实验7 土壤硝态氮的紫外分光光度法
土壤中氮含量的测定方法
[3] 宋歌, 孙波, 教剑英. 测定土壤硝态氮的紫外分光光度法与 其他方法的比较. 土壤学报, 2007 年3 月第44 卷第2 期:288～293
[4] 土壤中速效氮的测定方法, 土壤肥料 [5] 徐晓荣, 李恒辉, 陈良. 还原蒸馏法与酚二磺酸比色法测定
同时，过度使用氮肥，会导致水体富营养化，即水体中氮磷等营 养元素的富集，导致某些特征性藻类（主要为蓝藻、绿藻等）的异常 增殖，使水体透明度下降，水体溶解氧量下降，水质恶化，鱼类及其 他生物大量死亡的现象。
土壤中氮的分类
存在形式 ： 主要可分为硝态氮和铵太氮
溶解性： 分为水解性氮和不溶性氮
能否被植物直接吸收： 可分为有效氮（速效氮）和无效氮。
▪ 2、紫外分光光度法(校正因数法) 与经典的还原蒸馏法、镀铜镉 还原2重氮化偶合比色法,尤其是酚二磺酸法的测定结果具有可比 性,且操作相对简单,测定速度快。对于有机质低于50 g kg - 1的矿 质土壤来说,可以使用2. 2 作为校正因数,测定范围从N1～2 mg kg - 1到近于N 100 mg kg - 1 ,而测定水样硝酸盐含量使用的校正因数 2. 0[12 ,13 ]并不适用于土壤硝态氮含量的测定。土壤有机质高于 50 g kg - 1时,紫外分光光度法的校正因数有随之上升的趋势,但森 林土壤因表土层中有机质以粗腐殖质为主,校正因数未必很高。有 机质含量和性质与校正因数的定量关系尚需进一步深入研究。
▪ 混合法及其他：示波极谱滴定法、生物培养法、毛细管 电泳分析法、流动注射分析法、开氏消煮-常量蒸馏-纳 氏试剂光度法等
半微量克氏（Kjeldahl）法
水质中硝态氮和亚硝态氮测定
水质中硝态氮和亚硝态氮测定水质中的硝态氮测定(紫外分光光度法)原理:利用硝酸盐在220nm波长具有紫外吸收和在275nm波长不具吸收的性质进行测定,于275nm波长测出有机物的吸收值在测定结果中校正.试剂:1. 无硝酸盐纯水:采用重蒸馏或者蒸馏---去离子法制备,用于配制试剂及稀释样品.2. 盐酸溶液(1+11).3. 硝酸盐氮标准储备溶液[p(NO3---N)=100ug/mL]:称取经105`C烤箱干燥2h的硝酸钾(KNO3) 0.7218g,溶于纯水中并定容至1000mL,每升中加入2mL三氯甲烷,至少可稳定6个月.4. 硝酸盐氮标准使用溶液[p(NO3---N)=10ug/mL].仪器:1. 紫外分光光度计以及石英比色皿.2. 具有比色管:50mL分析步骤:1. 水预样处理:吸收50mL水样于50mL比色管中加1mL盐酸溶液酸化.2. 标准系列制备:分别吸收硝酸盐氮标准使用溶液0mL/L~7mg/L 硝酸盐氮标准系列,用纯水稀释到50mL,各加1mL盐酸溶液.3. 用纯水调节仪器吸光度为0，分别在220nm和275nm波长测量吸光度.计算:在标准样品的220nm波长吸光度中减去2倍于275nm波长的吸光度,绘制标准曲线和在曲线上直接读出样品中的硝酸盐氮的质量浓度.注:若275nm波长吸光度的2倍大于220nm波长吸光度的10%时,本标准将不能适用.水质中亚硝态氮的测定(重氮偶合分光光度法)原理:在pH1.7以下,水中亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺氮化,再与盐酸N-(1-萘)-乙二胺产生偶合反应,生成紫红色的偶氮染料,比色定量.试剂:1. 氢氧化铝悬浮液2. 对氨基苯磺酰胺溶液3. 盐酸N-(1-萘)-乙二胺溶液4. 亚硝酸盐氮标准储备液[p(NO2—N)=50ug/mL]:称取0.2463g 在玻璃干燥器内放置24h的亚硝酸钠(NaNO2),溶于纯水中,并定容至1000mL.每升中加2mL三氯甲烷保存.5. 亚硝酸盐氮标准使用溶液[p(NO2—N)=0.10ug/mL]仪器:1.具塞比色管:50mL.2.分光光度计.分析步骤:1. 若水样浑浊或色度较深,可先取100mL,加入2mL氢氧化铝悬浮液,搅拌后静置数分钟,过滤.2. 先将水样或处理后的水样用酸或碱调近中性.取50.0mL置于比色管中.3. 另取50mL比色管8支,分别加入亚硝酸盐氮标准液0,0.50,1.00,2.50,5.00,7.50,10.00和12.50mL,用纯水稀释至50mL.4. 向水样以及标准色列管分别加入1mL对氨基苯磺酰胺溶液,摇匀后放置2min~8min.加入1.0mL盐酸N-(1-萘)-乙二胺溶液,立刻混匀.5. 于540nm波长,用1cm比色皿,以纯水作参比,在10min至2h 内,测定吸光度.如亚硝酸盐氮浓度低于4ug/L时,改用3cm比色皿.6. 绘制曲线,查出亚硝态氮含量.计算:水样中亚硝态氮质量浓度计算见式:P(NO2-N)= m / VP(NO2-N):mg/L,亚硝酸氮质量浓度M:从标准曲线上查的样品管中亚硝酸盐氮的质量,单位为微克(ug) V:水样体积,mL。
