蒽酮法测还原糖

总糖的含量的测定（蒽酮法）

一、实验目的

掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。

二、实验原理

蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620 nm 处有最大吸收。蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈红色。对于以上特定的糖类反应较稳定。

三、实验器材

1.吸管

2.试管

3.分光光度计

4.水浴锅

5.电炉

6.电子分析天平

四、实验试剂

1．蒽酮试剂：取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中，当时配制使用。

2．标准葡萄糖溶液（0.1 mg/ml）：100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。

3． 6 mol/l HCl溶液。

4．10 % NaOH溶液：称取10 g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100 ml。

五、实验操作

1.制作标准曲线

取干净试管7支，按下表进行操作。

表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作

2.样品的处理（见实验四）

取上述实验四的水解液，冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸馏水定容至100 ml，过滤，取滤液10 ml，用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液，用于糖含量的测定。

测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量（同标准曲线）。

样品中糖含量的计算：

w —糖的质量分数（%）；

C —从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml)； V —样品稀释后的体积（ml ）；

m —样品的质量（mg ）。

ｗ＝ CV

ｍ ×100%