新的非肽类内皮素拮抗剂_咖啡酸_阿魏酸
苯丙素苷类化合物的研究进展2
饭石水,可以调节人体的新陈代谢,促进血液循环,增加食欲,有助于排除因环境污染而蓄积在人体内的有害物质,使细胞净化。
长期饮用麦饭石水,可收到延年益寿的效果。
因此,日本人把麦饭石称为“细胞洗涤剂”,广泛用于饮水净化与污水处理方面,且制成食品、饮料和人工矿泉水以及应用在蔬菜、水果保鲜,动物饲料、植物栽培和冰箱除臭等方面。
长期实践和临床验证,麦饭石对人的机体确有促进生长发育、抗疲劳、抗缺氧、增强免疫功能等生物活性。
以上所述除日本外,法国、美国和东南亚国家不但对麦饭石药用和营养价值等方面进行了研究,且已将麦饭石广泛应用于家庭矿泉浴、健身饮料、医治皮肤病、创伤、胃肠病以及神经系统的疾病等方面。
在我国目前已出现的麦饭石产品有:麦饭石营养素、麦饭石健身浴晶、麦饭石矿泉水、麦饭石冰箱除臭剂、麦饭石保健醋、麦饭石啤酒、麦饭石美容霜、麦饭石防冻霜以及各色各样的糖果、饼干、饮料等等,真可谓应用广泛。
(文献综述(收稿日期:2006208214; 修订日期:2007201219作者简介:许敬英(19792),女(汉族),四川泸州人,现为石河子大学化学化工学院在读硕士研究生,主要从事天然产物研究与开发工作.3通讯作者简介:周 静(19562),女(汉族),湖南湘乡人,现任石河子大学化学化工学院教授,学士学位,主要从事天然产物研究与开发工作.苯丙素苷类化合物的研究进展(Ⅱ)许敬英,苏 奎,周 静3(1.石河子大学食品学院,新疆石河子 832003; 2.石河子大学化学化工学院,新疆石河子 832003)摘要:苯丙素苷化合物是一类含有取代苯乙基和取代肉桂酰基的天然糖苷,因其具有广泛多样的生理活性而日益受到人们的重视。
本文就近几年对苯丙素苷类化合物的生物活性以及合成研究做一总结。
关键词:苯丙素苷; 生物活性; 合成中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:100820805(2007)0721770203Study Progress of Phenylpropano i d Glycosi des(Ⅱ)XU J ing 2ying,S U K ui,ZHOU J ing3(1.Food S cience College of S hihezi U niversity X injiang 832003,Ch ina;2.College of Che m istry and Che m ical Engineering,S hihezi U niversity,X injiang,832003,China )Abstract:Phenyl p r opanoid Glycosides (PPGs )are natural glycosides exist widely in f olk herbal p lants .The bi oactivity and synthesis of PPGs in recent years are reviewed in this article .Key words:Phenyl p r opanoid Glycoside; B i oactivity; Synthesis 目前世界上有多家实验室在从事苯丙素苷类化合物的提取分离、结构鉴定以及对其生物活性的测定研究工作。
芪地归芎汤对早期糖尿病肾病肾小管功能的影响
３讨 论
收并分解。健康人仅少量从尿中排出， 其含量较稳定且特异
ＤＮ是糖尿病主要的微血管并发症， 其最早期的结构改变 是 肾 小 球 和 肾 小 管 肥 大 ［３］ ， 肾 小 管 间 质 的 损 害 甚 至 出 现 在 肾 小球功能障碍之前， 并不依赖肾小球病变［４］ 。尿微量白蛋白已 公认为肾小球损害的早期指标， 而 尿 ＲＢＰ、α１－ ＭＧ、ＮＡＧ 是 肾 小管损伤的敏感指标。
１６ 例， 年龄 ３５￣６０ 岁， 平均 ４８．３ 岁， 糖尿病病程 １．４￣１７ 年， 平 前后无明显变化。见表 １。
均 ７．６ 年。两组临床资料经统计学处理差异无统计学意义， 具
表 １ 两组治疗前后 ＵＡＥＲ ＲＢＰ α１－ ＭＧ ＮＡＧ 变化比较（ ｘ±ｓ）
组别
例数
ＵＡＥＲ（μｇ／ｍｉｎ）
ＲＢＰ（ ｍｇ／ｍｍｏｌ·ｃｒ） α１－ ＭＧ（ ｍｇ／Ｌ）
本刊编辑部