紫外法测定红土壤中的硝态氮
１ ． ２ ． １ 标准 曲线 的绘 制 。 分别 取质 量浓度 为 １ ０ ０ ｍ Ｌ的硝
酸盐 氮标 准 贮备液 ０ 、 ０ ． ２ ５ 、 ０ ． ５ ０ 、 １ ． ０ ０ 、 １ ． ５ ０ 、 ２ ． ０ ０ ｍＬ于 ５ ０ ｍＬ 的 比 色管 中 ， 然 后 向各 比 色管 中加入 １ ｍＬ浓 度 为 １ ｍ ｏ Ｌ ／ Ｌ 的盐 酸 溶 液 ， 混合 均 匀后用 ７ ５ １ Ｇ 型 紫 外 分 光 光 度 计 在 ２ ２ ０ ｎ ｍ和 ２ ７ ５ ｎ ｍ处 ， 用１ ｃ ｍ 石英比 色皿 测定其吸 光度 ） 。 校正 吸光 度计 算式 ： Ａ ； Ａ 扩２ Ａ 扔。 标 准曲线 的 回归方 程 ：
经过 风干 后 ， 磨 制成 土样 ， 共５ ０ ０份 。
１ ． ２ 试 验 方 法
随机 抽取 ５种土 样 ， 吸取 硝酸 盐 氮标 液 ４ ． ０ ０ ｍＬ加 入 至 １ ０ ０ ｍＬ浸 提 液 中 ， 用 土样 分 析 法 测 定 回收 率 ， 结果见表 ２ 。 由 表 ２可 知 ， 对不 同的土 样测得 回收 率范 围是 ９ ７ ． ２ ％一 １ ０ ２ ． ０ ％， 平 均 回收率 ９ ９ ． ０ ４ ％。
资 源与环 境科 学
现代 农业 科技
２ ０ １ ３年 第 ｌ ３期
紫外法测定红土壤 中的硝态氮
王润 群 ・ 朱清根 彭 建 勇 ｚ 夏 春 宝 周贵萍
（ 江 西 省 吉 安 市 吉 州 区农 业 局 ， 江西吉安 ３ ４ ３ ０ ０ ０； 峡江县农业局 ）
摘 要 根据 硝 态 氮（ 硝 酸 盐氮和 亚硝 酸 盐氮 ） 在 紫外 区具 有 强烈 吸收 的特 征 ， 采 用 国产 ７ ５ １ Ｇ型 紫 外分光 光度 计 对 吉安 市红 土壤 中的 硝 态氮含 量进行 测 定。 经过对 ５ ０ ０份 不 同地点 种植 农作 物的 土样进 行测 定分 析 ， 结果表 明 ， 此 法相 对其 他 方法具 有操 作 简便 、 测 定 范 围宽 、 干扰 因素 少 、 精 密度 和 准确度 高等 优点 。 关键词 红 土壤 ； 硝 态氮 ； 紫外 分光光 度 法 ； 测定； 精 密度 ； 准确 度 中图分 类号 ０ ６ ５ ７ ． ３ ； Ｘ ８ ３ ０ ． ２ 文 献标识 码 Ａ 文 章编 号 １ ０ ０ ７ — ５ ７ ３ ９ （ ２ ０ １ ３ ） １ ３ — ０ ２ ４ ２ — ０ １
土壤全N有效N测定
些，所以联合测定时只好折中处理，使回收率达到
95%即可。
（2）H2SO4用量：
加入浓H2SO4的量要考虑土壤有机质类型、含量以
及加盐量的多少等因素。
一般是0.5-1.5g（含N约1mg时）加5ml浓H2SO4。
加酸的同时要做空白测定，以消除试剂误差。
二、 湿烧法： （开氏法）
1883年，丹麦人开道尔（J.Kjeldahl）创立。
由于仪器设备简单易得，操作也简便，准确度较高，
因此为一般实验室所采用。
目前已有多种半自动及自动定N仪。
开氏法测定土壤全N（半微量法）
一 、原理：
含N有机物在催化剂作用下，与浓H2SO4高温共煮，
使有机N转化成NH4-N（(NH4)2SO4），然后在碱 性溶液中蒸馏出NH3，用H3BO3吸收，再用标准酸 溶液直接滴定H3BO3吸收的NH3，根据酸的用量来 计算N含量。
小时。一般用标准(NH4)2SO4作回收试验。此法
受室温、液层厚度、内室大小等因素的影响。
小结
开氏法测定全氮步骤：
催化剂+浓H2SO4 OH-
有机N
(+无机N)
NH4+
NH3
H3BO3
NH4+ + H2BO3H+ H3BO3 |
|
样品的消煮
|
消煮液中NH4+的定量(蒸馏)
结果计算：
(v - v 0 ) c 14 10-3 土壤全氮含量 (g/kg) 103 m
