(整理)可溶性糖测定.
可溶性糖的测定
实验1 可溶性糖的测定一、实验目的1．学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。
2．学习721型分光光度计的原理和操作方法。
二、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物。
溶液含糖量在150μg /ml以内，与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接作用，样品不必经过水解。
三、实验器材1．试管（或具塞试管）2. 吸量管及试管架（1 ml、10 ml）3．沸水浴 4. 冰浴5．721型分光光度计6．蒽酮试剂称取100 mg蒽酮溶于100 ml 98%硫酸溶液（A.R）中，用时配制。
7．葡萄糖标准溶液（100 μg/ml）200 ml精确称取100 mg干燥葡萄糖，用蒸馏水定容至1000 ml。
8．样品溶液200 ml 可自选待测物制成样品溶液。
举例：称取500 g市售白薯（或淀粉），洗净切碎后用多功能食品加工机磨成浆，4层纱布压滤、弃滤液溜渣，将渣放于烘箱内80～85℃烘干后，再用植物粉碎机（微型）研细，过筛，取100目筛下物为待测样品。
取样品在烘箱内105℃烘干，恒重后，精确称取1～5 g，置于锥形瓶中，加入80 ml沸蒸馏水，放入沸水浴。
不时摇动，提取0.5 h。
取出立即过滤，残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤，合并滤液。
冷却至室温，用蒸馏水定容至100 ml。
9．白薯。
四、实验步骤：每管加入葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7 min，立即取出置冰浴中迅速冷却。
待各管溶液达室温后，用1 cm厚度的比色皿，以第一管为空白，迅速测其余各管的光吸收值。
然后以第2～7管溶液含糖量μg为横坐标，吸光度（OD620）为纵坐标，画出含糖量与OD620值的相关标准曲线。
可溶性糖的测定
默认分类2010-06-18 13:30:04 阅读22 评论0 字号：大中小订阅苯酚法测定可溶性糖原理：植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛（分子式见蒽酮法）能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，试剂便宜，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色可稳定160min以上。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：新鲜的植物叶片。
（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 水浴锅；3. 刻度试管；4. 刻度吸管。
（三）试剂：1. 90％苯酚溶液称取90克苯酚（AR），加蒸馏水10ml 溶解，在室温下可保存数月；2. 9％苯酚溶液取3ml90％苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配现用；3. 浓硫酸（比重1.84）；4. 1％蔗糖标准液将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000克。
加少量水溶解，转入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；5. 100μg/L 蔗糖标准液精确吸取1％蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水至刻度。
三、实验步骤1. 标准曲线的制：向试管内加入1ml90％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5～20S加入5ml浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8ml，在室温下放置30min，比色。
然后以空白为参比，在485nm波长下比色，以糖含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2. 可溶性糖的提取取：取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份（或干材料），分别放入3支刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复漂洗试管及残渣，定容至刻度。
可溶性糖的测定方法
可溶性糖的测定方法可溶性糖的测定方法有多种，常用的方法包括显色法、比色法、电化学法和色谱法等等。
下面将详细介绍这些方法的原理和步骤。
1. 显色法：显色法是通过特定的试剂与可溶性糖发生反应，产生有色产物来测定糖含量的方法。
