蒽酮法测还原糖
蒽酮比色法测定紫花地丁中总糖及还原糖含量
Abstract: Objective: Choosing the best conditions of extracting the total sugar in viola philippicassp munda W. Becker and testing the content of total sugar and reducing sugar in various parts of it. Methods: using orthogonal design L9（33）to choose the best condition of the ratio of material and solvent, reaction time and concentration of HCl, and testing total sugar and reducing sugar unnder 624 nm by Anthrone colorimetry. Results: The content of total sugar in the leaves、leafstalks and roots is 11.53 %,12.1 %,35.8 % respectively, and the content of reducing sugar in the parts above is 4.78 %,4.44 %,11.74 % respectively. The percentage of the experiment is well, RSD is 1.84 % and the Recovery rate is 97.61 %.
Keywords：Viola philippicassp Munda W.Becker; Total sugar; Reducing sugar; Anthrone colorimetry.
黄酒中总糖与还原糖含量测定方法比较
黄酒中总糖与还原糖含量测定方法比较黄酒作为一种传统的中国酒类饮品，其甜度对于消费者来说是一个重要的指标之一、而酒中的糖分主要可以分为总糖和还原糖两部分。
总糖是指以葡萄糖为单位计算的糖的总含量，包括单糖、双糖和多糖等。
而还原糖则是指可以通过还原反应将还原糖转化为葡萄糖的糖的含量。
目前测定黄酒中总糖和还原糖含量的方法有很多种，下面将对其中的几种常用方法进行比较。
一、酶法测定酶法测定是一种常用的测定酒中糖含量的方法。
其基本原理是利用特定的酶将糖分解成可以被检测的物质，进而测定其浓度。
常用的酶法测定总糖和还原糖的方法有苯酚-硫酸法、巴氏显色法和Nelson-Somogyi法等。
苯酚-硫酸法是一种简单、灵敏的测定方法。
该方法将样品中的糖与苯酚发生反应，生成呈紫蓝色的复合物，再用硫酸将复合物水解，生成浓黄色的产物。
样品的吸光度与糖的含量成正比。
巴氏显色法和Nelson-Somogyi法是一种将糖与多酚氧化酶作用后生成还原物质，再与葡萄糖酸生成呈蓝色的化合物的方法。
二、硫酸蒽酮显色法硫酸蒽酮显色法是一种测定还原糖含量的方法。
其基本原理是还原糖经酸水解生成葡萄糖，葡萄糖与蒽酮反应生成紫红色的产物，其吸光度与还原糖的浓度成正比。
该方法操作简单、时间短，但只适用于测定还原糖，不能测定总糖的含量。
三、显色剂法显色剂法是一种常用的测定总糖含量的方法。
其基本原理是糖与特定的显色剂反应生成有色化合物，通过测定化合物的吸光度来测定糖的含量。
显色剂法可以测定总糖的含量，但不能区分不同类型的糖。
四、色谱法色谱法是一种常用于测定糖含量的方法。
其基本原理是将糖分离开来，并通过色谱柱上的吸附剂将糖分解为可以被检测的物质。
常用的色谱法有高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）等。
HPLC法可以快速、准确地分析各种糖类的含量，但设备价格较高。
GC法适用于分析低浓度的糖类，但需要进行样品的脂肪酸酯化处理。
综上所述，测定黄酒中总糖和还原糖含量的方法有很多种，各种方法有其优劣之处。
蒽酮比色法测糖.doc
蒽酮比色法测糖一目的掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法二原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。
三实验器材及试剂马铃薯干粉、可调试移液器或移液管、可见分光光度计（723型）、电子分析天平、水浴锅、电炉子蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80%H2SO4定容到1000ml，当日配制使用。
标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml备用。
葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100mg，配制成500ml溶液，即得每ml含糖为200μg的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000ml稀硫酸中即得。
硫酸溶液由760m l浓硫酸（比重1.84)稀释成1000ml而成。
2g/L蒽酮试剂：溶解2g蒽酮于1L浓硫酸（98%的浓硫酸）中，当日配制使用。
四、操作1．可溶性糖的提取称取重约5g的新鲜植物叶子，于研钵中乙醚少许，仔细研磨成均匀的浆状物，倒入烧杯中，用70℃热水洗涤研钵，洗液并入烧杯中，再加蒸镏水30─40ml。
将烧杯放在水浴锅中加热，保持温度70─80℃约半小时，冷却后1滴1滴地加入饱和中性醋酸铅，以除去蛋白质，直至加入醋酸铅时不再形成白色沉淀为止。
然后将此混合物连同残渣一并洗入100ml容量瓶中，加水至刻度，充分振荡。
以干燥漏斗将滤液过滤于一干燥的三角烧瓶中，瓶中事先放有少量（约0.2─0.4g）草酸钠粉末，以除去滤液中过量的醋酸铅，使生成草酸铅沉淀，再行过滤，所得的透明滤液即为可溶性糖提取液。
蒽酮法测还原糖
总糖的含量的测定（蒽酮法）一、实验目的掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。
二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。
蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620 nm 处有最大吸收。
蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈红色。
对于以上特定的糖类反应较稳定。
三、实验器材1.吸管2.试管3.分光光度计4.水浴锅5.电炉6.电子分析天平四、实验试剂1．蒽酮试剂：取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中，当时配制使用。
2．标准葡萄糖溶液（0.1 mg/ml）：100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。
3． 6 mol/l HCl溶液。
