微生物实验室仪器使用指导

目录

1. 目的和适用范围 (3)

2. 职责 (3)

3. 仪器分类 (3)

4. 仪器使用指导 (3)

4.1 温度控制类 (3)

4.2 操作台类 (4)

4.3 灭菌类 (4)

4.4 读数类 (4)

4.5 其他类 (5)

5. 仪器维护指导 (6)

6. 注意事项 (7)

1.目的和适用范围

本文件规范微生物实验室仪器的使用，对仪器使用进行指导。

本文件适用于微生物实验室的仪器的使用和维护。

2.职责

2.1 微生物实验室检验人员按照本规程使用仪器，对仪器进行日常维护和操作使用登记。

2.2 仪器设备管理员负责对设备正常运行进行检查，并对设备进行定期维护、保养。

2.3 质量负责人负责对设备正常运行进行监督管理。

3.仪器分类

3.1 温度控制类：生化培养箱、霉菌培养箱、冷藏冰箱、超低温冰箱、恒温水浴锅和烘箱。

3.2 操作台类：超净工作台、生物安全柜。

3.3 灭菌类：高温高压蒸汽灭菌锅

3.4 读数类：电子天平、pH计

3.5 其他类：电加热板、不锈钢过滤系统和真空泵、显微镜、紫外检测灯、菌落计数器、高速振荡无菌均质器。

4.仪器使用指导

4.1 温度控制类

4.1.1 生化培养箱、霉菌培养箱类使用时按照规定的培养温度进行培养，未到规定时间进行观察时，请轻拿轻放。特别是霉菌培养时，需每天进行观察并记录数据，非必要不触碰培养皿，防止霉菌孢子扩散，可用封口膜密封培养皿防止孢子扩散。同时，记录好培养温度与时间，将记录填写进《培养箱使用记录》。

4.1.2 冷藏冰箱保存需要冷藏环境的试剂和工作菌株，拿取后请尽快关门。超低温冰箱用于保存标准储备菌株，仅在需要使用标准储备菌株时与维护除冰时打开。取出菌株后及时关闭冰箱门。工作日期间每天检查一次冰箱的温度，并填写进相应的《冰箱温度记录表》。

4.1.3 恒温水浴锅用于试剂恒温，试剂预热。将水浴锅设定至想要的温度，把试剂放进去。水不够可补加一级水，切勿使用自来水。

4.1.4 烘箱用于清洗干净的玻璃器皿进行烘干，把待烘干玻璃器皿放进烘箱，设定温度后，烘干后拿出关闭电源。

4.2 操作台类

4.2.1 超净工作台位于无菌操作室内，用于操作检测样品的计数和增菌等。具体操作参考《微生物实验室工作流程指导》4.1步骤⑥详解，每次使用请填写记录《超净工作台使用维护记录》，做检测工作单时要把样品编号写在使用项目一栏上。

4.2.2 生物安全柜位于生物安全操作室内，用于样品的后续分离与鉴定，具体操作参考《微生物实验室工作流程指导》4.1步骤⑥详解。

4.3 灭菌类

4.3.1 高温高压蒸汽灭菌锅用于灭菌处理，一台灭菌锅用于试剂和玻璃器皿灭菌，位于准备室。另一台灭菌锅用于阳性培养物灭菌，位于P2生物安全实验室灭菌室内。使用时注意补水，设定所需的灭菌温度与时间。试剂灭菌一般为121℃，15min、10min与20min。阳性培养物灭菌设置为121℃，30min（时间不能低于30min）。灭菌完毕，取出试剂请戴硅胶手套防止烫伤。每次灭菌需要用化学指示卡监控灭菌温度，填写《灭菌锅使用维护记录》。定期每三个月用生物指示剂进行监控，化学指示卡与生物指示剂拍照留底，并填写《灭菌效果监测记录》。

