糖测定方法是一种常用的分析方法，用于测定食品、饮料、果汁等中的可溶性糖含量。
可溶性糖是指在水中能够溶解的糖类化合物，如葡萄糖、果糖、蔗糖等。
测定可溶性糖含量可以帮助我们了解食品的甜味程度，还可以用于质量控制和产品开发等方面。
目前常用的可溶性糖测定方法主要包括比色法、光度法和高效液相色谱法等。
下面我将分别介绍这些方法的原理和步骤。
首先是比色法。
这种方法基于可溶性糖分子与特定试剂的反应，生成具有一定颜色的复合物。
比色法最常用的试剂是菲龙试剂、安利试剂和硝酸铜试剂等。
测定步骤一般包括样品的准备、试剂的配制和比色测定。
样品的准备通常是将食品或饮料样品经过适当处理后，将溶液通过滤纸滤除杂质。
试剂的配制则是根据给定的比例将试剂与溶剂混合。
比色测定时，则是将样品溶液和试剂溶液混合，并在一定时间内测量其吸光度。
根据比色复合物的吸光度与可溶性糖含量的关系，即可计算出样品中可溶性糖的含量。
其次是光度法。
这种方法是利用可溶性糖溶液对特定波长的光的吸收特性进行测定的。
光度法需要使用专用的光度计或分光光度计进行测量。
测定步骤与比色法类似，首先是样品的准备和试剂的配制，然后将试剂与样品溶液混合，并将混合溶液转移到光度计中进行测量。
光度计会根据样品溶液对光的吸收情况，输出吸光度值。
根据吸光度与可溶性糖浓度的相关关系，可以计算出样品中可溶性糖的含量。
最后是高效液相色谱法。
这种方法需要使用高效液相色谱仪进行分析。
高效液相色谱法是通过样品中可溶性糖与色谱柱中的填料分离，进而进行测定的。
测定步骤包括样品的制备和高效液相色谱仪的设置。
样品的制备一般涉及样品的提取和净化等过程。
提取过程通常使用有机溶剂将可溶性糖从样品中提取出来，净化过程则是通过固相萃取等手段去除杂质。
高效液相色谱仪的设置则是根据样品特性，选择合适的色谱柱，并设置适当的流动相条件和检测波长。
测定时，样品溶液会经过自动进样器注入色谱柱，可溶性糖在柱中与填料相互作用而分离，然后通过检测器检测吸收峰面积或浓度，最终计算出样品中可溶性糖的含量。
可溶性糖的测定
实验1 可溶性糖的测定一、实验目的1．学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。
2．学习721型分光光度计的原理和操作方法。
二、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物。
溶液含糖量在150μg /ml以内，与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接作用，样品不必经过水解。
三、实验器材1．试管（或具塞试管）2. 吸量管及试管架（1 ml、10 ml）3．沸水浴 4. 冰浴5．721型分光光度计6．蒽酮试剂称取100 mg蒽酮溶于100 ml 98%硫酸溶液（A.R）中，用时配制。
7．葡萄糖标准溶液（100 μg/ml）200 ml精确称取100 mg干燥葡萄糖，用蒸馏水定容至1000 ml。
8．样品溶液200 ml 可自选待测物制成样品溶液。
举例：称取500 g市售白薯（或淀粉），洗净切碎后用多功能食品加工机磨成浆，4层纱布压滤、弃滤液溜渣，将渣放于烘箱内80～85℃烘干后，再用植物粉碎机（微型）研细，过筛，取100目筛下物为待测样品。
取样品在烘箱内105℃烘干，恒重后，精确称取1～5 g，置于锥形瓶中，加入80 ml沸蒸馏水，放入沸水浴。
不时摇动，提取0.5 h。
取出立即过滤，残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤，合并滤液。
冷却至室温，用蒸馏水定容至100 ml。
9．白薯。
四、实验步骤：每管加入葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7 min，立即取出置冰浴中迅速冷却。
待各管溶液达室温后，用1 cm厚度的比色皿，以第一管为空白，迅速测其余各管的光吸收值。
然后以第2～7管溶液含糖量μg为横坐标，吸光度（OD620）为纵坐标，画出含糖量与OD620值的相关标准曲1要在冰浴条件下加入蒽酮，以防止发热，影响颜色反应。
蒽酮比色法测定可溶性糖
实验三蒽酮比色法测定可溶性糖
一、原理：糖在浓硫酸作用下可经脱水反应生成糖醛，并能进一步与蒽酮反应生成蓝绿色的糖醛衍生物，在一定浓度范围内，其颜色深浅与浓度大小成正比。
二、材料与仪器
植物叶片、分光光度计、水浴锅、漏斗、容量瓶、烧杯
三、步骤
1、取植物叶片0.15g，放入刻度试管中，加蒸馏水10ml。
2、将试管置于沸水中加热提取30min。
3、将提取液过滤，定容于25ml容量瓶。
4、取0.5ml提取液，依次加入1.5ml蒸馏水、0.5ml蒽酮乙酸乙酯溶液和5ml硫酸。
5、沸水浴保温1min。
6、630nm波长下，测定溶液吸光度值。
四、结果计算
可溶性糖含量（mg/g）=217.37X−3.0742∗25
w∗1000∗0.5。
可溶性糖的测定3
10、11、13、14、试管号0 1、2、3 4、5/ml标准蔗
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1糖溶液(mL)
蒸馏水(mL) 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1蔗糖浓度(µg) 0 20 40 60 80 100
按上述取样量取好后+加5mL蒽酮试剂(加蒽酮期间最好放在冷水中以使反应时间一致)?震荡?95?水浴10分钟?震荡?自来水中冷却至室温?630nm比色4、绘制标准曲线:在excel中以蔗糖终浓度为横坐标，吸光值为纵坐标作散点
可溶性糖的测定
可溶性糖的测定
一、标准曲线制作
1、标准蔗糖溶液(100µg/ml):标准称取0.5g烘干的分析纯无水蔗糖溶于水?
