植物组织中可溶性糖含量的测定
植物组织中可溶性糖含量的测定
植物组织中可溶性糖含量的测定九植物组织中可溶性糖含量的测定⼀．实验⽬的学习可溶性糖测定的蒽酮⽐⾊法⼆．实验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发⽣相应的变化，碳⽔化合物的代谢也不例外其含量也随之发⽣变化。
了解可溶性糖含量的变化，在⽣理上和实践上都有重要的意义。
本实验采⽤蒽酮⽐⾊法测定可溶性糖的含量。
糖在硫酸的作⽤下⽣成糠醛，糠醛再与蒽酮作⽤，形成⼀种绿⾊的络合物.在低浓度时，625nm 的OD值与糖含量成正相关。
该实验⽅法简便，但没有专⼀性，对于绝⼤部分的碳⽔化合物都能与蒽酮反应，产⽣颜⾊。
三．实验⽤品721型分光光度计分析天平研钵恒温⽔浴锅烧杯刻度试管⼤试管活性炭移液管漏⽃酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘⾄恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200µg的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。
稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（⽐重1.84）稀释成1000mL ⽽成。
四．实验步骤1.可溶性糖的提取称取0.5g的新鲜植物（青菜）叶⽚，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒⼊离⼼管内，置于80℃⽔浴中不断搅拌30min，离⼼10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。
在上清液中加0.5g活性炭，80℃⽔浴脱⾊30min,定容⾄10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。
2.显⾊及⽐⾊吸取上述糖提取液1mL，放⼊⼀⼲洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸⽔浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进⾏测定，波长为625nm，测得吸光度。
从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再⾏计算样品中含糖百分数。
3.绘制标准曲线取标准葡萄糖溶液将其稀释成⼀系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80µg。
植物组织中可溶性糖含量测定
实验报告课程：植物生理学实验题目：植物组织中可溶性糖含量的测定一.【实验原理】植物的代谢活动随着植物的发育过程而不断发生着变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化，在种子萌发过程中，在光合作用受到影响时和受到外界环境的胁迫等情况下植物可溶性糖含量都会发生变化。
了解植物可溶性糖含量的变化，在生理上与实践上都有重要意义。
蒽酮比色法是常用的测定可溶性五碳糖和六碳糖的方法，糖在硫酸的作用下脱水生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成一种绿色的络合物，在一定的浓度范围内颜色的深浅与糖含量成正比，可以用比色法测定。
该法简便，但没有专一性，绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应产生颜色。
二.【实验步骤】1、标准曲线的绘制2、可溶性糖的提取3、提取液的显色及比色三.【实验结果】实验中测得的数据如下所示：若以1号管调零，处理后数据如下：作出标准曲线如下：将y=0.261，0.269，0.247分别代入上述函数公式，得到：x=45.000，46.379，42.586；即三样品溶液中糖浓度分别为：45.000μg／mL，46.379μg／mL，42.586μg／mL。
样品中可溶性糖含量（m g·g-1）= A × c／(W × 103)式中，A——植物样品稀释后的体积（mL）；C——提取液的含糖量（μg／mL）；W——植物组织鲜重（g）。
四.【讨论】1、误差分析实验中的误差来源主要有：(1)植物材料称取的误差；(2)植物样品在转移过程中的损失；(3)最后过滤得到的提取液中尚有未除尽的醋酸铅；(4)移液管未润洗等等。
2、注意事项(1)样品提取液的显色应与标准曲线的绘制同步；(2)比色时以蒸馏水调零；(3)醋酸铅一定要除尽；(4)在样品转移过程中，尽量减少材料的损失；(5)进行第二次过滤时要更换滤纸，并将漏斗洗净。
3、植物组织中糖的测定方法还有很多种，举例说明它们的原理和优缺点。
(1)苯酚-硫酸法原理：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10~100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm 波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
植物中可溶性糖含量的测定
一、原理
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。
表24-2苯酚法测可溶性糖绘制标准曲线的试剂量
试剂
100μg/L蔗糖标准液
（mL）
蒸馏水（mL）
蔗糖量（μg）管号00
2.0
01、2
0.2
1.8
203、4
0.4
1.6
405、6
0.6
1.4
607、8
0.8
1.2
809、10
1.0
1.