4.4 读数类

4.4.1 电子天平主要用于样品称量和配制试剂称量。无菌操作室有一台电子天平（GZAN-C-005），主要用于样品的称量。准备室有一台电子天平（GZAN-C-006），主要用于配制试剂的称量。称量前先将天平放置于水平位置（GZAN-C-005放置于超净工作台内），用水平工具辅助调至水平位置，按开机键，归零后将校准砝码放置在托盘上，记录读数，并记录使用时间于《电子天平使用维护记录》，换用容器时清零后再称量。称量样品的电子天平（GZAN-C-005）还需要把样品编号写在称量记录上。使用完毕后将天平清理干净后，关闭电源并放置在远离剧烈振荡，远离高温，远离环境变化剧烈的位置。

4.4.2 pH计主要用于测量配制试剂的pH值。使用前先使用校准液校准三个点，分别为4.00,7.00和10.00。校准完毕且合格后方可使用。将干净的探头伸进待测液，搅拌摇匀得出读数后，观察待测液pH是否位于适合pH值区间内，区间外就需调节pH值。将校准点的信息记录于《pH计使用维护记录》，将待测液的pH值记录在《培养基配制与灭菌记录》上。使用完毕后清洗探头并用纸擦干，用保养液浸泡探头，关闭电源。

4.5 其他类

4.5.1 电加热板主要用于加热煮沸灭菌的培养基的灭菌。电加热板通电，设定350℃-400℃之间，然后将预热的培养基放置在面板上加热。操作期间佩戴硅胶手套防止烫伤。填写《电加热板使用维护记录》。

4.5.2 不锈钢过滤系统和真空泵用于滤膜法检测饮用天然矿泉水的微生物指标。使用前将不锈钢杯与垫片置于灭菌锅内121℃灭菌15min。然后与过滤系统一同放入超净工作台内紫外灭菌，连接过滤系统与真空泵，将待测水样置于水杯内进行抽滤。完毕后将滤膜置于相应培养基上进行培养。详细操作请参考《饮用天然矿泉水检测》。

4.5.3 显微镜用于鉴定时的染色镜检。目镜的常用倍数为10X，物镜有4X、10X、40X、100X，先将经过处理的载玻片固定于载物台上，先用4X物镜找到视野，然后依次用10X、40X去寻找，使用油镜（100X）时，先滴一滴香柏油于观察区域，慢慢调节粗准焦螺旋，头偏一侧观察油镜头刚好浸入到油滴中。用目镜观察并用粗准焦螺旋缓慢调节直至看到物象，换用细准焦螺旋直至物象清晰可见后进行观察，并判断细菌的类型并记录数据。填写《显微镜使用维护记录》，取下载玻片，断开显微镜电源。用擦镜纸蘸取少许二甲苯，清理油镜头。重新盖上防尘罩。

4.5.4 紫外检测灯用于检测培养物是否产生荧光反应，是细菌鉴定的其中一项试验。使用紫外检测灯是应尽量在暗处观察。条件达不到可置于生物安全柜内用黑色洁净袋套住。将待检培养基置于台上，用紫外灯照射培养皿，观察荧光反应，记录好数据，关闭紫外检测灯。清洁紫外灯后放置会原位置。填写《紫外检测灯使用维护记录》。

4.5.5 菌落计数器用于辅助菌落计数。打开菌落计数器的电源并开灯，将培养皿置于载物台上，用放大镜放大，对着培养皿逐个计数，记录数据。当菌落数量过多时可使用仪器内置的计数笔，用探笔在培养皿底面对所有的菌落逐个点数。此时菌落处被标上颜色，蜂鸣器发生鸣叫，表示计数有效。显示屏内数字自动累加。再次用放大镜仔细检查，确认点数无遗漏，计数即已完毕。如有遗漏，可用手动计数按键补计。

4.5.6 高速振荡无菌均质器用于样品均质。样品与稀释液装在无菌均质袋内，双手四指分别握住均质腔门左右侧上部，拇指顶住上面的控制面板，四指与拇指反向用力掰开均质腔门。把装有处理样品的样品袋放置在椭圆形的样品均质环中，并让处理袋底部搁在均质腔底部。抹平样品袋上部褶皱，然后用手推合均质腔门，这是样品处理袋已被夹合密封。