CuSO4催化效率不如前两者，但毒性小，使用完全， 不易引起N素损失。 催化过程为： 4CuSO4+3C+2H2SO42Cu2SO4+4SO2+3CO2+2H2O Cu2SO4+2H2SO42CuSO4+SO2+2H2O 即：当土壤有机质分解完毕，C被完全氧化后，消煮
土壤中氮含量的测定方法
缺氮时： 植物缺氮就会失去绿色,植株生长矮小细弱,分枝分蘖少,叶色变淡, 呈色泽均一的浅绿或黄绿色。蛋白质在植株体内不断合成和分解,因氮 易从较老组织运输到幼嫩组织中被再利用,首先从下部老叶片开始均匀 黄化,逐渐扩展到上部叶片,黄叶脱落提早。株型也发生改变,瘦小、直 立,茎杆细瘦。根量少、细长而色白。侧芽呈休眠状态或枯萎。花和果 实少。成熟提早。产量、品质下降。 氮过量时： 氮过量时往往伴随缺钾和或缺磷现象发生,造成营养生长旺盛,植 株高大细长,节间长,叶片柔软,腋芽生长旺盛,开花少,座果率低,果实膨 大慢,易落花、落果。过量的氮与碳水化合物形成蛋白质,剩下少量碳 水化合物用作构成细胞壁的原料,细胞壁变薄,所以植株对寒冷、干旱 和病虫的抗逆性差,果实保鲜期短,果肉组织疏松,易遭受碰压损伤。 同时，过度使用氮肥，会导致水体富营养化，即水体中氮磷等营 养元素的富集，导致某些特征性藻类（主要为蓝藻、绿藻等）的异常 增殖，使水体透明度下降，水体溶解氧量下降，水质恶化，鱼类及其 他生物大量死亡的现象。
肥力测定仪和TOC测定仪测定全氮
1.3 样品分析
1.3.1 土壤肥力仪和TOC 仪测定法 1.3.2 半微量开氏法 1）土样消煮 2）氨蒸馏 3）滴定 4）测定结果的计算
结论：
1、土壤全氮通常采用半微量开氏法（GB 7173-87）测量[1]，但 操作繁琐，测定1个样品大约需要40~60 min，不适合大批量样品 分析，此外，该法测得的全氮只包括溶解态氨和有机氮，而未包 括硝态和亚硝态氮，因此不适于处理固定态氨和硝态氮含量较高 的土壤。 2、紫外分光光度法(校正因数法) 与经典的还原蒸馏法、镀铜镉 还原2重氮化偶合比色法,尤其是酚二磺酸法的测定结果具有可比 性,且操作相对简单,测定速度快。对于有机质低于50 g kg - 1的矿 质土壤来说,可以使用2. 2 作为校正因数,测定范围从N1～2 mg kg - 1到近于N 100 mg kg - 1 ,而测定水样硝酸盐含量使用的校正因数 2. 0[12 ,13 ]并不适用于土壤硝态氮含量的测定。土壤有机质高于 50 g kg - 1时,紫外分光光度法的校正因数有随之上升的趋势,但森 林土壤因表土层中有机质以粗腐殖质为主,校正因数未必很高。有 机质含量和性质与校正因数的定量关系尚需进一步深入研究。 3、以H2SO4-H2O2消解土壤样品后，应用肥力测定仪和TOC 测 定仪测定全氮，并与半微量开氏法的测定结果进行比较。土壤肥 力测定仪法简便、准确、稳定性好、实用性强，可以作为土壤全 氮的测定方法。
土壤养分及酶活性测试方法
硝态氮的测定：《双波长分光光度法测定土壤硝态氮》，土壤肥料，2006（1）：50～52，涂常青，温欣荣。
原理：利用硝酸盐和亚硝酸盐在203nm 和230nm 波长处有较强紫外吸收峰，利用双波长系数倍数法的公式：21kA A A λλ-=∆选择合适波长时，从而消除亚硝酸盐、有机质的影响。
消除干扰后，硝酸盐氮的含量与A ∆呈线性关系，线性范围为0～2.0L /mg ，由此建立了测定土壤硝态氮的新方法。
硝酸盐氮标准比色液：称取0.7220g 与105℃烘箱中烘干2h 干燥冷却后的3KNO 与小烧杯中，加入二次蒸馏水溶解，定量转入1000ml 的容量瓶中，定容、摇匀，即为10ml /ug 的硝酸盐氮标准液。
称取该溶液10.00ml 于100ml 容量瓶中，定容、摇匀，即为10ml /ug 的硝酸盐氮标准比色溶液。
亚硝酸盐氮标准比色液：称取0.1232g 2NaNO 于小烧杯中，加入二次蒸馏水，定量转入250ml 容量瓶中，定容、摇匀，即为100ml /ug 亚硝酸盐氮标准溶液。
称取该溶液10.00ml 于100ml 容量瓶中，定容、摇匀，即为10ml /ug 亚硝酸盐氮标准比色液。
实验方法：1、k 系数的确定：分别准确移取10ml /ug 硝酸盐氮使用液2.00ml 、10ml /ug 亚硝酸盐氮标准使用液2.00ml 、土壤浸提液2.5ml 置于各自的25ml 比色管中，用二次蒸馏水定容、摇匀，用1cm 的石英比色皿，以二次蒸馏水作参比，在UV -紫外可见分光光度计上在190～300nm 范围内扫描，从而确定土壤样品、硝酸盐氮的最大吸收波长203nm ，在230nm 处吸收较弱，而亚硝酸盐氮在210nm 处有最大吸收，在230nm 吸收较弱。