尿 ＲＢＰ、α１－ ＭＧ 及 ＮＡＧ 变 化 是 反 映 近 端 肾 小 管 重 吸 收 的敏感指标。尿 ＲＢＰ 水平随肾小管—间质病变的严重程度增 加， 可间接反映肾小管—间质病变的程度。本研究结果表明， 芪地归芎汤治疗早期糖尿病肾病， 可以减少尿白蛋白的排 出， 降低尿 ＲＢＰ、α１－ ＭＧ 及 ＮＡＧ 水平， 改善肾小管功 能 ， 延 缓 早期糖尿病肾病的发展。
作用．肾脏病与透析肾移植杂志， １９９９， ８（ ６） ： ５３４－ ５３６． ４ Ｇｉｌｌｂｅｒｔ ＲＥ， Ｃｏｏｐｅｒ ＭＥ． Ｔｈｅ ｔｕｂｕｌｏｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉｕｍ ｉｎ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ
ｄｉａｂｅｔｉｃ ｋｉｄｎｅｙ ｄｉｓｅａｓｅ： ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ａｎ ａｆｔｅｒｍａｔｈ ｏｆ ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｉｎｊｕｒｙ． Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ， １９９９， ５６（ ５） ：１６２７－ １６３７． ５ 陈强， 胡伟新， 王生余， 等．尿视黄醇结合蛋白判断肾小管—间 质 损 伤 的 临 床 意 义． 肾 脏 病 与 透 析 肾 移 植 杂 志 ， ２００１， １０（ ５） ： ４０６－ ４０９． ６ 周 江 华 ， 郝 传 明 ， 林 善 锬 ， 等． α１－ 微 球 蛋 白 在 糖 尿 病 肾 脏 早 期 病变诊断中的意义． 中华肾脏病杂志， １９９５， １１（ １） ： ２６－ ２７． ７ Ｓａｌｅｍ ＭＡ， ＥＬ－ Ｈａｂａｓｈｙ ＳＡ， Ｓａｅｉｄ ＯＭ， ｅｔ ａｌ． Ｕｒｉｎａｒｙ ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ Ｎａｃｅｔｙｌ － ｂｅｔａ－ Ｄ－ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ ａｎｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｓ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｏｆ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ １ ｄｉａ－ ｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ． Ｐｅｄｉａｔｒ Ｐｉａｂｅｔｔｓ， ２００３， ３（ １） ： ３７－ ４１． ８ 樊瑞芬． 黄芪改善肾病综合征患者血液高凝状态的临床观察． 中国中西医结合肾病杂志， ２００１， ２（ １１） ：６７３－ ６７６． ９ 牟娜， 张庆怡， 倪兆慧， 等．黄芪对高糖作用下肾间质成纤维细 胞表 达 ＨＧＦ 的 影 响．中 国 中 西 医 结 合 肾 病 杂 志 ， ２００２， ３（ １） ：７－ １１． １０ 王 峰 ， 刘 敏 ， 杨 连 春 ， 等．咖 啡 酸 ， 阿 魏 酸：新 的 啡 肽 类 内 皮 素 拮 抗剂．中国临床药理学与治疗学杂志， １９９９， ４（ ２） ：８５－ ８７．
天然药物化学第4章苯丙素类化合物课件
HCOOH
+
HO
OO
OMe
apigravin
HO
OO
OMe
中间体生成叔(仲)阳碳离子
O
OO
OMe
二氢吡喃香豆素
第二节 香豆素 二、香豆素的化学性质
（四）酸的反应 1.环合反应：
形成环的大小决定于中间体阳碳离子的稳定性 中间体阳碳离子的稳定性
叔阳碳离子 > 仲阳碳离子 > 伯阳碳离子
稳定
不稳
第二节 香豆素 二、香豆素的化学性质
提取后可直接利用化合物的溶解性质进行分离 如：
香豆素在石油醚中溶解度不大，浓缩时即可 析出结晶。
1、酸碱分离法 依据——内酯遇碱能皂化，加酸能恢复的性质。
乙醚萃取液 NaHCO3 / H2O 萃 取
NaHCO3 / H2O 酸性成分
Et2O 稀 NaOH / H2O 萃 取
Et2O （ 中 性 成 分 ） 挥 干Et2O 加 NaOH / H2O 进行水解
侧链 不饱和键
环上双键 （吡喃或呋喃环）
C3、C4双键
在控制条件下，高锰酸钾氧化C3、C4双键；络酸氧化 侧链双键；臭氧先氧化侧链双键，在氧化（呋喃）