常用的试剂有硝酸铜和菲林试剂。
步骤：1）将待测样品与硝酸铜溶液混合，加热沸腾，反应生成红色沉淀。
2）离心沉淀，取上清液用氨水中和。
3）将中和后的溶液与菲林试剂混合，加热沸腾，产生显色反应。
4）使用分光光度计测定显色溶液的吸光度，根据吸光度与可溶性糖浓度之间的关系，计算样品中可溶性糖的含量。
2. 比色法：比色法是通过将待测样品与特定试剂反应，产生有色产物，并与标准溶液进行比色，从而计算样品中可溶性糖含量的方法。
常用的试剂有邻苯二酚、菲林试剂和磷酸重铈。
步骤：1）将待测样品与试剂混合，使其发生特定反应生成有色产物。
2）根据反应产物的颜色强度，与标准溶液的颜色强度进行比较，计算样品中可溶性糖的含量。
3. 电化学法：电化学法是通过利用可溶性糖在电极表面发生氧化还原反应，测定电流、电势或电导率的变化来确定糖浓度的方法。
常用的电化学方法有极谱法和电导法。
步骤：1）将待测样品与电解质溶液混合，形成电解质溶液。
2）将电解质溶液置于电极中，测量电流、电势或电导率的变化。
3）根据电流、电势或电导率的变化，计算样品中可溶性糖的浓度。
4. 色谱法：色谱法是通过使用色谱柱将样品中的可溶性糖分离，并通过检测分离后的峰面积或浓度来测定糖含量的方法。
常用的色谱技术有气相色谱和液相色谱。
步骤：1）将待测样品溶解，注入色谱柱。
2）通过调节流动相的组成和流速，使样品中的可溶性糖分离。
3）通过检测分离后的峰面积或浓度，计算样品中可溶性糖的含量。
总结：可溶性糖的测定方法有显色法、比色法、电化学法和色谱法等等。
选择合适的测定方法需要根据具体的需求和实验条件来确定。
无论采用哪种方法，都需要在严格控制实验条件的前提下进行，以确保结果的准确性和可重复性。
可溶性糖的测定（蒽酮比色法）
可溶性糖的测定——蒽酮比色法原理：可溶性糖与浓硫酸反应生成羟甲基糠醛，其与蒽酮生黄绿或蓝绿的糠醛衍生物，该物质在630nm(620)处有最大吸收峰，其浓度与可溶性糖的含量成正比。
试验用品：电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、1mL，2mL，5mL 移液管各一支、容量瓶（根据需稀释倍数选择25或50mL）、10mL 刻度试管或离心管、试管架（别用胶的）、指型管（大一点的便于震荡混匀液体）、漏斗、滤纸、洗瓶试验药品：蒽酮、乙酸乙酯、分析纯蔗糖、浓硫酸（优级纯或分析纯）、蒸馏水试验样品：玉米叶（干样）标液及标曲配制：蒽酮-乙酸乙酯试剂：称取分析纯蒽酮1g溶于50mL乙酸乙酯中，贮于棕色瓶，至于黑暗中保存，如有结晶析出可加热溶解。
1%蔗糖标准液：精确称取1.000g分析纯蔗糖加少量蒸馏水溶解后转入100mL容量瓶中，加0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度线；100mg/L蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL，加入100mL容量瓶，加水至刻度线。
标曲：项目管号0 1 2 3 4 5各管中蔗糖含量（ug) 0 20 40 60 80 100 100mg/L蔗糖液（ml）0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蒽酮乙酸乙酯试剂（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸（ml） 5 5 5 5 5 5 吸光度A630样品测定：称取0.05g样品于干燥的10mL刻度试管中，加蒸馏水10mL后放入水浴锅内沸水浴30min，再过滤到50mL容量瓶内混匀。
取干燥的指型管分别加入1.5mL蒸馏水、0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂、0.5mL样品溶液和5mL浓硫酸快速震荡摇匀后冷至室温比色（摇匀后反应10min左右可放入冷水中冷却）。
结果计算：可溶性糖含量=Mx×V×D×100V1×W×103Mx：标准溶液查得的糖含量（ug）V ：样品总体积（mL）V1：测定时的取用体积（mL）D ：稀释倍数（mg）103：样品重量单位由mg换算成ug的倍数。
可溶性糖测定方法
可溶性糖测定方法可溶性糖测定方法是一种常用的分析方法，用于测定食品、饮料、果汁等中的可溶性糖含量。
可溶性糖是指在水中能够溶解的糖类化合物，如葡萄糖、果糖、蔗糖等。
测定可溶性糖含量可以帮助我们了解食品的甜味程度，还可以用于质量控制和产品开发等方面。
目前常用的可溶性糖测定方法主要包括比色法、光度法和高效液相色谱法等。
下面我将分别介绍这些方法的原理和步骤。
首先是比色法。
这种方法基于可溶性糖分子与特定试剂的反应，生成具有一定颜色的复合物。
比色法最常用的试剂是菲龙试剂、安利试剂和硝酸铜试剂等。
测定步骤一般包括样品的准备、试剂的配制和比色测定。
样品的准备通常是将食品或饮料样品经过适当处理后，将溶液通过滤纸滤除杂质。
试剂的配制则是根据给定的比例将试剂与溶剂混合。
比色测定时，则是将样品溶液和试剂溶液混合，并在一定时间内测量其吸光度。