选取203nm 、230nm 为测量波长和参比波长测定土壤中硝态氮，从而可消除样品中主要干扰组分亚硝酸盐氮的干扰。
据0kA A 230203=-的公式计算，求得72.2k =。
铵态氮和硝态氮测定方法!!!---副本
铵态氮和硝态氮测定方法---副本铵态氮测量方法（2mol•L-1KCl浸提—靛酚蓝比色法）1）方法原理2mol•L-1KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。
土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。
在含氮0.05～0.5mol•L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。
2）试剂（1）2mol•L-1KCl溶液称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于水中，稀释至1L。
（2）苯酚溶液称取苯酚（C6H5OH，化学纯）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释至1L。
此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
（3）次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4•7H2O，化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4•12H2O，化学纯）31.8g和52.5g•L-1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含10%有效氯的漂白粉溶液)5mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
（4）掩蔽剂将400g•L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6•4H2O，化学纯）与100g•L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。
每100mL 混合液中加入10 mol•L-1氢氧化钠0.5mL。
（5）2.5µg•mL –1铵态氮（NH4+—N）标准溶液称取干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4，分析纯0.4717g溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L，制备成含铵态氮（N）100µg•mL –1的贮存溶液；使用前将其加水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5µg•mL –1的标准溶液备用。
3）仪器与设备：往复式振荡机、分光光度计。
4）分析步骤（1）浸提称取相当于10.00g干土的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g，置于150mL三角瓶中，加入氯化钾溶液100mL，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h。
双波长分光光度法测定土壤硝态氮
211 主要仪器与试剂 UV - 2401 紫 外 - 可 见 分 光 光 度 计 ; 振 荡 器
收稿日期 : 2005 - 01 - 07 作者简介 : 涂常青 (1970 - ) , 女 , 广东平远人 , 高级实验师 , 在读硕士 , 主要从事环境分析化学的研究 。
— 50 —
千粒重 (g) 2610 2518 2517
实际产量 (kg/ hm2) 704715 671015 635510
差异显著性
0105
0101
a
A
b
AB
c
B
注 : LSD0105 = 282132 kg/ hm2 , LSD0101 = 401190 kg/ hm2 。
