测量吸光度产生误差的可能原因
吸光光度法
光电管分为红敏和紫敏，阴极表面涂银和氧 化铯为红敏，适用625－1000nm波长；阴极 表面涂锑和铯为紫敏，适用200－625nm波长
目视比色法—比色管
光电比色法—光电比色计
光源、滤光片、比色池、硒光电池、检流计
分光光度法与分光光度计
722型分光光度计光学系统图
1.光源；2.滤光片；3,8聚光镜 4,7.狭缝；5.准直镜；6.光栅 9.比色池；10.光电管
e 表示物质的浓度为1mol/L,液层厚度为1cm时溶液
的吸光度。单位： (L•mol-1 •cm-1)
桑德尔(Sandell)灵敏度： S 当仪器检测吸光度为0.001时，单位截面积光
程内所能检测到的吸光物质的最低含量。 单位：mg/cm2
S=M/e
氯磺酚S测定钢中的铌 50ml容量瓶中有Nb30μg，用2cm比色池，在650nm
AHB和AB-分别为有机弱酸HB在强酸和强碱性时的吸光度，它 们此时分别全部以[HB]或[B-]形式存在。
pKa=pH+ lg
AB- - A A- AHB
lg AB- - A A- AHB
对pH作图即可求得pKa
2 络合物组成确定 饱和法（摩尔比法） 制备一系列含钌3.0×10-5 mol/L (固定不变)和不 同浓度（小于12.0×10-5 mol/L）的PDT溶液，按 实验条件，485nm测定吸光度,作图。
c 显色反应时间 针对不同显色反应确定显示时间 显色反应快且稳定；显色反应快但不稳定； 显色反应慢，稳定需时间；显色反应慢但不稳定
d 显色反应温度 加热可加快反应速度，导致显色剂或产物分解
e 溶剂
有机溶剂，提高灵敏度、显色反应速率
简述吸光光度法测量条件
简述吸光光度法测量条件光度分析中，为使测得的吸光度有较高的灵敏度和准确度，还必须选择合适的测量条件。
1. 入射光波长的选择一般以λmax作为入射光波长。
如有干扰，则根据干扰最小而吸光度尽可能大的原则选择入射光波长。
2. 参比溶液的选择参比溶液主要是用来消除由于吸收皿壁及试剂或溶剂等对入射光的反射和吸收带来的误差。
应视具体情况，分别选用纯溶剂空白、试剂空白、试液空白作参比溶液。
3. 吸光度读数范围的选择吸光光度分析所用的仪器为分光光度计，测量误差不仅与仪器质量有关，还与被测溶液的吸光度大小有关。
由下式可计算在不同吸光度或透光度读数范围引起的浓度的相对误差。
若分光光度计的读数误差DT 为5%, 当T = 65-20%，（或 A =0.19-0.70），则测量误差。
通常应控制溶液吸光度A在0.2-0.7之间，此范围是最适读数范围。
通过调节溶液的浓度或比色皿的厚度可以将吸光度调节到最适范围内。
当T%=36.8或A=0.434时，由于读数误差引起的浓度测量相对误差最小。
在吸光度法中，影响显色反应的主要因素有哪些？⒈确定适宜的条件的原因：在可见光分光光度法的测定中，通常是将被测物与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。
因此，显色条件的完全程度和吸光度的测量条件都会影响到测量结果的准确性。
为了使测定有较高的灵敏度和准确性，必须选择适宜的显色反应条件和仪器测量条件。
通常所研究的显色反应条件有显色温度和时间，显色剂用量，显色液酸度，干扰物质的影响因素及消除等，但主要是测量波长和参比溶液的选择。
对显色剂用量和测量波长的选择是该实验的内容。
⒉如何确定适宜的条件：条件试验的一般步骤为改变其中一个因素，暂时固定其他因素，显色后测量相应溶液吸光度，通过吸光度与变化因素的曲线来确定适宜的条件⒈确定适宜的条件的原因：在可见光分光光度法的测定中，通常是将被测物与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。
紫外可见分光光度计检定误差分析及控制
紫外可见分光光度计检定误差分析及控制摘要：紫外可见分光光度计在使用过程中，由于多种原因会引起波长或杂散光检定误差，导致测量结果不准确，为了得到更为准确的实验结果，必须进一步控制紫外可见分光光度计检定误差。
分光光度计广泛应用于食品、化工、环保等各个行业，量大面广，JJG178-2007紫外、可见、近红外分光光度计国家计量检定规程中，规定了检定的具体参数，其中透射比误差是最关键的参数，它的准确与否直接影响仪器的测量准确性。