根据检验需求选择运行程序，在准备截面中按下“+”“-”键可切换当前所选定程序号，程序分为系统默认和自定义两种，然后按下控制面板上的“暂停\开始”，处理器将立即开始高速振荡，请保证均质腔门已关闭紧密，否则振荡处理无法启动。当样品处理结束，待均质环完全停止后，再掰开处理器均质腔门，拿出样品袋。按照上述步骤进行下一个样品处理，如样品状态不一样，可调整均质时间。

5.仪器维护指导

5.1 所有仪器使用完毕均需清洁。

5.2 所以仪器的最佳工作温度为5-40℃，避免将仪器放置在超出此范围的区域，如环境温度超出此范围，使用空调进行温度调节。

5.3 霉菌培养箱被霉菌孢子污染时，用消毒剂进行消毒处理，详情请参考《消毒剂管理规定》。

5.4 注意恒温水浴锅内水的多少，缺水时用一级水补充。

5.5 生物安全柜与超净工作台每次使用完毕后，喷洒消毒酒精于操作台上，仔细清理每个角落。

5.6 定期清理真空泵储液瓶内的水，防止细菌滋生。

5.7 生物安全柜与超净工作台的过滤网维护：根据实际情况，每个季度或者半年检查安全柜的

任何物理异常或故障，如有异常及时报修；将初效过滤器拆下清洗，防止积尘将导致进风量不足，而降低洁净效果。

每年请具备资格的认证技术人员对安全柜进行性能认证，依据紫外灯使用寿命效果，进行紫外灯的更换；当正常调节或清洗初效空气过滤器后，仍达不到理想的截面风速时，则应调节风机的工作电压（旋动旋钮），从而达到理想的均匀风速（将调节风速旋钮从左向右，从低速向高速缓慢调节，新工作台不应调至最高风速）。

在使用十八个月后当风机不能达到理想风速时，则说明高效空气过滤器积尘过多（滤料上滤孔已基本被堵，要及时更新），一般高效空气过滤器的使用期限为十八个月；更换高效空气过滤器时，应注意型号规格尺寸（原生产厂家配置），按箭头风向装置，并注意过滤器的周边密封，绝对无渗漏现象发生。

6.注意事项

6.1 冰箱内不能放置其他与实验无关的物品。

6.2 冰箱内物品要合理均匀摆放，以免堆在一起导致保藏温度不一致。

6.3 在拿取物品时，注意及时关闭冰箱门。

6.4 在需要拿取菌种进行实验时，要佩戴耐低温手套。

6.5 如果临时停电，在供电恢复后立马打开电源。

6.6 对均质器的外部及均质腔进行清洁时，先用温和的肥皂水清洁，然后用柔软的布轻轻擦干（若均质腔被细菌感染，则用70%异丙基乙醇液进行处理）。不要使用酸、碱、盐及氯溶液清理

处理器的外表面，另外避免有机溶剂损坏处理器。

6.7 在进行使用时，注意防止手部被烫伤，与高温面接触时，请戴上硅胶手套操作。

6.8 加热煮沸试剂时，容器切勿盛装过多液体，防止沸腾时溢出且污染加热板。

6.9 设置加热温度不宜过高，防止溶液暴沸或容器底部的液体焦糊。

6.10 使用完毕后待加热板的HOT指示灯熄灭再关闭电源。

6.11 在操作台使用酒精灯时，等手上的酒精挥发完毕再点燃酒精灯。

6.12 进行镜检时，准焦螺旋调节动作要慢，以免镜头压破载玻片或损伤镜头。

6.13 禁止用手去触摸镜头的透镜部分，以免镜头粘上油脂导致观察受阻。

6.14以上仪器发现故障时，应请有经验的技术人员检修。

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