3 小结
促进水稻分蘖 , 从而提高有效穗和实粒数 , 最终产 生显 著 的 增 产 效 果 , 可 比 浅 施 、面 施 分 别 增 产
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土壤肥料 2006 (1)
21213 样品测定方法
准确称取 10 g 充分拌匀的鲜土壤 , 分别置于
y = 015283 x - 010009 …………………… (1)
3 结果与讨论
311 精密度和准确度实验 31111 沙田柚果园土壤硝态氮的测定
随机抽取 4 份沙田柚土壤 , 按 21213 所述方法 进r = 019999 (n = 7)
Abstract : A method of determining nitrate nitrogen concentration of vegetables applying nitrate electrode was introduced in this paper. The results showed that this method was convenient , swift , and precise according to the evaluation of re2 covery trial , contrast experiment , and precision test . The method could be applied to the swift determination of nitrate in vegetables. Key words : vegetable ; nitrate ; determination method ; nitrate electrode
LYT 1228-2015 土壤 硝态氮 方法证实
1方法依据本方法依据L Y/T 1228-2015 5.1 硝态氮的测定 酚二磺酸比色法2仪器和设备紫外-可见分光光度计3分析步骤依据L Y/T 1228-2015 硝态氮的测定 酚二磺酸比色法 5.1.44试验结果报告4.1 校准曲线及线性范围按 L Y/T 1228-2015 5.1 操作，数据见表1。
表1 校准曲线数据回归方程: y = 0.3285x +0.0030 r=0.9998 4.2 检出限在10个空白样品中分别加入5倍检出限浓度的标准物质，进行测定，按照HJ 168-2010规定MDL=S t n ⨯-)99.0,1(进行计算，结果见表2表2 方法检出限测定结果（N=10）由W =m tVC⨯⨯计算得出方法检出限，为0.20mg/kg。
其中：W—硝态氮含量，mg/kg；C—校准曲线上查得待测样品溶液中硝态氮的含量，单位mg/L；m—烘干土样质量，m=50.00g；V—显色液体积，100mL；t—分取倍数，250/50=5。
4.3 精密度实验取3个浓度水平的样品，按照步骤3，分别做6次平行实验，计算出硝态氮平均值，最大相对偏差，相对标准偏差，结果见表3。
表3 精密度测试数据4.4准确度（人员比对）对同一样品，两名实验员分别做3次平行实验，计算平均值，相对偏差，检测结果见表4。
表4 人员比对测试数据5结论5.1检出限实验室检出限为0.20mg/kg。
5.2精密度样品1平均值为7.50mg/kg，最大相对偏差为2%；样品2平均值为13.8mg/kg，最大相对偏差为2%；样品3平均值为16.2mg/kg，最大相对偏差为2%；标准中要求测定结果允许相对偏差小于8%。
5.3准确度（人员比对）对同一样品进行人员比对，马霞测得平均值为8.54 mg/kg，吴欢测得平均值为8.63mg/kg，相对偏差为0.6%。
土壤硝态氮测定方法
土壤硝态氮测定方法操作步骤：取5.00g土样，加入50ml2mol/lKCL溶液，振荡1小时，悬液静置3~5min后过滤。
测定浸提液在220nm和275nm处吸光度A220和A275。
按照下式计算校正吸光度A：A= A220 -2A275建立A与硝态氮浓度之间的相关曲线，即可计算出浸提液中硝态氮的浓度。
硝酸盐标准曲线制定：称取0.7220g于105°C烘箱中干燥冷却后的KNO3于小烧杯中，加入二次蒸馏水溶解，定量转入1000ml容量瓶中，定容，摇匀，即为100u g/ml硝酸盐氮标准溶液。