4．10 % NaOH溶液：称取10 g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100 ml。
五、实验操作1.制作标准曲线取干净试管7支，按下表进行操作。
表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作2.样品的处理（见实验四）取上述实验四的水解液，冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸馏水定容至100 ml，过滤，取滤液10 ml，用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液，用于糖含量的测定。
测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量（同标准曲线）。
样品中糖含量的计算：w —糖的质量分数（%）；C —从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml)； V —样品稀释后的体积（ml ）；m —样品的质量（mg ）。
ｗ＝ CVｍ ×100%。
实验十蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量
实验十蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量一、实验目的掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法。
二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
酸可使糖类（如已糖基，戊醛糖及已糖醛酸）脱水生成糠醛，生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大光吸收值。
在10~100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
而对于上述特定的糖类物质，反映较稳定。
多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应，因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。
这一种方法具有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右时就能进行测定，所以可作为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器，试剂和材料1．仪器（1）分光光度计；（6）漏斗，漏斗架个6个（2）电子天平；（7）容量瓶：50ml2个；（3）三角瓶：50ml2个（8）移液管；（4）刻度具塞试管；10ml13支；（9）水浴锅。
（5）试管架，试管夹各2个；2．试剂（1）葡萄糖标准液：100ug/ml；（2）浓硫酸；（3）蒽酮试剂：0.2g蒽酮，溶于100ml浓流酸中，现当日配制使用。
3．材料小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织（大白菜心）。
四、操作步骤1．葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液；管号1234567葡萄糖标准液/mL00.10.20.30.40.50.6蒸馏水/mL 1.00.90.80.70.60.70.8葡萄糖含量/ug0102030405060在每支试管中，加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸入冰水浴中冷却。
各加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。
以标准葡萄糖含量（ug）做横坐标，以吸光值作纵坐标，做出标准曲线。
蒽酮法实验报告
一、实验目的1. 熟悉蒽酮法检测还原糖的基本原理和方法。
2. 掌握蒽酮试剂的配制和操作步骤。
3. 通过实验，学会运用蒽酮法检测还原糖含量。
二、实验原理蒽酮法是一种检测还原糖的经典方法。
其原理是还原糖在酸性条件下，能与蒽酮发生显色反应，生成红色化合物。
根据溶液颜色的深浅，可以计算出还原糖的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 标准葡萄糖溶液- 样品溶液- 蒽酮试剂- 醋酸- 硫酸- 水浴锅- 移液管- 比色皿- 分光光度计2. 实验仪器：- 实验台- 电子天平- 移液器- 烧杯- 滴定管- 玻璃棒四、实验步骤1. 配制蒽酮试剂：- 称取0.1g蒽酮，加入100mL醋酸溶液，溶解后转移至1000mL容量瓶中，用醋酸溶液定容至刻度。
2. 标准曲线的制作：- 分别吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL标准葡萄糖溶液于6个试管中，依次加入5mL蒽酮试剂，混匀后放入水浴锅中加热10分钟。
- 取出试管，冷却至室温，用蒸馏水定容至10mL。
- 使用分光光度计在波长620nm处测定吸光度。
- 以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品溶液的制备：- 称取一定量的样品，加入适量的蒸馏水，溶解后定容至100mL。
4. 样品溶液的测定：- 分别吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL样品溶液于6个试管中，依次加入5mL蒽酮试剂，混匀后放入水浴锅中加热10分钟。
- 取出试管，冷却至室温，用蒸馏水定容至10mL。
- 使用分光光度计在波长620nm处测定吸光度。
5. 还原糖含量的计算：- 根据样品溶液的吸光度，从标准曲线中查得相应的葡萄糖浓度。
- 根据样品溶液的体积和浓度，计算还原糖含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：- 标准曲线的线性范围为0.5～2.5mg/mL。
2. 样品溶液的测定：- 样品溶液的吸光度在标准曲线的线性范围内。
3. 还原糖含量的计算：- 样品溶液的还原糖含量为（计算值）mg/mL。
还原糖的测定实验报告[生物化学实验报告]
![还原糖的测定实验报告[生物化学实验报告]](https://img.taocdn.com/s3/m/73e5e828cec789eb172ded630b1c59eef8c79ab9.png)
还原糖的测定实验报告[生物化学实验报告]实验一糖类的性质实验〔一〕糖类的颜色反响一、实验目的1、了解糖类某些颜色反响的原理。
2、学习应用糖的颜色反响鉴别糖类的方法。
二、颜色反响〔一〕α-萘酚反响1、原理糖在浓无机酸〔硫酸、盐酸〕作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。
因为糠醛及糠醛衍生物对此反响均呈阳性，故此反响不是糖类的特异反响。
2、器材试管及试管架，滴管3、试剂莫氏试剂：5％α-萘酚的酒精溶液1500mL.称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100mL，贮于棕色瓶内。