根据比色复合物的吸光度与可溶性糖含量的关系，即可计算出样品中可溶性糖的含量。
其次是光度法。
这种方法是利用可溶性糖溶液对特定波长的光的吸收特性进行测定的。
光度法需要使用专用的光度计或分光光度计进行测量。
测定步骤与比色法类似，首先是样品的准备和试剂的配制，然后将试剂与样品溶液混合，并将混合溶液转移到光度计中进行测量。
光度计会根据样品溶液对光的吸收情况，输出吸光度值。
根据吸光度与可溶性糖浓度的相关关系，可以计算出样品中可溶性糖的含量。
最后是高效液相色谱法。
这种方法需要使用高效液相色谱仪进行分析。
高效液相色谱法是通过样品中可溶性糖与色谱柱中的填料分离，进而进行测定的。
测定步骤包括样品的制备和高效液相色谱仪的设置。
样品的制备一般涉及样品的提取和净化等过程。
提取过程通常使用有机溶剂将可溶性糖从样品中提取出来，净化过程则是通过固相萃取等手段去除杂质。
高效液相色谱仪的设置则是根据样品特性，选择合适的色谱柱，并设置适当的流动相条件和检测波长。
测定时，样品溶液会经过自动进样器注入色谱柱，可溶性糖在柱中与填料相互作用而分离，然后通过检测器检测吸收峰面积或浓度，最终计算出样品中可溶性糖的含量。
实验 植物可溶性糖测定
～注意事项～
蒽酮试剂含有浓硫酸，使用时应该小心
离心时要平衡 在蒽酮反应前稀释样品10-20倍
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四、操作步骤
1.可溶性糖的提取 称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加 80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管 内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心 10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的 刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次， 合 并 上 清 液 。 在 上 清 液 中 加 0.5g 活 性 炭 ， 80℃水浴脱色30min，定容至10ml，过滤后 取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。
植物组织中可溶性糖含量的测定
பைடு நூலகம்
一、实验目的
学习可溶性糖测定的蒽酮比色法
二、实验原理
植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发
生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外， 其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量 的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。 本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。 糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮 作用，形成一种绿色的络合物。在低浓度时， 625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法 简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水 化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。
试剂（ml) 1
葡萄糖标准液 80%酒精 蒽酮-硫酸试剂
管号 2 3 4 5 6 7
0
0.15 0.3 0.45 0.6 0.75 0.9
1.0 0.85 0.7 0.55 0.4 0.25 0.1 5 5
30
5
60
5
90
5
120
5
150
5
180
葡萄糖浓度（ul/ml)0
可溶性糖的测定3
10、11、13、14、试管号0 1、2、3 4、5/ml标准蔗
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1糖溶液(mL)
蒸馏水(mL) 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1蔗糖浓度(µg) 0 20 40 60 80 100
按上述取样量取好后+加5mL蒽酮试剂(加蒽酮期间最好放在冷水中以使反应时间一致)?震荡?95?水浴10分钟?震荡?自来水中冷却至室温?630nm比色4、绘制标准曲线:在excel中以蔗糖终浓度为横坐标，吸光值为纵坐标作散点
可溶性糖的测定
可溶性糖的测定
一、标准曲线制作
1、标准蔗糖溶液(100µg/ml):标准称取0.5g烘干的分析纯无水蔗糖溶于水?