而透射比滤光片标准物质是目前检定校准各类型分光光度计的主要标准器之一，在一次计量比武中，出现了测量值的异常偏离，经过短时间内两名人员多次重复测量，得到的数据与第一次测量时基本一致。
关键词：紫外可见分光光度计；检定误差；控制引言紫外可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法原理，利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射吸收来进行分析的一种分析仪器。
分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
1紫外可见分光光度计检定误差分析1.1波长显示数值误差实际测量波长点调节至0度时，需要将检测物质放置在吸收池中，随后沿着相同波长方向逐个位置点测试物质的透射比例值，最终计算出相应的峰值波长数据。
而波长在实际测量过程中所得的平均数值和标准数值之差被称为波长显示数值差。
1.2透视比例误差技术人员需要在235nm、257nm、313nm波长下，分别矫正仪器设备的0度范围以及满度范围，进一步测量出各标准物质的基础透射比。
紫外可见分光光度计工作时，数据测量的平均数值以及标准值之差一般为透射比例数值误差，为此各个波长透射比所展现的数值误差最大范围则为各个波长段透射比例数值误差。
2紫外可见分光光度计检定误差控制2.1强化检测人员技能提升为进一步提高检测人员的检测技能，确保检测数据的稳定和安全，应不断强化检测人员对检定规程的理论学习，认真学习JJG178—2007《紫外、可见、近红外分光光度计》，并且将理论与实际操作相互结合，积极总结工作中的工作经验和教训，不断提升自身检测水平和处理问题能力，有效防止检测误差性的产生。
项目五——吸光光度法
03
吸光光度法的仪器和试剂
分光光度计
01
定义
分光光度计是分光光度法中使用的核心仪器，用于测量溶液对特定波长
的光的吸光度。
02 03
工作原理
分光光度计通过光源发出连续光谱的光，经过单色器分光后，得到特定 波长的单色光，照射到样品上，然后通过检测器检测透过样品的光强， 从而计算出样品的吸光度。
类型
常见的分光光度计有紫外-可见分光光度计、红外分光光度计等。
酶活性测定
某些酶催化的反应会产生或消耗具有 特定吸光特性的物质，利用吸光光度 法可以测定这些物质的浓度变化，从 而推算出酶的活性。
工业生产中的吸光光度法
产品质量控制
在某些工业生产过程中，产品的吸光特性与其质量密切相关。通过吸光光度法测 量产品的吸光度，可以实时监控产品质量，确保生产过程的稳定性和产品的一致 性。
通过合成具有更高选择性和灵敏度的试剂和探针，提高吸光光度法 对目标分析物的检测灵敏度。
引入多元校正技术
利用多元校正算法，消除干扰因素，提高吸光光度法在复杂样品中 的测量精度和灵敏度。
拓展应用领域和范围
环境监测领域
将吸光光度法应用于大气、水体 等环境样品的检测，实现对环境
污染物的快速、准确测定。
生物医学领域
引入人工智能、物联网等技术， 实现吸光光度法仪器的远程操控 、数据自动处理和分析等功能， 提高仪器的易用性和分析效率。
多功能集成
将多种分析方法集成到一台仪器 中，实现一台仪器同时具备多种 分析功能，提高仪器的综合性能
和应用范围。
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THANKS
常见试剂
常见的吸光光度法试剂有显色剂、还原剂、氧化剂等。
使用注意事项
双缩脲法测定实验报告
一、实验目的1. 学习双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法。
2. 掌握双缩脲试剂的配制和使用。
3. 了解实验过程中可能出现的误差及解决办法。
二、实验原理双缩脲法是一种经典的蛋白质定量方法，其原理基于蛋白质分子中的肽键与铜离子（Cu2+）在碱性条件下发生反应，生成紫红色络合物。
该络合物在特定波长（如540nm）处的吸光度与蛋白质含量呈正比关系。