吡喃上双键，最后氧化C3、C4双键。
第二节 香豆素 二、香豆素的理化性质
（一）性状 （二）溶解性 （三）碱水解反应和内酯性质 （四）酸的反应 （五）C3、C4双键性质和加成反应 （六）呈色反应
一般用有机溶剂或水提取，因简单苯丙素类化合 物多具挥发性，是挥发油芳香族化合物的主要组成部 分，可用水蒸气蒸馏法提取。其分离，一般用硅胶柱 色谱，高效液相色谱等进行分离。
本章内容
概述 第一节 苯丙酸类 第二节 香 豆 素 第三节 木 脂 素
苯丙素(香豆素)
（二）紫外光谱 无含氧官能团取代的香豆素，在 274nm（苯环）和311nm （α-吡喃酮 环）处有吸收。 7-位如有羟基、甲氧基或β-D葡萄糖 取代，则在217nm，315~330nm处有 强吸收峰，而在240，255nm处出现 弱峰。5，7-及7，8-二氧取代香豆素 UV与7-氧取代相似。
此外，加入诊断试剂（如乙酸钠），
也可改变紫外吸收峰位。 如有邻二酚羟基，加入三氯化铝可 使最大吸收红移。
（三）红外光谱 α-吡喃酮羰基 —1750~1700cm-1 羰基如与取代基形成分子内氢键 — 1680~1660cm-1 芳环双键 — 1645~1625cm-1 呋喃环双键 — 1639~1613cm-1
注意以下几点： 1.碱液水解开环时，要注意碱液的浓度和 加热时间，否则将引起降解反应而使香 豆素破坏，或者使香豆素开环而不能合 环。 2.对酸碱敏感的香豆素用此法可能得到次 生产物。
乙醚萃取液 NaHCO3水溶液萃取 碱水层 乙醚层 稀冷的NaOH进行萃取 乙醚层 回收乙醚并用 NaOH水或醇溶 液进行水解
四、香豆素的波谱学特性 （一）荧光性质 香豆素在可见光下为无色或浅黄色结晶， 在紫外光下显蓝色荧光，C7位导入羟基 后荧光增强，羟基醚化后或导入非羟基 取代基可减弱荧光。 7-羟基香豆素加碱 可使荧光转为绿色，一般香豆素遇碱荧 光都增强。7-羟基香豆素在C8位导入羟 基，荧光消失。呋喃香豆素荧光较弱， 多烷氧基取代呈黄绿色或褐色荧光。
R 5
H 4
C-5有基团取代，H-4 -0.3 ppm，在δ7.9-8.2之间
O
O
H 3' H 2' O O
呋喃香豆素如果呋喃
O 环上没有取代
H-2’,H-2’’ δ7.34-7.80
第三章 苯丙素类
Br
多用来判断C6位是否有取代基存在。
36
5.Emerson reaction: 试剂：2%的4-氨替比林和8%的铁氰化钾，其 与酚羟基对位活泼氢反应生成红色化合物。 酚羟基对位无取代基（+）红色 有取代基（-）
H2N HO H CH3 N N CH 3 [O] K3Fe(CN)6 O N N CH 3 O N CH3
8-OH导入
兰色荧光
-OH
荧光减弱或消失
绿色
30
五.化学性质：
1.内酯性质和碱水解反应：香豆素的α-吡喃酮环具有α， β-不饱和内酯性质，在稀碱液中会逐渐水解生成顺邻 羟桂皮酸的盐，而顺邻羟桂皮酸不易游离存在，其盐 的水溶液经酸化即闭环恢复成内酯。这个闭合过程极 易发生，即使在很弱的酸溶液中，如通入CO2也能促使 其内酯化而闭环。
绿原酸（chlorogenic acid）
CH2OH O H3CO
菜蓟素（cynarin）
COOglc HO HO
glc
松柏苷（coniferin）
咖啡酸葡萄糖苷
10
HO
HO
HO
CH2
CH COOH OH
HO
CH2
CH COOH O OH
OH OH
O C CH CH2
丹参素甲 丹参素丙
OH OH HO HOOC O C O O OH OH O O COOH OH
28
2.溶解性：
游离香豆素---不溶于冷水，溶于沸水，易溶于
甲醇、乙醇、氯仿、乙醚等有机溶剂。
香豆素苷---溶于水、甲醇、乙醇，难溶于氯仿、
乙醚。
根据香豆素的溶解性，在提取分离时可采用系
统溶剂法。
29
苯丙素类
4. Gibb’s反应和Emerson反应 作用：鉴别酚羟基对位或6位无叏代者 现象：前者呈深兰色，后者呈红色。 Gibb’s试剂：2，6二溴苯醌氯亚胺的乙醇液 +1%氢氧化钾乙醇液， Emerson试剂：2%4-氨基安替匹枃乙醇 +8%铁氰化钾水液，
Gibb’s反应
Br
Br pH 9~10
O
HO
芳环质子 H-8 (1H,d.J=2.0) δ（高场、羟基邻位） H-6 (1H,dd.J=8.0;2.0) δ（高场、羟基邻位） H-5 (1H,d.J=8.0) δ（低场）
H
呋喃环质子(AB系统 ,dd.)