蒸馏水定容到50mL?取0.5mL?蒸馏水定容至50mL
2、蒽酮试剂: 84ml浓硫酸(比重1.84)+16mL蒸馏水冷却至不烫手，称取0.15g
蒽酮，溶解其中，贮于具塞棕色瓶中，当天配置当天用。
2、查标准曲线，计算蔗糖浓度
注意事项:
与硫酸含水量、显色温度、显色时间有关，所有控制好这些条件，最好一致
2图，并拟合直线，看其拟合度R越大越好
二、样品测定
1、称0.1g过100目筛的烘干样品—?10ml离心管中—?6—7ml蒸馏水—?100?水浴，30分钟—?4800转/分5分钟—?收集上清液—?加水6-7ml离心，如此重复提取3次，收集三次上清液于50ml容量瓶中—?蒸馏水定容—?取待测液1.0ml—?加水1 ml—?加蒽酮5ml—?与标准曲线制作步骤同—?630nm下测,,,
可溶性糖的测定
实验1 可溶性糖的测定一、实验目的1．学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。
2．学习721型分光光度计的原理和操作方法。
二、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物。
溶液含糖量在150μg /ml以内，与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接作用，样品不必经过水解。
三、实验器材1．试管（或具塞试管）2. 吸量管及试管架（1 ml、10 ml）3．沸水浴 4. 冰浴5．721型分光光度计6．蒽酮试剂称取100 mg蒽酮溶于100 ml 98%硫酸溶液（A.R）中，用时配制。
7．葡萄糖标准溶液（100 μg/ml）200 ml精确称取100 mg干燥葡萄糖，用蒸馏水定容至1000 ml。
8．样品溶液200 ml 可自选待测物制成样品溶液。
举例：称取500 g市售白薯（或淀粉），洗净切碎后用多功能食品加工机磨成浆，4层纱布压滤、弃滤液溜渣，将渣放于烘箱内80～85℃烘干后，再用植物粉碎机（微型）研细，过筛，取100目筛下物为待测样品。
取样品在烘箱内105℃烘干，恒重后，精确称取1～5 g，置于锥形瓶中，加入80 ml沸蒸馏水，放入沸水浴。
不时摇动，提取0.5 h。
取出立即过滤，残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤，合并滤液。
冷却至室温，用蒸馏水定容至100 ml。
9．白薯。
四、实验步骤：每管加入葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7 min，立即取出置冰浴中迅速冷却。
待各管溶液达室温后，用1 cm厚度的比色皿，以第一管为空白，迅速测其余各管的光吸收值。
然后以第2～7管溶液含糖量μg为横坐标，吸光度（OD620）为纵坐标，画出含糖量与OD620值的相关标准曲1要在冰浴条件下加入蒽酮，以防止发热，影响颜色反应。
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引言可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的植物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。
对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。
因此，可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。
而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中，是人体热量的最最主要来源，具有较高的营养价值。
本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法，及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。
1 蒽酮比色法1.1 原理糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物，颜色的深浅与糖含量有关。
在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。
由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。
1.2 仪器与材料1.2.1实验仪器分光光度计，电炉，铝锅，电子天平，20ml刻度试管，刻度吸管5ml 1支、1ml 2支，漏斗。
1.2.2实验试剂（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。