通过测量吸光度，可以计算出蛋白质的浓度。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 蛋白质标准液（已知浓度）- 待测样品（含有未知蛋白质）- 双缩脲试剂A（含CuSO4）- 双缩脲试剂B（含NaOH）- 6mol/L NaOH溶液- 0.1mol/L HCl溶液- 10g/L NaCl溶液- 移液器- 容量瓶- 烧杯- 比色皿- 分光光度计2. 实验仪器：- 移液器- 容量瓶- 烧杯- 比色皿- 分光光度计四、实验步骤1. 配制双缩脲试剂：- 称取0.1g硫酸酮（CuSO4）溶于50mL去离子水中。
- 称取1.5g酒石酸钾钠溶于50mL去离子水中。
- 称取0.05g碘化钾溶于50mL去离子水中。
- 将三种溶液混合，搅拌均匀，备用。
2. 准备蛋白质标准液：- 将蛋白质标准液用去离子水稀释至一定浓度，备用。
3. 准备待测样品：- 称取一定量的待测样品，用去离子水稀释至一定浓度，备用。
4. 标准曲线的制作：- 取7支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL蛋白质标准液，然后依次加入1.5mL双缩脲试剂A和1.5mL双缩脲试剂B。
- 将试管放入水浴中加热10分钟，取出冷却至室温。
- 用移液器取0.5mL溶液于比色皿中，以空白试剂为参比，在540nm波长处测定吸光度。
- 以蛋白质含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
5. 待测样品的测定：- 按照标准曲线的制作步骤，对待测样品进行测定。
- 根据标准曲线，计算出待测样品中蛋白质的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：- 在540nm波长处，蛋白质含量与吸光度呈良好的线性关系，相关系数R²=0.998。
光度准确度
光度准确度（Photometric accuracy ）：有两种表示方式吸光度准确度ΔA，和透射比准确度ΔT。
两种情况标称参数不符合保证参数：1、有些厂家不给出ΔA而只给出ΔT，不讲明在什么透射比情况下测试，实际上仪器不可能在0～100%T范围内的任何地方测试都能达到参数给的指标。
如Unico 4802（只标出光度准确度为±0.3%T）2、许多制造厂商对自己的高档仪器,基本上都是写成“±0. 3% T ( 0～100%T )”。
如岛津的UV-2401PC、UV-2450PC、UV-2550PC 等。
从理论上讲任何高档紫外可见分光光度计的透射比准确度ΔT不可能在0～100% T内都能达到±0. 3%T的透射比准确度。
一、光度噪声对分析测试误差的影响在光度分析中,特别在紫外可见光度分析中,光度噪声(Photomet ricNoise )是影响比耳定律偏离的最主要因素之一,是主要分析误差的来源。
若已知光度噪声为N,则可根据A. J.Owen 提出的计算公式:噪声误差(%)=N×100/A,计算出不同N 的情况下,吸光度的相对误差ΔA/ A (ΔA 为吸光度绝对误差, A为吸光度真值)与A 的关系。
或求出不同A 的情况下,ΔA/ A与N 的关系。
目前国内外有些仪器制造者和使用者们,不注重仪器的光度噪声对分析测试结果的影响。
有的厂商甚至在样本上不给出光度噪声这个重要指标。
有些厂商(技术人员)在测试光度噪声时,只测15min或30min ,这些都是不对的,是值得注意的重要问题。
紫外可见分光光度计的光度噪声是分析误差的主要来源之一,它主要影响或限制是被测试样浓度的下限。
目前,国际上最高级的紫外可见分光光度计的光度噪声为±0.0002Abs(峰-峰值,如美国Va rian 公司的Ca ry5 )。
它的测量下限在0. 02Abs时,测量误差可达到1%。
国外还有许多高档紫外可见分光光度计的光度噪声都在±0. 0002Ab s (峰-峰值,如美国P-E 公司的Lambda900等)。
分光计的调节和使用实验报告误差分析
分光计的调节和使用实验报告误差分析实验室报告分光计的调节和使用实验报告误差分析摘要：本实验通过对分光计的调节和使用，实现对样品的测量和分析。
在实验过程中发现误差主要来源于仪器本身及人员操作不当，得到了较为准确的数据结果。
实验结果表明，分光计可用于对样品的定量分析和质量控制。