δ6.70～7.20 (1H,d.J=2.0～2.5) δ7.50～7.70 (1H,d.J=2.0～2.5)
8 7
O1
2 3
O
6 5 4
具有苯并α-吡喃酮的内酯类化合物. 生源途径:
OH COOH O -H2O O
桂皮酸途径
二 、分类 根据其叏代和并环的情况分为五类: 1. 简单香豆素 只在苯环有叏代的香豆素，叏代基包括羟基、 甲氧基、亚甲二氧基、异戊烯基。
MeO
R=H R=Glc
O
OMe
RO
O
O
MeO
O
O
O
芳环 1660～1600cm-1 (三个较强吸收)
内酯环 1750～1700cm-1（C=O, 最强峰） 1270～1220cm-1 ( 强吸收峰 ) 1100～1000cm-1 ( 强吸收峰 )
2．紫外（UV）光谱
O
O
HO
7
O
O
O
7
O
O
苯环274nm (log 4.03) 引入羟基（共轭↑） ａ-吡喃酮环311nm (log 3.72) 325nm (log 4.15)
芪参产品线知识要点
芪参产品线知识要点（共计315道）芪参益气滴丸（105道）一、医学相关知识1. ATP是什么？（权重 10分）ATP是三磷酸腺苷。
2. 慢性心衰发生发展的基本机制是什么？（权重 10分）慢性心衰发生发展的基本机制是心肌重构，包括心肌细胞肥大、心肌细胞凋亡、心肌细胞外基质过度纤维化，从而造成心肌结构、功能的变化。
3. 慢性心衰的主要症状有哪些？（权重 10分）呼吸困难、无力、体液潴留（气短、乏力、水肿）。
4. 慢性心衰治疗目标是什么？（权重 10分）心衰的治疗目标：改善症状、提高生活质量、防止和延缓心室重构的发展，从而降低心衰的死亡率和住院率。
5. 心脏彩色超声多普勒是临床常用的评价心功能的无创检查方法，其测量的指标英文缩写“LVEF”是什么意思？正常值是多少？（权重 10分）“LVEF”是左室射血分数。
正常值>55%。
6. 6MWD是什么？（权重 10分）6MWD是6分钟步行距离。
7. 心衰标准化治疗药物包括哪些？（金三角药物）（权重 10分）血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）或血管紧张素受体拮抗剂（ARB）、β-受体阻滞剂、醛固酮受体拮抗剂，这三类药物被称为治疗心衰的“金三角”药物。
8. 引起慢性心衰的主要原发疾病有哪些？（权重 10分）冠心病、高血压、糖尿病等。
9. 中国心力衰竭发病率是多少？（权重 10分）中国心力衰竭成人发病率1%-2%，70岁以上人可能超过10%。
10. 心梗后出现心功能不全几率是多少？心梗后出现心衰的几率是多少？（权重10分）中国，心梗后约有50％以上的患者会出现心功能下降；心梗后约有1/3的患者会发展成为心力衰竭。
11. 什么是心力衰竭？（权重 10分）心力衰竭(heart failure)是各种心脏结构和（或）功能性疾病导致心室充盈和（或）射血功能受损，心排血量不能满足机体代谢的需要，器官、组织血液灌注不足，肺循环和（或）体循环淤血而引起的一组综合症。
12. 心衰机制中RAAS系统是什么？（权重 10分）RAAS系统是：肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS)。
紫苏的化学研究报告
紫苏的化学研究报告紫苏别名荏子、赤苏、红苏等。
唇形科，一年生直立草木植物。
紫苏性温、味辛，以叶、梗、果实三部分分别入药。
紫苏叶具有解表散寒，行气和胃功效;紫苏梗具有理气宽中，止痛，安胎功效;紫苏子具有降气消痰，平喘，润肠功效。
化学研究国内外学者对紫苏属植物的化学成分进行了大量研究，从中分离鉴定了百余种化合物，这些化合物可以归属于挥发油类、萜类、甾醇类、酚酸和桂皮酸类、苷类、黄酮类、色素类和脂肪酸类等。
1、挥发油类科学家对紫苏挥发性成分的研究已有近百年历史。
迄今为止，国内外学者通过化学，GC,GC-MS,GC-FT/IR等方法从紫苏属植物中分离鉴定了百余种挥发性成分，其中主要成分为紫苏醛、柠檬烯、芳樟醇、呋喃酮类衍生物、丁香烯、肉豆蔻醚以及蒎烯，薄荷醇，苯甲醛，丁香油酚等成分。