蒸馏水定容到50mL?取0.5mL?蒸馏水定容至50mL
2、蒽酮试剂: 84ml浓硫酸(比重1.84)+16mL蒸馏水冷却至不烫手，称取0.15g
蒽酮，溶解其中，贮于具塞棕色瓶中，当天配置当天用。
2、查标准曲线，计算蔗糖浓度
注意事项:
与硫酸含水量、显色温度、显色时间有关，所有控制好这些条件，最好一致
2图，并拟合直线，看其拟合度R越大越好
二、样品测定
1、称0.1g过100目筛的烘干样品—?10ml离心管中—?6—7ml蒸馏水—?100?水浴，30分钟—?4800转/分5分钟—?收集上清液—?加水6-7ml离心，如此重复提取3次，收集三次上清液于50ml容量瓶中—?蒸馏水定容—?取待测液1.0ml—?加水1 ml—?加蒽酮5ml—?与标准曲线制作步骤同—?630nm下测,,,
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可溶性糖的测定方法
可溶性糖的测定方法有多种，常用的方法包括显色法、比色法、电化学法和色谱法等等。
下面将详细介绍这些方法的原理和步骤。
1. 显色法：
显色法是通过特定的试剂与可溶性糖发生反应，产生有色产物来测定糖含量的方法。
常用的试剂有硝酸铜和菲林试剂。
步骤：
1）将待测样品与硝酸铜溶液混合，加热沸腾，反应生成红色沉淀。
2）离心沉淀，取上清液用氨水中和。
3）将中和后的溶液与菲林试剂混合，加热沸腾，产生显色反应。
4）使用分光光度计测定显色溶液的吸光度，根据吸光度与可溶性糖浓度之间的关系，计算样品中可溶性糖的含量。
2. 比色法：
比色法是通过将待测样品与特定试剂反应，产生有色产物，并与标准溶液进行比色，从而计算样品中可溶性糖含量的方法。
常用的试剂有邻苯二酚、菲林试剂和磷酸重铈。
步骤：
1）将待测样品与试剂混合，使其发生特定反应生成有色产物。
2）根据反应产物的颜色强度，与标准溶液的颜色强度进行比较，计算样品中可溶性糖的含量。
3. 电化学法：
电化学法是通过利用可溶性糖在电极表面发生氧化还原反应，测定电流、电势或电导率的变化来确定糖浓度的方法。
常用的电化学方法有极谱法和电导法。
步骤：
1）将待测样品与电解质溶液混合，形成电解质溶液。
2）将电解质溶液置于电极中，测量电流、电势或电导率的变化。
3）根据电流、电势或电导率的变化，计算样品中可溶性糖的浓度。
4. 色谱法：
色谱法是通过使用色谱柱将样品中的可溶性糖分离，并通过检测分离后的峰面积或浓度来测定糖含量的方法。
常用的色谱技术有气相色谱和液相色谱。
步骤：
1）将待测样品溶解，注入色谱柱。
2）通过调节流动相的组成和流速，使样品中的可溶性糖分离。
3）通过检测分离后的峰面积或浓度，计算样品中可溶性糖的含量。
总结：
可溶性糖的测定方法有显色法、比色法、电化学法和色谱法等等。
选择合适的测定方法需要根据具体的需求和实验条件来确定。
无论采用哪种方法，都需要在严格控制实验条件的前提下进行，以确保结果的准确性和可重复性。