01002．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.1～0.3 g,共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5～10 mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30 min（提取2次），提取液过滤入25 mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
实验植物组织中可溶性糖含量的测定
实验方案一、实验目的通过实验，掌握测定萝卜品质的方法（一）萝卜外部形态的测定1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸2、实验方法．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
上述特定的糖类物质，反应较稳定。
该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。
三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。
（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡2.称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。
植物体内可溶性糖含量的测定
植物体内可溶性糖含量的测定——蒽酮法一、实验目的1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理2.掌握分光光度计的使用二、实验背景糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
三、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮(C14HoO)缩合成蓝色化合物。
溶液含博量在每mL 150 pg以内，与蔥酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用,样品不必经过水解。
四、材料、仪器及试剂1.材料：苹果2.仪器：分光光度计恒温水箱试管漏斗容量瓶试管架研钵刀片3.试剂：蒽酮试剂(称取100 mg蒽酮溶于100 mL 98%硫酸溶液(A.R)中）葡萄糖标准溶液(100 μg)/mL(精确称取100 mg干燥葡萄糖,用蒸馏水定容至1000 mL）。
样品溶液（可自选待测物制成样品溶液。
eg：称取0.1g苹果剪碎置于研钵中加入少量蒸馏水研磨成匀浆然后转入20ml刻度试管中用10ml蒸馏水分次洗涤研钵洗液一并转入刻度试管中。
置沸水浴中加盖煮沸10分钟冷却后过滤滤液收集于100ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度摇匀备用。
）四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作：取七支干燥洁净的试管编号后，按下表操作。
编号123456700.100.200.300.400.600.80葡萄糖标准液(100ug/ml)H2O 1.00.900.800.700.600.400.20蒽酮试剂10101010101010每管加人葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，传各管都加人蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置冰浴中迅速冷却。
植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法、分光光度法)
Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法）二、原理糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。
显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。
本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。
蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。
三、材料、仪器设备及试剂1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。
2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；50ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。
3.试剂及配制：蒽酮乙酸乙酯试剂：称取蒽酮2 g溶于100ml乙酸乙酯中，棕色瓶保存。
加热溶解。
每次用前检查，有结晶则微热溶解后使用。
100μg·ml－1蔗糖标准母液：准确称取蔗糖1 g于烧杯加少量水溶解后，洗入100ml容量瓶中定容至刻度。
再取1ml稀释定容100ml，即100μg/ml 蔗糖标准液。
四、实验步骤1.蔗糖标准曲线制作1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液。
加入表中试剂后，按顺序加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯溶液，沿壁缓慢加入5ml浓硫酸，并立即摇动使混合均匀，立即沸水浴，每管准确保温1min，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在630nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。
2.样品提取称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g，放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取30min，冷却后过滤入50ml容量瓶中，再次加水10ml，沸水浴30min，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。
残渣如需继续测定淀粉，则过滤前离心，防止残渣流失。
3.糖含量测定吸取待测液0.5ml，加入试管中，再加蒸馏水1.5 ml。
实验8 植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮比色法)
实验七植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
上述特定的糖类物质，反应较稳定。
该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。
三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。
（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。
置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。
3.糖含量测定用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml 蒽酮试剂。
实验四___植物组织中可溶性糖含量的测定
一、实验目的：掌握蒽酮比色法测定可溶性糖含量的 提取和方法原理；掌握分光光度计中标准曲线制作的 使用程序。 二、实验原理：（P48） 三、实验材料：绿豆黄化苗四、实验步骤： 1.可溶性糖的提取：材料不需烘干（1 g鲜重）加入10 mL
纯水，80℃水浴30min，过滤后定容至50mL 。(不必脱色和离 心）
按“SET”进行设置，按“↓翻页”可在标样间切换，设置完毕后。 按“100T％”调零，出现：
请将参比杯拉入光路！ ENT确认
参比测量后按“ENT”，出现：
请置入样品比色皿标号：
输入标号后，出现：
请将样品拉入光路！ ENT确认
按“ENT”确认，拉动拉杆，进入下一比色皿的测量。测量结 束后，得到标准曲线，按“ESC”退回上一层界面。
按“1”进入样品“测量”功能。（此功能是对样品的测量，需 要有参比杯做对照。）按“ENT”，出现：
请将参比杯拉入光路！ ENT确认
测量后，按“ENT”，出现：
请置入样品比色皿标号：
依次测量。 按“3”进入“置入曲线”，（此功能主要用于标准曲线做 完后无法及时做样品测量，故记下曲线公式，在进行测量 前直接输入曲线）页面如下： 置入曲线 当前曲线：C= A+ SET修改↓翻页
723G型分光光度计“标准曲线”建立方法
浓度测量 1 测量 2 AC建 曲线 3 置入 曲线 1-4选择 4 参数 PRN打印 设置 进行此功能操作流程如下：
Байду номын сангаас
在主界面下，按“2”进入“浓度测量”功能，出现如下界面：
按“2”进入“AC建曲线”功能，出现如下界 面： 比色皿： 测建曲线 波长： 标样个数： 标样A1： SET修改↓翻页
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
九植物组织中可溶性糖含量的测定
一．实验目的
学习可溶性糖测定的蒽酮比色法
二．实验原理
植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。
了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。
本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。
糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm 的OD值与糖含量成正相关。
该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。
三．实验用品
721型分光光度计分析天平研钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精（80%）
葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成
500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。
稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。
四．实验步骤
1.可溶性糖的提取
称取0.5g的新鲜植物（青菜）叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1
次，合并上清液。
在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。
2.显色及比色
吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。
从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。
3.绘制标准曲线
取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80μg。
按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。
试剂（ml) 管号
1 2 3 4 5 6
葡萄糖标准液0 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 80%酒精 1.0 0.95 0.9 0.8 0.7 0.6
蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5
葡萄糖浓度（ug/ml) 0 10 20 40 60 80 4.计算样品中含糖量％
设V为植物样品稀释后的体积（m L）
C为提取液的含糖量(μg/ m L)
W为植物组织鲜重(g)
则得计算式如下：
可溶性糖含量％＝( C×V)/(W×106) ×100%
五．注意事项
1.蒽酮试剂含有浓硫酸，使用时应该小心
2.离心时要平衡
3.在蒽酮反应前稀释样品10-20倍
六．实验结果及分析
实验测得吸光度值为0.175，而标准曲线如图1，标准曲线方程为y=0.3573x-0.4879,将y=0.175代入方程，得x=1.185，即C=1.185(μg/ m L)。
可溶性糖含量=( C×V)/(W×106) ×100%
=（1.185*6）/（0.5*106）*100%
=13.42%
所以，实验测得新鲜青菜叶片可溶性糖含量约为13.42%。
（标准曲线见下表）
图1
THANKS !!!
致力为企业和个人提供合同协议，策划案计划书，学习课件等等
打造全网一站式需求
欢迎您的下载，资料仅供参考。