2、萜类和甾醇除挥发性萜类外，紫苏还含有非挥发性萜类和甾醇类化合物。
如齐墩果、熊果酸、委陵菜酸、β-谷甾醇、豆甾醇、油菜甾醇等物质。
3、苷类紫苏中的苷类包括萜苷、苯丙素苷、氰苷、茉莉苷和苯戊酸苷等成分。
4、酚酸类和桂皮酸衍生物紫苏类含有较丰富的酚酸类和桂皮酸类衍生物，如咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、咖啡酸甲酯、咖啡酸乙烯酯、二羟基苯甲醛、二羟基苯甲酸甲酯等化学物质。
5、和苯丙素酚类紫苏类含有苯丙素酚类和黄酮及其苷类成分，如芹菜素、木犀草素、高黄芩素、七叶内酯等化学成分。
6、色素类紫苏富含色素类，紫苏花色素是一种天然食用色素，广用于食品，饮料工业中。
另外，紫苏中含叶黄质类植物色素，如花色素苷、矢车菊苷元、叶黄素、β-胡萝卜烯、新黄素、董菜黄素、花药黄素等化学成分。
7、脂肪酸类紫苏子含有丰富的油脂，含油率约35%~50%。
脂肪油主要成分为亚麻酸、亚油酸、油酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸等。
其中a-亚麻酸含量较高，可达84.5%。
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新的非肽类内皮素拮抗剂:咖啡酸、阿魏酸王 峰3,刘 敏,杨连春,王京媛,吕 敏,李 菲(中国人民解放军空军总医院,北京100036)摘要 目的:研究桂皮酸类化合物咖啡酸和阿魏酸对内皮素(endothelin21,ET21)生物效应的拮抗作用。
方法:体内ET21iv致小鼠急性死亡、体外血管平滑肌细胞培养、主动脉条收缩试验和ET受体结合试验。
结果:咖啡酸和阿魏酸(ip)能剂量依赖性地显著延长ET21致小鼠急性死亡时间,在离体器官可观察到咖啡酸与阿魏酸能拮抗ET21的缩血管效应;放射性受体2配体结合实验表明,咖啡酸和阿魏酸可竞争性地抑制ET21与其受体的结合。
结论:咖啡酸和阿魏酸为新的非肽类ET拮抗剂。
关键词 内皮素;咖啡酸;阿魏酸;内皮素拮抗剂 内皮素21(endothelin21,ET21)是由21个氨基酸组成的体内活性多肽,除强大而持久的血管收缩作用外,对啮齿类动物和哺乳类动物有多种生物效应,如调节水和电解质平衡、激素分泌,组织细胞增生和血管通透性等[1,2]。
ET21参与多种疾病如高血压、冠心病、脑卒中、心律失常的病理生理过程[3,4]。
对内皮素拮抗剂的研究与开发,为治疗内皮素相关性疾病提供了新的途径。
咖啡酸与阿魏酸为桂皮酸类化合物,普遍存在于当归、川芎等常用植物药中。
为了探讨咖啡酸与阿魏酸的药理作用机理,本研究对咖啡酸及阿魏酸拮抗ET21的作用进行探索。
材料与方法 动物 昆明种小鼠、Sprague2Dawley(SD)大鼠均购自北京医科大学实验动物部。
试剂与仪器 ET21、咖啡酸(caffeic acid, CFA)、阿魏酸(ferulic acid,FLA)购自美国Sigma公司;125I2ET21购于Amersham Pharmacia Biotech,放射浓度317MBq・mL-1,370MBq・mL-1;混合性内皮素受体拮抗剂bosentan由Dr.Volker Breu (Hoffmann La2Roche,Switzerland)惠赠。
MB2III 型酶标检测仪为北京市新技术应用研究所产品。
N IH3T3血管平滑肌成纤维细胞由中国预防医学收稿日期:1999204226基金项目:国家自然科学基金资助项目(39670886)3Tel:(010)66928442,E2mail:wangfeng888@ 科学院病毒研究所韩立群研究员提供,Topcount. NXT(Microplate Scintillation&Luminescence Counter)Pakard BioScience Company产品。