（2）浓硫酸（比重1.84）。
1.2.3实验材料植物叶片。
1.3 实验方法1.3.1标准曲线的制作取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。
然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。
然后以空白为参比，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
1.3.2可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，或干材料。
分别放入3支刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min （提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
1.3.3显色测定吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中（重复2次），加蒸馏水1.5ml，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。
1.3.4结果计算可溶性糖含量(mg/g) = （从回归方程求得糖量/吸取样品液的体积）×提取液量×稀释倍数÷样品干重×10-62 铜还原碘量法2.1 原理试剂中的Cu2+与还原糖作用，生成氧化亚铜(Cu2O)沉淀。
加入H2SO4后，氧化亚铜溶解生成Cu+,试剂中的KIO3与KI在酸化的同是生成I2。
KIO3+5KI+3H2SO4→3K2SO4+3H2O+3I2，然后Cu+被I2氧化，2Cu++I2→2Cu+ + 2I-溶液中剩余的碘以淀粉为指示剂，用Na2S2O3标准溶液滴定：Na2S2O3+ I2→Na2S2O6 + 2NaI同时以水代替样试液做空白滴定，将空白与样品的滴定差值带入由滴定标准系列糖液计算的回归方程中，即可求得所求试样中还原糖的含量。
2.2 仪器与试剂2.2.1实验试剂除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和GB∕T 6682 规定的至少三级水。
氢氧化钠溶液碱性铜试剂，盐酸溶液[c（HCl）=1mol∕L]，亚铁氰化钾溶液{w[K4Fe （CN）6·H2O=15％]}，硫酸锌溶液[w(ZnSO4·7H2O）6·H2O=30％]，硫酸+草酸混合液，硫代硫酸钠溶液，硫代硫酸钠工作溶液[c（Na2S2O3）=0.005mol∕L]，淀粉指示剂，酚酞指示剂，氢氧化钠溶液[c（NaOH）=0.5mol∕L]，葡萄糖标准液。
2.2.2仪器和设备分析天平，高速组织捣碎机，电磁炉、可调温电炉或恒温水浴锅，25mL滴定管，（酸式、减式皆可），鼓风干燥箱。
2.3 实验方法2.3.1样品制备（1）新鲜样品：取有代表性的样品，洗净，把水吸干，用四分法取样，切碎，混匀，用组织捣碎机匀浆。
黄瓜，番茄等多汁蔬菜可直接制成匀浆。
其他样品蔬菜可称取切碎混匀的样品100.0g，加入100mL水制成匀浆，韭菜等水分较少的蔬菜可称取切碎混匀的样品100.0g，加入200mL水制成匀浆。
去相当于10g样品的匀浆，精确到0.01g，用水洗入100mL容量瓶（V1）中，加入亚铁氰化钾溶液和硫酸锌溶液各1mL（如菜豆累高蛋白蔬菜可加入2mL）。
摇匀后定容，放置片刻，等沉淀分离后过滤备用。
（2）干制品：将样品至于63℃~67℃鼓风干燥后，用粉碎机粉碎，过0.5mm筛。
去1.00g~2.00g粉碎的样品防雨烧杯中，加入少量水湿润，用水洗入100mL容量瓶中，用沸水浴加热10min，冷却后，加入亚铁氰化钾溶液和硫酸锌溶液各1mL，摇匀后定容，过滤后备用。
（3）制品各种酱腌菜：去切碎混匀的样品100.0g，加入100mL水制成匀浆。
蔬菜罐头可直接制取匀浆，操作步骤同5.1。
番茄酱混匀后，可直接制取5.00g样品用水洗入100mL容量瓶同5.1操作。
蔬菜汁称取混匀的样品20.00g用水洗入100mL容量瓶同5.1操作。
2.3.2还原糖的鉴定（1）标准曲线的制作：用移液管吸取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL的葡萄糖标准液与100mL锥形瓶中，或200mm×25mm的试管中，各加水至5.0mL，加入5mL的铜试剂，锥形瓶或试管口上加小漏斗，用相应的架子固定，置于沸水浴中加热15min。
取出后立即置于冷水中，冷却至25℃到30℃。
将加盖小漏斗更换为表面皿（不可摇动）。
加入2mL硫酸+草酸的混合液，立即摇动，使氢氧化亚铜完全溶解。
用硫代硫酸钠工作溶液滴定至浅黄绿色时，加入约0.5mL的淀粉指示剂，滴定至蓝色消失为终点。