关键词：分光计，调节，使用，误差分析实验目的：1. 学习分光计的构造和调节方法；2. 掌握分光光度法在定量分析中的应用；3. 学会对数据进行误差分析。
实验仪器和试剂：仪器：UV-Vis分光光度计试剂：CuSO4标准溶液，去离子水实验步骤：1. 打开分光计电源，进行预热，待显示器显出各参数后，进行仪器校准；2. 取一定浓度的实验样品，与去离子水混合，测量吸光度，可计算出样品浓度；3. 测量标准溶液的吸光度，计算浓度，并进行比较；4. 进行误差分析，得出结果。
实验结果和分析：本次实验结果较为准确，得到了满足实验要求的数据。
但是，仍有一定误差存在。
主要误差来源于以下几个方面：1. 仪器本身误差：包括光源稳定性、光栅衍射效率和检测器的灵敏度等方面的误差；2. 操作中人员误差：由于实验过程中操作者的操作不规范和数据分析不够精细，也会对实验数据产生一定影响。
通过对实验数据的分析，可以看出误差来源较为明确，这也提示我们在之后的实验中应该更加仔细操作仪器，减小误差的产生，提高实验数据的准确性。
结论：通过本次实验，我们深入了解了分光计的调节和使用方法，学习了分光光度法在定量分析中的应用。
同时，也发现了实验在操作和仪器误差方面的不足，这对于之后的实验开展具有一定的启示作用。
分光计可以精确地测量样品的吸光度值，并可用于对样品的定量分析和质量控制。
(完整版)测量误差的分类以及解决方法
测量误差的分类以及解决方法1、系统误差能够保持恒定不变或按照一定规律变化的测量误差，称为系统误差。
系统误差主要是由于测量设备、测量方法的不完善和测量条件的不稳定而引起的。
由于系统误差表示了测量结果偏离其真实值的程度，即反映了测量结果的准确度，所以在误差理论中，经常用准确度来表示系统误差的大小。
系统误差越小，测量结果的准确度就越高。
2、偶然误差偶然误差又称随机误差，是一种大小和符号都不确定的误差，即在同一条件下对同一被测量重复测量时，各次测量结果服从某种统计分布；这种误差的处理依据概率统计方法。
产生偶然误差的原因很多，如温度、磁场、电源频率等的偶然变化等都可能引起这种误差；另一方面观测者本身感官分辨能力的限制，也是偶然误差的一个来源。
偶然误差反映了测量的精密度，偶然误差越小，精密度就越高，反之则精密度越低。
系统误差和偶然误差是两类性质完全不同的误差。
系统误差反映在一定条件下误差出现的必然性；而偶然则反映在一定条件下误差出现的可能性。
3、疏失误差疏失误差是测量过程中操作、读数、记录和计算等方面的错误所引起的误差。
显然，凡是含有疏失误差的测量结果都是应该摈弃的。
解决方法：仪表测量误差是不可能绝对消除的，但要尽可能减小误差对测量结果的影响，使其减小到允许的范围内。
消除测量误差，应根据误差的来源和性质，采取相应的措施和方法。
必须指出，一个测量结果中既存在系统误差，又存在偶然误差，要截然区分两者是不容易的。
所以应根据测量的要求和两者对测量结果的影响程度，选择消除方法。
一般情况下，在对精密度要求不高的工程测量中，主要考虑对系统误差的消除；而在科研、计量等对测量准确度和精密度要求较高的测量中，必须同时考虑消除上述两种误差。
1、系统误差的消除方法(1)对测量仪表进行校正在准确度要求较高的测量结果中，引入校正值进行修正。
(2)消除产生误差的根源即正确选择测量方法和测量仪器，尽量使测量仪表在规定的使用条件下工作，消除各种外界因素造成的影响。
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测量吸光度产生误差的可能原因
1. 光路不清洁或污染：如果光路中存在灰尘、油脂、水珠等杂质，会影响光线的传播和吸收，导致吸光度测量结果不准确。
2. 光源不稳定：光源的稳定性会影响吸光度的测量结果，如果光源不稳定，会导致吸光度的波动，从而影响测量结果的准确性。
3. 试剂质量不纯：试剂的质量不纯会导致吸光度的测量结果不准确，因为试剂中的杂质会影响吸光度的测量。
4. 仪器校准不准确：如果仪器的校准不准确，会导致吸光度的测量结果不准确。
5. 操作不规范：如果操作不规范，比如样品的加入量不准确、搅拌不均匀等，会导致吸光度的测量结果不准确。
6. 温度变化：温度的变化会影响试剂的吸收性能，从而影响吸光度的测量结果。
7. 光路长度不一致：如果光路长度不一致，会导致吸光度的测量结果不准确。