CFA,FLA对ET21致小鼠急性死亡的拮抗作用 体重20±2g,昆明种小鼠,♀♂兼用,随机分组,禁食(不禁水)18h后,分别给予CFA及FLA 各011,110,1010,10010mg・kg-1,ip,对照组给予等容积的生理盐水,30min后给予ET2112nmol・kg-1,iv,观察给ET21后15min内小鼠的存活情况,记录动物数和死亡时间,存活时间超过15min 按15min计。
CFA和FLA对ET21缩血管效应的拮抗作用 体重230±10g,♂SD大鼠,击头致昏后快速摘取胸主动脉,分离结缔组织后,剪成2～3mm宽的血管环,置于Krebs2Henseleit生理溶液(K2H液,p H 7140±0105,95%O2+5%CO2,3710±015℃)中,经张力换能器连台式平衡记录仪(上海大华仪表厂),记录血管张力。
加基础张力2g,以10-7 mol・L-1去甲肾上腺素预激2次。
平衡60min达稳定后,加入ET2110-9mol・L-1,待达到最大收缩效应,分别加入不同浓度的CFA及FLA(以2% DMSO为溶媒,实验用2%DMSO作对照),观察CFA与FLA的作用。
CFA及FLA对ET21致血管平滑肌细胞增殖效应的拮抗作用 取第5代兔主动脉平滑肌细胞(RAVSMC)以传代培养法调整细胞数为1×105・mL-1,接种于96孔培养板(100μL/孔),37℃,5% CO2孵育24h后换以含1%小牛血清和ET2110 nmol・L-1的DM EM培养液继续孵育,加入CFA及FLA考察其对ET21致平滑肌细胞增殖的作用。
于不同培养时间以结晶紫染色后用酶标检测仪在570 nm处测定各孔吸光度(A)值,得到ET21对RAVSMC增殖的时间2效应关系和CFA与FLA对ET21致平滑肌细胞增殖的作用。
咖啡酸、阿魏酸、125I2ET21与NIH3T3结合实验 3T3成纤维细胞用RPM1640培养液调整至105个・mL-1,转移到96孔细胞培养板上,使每孔细胞数为104个,咖啡酸、阿魏酸和bosentan用二甲基亚砜(DMSO)溶解后,用RPM1640培养液稀释成不同浓度(浓度范围为10-10～10-4mol・L-1),按不同浓度梯度加入96孔细胞培养板后,再加入10-9mol・L-1125I2ET21,使体系总体积为300μL, 37℃培养1h后,用缓冲液(20mol・L-1Tris HCl, p H715,10nm MgCl2)经Whatman GF/C滤器洗4次,加50μL闪烁液后进行放射活性计数。
用10-5 mol・L-1bosentan作为非特异性结合管,并用已知的非肽类混合型ET受体拮抗剂bosentan作为阳性对照,判定咖啡酸、阿魏酸拮抗内皮素效能强弱。
数据处理 数据以 x±s表示,进行组间t检验。
结果1 CFA,FLA对ET21致小鼠急性死亡的拮抗作用ET2112nmol・kg-1,iv可引起各组小鼠全部死亡,但死亡时间不同。
小鼠给予CFA,FLA可依剂量地延长ET21引起的小鼠急性死亡时间。
同样剂量下,FLA的拮抗ET21致小鼠急性死亡作用较强。
结果见表1。
T ab1 E ffects of caffeic acid(CFA)and ferulic acid (FLA)dose from011to100mg・kg-1ip on the time of acute death induced in mice by endothelin21(ET2 1)(12nmol・kg-1,iv)in vivo.The data is the time of death in min after ET21administrationDose/Time of death/minmg・kg-1CFA FLAControl 2.24±1.02 2.24±1.020.1 2.33±0.19 3.33±1.841.02.58±0.21 4.04±0.50310 3.19±0.88 5.54±1.06310012.72±3.113314.37±1.8933n=10, x±s,3P<0105,33P<0101vs control group.2 CFA,FLA对ET21缩血管效应的拮抗作用离体大鼠主动脉给予10-9mol・L-1ET21后,可导致动脉收缩。