用前配制。
1％葡萄糖溶液100mL1％果糖溶液100mL1％蔗糖溶液100mL1％淀粉溶液100mL0.1％糠醛溶液100mL浓硫酸500mL4、实验操作取5支试管，分别参加1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、0.1％糠醛溶液各1mL。
再向5支试管中各参加2滴莫氏试剂，充分混合。
倾斜试管，小心地沿试管壁参加浓硫酸1mL，慢慢立起试管，切勿摇动。
观察记录各管颜色。
〔二〕间苯二酚反响1、原理在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。
此反响是酮醣的特异反响。
醛糖在同样条件下呈色反响缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反响。
实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反响。
2、器材试管及试管架，滴管3、试剂塞氏试剂：0.05％间苯二酚－盐酸溶液1000mL，称取间苯二酚0.05g 溶于30mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000mL。
1％葡萄糖溶液100mL1％果糖溶液100mL1％蔗糖溶液100mL4、实验操作取3试管，分别参加1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液各0.5mL。
再向3支试管中各参加塞氏试剂5mL，充分混合。
将试管同时放入沸水浴中，观察记录各管颜色。
(二)糖类的复原作用一、实验目的1、理解并掌握糖类的复原性质；2、学习常用的鉴定糖类复原性的方法。
淀粉总糖还原糖的测定方法
淀粉总糖还原糖的测定方法淀粉的测定方法---蒽酮法一( 原理用乙醇将烟叶中可溶性糖浸出并分离出去，而后烟叶中淀粉用适量Hcl，因淀粉在稀酸作用下被水解成葡萄糖，再按葡萄糖测定进行。
根据葡萄糖的含量从而算出淀粉含量。
二( 仪器设备三角瓶50ml 容量瓶100ml 移液管10ml、1ml 漏斗圆底烧瓶1000ml 离心管和离心机水浴锅温度计烘箱滤纸天平分光光度计三( 试剂盐酸乙醇氢氧化钠蒽酮四、试剂的配制和标准曲线的绘制1. 葡萄糖标准液的配制称取无水葡萄糖(AR级)0.1g溶于蒸馏水中，定容至100毫升，用前取此液10毫升，再用水稀释至100毫升。
2. 标准曲线的绘制取6支干洁刻度试管，依次移入葡萄糖标准液(100μg/ml)0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml后，再从1至6试管依次补加1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0ml蒸馏水后，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，以吸光值为纵坐标，糖含量为横坐标，绘出标准曲线 3. 80%乙醇的配制取400毫升乙醇加水定容至500ml4. 1当量的盐酸配制 43毫升浓盐酸加水定容至500ml5. 10%氢氧化钠配制 10g氢氧化钠溶于100ml水中6. 蒽酮试剂:1克蒽酮溶于72%的HSO1000ml(98%的HSO+240的蒸馏水)，棕色瓶冰箱2424保存2,3周。
五实验步骤1. 分离出水溶性糖0.1g样置于离心管中加入8毫升80%乙醇 80?水浴浸提30分钟冷却后离心(3600转)5分钟残渣再加入8ml80%乙醇。
重复三次2. 水解残渣用1当量的盐酸15ml洗入50ml三角瓶，摇匀后烘箱105度加热3.5小时，冷却后加10%氢氧化钠6ml中和，过滤，蒸馏水定容100ml。
3. 测定取滤液1ml(空白用1ml蒸馏水代替)，加入蒽酮试剂5ml，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色六结果的计算与表述C=AN*0.9/W) C—样品淀粉含量(μg/g) W—样品重量(gA—标准曲线查得的糖量(μg) N—样品提取液占样品反应液的倍数蒽酮比色法测总糖:实验步骤:1、可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品0.100克，置于离心管中，加入8毫升80%乙醇，于80?水浴浸提30分钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8毫升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。
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总糖的含量的测定（蒽酮法）
一、实验目的
掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。
二、实验原理
蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。
蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620 nm 处有最大吸收。
蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈红色。
对于以上特定的糖类反应较稳定。
三、实验器材
1.吸管
2.试管
3.分光光度计
4.水浴锅
5.电炉
6.电子分析天平
四、实验试剂
1．蒽酮试剂：取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中，当时配制使用。
2．标准葡萄糖溶液（0.1 mg/ml）：100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。
3． 6 mol/l HCl溶液。
4．10 % NaOH溶液：称取10 g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100 ml。
五、实验操作
1.制作标准曲线
取干净试管7支，按下表进行操作。
表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作
2.样品的处理（见实验四）
取上述实验四的水解液，冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸馏水定容至100 ml，过滤，取滤液10 ml，用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液，用于糖含量的测定。
测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量（同标准曲线）。
样品中糖含量的计算：
w —糖的质量分数（%）；
C —从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml)； V —样品稀释后的体积（ml ）；
m —样品的质量（mg ）。
ｗ＝ CV
ｍ ×100%。