以糖的含量（mg）为y，空白与糖液滴定差值为x，计算回归方程y=bx+a并计算出a和b的值。
标准曲线于没新配一次铜试剂和硫代硫酸钠储备液制备一次即可。
（2）试样还原糖的测定：根据不同样品中糖的含量，用移液管吸取5mL～10mL(V2)与50mL或100mL(V3)于容量瓶中.用水定容(含糖量低的样品不作次稀释处理)。
从容量瓶中吸取5.00mL（V5）与锥形瓶或试管中，加入5.00mL的铜试剂。
以下按6.1.1标准曲线的制作步骤操作。
记录滴定值（V4）。
同时以水代替试样作空白（可不加热）。
将试样与空白滴定差值带入回归方程即可算出试样中还原糖的含量。
如试样与铜试剂加热反应后，砖红色氧化亚铜的含量较多看不到蓝色，则样品含糖量偏高，可酌情吸取1mL～4mL样液，加水至5.00mL测定。
滴定值应不少于标准曲线的最高点。
（3）试样可溶性总糖测定：用移液管吸取5mL～10mL与50mL或100mL于容量瓶中，加入1mL的盐酸溶液，置于沸水浴中加热10min，冷却，加入酚酞试剂1～2滴，用约0.5mol∕L氢氧化钠溶液中和至红色，再用稀盐酸调定红色刚刚消失，定容。
以下按还原糖步骤操作[1]。
2.3.3结果计算试样中可溶性总糖的的含量以质量分数w1计，单位以百分率（％）表示，计算式如下：W1=[a+b(V0-V4)×V1×V3]/V2×V5×m×10003 费林试剂法3.1 原理在沸热条件下,用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时将费林试剂中的二价铜还原为一价铜,以亚甲基蓝为指示剂,稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。
3.2 仪器与试剂3.2.1仪器设备高速组织捣碎机，电热恒温水浴，1000W调温电炉，200ml,250ml容量瓶，250ml 锥形瓶，50ml碱式滴定管。
3.2.2实验试剂（1）费林试剂甲：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O，分析纯)34.6g溶于水中，稀释至500ml，过滤，贮于棕色瓶内。
（2）费林试剂乙：称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠(KNaC4O6H4·4H2O，分析纯)138g 溶于水中，稀释至500ml,用石棉垫漏斗抽滤。
（3）转化糖标准溶液：称取9.5g蔗糖(分析纯)用水溶解后转入1000ml容量瓶中，加入6MHCl(分析纯)10ml,加水至100ml。
在20～25℃下放置三天或在25℃保温24h，然后用水定容(此为酸化的1%转化糖液,可保存3～4个月)。
测定时，取1%转化糖液25.00ml放入250ml容量瓶中,加入甲基红指示剂一滴，用1MNaOH溶液中和后用水定容，即为1mg/ml转化糖标准溶液。
（4）亚甲基蓝溶液：称取0.5g亚甲基蓝(分析纯)溶于100ml水中。
（5）乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌［Zn(OAC)2·2H2O，分析纯］溶于水中，加冰乙酸3ml，稀释至100ml。
（6）亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾［K4Fe(CN)6·3H2O,分析纯］溶于水，稀释至100ml。
3.3 实验方法3.3.1样品提取液制备取待测样品适量，洗净，用不锈钢刀将可食部分切成适当小块充分混匀后，按四分法取样。
称取100g鲜样加入等重量的水，放入组织捣碎机中捣成1:1匀浆，有些材料匀浆比例可适当调整，多汁果蔬类可直接捣浆。
称取匀浆25.0或50.0g(相当于样品12.5或25.0g)放入150ml烧杯中，含有机酸较多的材料加0.5～2.0g粉状CaCO3调至中性(广范试纸检试)。
用水将样液全部转入250ml容量瓶中，并调整体积约为200ml。
置80±2℃水浴保温30min，其间摇动数次，取出加入乙酸锌溶液及亚铁氰化钾溶液各2～5ml,冷却至室温后，用水定容，过滤备用。
3.3.2可溶性糖测定（1）费林试剂的标定：取费林试剂甲、乙各 5.00ml或在测定前先等体积混合后取10.00ml混合液于250ml锥形瓶中,放入玻璃珠4～5粒,先加入比预测(按6.2进行预测)仅少0.5ml的1mg/ml转化糖标准液。
将此混合液置1000W电炉上加热,使其在2min 左右沸腾,准确煮沸2min,此时不离开电炉,立即加入0.5%亚甲基蓝指示剂6滴,并继续以每4～5s的滴速滴加标准糖液,直至二价铜离子完全被还原生成砖红色氧化亚铜沉淀,溶液蓝色褪尽为终点。
用准确滴定标准糖液的毫升数V1,乘以标准糖液浓度［mg/ml］,即得10ml费林试剂所相当的糖的毫克数。