移取该溶液10.00ml于100ml容量瓶，定容，摇匀，即为10ug/ml硝酸盐氮标准溶液。
分别取10ug/ml 硝酸盐氮标准溶液0、1、2、3、4、5、6、7ml于50ml容量瓶中，加入二次重蒸水，定容摇匀。
用1cm比色皿分别在220nm和275nm处测定吸光度。
用公式：A= A220 -2A275求的校正吸光度。
求此标准曲线方程。
按下式计算硝态氮：硝态氮(mg／kg)=C*V*D／m式中：C为从标准曲线查得的NO3-—N含量：V为比色测定液总体积(mL)；D为分取倍数；m为鲜土样质量(g)。
方法原理利用硝酸盐和亚硝酸盐氮在203nm和230nm波长处有较强的紫外吸收峰．利用双波长系数倍率法的公式：AA=Au_KA 给硝酸盐氮选择合适的波长对，从而消除亚硝酸盐、有机质的影响。
消除干扰后，硝酸盐氮的含量与△A呈线性关系．线性范围是O～2．0ms／L。
由此建立了测定土壤硝态氮的新方法。
1主要仪器与试剂UV一24|D1紫外一可见分光光度计(日本岛津公司)；振荡器(振次：243V／rain)；恒温干燥箱；二次蒸馏水器。
硝酸盐氮标准液：称取0．7220g于105℃烘箱中烘2h，干燥冷却后的KNO 于小烧杯中，加人二次蒸馏水溶解，定量转人1000mL的容量瓶中，定容．摇匀，即为1001xg／mL硝酸盐氮标准液。
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实验 土壤硝态氮的紫外分光光度法
根层土壤中硝态氮的含量与植物生长发育有着密切的关系，其测定结果可为合理施肥，
肥料规划和估产提供依据。
一. 目的要求
了解紫外/可见分光光度计的基本结构，掌握用波长选择消除干扰组分的测定技术，用
校正因数法测定土壤硝态氮的含量。
二. 方法原理
用氯化钠溶液提取土壤硝态氮，于紫外分光光度计上分别测量其210和275纳米的吸
光度，前者是硝酸根和以有机质为主的杂质的吸收值，后者是以有机质为主的杂质的吸收。
因为275纳米处硝酸根已无吸收，而有机质在275纳米处的吸收值是210纳米处的f倍，故
可将A275校正为有机质在210纳米处的干扰吸收，从A210中减去，即得硝酸根在210纳
米处得真实吸收值，再利用标准曲线法求得土壤中硝态氮得含量。
三. 器皿与试剂
1. 紫外、可见分光光度计和石英比色皿。
2. 50毫升容量瓶10个，100和250毫升锥形瓶各4个，漏斗4个，普通试管4支，50
毫升胖肚吸管1支，5、10毫升和2毫升刻度吸管各一只，滴管2支。
3. 氯化钠溶液1mol/L: 称取氯化钠58.44克溶于400毫升水中，转入1升容量瓶中，稀
释至刻度。
4. 硝态氮标准溶液100µg/ml: 称取于105℃烘制2小时得硝酸钾0.3609克溶于水，转
移至500毫升容量瓶中，用水定容。临用时再稀释至20µg/ml。
5. 硫酸溶液，10％（V/V）
四. 测定步骤
1.待测液制备
称取10.00克风干土样于250毫升锥形瓶中，加入50毫升1 mol/L的氯化钠溶液，加塞
振荡30分钟，过滤于干净干燥的100毫升锥形瓶中，初液弃去。同时做试剂空白。
2.标准曲线绘制与测定
吸取20µg/ml硝态氮标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00毫升分别置入50毫
升容量瓶中，用水定容至刻度后，再加入2毫升10％硫酸溶液，摇匀。浓度分别为0.00、
0.20、0.40、0.80、1.20和1.60µg/ml。
以零浓度标液作参比，于210米处测定标准系列的吸光度，绘制标准曲线或建立回归
方程。
去土壤浸体液和试剂空白液各10毫升入试管中，加入0.8毫升10％硫酸，摇匀。以试
剂空白作参比，分别于210纳米和275纳米处测定吸光度，不要每测一个样品改变一次波长，
以避免逐次改变波长而引入波长重现性误差。若土壤浸体液吸光度太大，可用氯化钠溶液稀
释，但应按比例加入硫酸溶液。
测定时，向比色皿中加入待测液不要超过3/4容积。
3. 结果计算
根据测得A210和A275，按下式计算硝态氮的吸光度△A
△A=A210-f×A275
由△A从工作曲线上查得相应浓度，乘以液土比和稀释倍数，即为土壤硝态氮含量。式
中f为校正因数，本实验取值为3.6。
五. 问题讨论
1. 为什么标准曲线溶液不加入试剂空白？标准定容后，再加2毫升10％硫酸溶液，对
测定结果有没有影响？