ET21引起最大动脉收缩后给予CFA,FLA,二者均能拮抗ET21的缩血管效应,且表现明显的剂量依赖性。
结果如图1。
药物浓度2效应曲线经sigmiodal方法拟合后,求得最大效应(E max)和IC50,CFA和FLA最大效应分别为70195%±6130%和92110%±0181%,IC50(×10-6 mol・L-1)分别为1180±0180和01063±01005。
结果表明,FLA对ET21缩血管作用的拮抗效能较CFA强(P<0105)。
Fig1 Concentration2response curves of antagonist effects of caffeic acid(CFA)and ferulic acid(FLA) concentrations from10-4to10-9mol・L-1on vasoconstriction induced by endothelin21(ET21)10-9 mol・L-1on isolated aortic rings of Sprague2Dawley rats i n vit ro( x±s,n=6).○—○CFA;●—●FLA.3 CFA,FLA对ET21致血管平滑肌细胞增殖效应的拮抗作用ET21可刺激RAVSMC增殖,于d2达峰值, d1,d2和d7的细胞增殖率分别为3313%±2510%,5010%±1316%,4010%±9128%,与对照组相比有显著性差异。
根据ET21引起RAVSMC 增殖的时间2效应关系,选定10nmol・L-1ET21与CFA,FLA共孵d2测定细胞染色后A(570nm)值,判断ET21引起RAVSMC增殖效果。
结果表明,CFA,FLA可显著性地拮抗ET21引起的RAVSMC增殖,且该作用表现为浓度依赖性。
结果如表2。
4 咖啡酸、阿魏酸、125I2ET21与NIH3T3细胞结合实验125I2ET21可与3T3成纤维细胞上的内皮素受体特异性结合,当培养液中含有咖啡酸或阿魏酸时, 125I2ET21的结合反应被咖啡酸或阿魏酸竞争性拮抗。
根据结合效应2浓度曲线分析,非肽类混合型内皮素受体拮抗剂bosentan对125I2ET21与ET受体结合的拮抗效能最大,其次为FLA,而CFA作用最小,结合效应2浓度曲线呈平行性右移。
经sigmoidal方法对结合效应2浓度曲线进行拟合,得出bosentan、阿魏酸和咖啡酸拮抗125I2ET21与3T3成纤维细胞ET受体结合的半数抑制浓度(IC50)分别为8113×10-9,8186×10-8和6198×10-7mol・L-1;最大效应分别为102105%,101111%和100130%。
结果见图2。
T ab2 Inhibitory effects of CFA,FLA concentrations from10-8to10-11mol・L-1on RAVSMC proliferation induced by ET21(10nmol・L-1)cultured for48hGroup Control10-1110-1010-910-8CFA 2.4±0.2 1.2±0.133 1.2±0.433 1.2±0.8330.9±0.133FLA 2.4±0.2 1.4±0.333 1.5±0.73 1.2±0.233 1.2±0.433The data is the A value×100. x±s.n=3.3P<0105,33P<0101vs controlgroup.Fig2 Concentration response curve of bosentan, ferulic acid and caffeic acid in the binding of125I2ET2 1to ET21receptor in cultured3T3cells.■—■bosentan;●—●FLA;▲—▲CFA.讨论ET21是迄今为止发现的缩血管活性最强的肽类物质,亦是细胞有丝分裂激动剂。